专利名称：高挂草提取物的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种高挂草提取物的制备方法。
背景技术：
高挂草(裕固药名为曲龙或槐撒石)为裕固族人常用草药之一，用于治疗人畜 包衣不下，治疗效果较好。高挂草为松萝科(Usneaceae)松萝属(fA"ea)的破 茎松萝(Owe" Vain)的全株。
高挂草植物体丝状，长15-30cm，成二叉式分枝，基部较粗，分枝少，先端 分枝多。表面灰黄绿色，具光泽，有明显的环状裂沟，横断面中央有韧性丝状的 中轴，具弹性，可拉长，由菌丝组成，易与皮部分离；其外为藻环，常由环状沟 纹分离或成短筒状。菌层产生少数子囊果。子囊果盘状，褐色，子囊棒状，内生 8个椭圆形子囊孢子。生于深山老林树干上或岩壁上。
破茎松萝在我国东北全草入药，具有强心利尿，止咳平喘，通经活络，清热 明目退云翳等功效，主治结膜炎，角膜云翳，耳鸣，白带，风湿痛，瘰疬等。1995 年，国外有人报道从破茎松萝中提取分离得到的松萝酸和地弗地衣酸是其显示解 热镇痛的主要有效成分。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高挂草提取物的制备方法。
本发明将粉碎后的高挂草中加入溶剂提取；提取液过滤、减压回收得到总提 物，加水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，所得乙酸乙酯部分包括 8个酚酸类化合物和2个甾体类化合物，即为高挂草提取物。
一种高挂草提取物的制备方法，其特征在于该方法包括
1) 将粉碎后的高挂草药材加入溶剂提取；
2) 将高挂草药材提取液过滤、减压回收得到总提物，加水混悬，依次用石 油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，减压回收分别得石油醚部分、乙酸乙酯部分和正 丁醇部分；
3) 乙酸乙酯部位经过反复硅胶柱层析，得到8个酚酸类化合物和2个甾体类化合物。
上述方法中，加入的溶剂为60~98%的工业乙醇或甲醇，提取方法包括冷浸、 超声或微波提取。
上述方法中，柱层析填料为层析用硅胶。
上述方法中，高挂草药材与溶剂的体积比为1: 1 1: 10。
上述方法中，8个酚酸类化合物和2个甾体类化合物，分别为石油醚:丙酮 (30:1)得到4-甲基-2， 6-二羟基苯甲醛，氯仿:丙酮(20: 1)得到(3-苔黑酚酸
甲酯，氯仿:甲醇(6:1)薄层制备分别得到(+)-松萝酸和(-)-松萝酸，石油醚:丙酮 (15:1)得到5cc,8a-过氧麦角多甾-6,22E-二烯-3"醇，氯仿:丙酮(30:l)得到5a,8oc-
过氧麦角多甾-6,9,22E-三烯-3y9醇，氯仿:丙酮(10:1 )得到苔色酸，氯仿:丙酮(30:1)
得到苔色酸甲酯，氯仿:丙酮(10:1)得到苔色酸乙酯，氯仿:丙酮(10:1)得到茶渍酸。
本发明的提取物具有抑制口腔微生物的活性，可以广泛用于预防和治疗口腔 疾病的药物或保健品中。 本发明的优点在于
1) 利用简单的方法，对高挂草不同极性部位进行抑菌活性筛选，找到活性 部位，经过多次硅胶柱层析，阐明活性部位的组成。
2) 本发明所得提取物组成明确。
3) 本发明所得提取物具有抑制口腔微生物的活性，可以广泛用于预防和治 疗口腔疾病的药物或保健品中。
4) 本发明制得的提取物得率高，同时工艺流程短，设备及操作简单，成本 低廉，适合较大规模的制备。
具体实施例方式
高挂草提取物的制备方法步骤如下
1) 将粉碎后的高挂草药材(过20-80目筛)中加入60~98%的工业乙醇或甲
醇，冷浸、超声或微波提取，提取时间为30分钟至7天，料液比为l: 1~1: 10;
2) 将高挂草药材提取液过滤、减压回收得到总提物，加水混悬，依次用石
油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，减压回收分别得石油醚部分、乙酸乙酯部分和正
丁醇部分；
43) 对已经确定的活性部位即乙酸乙酯部分进行反复硅胶柱层析；石油醚: 丙酮(30:1)得到化合物(l)，氯仿:丙酮(20: 1)得到化合物(2)，氯仿:甲醇(6:1) 薄层制备分别得到化合物(3)和化合物(4)，石油醚:丙酮(15:1)得到化合物(5), 氯仿:丙酮(30:1)得到化合物(6)，氯仿:丙酮(10:1)得到化合物(7)，氯仿:丙酮
(30:1)得到化合物(8)，氯仿:丙酮(10:1)得到化合物(9)，氯仿:丙酮(10:1) 得到化合物(IO)。
4) 综合应用多种光谱及波谱技术(IR， UV, HR-ESIMS, EI-MS, 1D/2D NMR) 对纯化得到的化合物结构进行了鉴定，分别为8个酚酸类化合物和2个甾体类化 合物，分别为4-甲基-2， 6-二羟基苯甲醛(1)， p-苔黑酚酸甲酯(2)， (+)-松萝酸(3) 和(-)-松萝酸(4)， 5a,8a-过氧麦角多甾-6,22E-二烯-3"醇(5)， 5a,8a-过氧麦角多甾 -6,9(ll),22E-三烯-3;S醇(6)，苔色酸(7)，苔色酸甲酯(8)，苔色酸乙酯(9)，茶渍酸 (10)，测定结果可靠。
下面结合实施例对本发明作详细说明。 实施例l:高挂草(破茎松萝)有效部位的制备
破茎松萝(2.5 kg)，室温下用95%工业乙醇浸泡七次，每次七天，减压浓縮 回收乙醇。将所得提取物(110g)加水溶解，用石油醚，乙酸乙酯，分别萃取，得 石油醚部分4g，乙酸乙酯部分60g，正丁醇部分50g。乙酸乙酯部位经过反复硅 胶柱层析，得到8个酚酸类化合物和2个甾体类化合物，分别为石油醚:丙酮 (30:1)得到4-甲基-2， 6-二羟基苯甲醛50mg (1)，氯仿:丙酮(20: 1)得到(3-苔黑酚酸甲酯10mg(2)，氯仿:甲醇(6:1)薄层制备分别得到10mg (+)-松萝酸(3) 和4mg(-)-松萝酸(4)，石油醚:丙酮(15:1)得到12mg5a,8a-过氧麦角多甾-6,22E-二烯-3〃醇(5)，氯仿:丙酮(30:1)得到15mg5a,8a-过氧麦角多甾-6,9(11),22E-三 烯-3"醇(6)，氯仿:丙酮ao:l)得到50mg苔色酸(7)，氯仿:丙酮(30:1)得到100mg 苔色酸甲酯(8)，氯仿:丙酮(10:1)得到50mg苔色酸乙酯(9),氯仿:丙酮(10:1) 得到50mg茶渍酸(10)。化学结构如下1 R^CH3， R2=H, R3=OH, R4=CHO
2 R^CH3， R2=COOCH3， R3=OH， R4=CH3
7 R广OH, R2=COOH， R3=CH3, R4=H
8 R产OH, R2=COOCH3, R3=CH3, R4=H
9 R广OH, R2=COOCH2CH3, R3=CH3,
10 R^CHg, R3=OH, R^H, R2=
=H
实施例2:高挂草(破茎松萝)乙酸乙酯部位抑菌活性研究
1 .实验方法将2种口腔菌(Jc""o附yc^ W"oras ATCC 27044和 S&印toco"i^ ATCC 25175)和4种普通菌(Sto/ /ococcws tmreiw ATCC
6538、五"/zen'cWa co/z' ATCC 8739、万w7/iw仰6"fc ATCC 9372、尸sratfomortay "m^"仍"ATCC 9027)的标准菌种挑选单个菌落接种于TSB (Tryticase soy broth
6Becton Dickinson and Co.， CockeysviUe， Md.)培养基内，于5%的(302培养箱中 37'C培养18 24h。将样品溶解于TSB培养基中，按两倍稀释的方法lOO^L加 入到96孔板上，使样品浓度在2500-1.22ppm之间，再加入100|aL培养好的各 种菌液，使菌浓度为lxl08CFU/mL， C02培养箱中培养18 24h，用bio-tek ELX808酶标仪测定OD61Qnm. OD61()nmS0.05的最小样品浓度为最小抑菌浓度 (MIC)。 口腔菌以triclosan为阳性对照，普通菌以青霉素G为阳性对照，阴性 对照为不加药品的各菌液，空白为加样品不接种的药液，试验重复两次。 2.实验结果(见表l)
由实施例1得到的高挂草乙酸乙酯部位对2种口腔菌(Jc^wmj;c" v^cmm ATCC 27044和5^eptococciw wwtow ATCC 25175)和4种普通菌(5top /ococcra awreKS ATCC 6538、五sc/zerz'c/n'a co/z' ATCC 8739、 B鎖7/船s由z'fc ATCC 9372、 尸ww^womw flerag/"ora ATCC 9027)均具有较好的抑制作用。
表1高挂草乙酸乙酯部位(GGC)最小抑菌浓度实验结果 _MIC(ppm) results_ rrr>positive control
spcciss_triclosan penicillin G
v4c"7 o，ces w'5Tcw船ATCC 27044 5fr印tococcws ATCC 2517539.13.9
oral bacterium78.17.8
SVop^yfococcKs awrews ATCC 6538625125
normalATCC 873962562.5
bacteriumw緣j ATCC 9372312.5125
i^ewtfo,noy aerwg/wora ATCC 90271250>250
权利要求
1、一种高挂草提取物的制备方法，其特征在于该方法包括1)将粉碎后的高挂草药材加入溶剂提取；2)将高挂草药材提取液过滤、减压回收得到总提物，加水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，减压回收分别得石油醚部分、乙酸乙酯部分和正丁醇部分；3)乙酸乙酯部位经过反复硅胶柱层析，得到8个酚酸类化合物和2个甾体类化合物。
2、 如权利要求1所述的方法，其特征在于溶剂为60~98%的工业乙醇或甲醇， 提取方法包括冷浸、超声或微波提取。
3、 如权利要求1所述的方法，其特征在于柱层析填料为层析用硅胶。
4、 如权利要求l所述的方法，其特征在于高挂草药材与溶剂的体积比为1:1~1: 10。
5、 如权利要求l所述的方法，其特征在于8个酚酸类化合物和2个甾体类 化合物，分别为石油醚:丙酮(30:1)得到4-甲基-2， 6-二羟基苯甲醛，氯仿:丙酮(20: 1)得到P-苔黑酚酸甲酯，氯仿:甲醇(6:1)薄层制备分别得到(+)-松萝酸 和(-)-松萝酸，石油醚:丙酮(15:1)得到5a,8a-过氧麦角多甾-6,22E-二烯-3"醇， 氯仿:丙酮(30:1)得到5cx,8a-过氧麦角多甾-6,9,22E-三烯-3A醇，氯仿:丙酮(10:1) 得到苔色酸，氯仿:丙酮(30:1)得到苔色酸甲酯，氯仿:丙酮(10:1)得到苔色酸 乙酯，氯仿:丙酮(10:1)得到茶渍酸。
全文摘要
本发明公开了一种高挂草提取物的制备方法。本发明将粉碎后的高挂草中加入溶剂提取；提取液过滤、减压回收得到总提物，加水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，所得乙酸乙酯部分包括了8个酚酸类化合物和2个甾体类化合物。本发明制得的提取物得率高，同时工艺流程短，设备及操作简单，成本低廉，适合较大规模的制备。提取物具有抑制口腔微生物的活性，可以广泛用于预防和治疗口腔疾病的药物或保健品中。
文档编号A61K36/09GK101461828SQ20071030729
公开日2009年6月24日 申请日期2007年12月18日 优先权日2007年12月18日
发明者师彦平, 戚欢阳, 靳元鹏 申请人:中国科学院兰州化学物理研究所