阿利吉仑硝酸盐的制作方法

专利名称：：阿利吉仑硝酸盐的制作方法阿利吉仑硝酸盐本发明涉及肾素抑制剂式(I)的2(S)，4(S),5(S)，7(S)-N-(3-氨基-2，2-二甲基-3-氧代丙基)-2，7-二(1-曱基乙基)-4-羟基-5-絲-8-[4-甲氧基-3-(3-甲氧基-丙氧基)苯基]-辛酰胺的新盐，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>该化合物的国际非专利名(INN)是阿利吉仑，在EP678503A中有具体公开。活性成分阿利吉仑是游离碱，其在EP678503A中具体述及，并且它具有一个碱性基团，即5位氨基。该基团的pKa为9.79。因此，一个酸性基团可以与氨基氮的孤电子对结合。EP678503Az〉开了作为阿利吉仑的特定盐的盐酸盐(实施例137)和半富马酸盐(实施例83)。然而，它没有提及这些盐的任何特定性质。同时，活性成分半富马酸盐形式的阿利吉仑作为抗高血压药进行研发。与游离碱和HC1盐相反，半富马酸盐更易于处理，至少部分地具有结晶能力并且该盐容易获得。此外，在本领域中认为与弱酸相反，强酸与阿利吉仑不形成稳定的盐。所述半富马酸盐在开口坩埚中测定具有96.6。C的熔点(10K/分钟的加热速率)和28.9J.g"的熔融焓。阿利吉仑半富马酸盐纟艮难配制。通常而言，在包含阿利吉仑半富马酸盐的盖伦制剂中，一般需要大量其性质使得片剂配制困难的药物物质(DS)。例如，阿利吉仑半富马酸盐具有针状结晶习性，该习性对于药物物质的堆积性能如流动性和堆密度具有负面影响。药物物质的压制性能不良，从而导致微粒间弱结合以及在压力下多晶型变化和/或在压制下无定形化。阿利吉仑半富马酸盐具有强弹性组分，其也导致微粒间结合变弱。为了获得合理的片剂尺寸，高剂量(每片高达300或600mg游离碱)使得高载药量成为必需。药物物质的品质变化很大，其对片剂可加工性如粒度分布、堆密度、可流动性、润湿行为、表面积和粘附趋势产生影响。而且，阿利吉仓具有高吸湿性。当与^触时，药物物质的多晶型变为无定形态，后者与结晶形态相比显示出较差的稳定性。这些障碍的集^f吏得标准片剂制备方法变得极度困难。由于例如高吸湿性、针状微粒结构、流动性差以及导致可加工性问题和剂量均匀性问题，直接压片对于常规生产而言不是可行的选择。滚压法使得药物物质的高的总体积减少。然而，由于药物物质的低的可压性，在滚压过程中将药物物质进行预先压制使得进一步压制为具有对脆碎性而言足够的硬度和抗性而不含大量赋形剂的片剂变得极度困难。已经发现，阿利吉仑载药量高于约35%的片剂不产生稳健的片剂(例如脆碎性、a)和稳健的方法(例如在滚压和压片过程中粘沖)。如上文所解释的那样，低结晶性、吸湿性和相对低的稳定性(特别是在潮湿的存在下)导致了更复杂的生产方法，特别是当分离终产物时更是如此。具体而言，由于上文提及的阿利吉仑半富马酸盐所具有的较不希望的性质，诸如过滤和干燥的工序的时间可以非常长。阿利吉仑半富马酸盐对制粒过程也敏感。因此，尽管阿利吉仑已经做出了非常重要的贡献，但是所报道的不希望的性质已经成为工序节约的障碍。因此，需要更稳定的、例如结晶形式的阿利吉仑，它在化学制备工序最终阶段后的千燥、过滤或制粒工序中以及在制备药物制备的步骤中甚至更容易处理。已经做出很多无用的努力通过形成盐去寻找改善的形式，这种形式理想地尽可能是结晶并且在理化方面是稳定的。只有本发明的盐、其溶剂化物及其多晶型形式表现出预期的改善性质。形成具有预期有利性质的阿利吉仑的盐已经证明是困难的。例如，在大多数情况下，获得了稳定性差的无定形的盐(例如硬泡沫状物、蜡状物或油状物)。更详尽的研究已经显示与阿利吉仑半富马酸盐相比，本发明的阿利吉仑的盐已经证明是特别有益的。本发明涉及式I化合物与硝酸的盐，或者分别地，其无定形形式、溶剂化物且特别是水合物以及多晶型形式，(I)。优选的盐例如选自无定形形式的阿利吉仑的硝酸盐；或者结晶或部分结晶形式的阿利吉仑的硝酸盐。本发明的盐优选以分离的和基本上纯的形式存在，例如纯度>95%,优选>98%，首选>99%。本发明的盐的对映异构体纯度为>98%，优选>99%。与半富马酸盐相比，本发明的盐或其无定形形式、溶剂化物如盐的水合物以及相应的多晶型形式具有意想不到的有利特性。在给定条件下，结晶性盐和结晶性盐的水合物具有明确的熔点，其具有显著的吸热熔融焓。本发明的结晶性盐是稳定的，在贮存和分配过程中也具有比阿利吉仑半富马酸盐好的品质。此外，本发明的结晶性盐和无定形盐都不是吸湿性的。因而，本发明的盐已经证明在物理上是格外稳定的。在室温和略高温度下对于不同的相对湿度而言，历经宽范围的湿度和数小时、例如4小时的时期，本发明的盐显示几乎没有水吸收或水损失。并且，例如，本发明的盐的熔点将不会因为在不同相对湿度下贮存而改变。某些盐的改善的理化性质对于当把它们生产为具有药物活性的物质和当生产、贮存和应用盖伦制剂时均是非常重要的。在这种方式中，以物理参数改善的恒定性开始，可以确保甚至更高品质的制剂。通过使得在后处理中进行的工序步骤更简单，盐的高稳定性还给出了获得经济益处的可能性。优选的盐的高结晶性允许对分析方法、特别是各种x-射线方法进行选择，使用这些方法可以对它们的释放进行清楚和简单的分析。该因素对于活性物质及其盖伦性质在生产、贮存和适用于患者期间的品质而言也是非常重要的。此外，可以避免关于稳定盖伦制剂中活性成分的复杂规定。因此，出人意料地发现与公知常识相反，强酸即硝酸可以与阿利吉仑形成稳定的盐。因此，本发明涉及阿利吉仑的结晶性、部分结晶性和无定形盐。本发明还涉及本发明的盐的多晶型形式以及溶剂化物如7jc合物。本发明的盐的溶剂化物和水合物可以分别例如作为半-、单-、二-、三-、四-、五-、六-溶剂化物或水合物存在。用于结晶的溶剂可以被包埋在晶格中，所述溶剂例如有醇类(尤其是甲醇、乙醇)、醛类、酮类(尤其是丙酮)、酯类(例如乙酸乙酯)或烷烃类(尤其是戊烷、己烷、庚烷或环己烷)。所选溶剂或水在结晶中和在随后的工序步骤中导致溶剂化物或水合物的程度或者直接导致游离碱的程度通常是不可预知的，其取决于工序条件的集合以及阿利吉仑与所选溶剂、尤其是水之间的各种相互作用。所得的盐、溶剂化物和水合物形式的结晶性或无定形固体以及相应的盐溶剂化物或盐水合物各自的稳定性必须通过实验来确定。因而不可能仅仅聚焦于所得固体的分子的化学组成和化学计量比，因为在这些情况下可以生产出不同的结晶性固体和不同的无定形物质。对相应的水合物而言，表述盐水合物可以是优选的，因为晶体结构中的水分子通过强的分子间力结合并由此表示这些结晶结构形成的基本元件，所述这些晶体部分地是格外稳定的。这与其中任意所形成的溶剂化物都是不稳定的半富马酸盐是全然不同的。然而，水分子也存在于某些晶格中，其通过相当弱的分子间力结合。该分子或多或少地整合在晶体结构形成中，但具有较低的积极作用。无定形固体中的水含量可以象结晶性水合物那样被清楚地确定，但是主要取决于干燥和环境条件。相反，在稳定的水合物中，具有药物活性的物质与水之间具有明确的化学计量比。在许多情况下，这些比率不是完全能够实现化学计量值，与理论值相比通常由于某些晶体缺陷以较低的值接近。对于结合较弱的水而言，有机分子与水分子的比率可以以相当大的程度不同，例如遍布二-、三-或四7jC合物。另一方面，在无定形固体中，水的分子结构分类不是化学计量的；但是，仅在偶然情况下该分类也可以是化学计量的。在一些情况下，对水分子的精确化学计量进行分类是不可能的，因为形成了层结构以至于所包埋的水分子不能以所定义的形式进行测定。对于具有相同化学组成的结晶性固体而言，所得的不同晶格以术语多晶现象来概括。当适当和便利时，上下文中对本发明的盐的称谓应理解为还指相应的溶剂化物如水合物和多晶型变体以及无定形形式。该硝酸盐粉末的X-射线衍射图具有许多离散的X-射线反射，并且几乎没有非结晶性或无定形部分的信号。因此，结晶化程度是令人惊奇地高的。同样，可以培养出相对大的晶体，就结晶学而言它们是单晶。这类单晶允许测定固体的结构。其通过由X-射线衍射仪测定的反射强度的计算机辅助评价来进行。在正常条件如标准晶体(gaugedcrystals)的高物理、化学和对映异构纯度下，这种用于测定晶体结构的工序能够在分子或原子水平、即单位晶格的对称性和尺寸、原子位置和温度因素清楚地测定结构，并且由确定的单位晶4^水积、以分子量为基础显示了X-射线照相密度。同时，X-射线照相结构测定提供了其品质的细节。该硝酸盐的显著特性在很大程度上基于晶体，其通过每个阿利吉仑分子掺入一个硝酸根分子而形成该盐。因此，产生了几乎完美的三维晶格。该盐具有比半富马酸盐高得多的高熔点和熔融焓。该盐特别的晶格是其理化稳定性的主要因素。在密闭样品容器中，以Tr=10K'min—1的速率加热，其具有173±0.2。C的熔点和105.8J/g的熔融焓。所示熔点是仅能在封闭样品容器中测定的熔点。这两种热力学特性以相应的两种数据解斧沈明了与半富马酸盐相比的有利的物理性质，所述数据即在开口坩埚中96.6。C的熔点(10K/分钟加热速率)和28.9J.g-1的熔融焓。这些热力学数据以及X-射线数据是阿利吉仑硝酸盐的物理和化学抗性的基础。阿利吉仑硝酸盐在溴化钾粉末中的红外吸收光i脊(DRIFT-IR光语一漫反射红外傅里叶变换-IR)测量显示出下述以倒数波数(cm")表示的显著带358cm-1(O國H或N陽H)、2960cm-1(C陽H)、1665cm-1(酰胺，C-O)、1516cm-1(酰胺或芳香C-C)、1388cm-1(NCV或C-H)、1191cm-1(C誦O)、1136cm-1(醚或叔醇C-O)、1028cm-1(醚或叔醇C-O)、809cm-1(芳香C-H或N03)、631cm-1(酰胺)。全部吸收带的误差容限(errormargin)是士2cm-1。本发明涉及结晶性硝酸盐，它是一种通过由单晶X-射线分析和X-射线粉末图获得的数据和参数清楚地表征的结晶性固体.单晶X-射线衍射方法的理论的深入讨论以及所评价晶体数据和参数的定义可以从Stout&Jensen,《X-射线结构测定；实用指南》("X-RayStrcutureDetermination;APracticlaGuide"，麦克米兰公司(MacMillianCo.)，纽约，N.Y.(1968))第3章中找到。在室温(25匸)下，采用Cu-Ka照射(1=1.54056A)和Peltier-冷却的珪检测器，在反射几何学中用ScintagXDS2000粉末衍射仪进行SPPIOO硝酸盐X-射线粉末图的测定。扫描范围为1.5度至40度的20，扫描速率为3t分钟。在X-射线衍射图中最强的反射显示出以下晶面间距以[A(±0.1人)表示的d:17.0、9.6、8.3、7.5、6.2、5.8、5.5、4.6、4.5、4.3、4.2、4.1、4.0、3.8、3.7、3.3、3.1、2.9、2.1。阿利吉仑硝酸盐的单晶X-射线结构测定的数据和^lfc包含在表l中。表l阿利吉仑硝酸盐在100K的晶体数据和参数晶体数据总式分子量晶体颜色晶体形状晶系C30H54N4O9614.77无色单斜晶体系空间群单晶各维的尺寸和单位晶格的角度单位晶^^沐积单位晶格中的分子数目F(000)单位晶格参数的测量范围(0)所计算的密度线性吸收系数P2ia=10.719(5)Ab=8.609(4)Ac=18.459(9)AP=104.998(10)。a=Y=穿1645.4(14)A326681.2410.707X-射线测定数据衍射仪X-照射(石墨单色仪)波长温度扫描范围(e)扫描模式所收集的反射/独特显著反射的数目(1>20(1))强度的变异吸收校正BrukerAXSCuKa1.54178566(2)2.48-50.437189/32241812来自等价物的半经验数据结构精修方法参数数目拟合指数(agreementindex)(R全部数据)0.0919加权拟合指数(Rw全部数据)0.1852对FZ的全矩阵最小二乘法398S因子(拟合优度)1.015所用反射的数目3224分子、包括水分子中全部氢原子的处置混合消光校正无在结论性差值-傅里叶计算中的最大/最0,504/-0.214小残余电子密度绝对结构参数0.3(5)所用的计算机程序SHELXTLV6.10([SheldrickGM(2000))SCHAKAL86(Keller,Frdburg1986)PLATON(Spek，ActaCryst"1990)阿利吉仑硝酸盐的该形式可以通过将其加热至60。C以上来转化为高温形式。阿利吉仑硝酸盐的这种高温形式的单晶X-射线结构测定的数据和参数包含在表la中。表la阿利吉仑硝酸盐在300K的晶体数据和参数晶体数据总式分子量晶体颜色晶体形状晶系空间群单晶各维的尺寸和单位晶格的角度C!30H54N409614.77单斜晶体系a=11.69(3)Ab=8.72(3)Ac=17.91(5)AP=107.22(9)。a=Y=90。单位晶,积1744(9)A:单位晶格中的分子数目2F(000)668单位晶格参数的测量范围(0)所计算的密度1.171线性吸收系数0.707X-射线测定数据衍射仪X-射线(石墨单色仪)波长温度扫描范围(e)扫描模式所收集的反射/独特显著反射的数目(1>2<7(1))强度的变异吸收校正BrukerAXSCuKa1.54178566(2)2.58-44.497189/25721812来自等价物的半经验数据结构精修方法全矩阵最小二乘法，F:参数数目240拟合指数(R全部数据)0.1160加权拟合指数(Rw全部数据)0.2514S因子(拟合优度)1.047所用反射的数目2572分子、包括水分子中全部氢原子的处置混合消光校正SHELXL在结论性差值-傅里叶计算中的最大/最0.375/-0.248小残余电子密度绝对结构参数-0.2(8)所用的计算机程序SHELXTLV6.10(SheldrickGM(2000))SCHAKAL86(Keller,Freiburg1986)PLATON(Spek，ActaCryst.，1990)因此，本发明还涉及阿利吉仑硝酸盐的不同形式，特别是不同的多晶型形式。对物理化学方法如干燥、过筛、研磨而言以及在采用药物赋形剂进行的盖伦工序、即在混合工序中、在制粒中、在喷雾干燥中、在压片中，纯活性物质的品质的基本特征是活性物质的水吸收或水损失，其取决于相关环境的温度和相对湿度。在某些制剂中，游离和结合水毫无疑问地与赋形剂一起亏1入和/或由于与各配制工序相关的原因7jC被加入到加工团块中。这样，药物活性物质与游离7JC接触相当长的时间，这取决于不同活动的温度(部分蒸汽压)。通过使用动态蒸气吸收(DVS-1，来自表面测定系统有限公司(SurfaceMeasurementSystemsLTD),Marlow，白金汉郡，UK)经过预定时间间隔和预定相对湿度进行等温测量来完成该性质的清楚表征。表4说明了对于39.4mg阿利吉仑硝酸盐样品而言和对于在每个湿度水平平衡后2小时的时期而言在25。C作为相对湿度的函数的质量变化、即水吸收或损失。显示了在吸收和解吸循环过程中的质量变化。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>这种基于热重法的吸收方法的测量误差是约0.1%。因此，在所用M(从药学-盖伦的观点来看是现实的)下阿利吉仑硝酸盐未显示出可测量的水吸收或损失。因此，样品是非吸湿性的，其在95%RH下的水分吸收为0.3%。考虑到半富马酸盐的性质，这在很大程度上是令人惊奇的。这种性质在化学生产的最终阶段以及实际上还在不同剂量形式的所有盖伦工序阶段是关键的。这种例外的稳定性同样地通过活性成分的持续可用性使患者受益。阿利吉仑硝酸盐对水而言的例外的稳定性还可以在稳定性测试中显示。在这些测试中，无论是在开口容器还是在密闭安瓿中在40。C和75%相对湿度下放置四周后，阿利吉仑硝酸盐的含水量保持恒定。将其与阿利吉仑半富马酸盐相对差的稳定性进行对比，如表3所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>由于该硝酸盐具有有利的结晶性，因而适于直接压制成相应的片剂。除了该硝酸盐具有良好的理化性质外，为了改善和简化药物的全部生产方法使用这种盐也是有利的。例如，当采用例如EP678503A中所公开的方法时，半富马酸盐必须在N-脱保护之后以单独的步骤形成。然而，当采用硝酸时，N-脱保护和盐形成可以在一个步骤中进行，因而使得生产方法效率更高。本发明的另一个目的是本发明的盐的制备。包括其无定形或结晶形式的本发明的盐可以如下制备为了形成所述盐，该方法在溶剂系统中进行，在该溶剂系统中，两种反应物、即碱阿利吉仑和单独的^充分溶解的。为了达到结晶或沉淀，使用所得盐在其中仅微溶或根本不溶的溶剂或溶剂混合物是方便的。对于本发明的盐而言，一种变通方法是使用这种盐在其中极易溶解的溶剂和随后向该溶液中加入反溶剂，即，所得盐在其中溶解性差的溶剂。对于盐结晶而言，另一种变通方法在于浓缩该盐溶液，例如通过加热，酌情在减压下，或者通过緩慢蒸发溶剂，例如在室温下，或者通过加入晶种进行接种，或者通过设置形成水合物所需的水分活度。可以使用的溶剂例如有C广Cs-链烷醇类，优选乙醇和异丙醇；以及CrCs-二烷基酮类，优选丙酮，及其与水的混合物。用于盐结晶的反溶剂可以是例如C3-Cr烷基腈类，尤其是乙腈；酯类，尤其是QrC7-烷烃羧酸-d-C5-烷基酯，例如乙酸乙酯或乙酸异丙酯；二-(d-Cs-烷基)-醚类，例如叔丁基甲基醚，还有四氢呋喃；Cs-Cs-烷烃类，尤其是戊烷、己烷、环己烷或庚烷；和甲苯。为了产生7jc合物，特别使用溶解和结晶方法，或者水平衡结晶方法。所述盐的制备方法的特征在于(i)将阿利吉仑游离碱溶于有机溶剂中；(ii)将硝酸与有机溶剂混合；(iii)将步骤(i)和(ii)中所得的溶液混合；(iv)将溶剂浓缩，例如通过加热进行，酌情在减压下进行，或者通过緩慢蒸发，例如在室温下，直至沉淀；(v)向蒸发残余物中任选地加入另外的有机溶剂，特别是如果形成浓稠浆液的话；(Vi)过滤浆液并干燥，获得所述盐。在溶解工序(i)中，所用的有机溶剂有利地是醇类，例如乙醇或异丙醇，或者烷基腈类，特别是乙腈，和水。最优选的有机溶剂是醇类，例如异丙醇。所述有机溶剂可以是任何适宜的级别，优选是高纯度级别，例如>90%,更优选>95%，例如HPLC级别。必要时，所述溶剂可以温热至室温以上、例如25-60'C、更优选30-50。C。阿利吉仑游离碱可以原样溶解或者以预溶解形式使用。预溶解的阿利吉仑游离碱是优选的。用于预溶解阿利吉仑游离碱的溶剂可以与上文相同，优选醇类，例如乙醇。在工序步骤(ii)中，所用的有机溶剂有利地是醇类，例如乙醇或异丙醇，或者烷基腈类，特别是乙腈，和水。最优选的有机溶剂是醇类，例如异丙醇。所述有机溶剂可以是任何适宜的级别，优选高纯度级别，例如>卯％，更优选>95%，例如HPLC级别。必要时，所述溶剂可以温热至室温以上、例如25-6(TC、更优选30-5(TC。硝酸优选以水溶液的形式使用。硝酸的水溶液优选是0.5-20N、更优选1-10N、例如6N。在工序步骤(iv)中，有利地将所述混合溶液静置，以便緩慢蒸除溶剂。这优选在室温、例如20-25。C下进行。也可以通过温热至室温以上、例如〉25至100。C、更优选30至70'C来进行混合溶液的浓缩。或者，将溶液冷却至室温以下、更优选-10至〈0。C、还更优选-5至10。C。通常静置足够时间以发生沉淀，例如1至48小时、优选17至36小时、最优选20至30小时。在某些实例中，特别是当以实验室M^进行时，4至8小时可以是足够的。优选地增加步骤(v)以有助于样品转移和过滤，否则，如果残余物是浆液形式时是非常浓稠的和不易于转移。在工序步骤(vi)中，干燥优选在升高温度、更优选30-150。C、还更优选40-100。C、最优选45-70。C下进行。或者或另外地，干燥可以在大气压以下、优选在0.2-0.02巴的真空、更优选0.1-0.05巴的真空下进行。干燥通常进行直至产生恒定质量。优选地将产物干燥5-36小时、优选10-24小时、最优选15-20小时。形成盐的方法同样是本发明的目的。在一种优选的变通方法中，结晶可以通过加入至少一粒晶种进行优化，例如被加速。本发明的盐可以例如以药物制剂的形式使用，所述制剂包含活性物质，例如治疗有效量的活性物质，任选地还包含可药用载体，例如还包含无机或有机的固体或任选地液体可药用载体，其适于经肠、例如口服或者经胃肠道外施用。本发明特别涉及药物组合物，尤其是固体剂量单位形式的药物组合物，其优选用于口服施用，任选地还含有可药用栽体。此类药物制剂可用于例如预防和治疗可以通过阻断A1^受体而被抑制的疾病或病症，例如选自下组的疾病和病症(a)高血压、充血性心力衰竭、肾衰竭且尤其是慢性肾衰竭、经皮腔内血管成形术后再狭窄和冠状动脉旁路手术后再狭窄；(b)动脉粥样硬化、胰乌素抵抗和X综合征、2型糖尿病、肥胖症、肾病、肾衰竭如慢性肾衰竭、曱状腺功能减退、心M^t塞(MI)后的存活、冠心病、老年高血压、家族性血脂异常性高血压、胶原形成增加、纤维变性和高血压后重塑(联合的抗增殖效应)，所有这些疾病或病症伴有或不伴有高血压；(c)具有或不具有高血压的内皮功能障碍，(d)高脂血症、高脂蛋白血症、动脉粥样硬化和高胆固醇血症，和(e)青光眼。主要用途是用于治疗高血压和充血性心力衰竭以及心肌梗塞后。相关领域技术人员完全能够选择相关的和标准的动物实验模型来证实上下文所指出的治疗适应症和有益的效果。例如可以使用相关领域已知的相应的药理模型来证明施用代表性的本发明的盐或根据本发明所用的活性药物的组合的药物活性。相关领域技术人员完全能够选择相关的和标准的动物实验模型来证实上下文所指出的治疗适应症和有益的效果。药物功效在多种动物模型中进行评价，包括醋酸去氧皮质酮-盐大鼠(DOCA-盐)和自发性高血压大鼠(SHR)，以正常盐饮食或盐负荷(含4-8%盐的大鼠食物或者1%NaCl作为饮用水)维持。DOCA-盐实验模型使用急性或慢性研究方案。急性研究方案包括使用具有留置股动脉和静脉导管的大鼠历经6小时试验期对各试样物质的效果进行评价。急性研究方法评价了在DOCA-盐高血压建立期期间测试物质降低血压的能力。相反，慢性研究方法评价了在DOCA-盐高血压发展期期间测试物质防止或延迟血压升高的能力。因此，在慢性研究方法中通过无线电发射仪来监控血压。在开始DOCA-盐处置之前和因而在诱发高血压之前，将无线电发射仪通过手术植入大鼠的腹主动脉。长期监控血压达6周(大约在施用DOCA-盐前1周和其后5周)。通过吸入含有2-3%异氟烷的氧气、继之以腹腔注射100mg/kg阿米妥钠(异戊巴比妥)麻醉大鼠。通过稳定节律呼吸模式评价麻醉的水平。急性研究方法在植入DOCA时对大鼠进行单侧肾切除。剃除左侧腹部和颈背部的毛，用无菌乙醇拭子和聚维酮/衫碟拭。手术过程中将大鼠放置在加热板上以保持体温在37。C。透过皮肤和下层肌肉切开20mm切口暴露左肾。将肾脏与周围组织分离，从腹腔中取出，在肾动脉周围和接近它们与主动脉的结合处的静脉安全地进行两次结扎(3-0丝线)。然后剪断肾动脉和静脉并将肾脏移出。用4-0缝合丝线和不锈钢缝合夹分别闭合肌肉和皮肤伤口。同时，在颈背部切开15mm切口，皮下^v包含醋酸去氧皮质酮(100mg/kg)的3-周释放药丸(美国创新研究(InnovativeResearchofAmerica),萨拉索塔，佛罗里达州)。然后将伤口用不锈钢缝合夹闭合，用聚维酮/碘处理两处伤口；对大鼠进行术后肌内注射普鲁卡因青霉素G(100，000U)和皮下注射丁丙诺啡(0.05至0.1mg/kg)。将大鼠迅速放在l。/oNaCl+0.2。/。KCl饮用水上；该处理持续至少3周，此时所述动物已经变得高血压且可用于实验。在实验前48小时，将动物用异氟烷麻醉并将导管植入股动脉和静脉中用于测量动脉压、收集血和施用实验化合物。将大鼠圏在Plexiglas饲养笼中恢复48小时，该饲养笼还可用作实验盒。慢性研究方法除了在单側肾切除和开始DOCA和盐前7-10天给大鼠^无线电发射仪之外，该方法与上述方法相同。此外，大鼠不进行放置股动脉和静脉导管的手术。无线电发射仪的植入如M.K.Bazil，C.Krulan和R丄.Webb.在J.Cardiovasc.Pharmacol.22:897-905，1993中所述。然后在计算机上设置方案用于在预订时间点测定血压、心率等。在各时间点历经各时间间隔收集基线数据。例如，基线或给药前数值通常包括给药前24小时收集数据和三次连续测定求平均值。在给药前、给药期间和给药后在各个预先选择的时间点测定血压、心率和活性。所有测定在未受限制和未受扰动的动物上进行。最长研究时间由电池寿命决定，可长达九个月。对于这段时期的研究，大鼠经口服给药(l-3ml/kg溶媒)，每天不超过两次，或者经饮用水或与食物混合进行给药。对于短期研究、即最多8周，药物通过皮下^渗透微泵来给予。渗透微泵根据药物递送速率和时间来选择。阿利吉仑剂量范围为l-10mg/kg/天。此外，SHR#^用于研究阿利吉仑的作用。SHR的高血压背景通过长期盐负荷以抑制肾素血管紧张素系统(RAS)或者通过长期缺盐以激活SHR的RAS来进行修正。进行这些操作以更广泛地评价各测试物质的效能。实验在由塔可尼克农场(TaconicFarms),Germantown，纽约(Tac:N(SHR)fBR)提供的自发性高血压大鼠(SHR)上进行。将无线电遥测装置(数据科学国际乂A司(DataSciencesInternational,Inc.),St.Paul,明尼苏达州)植入14-16周龄的全部实验动物的较低腹主动脉。使所有SHR在手术^操作后回复至少2周，然后开始实验。心血管参数通过无线电发射仪连续监测并传送至接收器，然后在那里采用计算机化数据采集系统收集数字化信号并进行l^存。在清醒、自由活动和未受扰动的SHR中在它们的饲养笼中监测血压(平均动脉收缩压和舒张压)和心率。动脉血压和心率每10分钟测量10秒并记录。对每只大鼠所报告的数据表示历经24小时时期平均的平均值，并且由每天所采集的144-10分钟样品组成。血压和心率的基线值包括在开始药物治疗前所测定的三次连续24小时读数的平均值。将所有大鼠圏养在温度和湿度受控的房间内并维持12小时光暗循环。除了心血管参数，还记录所有大鼠的体重每周测定。治疗在饮用水中经由每天口服管饲法或如上所述在渗透微泵中进行施用。如果在饮用水中给予，则每周测五次耗水量。然后根据每只大鼠的耗水量、药物物质在饮用水中的浓度和个体体重计算个体大鼠的阿利吉仑剂量。每三至四天新鲜配制所有药物在饮用水中的溶液。饮用水中阿利吉仑的典型剂量范围是3-30mg/kg/天。但是，在其中响应者率被组合治疗提高的情况中，剂量与作为单独治疗所用的那些相同。当通过口服管饲法给药时，阿利吉仑的剂量范围是l-50mg/kg/天。完成慢性研究后，立即将SHR或DOCA-盐大鼠麻醉并快速移出心脏。分离并移除心耳后，对左心室和左加右心室(总心室)进行称重并记录。然后将左心室和总心室质量针对体重进行标准化并记录。所有所报告的血压和心脏质量的值表示为组平均值±SEM。在处置后评价了血管功能和结构，以评估组合的有益效应。按照IntenganHD，ThibaultG,LiJS，SchiffrinEL，C7mi/她Vw100(22):2267-2275，1999中所述的方法研究了SHR。同样，用于评估DOCA-盐大鼠中血管功能的方法学在IntenganHD，ParkJB，Schiffrin，EL，好3;/wte附iVw34(4第2部分)907-913，1999中有描述。本药物制剂(如果希望的话还可以包含其它具有药理活性的物质)以本身已知的方式进行制备，例如通过常规的混合、制粒、包衣、溶解或冷冻干燥方法来制备，并且包含约0.1%-100%、尤其是约1%-约50%、对于冷冻千燥制剂最多100%的活性物质。本发明同样地涉及包含本发明的盐的组合物。本发明同样地涉及本发明的盐优选地在制备药物制剂、特别是用于预防和治疗可以通过肾素抑制被调控的疾病或病症的药物制剂中的用途。首要用途是治疗高血压、肾衰竭、左心室功能紊乱和心力衰竭。本发明同样地涉及用于预防和治疗可以通过肾素抑制被调控的疾病或病症的用途，其特征在于给需要该治疗的患者、包括人类患者施用治疗有效量的本发明的盐和^f壬选的至少一种用于治疗心血管疾病和上下文列出的相关病症和疾病的纟且分。本发明同样地涉及组合，例如药物组合，其含有本发明的盐或在每种情况下其可药用盐与至少一种用于治疗心血管疾病和上下文列出的相关病症和疾病的组分或在每种情况下其可药用盐。与其它用于治疗心血管疾病和上下文列出的相关病症和疾病的组分或在每种情况下其可药用盐的组合同样是本发明的目的。该组合可以例如用选自下组的下述组分来制备(i)HMG-Co-A还原酶抑制剂或其可药用盐，(ii)血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂或其可药用盐，(iii)钓通道阻滞剂或其可药用盐，(iv)醛固酮合酶抑制剂或其可药用盐，(v)眵固酮拮抗剂或其可药用盐，(vi)血管紧张素转化酶/中性内肽酶(ACE/NEP)双重抑制剂或其可药用盐，(vii)内皮素拮抗剂或其可药用盐，(viii)血管紧张素II受体阻断剂(ARB)或其可药用盐，和(ix)利尿剂或其可药用盐。HMG-Co-A还原酶抑制剂(也称作p-羟基-P-曱基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂)被理解为是可以用于降低血液中脂质水平、包括胆固醇的那些活性药物。HMG-Co-A还原酶抑制剂类别包括具有不同结构特征的化合物。例如，可以提到的是选自以下的化合物阿托伐他汀、西立伐他汀、康帕丁(compactin)、达伐他汀、二氢康帕丁、fluindostatin(氟多他汀)、氟伐他汀、洛伐他汀、匹伐他汀、美伐他汀、普伐他汀、rivastatin(雷司他汀)、辛伐他汁和维洛他汀(velostatin)，或其各自的可药用盐。优选的HMG-Co-A还原酶抑制剂是已经市售的那些药物，最优选是氟伐他汀和匹伐他汀，或其各自的可药用盐。用所谓的ACE-抑制剂(也称作血管紧张素转化酶抑制剂)来阻断血管紧张素I向血管紧张素II的酶降解是用于调节血压的成功的变通方法，因而还可以获得治疗充血性心脏衰竭的治疗方法。ACE-抑制剂类别包括具有不同结构特征的化合物。例如，可以提到的是选自以下的化合物阿拉普利、贝那普利、贝那普利拉、卡托普利、西罗普利、西拉普利、地拉普利、依那普利、依那普利拉(enaprilat)、福辛普利、咪达普利、赖诺普利、moveltopril(莫维托普利)、培咮普利、喹那普利、雷米普利、螺普利、替莫普利和群多普利，或其各自的可药用盐。优选的ACE-抑制剂是已经市售的那些药物，最优选是贝那普利和依那普利。CCB类别主要包括二氢吡啶类(DHP)和非-DHP类，例如地尔硫卓型和维拉帕米型CCB。可用于所述组合的CCB优选是选自如下的DHP代表物氨氯地平、非洛地平、ryosidine(若司咬)、伊拉地平、拉西地平、尼卡地平、硝苯地平、尼古地平、尼鲁地平、尼莫地平、尼索地平、尼群地平和尼伐地平(nivaldipine)，并且优选是选自如下的非-DHP代表物氟桂利溱、普尼拉明、地尔石危卓、芬地林、戈洛帕米、米贝拉地尔、阿尼帕米、噻帕米和维拉帕米，及其各自的可药用盐。所有这些CCB在治疗学上可用作例如抗高血压、抗心绞痛或抗心律失常药物。优选的CCB包括氨氯地平、地尔硫卓、伊拉地平、尼卡地平、硝苯地平、尼莫地平、尼索地平、尼群地平和维拉帕米，或者例如根据具体的CCB，其可药用盐。尤其优选的DHP是氨氯地平或其可药用盐，尤其是其苯磺酸盐。尤其优选的非-DHP代表物是维拉帕米或其可药用盐，尤其是盐酸盐。醛固酮合酶抑制剂是将皮质酮转化为醛固酮的酶，其通过将皮质酮羟基化以形成18-OH-皮质酮和将18-OH-皮质酮转化为醛固酮。醛固酮合酶抑制剂类别已知被用于治疗高血压和原发性醛固酮增多症，其包括甾体和非甾体醛固酮合酶抑制剂，最优选后者。的那些醛固酮合酶抑制剂。醛固酮合酶抑制剂类别包括具有不同结构特征的化合物。例如，可以提到的是选自非栽体芳香酶抑制剂阿那曲峻、法倔唑(包括其(+)-对映异构体)以及甾体芳香酶抑制剂依西美坦或者在各自适合的情况下其可药用盐的化合物。最优选的非甾体醛固酮合酶抑制剂是下式的法倔唑盐酸盐的(+)-对映异构体(美国专利4617307和4889861):优选的血管紧张素转化酶/中性内肽酶(ACE/NEP)双重抑制剂例如是奥马曲拉(omapatrilate)(参见EP629627)、法西多曲或fasidotrilate(法西多曲特)，或者在适合的情况下其可药用盐。优选的内皮素拮抗剂例如是波生坦(参见EP526708A)和替唑生坦(参见WO96/19459)，或其各自的可药用盐。可以在本发明的组合中使用的适宜的血管紧张素II受体阻断剂包括具有不同结构特征的AT广受体拮抗剂，优选是具有非肽结构的那些。例如，可以提到的是选自以下的化合物缬沙坦(EP443983)、氯沙坦(EP253310)、坎地沙坦(EP459136)、依普罗沙坦(EP403159)、厄贝沙坦(EP454511)、奥美沙坦(EP503785)、他索沙坦(EP539086)、替米沙坦(EP522314)、指定为E-4177的下式化合物优选的甾体眵固酮拮抗剂是下式的依普利酮或者螺内酯。指定为SC-52458的下式化合物:或其各自的可药用盐。优选的A1V受体拮抗剂是已经市售的那些药物，最优选是缬沙坦或其可药用盐。利尿剂例如是选自氯漆，桊、氢氯噢，秦、methylclothiazide(甲基氯漆噪)和chlorothalidon(氯痿酮)的瘗嚷类衍生物。最优选是氢氯噻溱。优选地，本发明的组合的活性剂的联合治疗有效量可以同时或以任意次序分别地或以固定组合施用。以通用名或商品名识别的活性剂的结构可以从标准纲要"默克索引"(TheMerckIndex)的现行版本或者从数据库如国际专利(PatentsInternational)(例如IMS世界出版物(IMSWorldPublications))中获得。其相应的内容引入本文作为参考。任意本领域技术人员完全能够识别这些活性剂，并且根据这些参考文献同样能够制备和在体外和体内标准实验模型中测试药物适应症和性质。相应的活性成分或其可药用盐还可以以溶剂化物的形式使用，例如水合物或者包含用于结晶的其它溶剂。将被组合使用的化合物可以作为可药用盐存在。如果这些化合物含有例如至少一个碱性中心，则它们可以形成酸加成盐。如果需要的话，还可以形成存在另外的碱性中心的相应的^成盐。含有酸性基团(例如COOH)的化合物还可以与碱成盐。在一种变通中，本发明同样地涉及"成套药盒"，例如，本发明的将被组合使用的组分可以独立地或者通过使用含有不同量组分的不同固定组合、即同时或在不同时间点给予。那么，成套药盒的各部分可以例如同时施用或者按时间顺序交错，即对于成套药盒的各部分而言在不同时间点和以相同或不同的时间间隔。优选地，选择时间间隔以便各部分组合使用对所治疗疾病或病症的效应高于仅使用各组分中仅任意一种将获得的效应。此外，本发明还涉及包含本发明的组合以及同时、分别或依次使用的说明书的商业包装。剂量可以取决于多种因素，例如应用模式、种属、年龄和/或个体状况。例如，施用于体重约75kg的包括人在内的温血动物的剂量、尤其是有效抑制肾素活性、例如降4氐血压的剂量为约3mg至约3g，优选约10mg至约lg，例如20至200mg/人/天，优选地分为1至4个单剂量，所述单剂量可以例如是等量的。通常儿童接受成人剂量的约一半。每一个体所需的剂量可以例如通过测定活性成分的血清浓度来监控，并调整至最佳水平。基于游离碱计算，单剂量包含例如每名成人患者75mg、150mg或300mg。本发明通过实施例来具体说明，并且还涉及在实施例中所命名的新化合物以及它们的用途及制备方法。以下实施例用于解释本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例1:(2(S),4(S)，5(S)，7(S)-N-(3-氨基-2，2-二甲基-3-氧代丙基)-2，7-二(1-甲基乙基)-4-羟基-5-氨基-8-[4-甲氧基-3-(3-甲氧基-丙氧基)苯基-辛酰胺硝酸盐的制备将3.21g(2(S)，4(S)，5(S)，7(S)國N-(3-絲-2，2-二甲基誦3-氧代丙基)誦2，7-二(1-甲基乙基)-4-羟基-5-氨基-8-[4-曱氧基-3-(3-甲氧基-丙氧基)苯基卜辛酰胺游离碱在乙醇中的溶液(43%重量)溶于2ml异丙醇(HPLC级别)中。将0.5ml硝酸(6N)另外地与2ml异丙醇(HPLC级别)混合。将上述两份异丙醇溶液在室温下混合，没有沉淀出现。在环境温度下蒸发该混合溶液中的溶剂直至沉淀出现。浆液变得非常浓稠。向浓稠浆液中加入2ml异丙醇。将浆液在环境温度下再搅拌4小时。过滤浆液，将固体在真空干燥箱(箱内真空0.05巴)中于5(TC干燥过夜。干燥产物称重为1.275g(产率:82.9。/。)。将产物在真空干燥箱中于65'C再干燥6小时，随后进行表征。在具有小的内部容积的密闭样品容器中，以10JOmiiT1的速率加热，测得根据实施例1制备的阿利吉仑硝酸盐的熔点是173。C，熔融焓是105.8J/g。通过立体专一性HPLC方法测定根据实施例1制备的盐的对映异构体纯度。通过手性柱(ChiralAGP)进行立体专一性分离。测得对映异构体纯度即ee=100%。元素分析给出了阿利吉仑硝酸盐中存在的元素的下述测定值。元素分析的结果在误差范围内与阿利吉仑硝酸盐的总式相应。<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>权利要求1.式I化合物与硝酸的盐2.根据权利要求l的盐，为结晶形式、部分结晶形式或无定形形式。3.根据权利要求l的盐，其特征在于具有以倒数波数(cm-1)表示的吸收带的DRIFT-IR光镨358cm-1(O-H或N-H)、2960cm-1(C-H)、1665cm-1(酰胺，C=0)、1516cm-1(酰胺或芳香C=C)、1388cm-1(N03-或C-H)、1191cm-1(C-O)、1136cm-1(醚或叔醇C-O)、1028cm-(醚或叔醇C-O)、809cm-1(芳香C-H或N03-)、631cm-1(酰胺)；或者用ScintagXDS2000粉末衍射仪获得的包含下述晶面间距的X-射线粉末衍射图以A(土0.lA)表示的d:17.0、9.6、8.3、7.5、6.2、5.8、5.5、4.6、4.5、4.3、4.2、4.1、4.0、3.8、3.7、33、3.1、2.9、2.1。4.根据权利要求l-3任一项的盐，为溶剂化物形式。5.根据权利要求l-4任一项的盐，为水合物形式。6.根据权利要求l-5任一项的盐，为选自如下的形式(i)结晶形式；(ii)部分结晶形式；(iii)无定形形式；和(iv)多晶型形式。7.药物制剂，含有权利要求l-6任一项的化合物和可药用赋形剂或添加剂。8.根据权利要求7的药物制剂，含有与至少一种选自如下的组分组合的根据权利要求1-6任一项的盐(i)HMG-Co-A还原酶抑制剂或其可药用盐，(ii)血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂或其可药用盐，(iii)钓通道阻滞剂或其可药用盐，(iv)醛固酮合酶抑制剂或其可药用盐，(v)醛固酮拮抗剂或其可药用盐，(vi)血管紧张素转化酶/中性内肽酶(ACE/NEP)双重抑制剂或其可药用盐，(vii)内皮素拮抗剂或其可药用盐，(viii)血管紧张素II受体阻断剂(ARB)或其可药用盐，和(ix)利尿剂或其可药用盐.9.权利要求l-6任一项的化合物在制备药物中的用途，所述的药物用于预防和治疗可以通过肾素抑制被调控的疾病和病症。10.根据权利要求1的盐的制备方法，其特征在于(i)将阿利吉仑游离碱溶于有机溶剂中；(ii)将硝酸与有机溶剂混合；(iii)将步骤(i)和(ii)中所得的溶液混合；(iv)将溶剂浓缩，例如通过加热进行，酌情在减压下进行，或者通过緩慢蒸发，例如在室温下，直至沉淀；(v)向蒸发残余物中任选地加入另外的有机溶剂，特别是如果形成浓稠浆液的话；(vi)过滤浆液并干燥，获得所述盐。全文摘要本发明涉及阿利吉仑的新盐、各自的制备和用途以及含有该盐的药物制剂。文档编号A61P9/00GK101389598SQ200780006239公开日2009年3月18日申请日期2007年2月23日优先权日2006年2月24日发明者P·卡普因斯基,R·吴,冯丽丽申请人:诺瓦提斯公司