专利名称：一种静脉注射用水飞蓟宾类化合物乳剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种静脉注射用乳剂，特别是一种水飞蓟宾类化合物乳剂及其 制备方法，属医药药物领域。
背景技术：
我国是肝病高发国家，目前约有现症的慢性乙型肝炎患者3,000万人，1.2 亿乙肝病毒携带者。肝病患者大都伴有胆囊疾病，用药周期较长，难以彻底治 愈，反复发作的情况较多。
水飞蓟宾(Silibinin; SL)是从菊科植物水飞蓟种子中提取精制而得到的 类黄酮化合物，其化学结构式如下
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据报道，水飞蓟宾及其同分异构体对肝细胞膜有稳定作用，它能阻止或避 免溶解的细胞成分(例如转氨酶)流失。水飞蓟宾可限制某些肝毒性物质(如
cr鹅膏菌素)穿透进入细胞内部，增强蛋白质合成能力，增强肝细胞的修复能
力和再生能力，临床上广泛用于治疗急、慢性肝炎，初期肝硬变，肝中毒等疾 病。然而，水飞蓟宾及其同分异构体的水溶性差，其口服生物利用度较低(含
70% 80%水飞蓟素的标准提取物，从动物和人胃肠道仅能吸收20% 30% )，代谢较快，因此需频繁给药才能保证血药浓度在有效范围内，而频繁给药又易 导致积蓄中毒。
同时，对于水飞蓟宾类化合物的注射剂，目前也未见在市场上出现，因其 普通的注射剂需要添加大量的助溶剂或增溶剂等辅料，这必然会增加其毒性和 刺激性，增加临床用药的风险。
而乳剂作为药物载体却具有以下优点1.作为油相的大豆油及作为乳化剂 的卵磷脂，对机体的安全性已被确认。大豆油和卵磷脂作为注射用辅料已被我 国和世界其他多国药典所收载。2.乳剂中液滴的分散度很大，生物利用度高。 3.乳剂中的液滴能够起到控制扩散的作用，可使药物缓释化，延长半衰期。4. 能够提高药物对靶组织的靶向性，特别具有较强的肝被动靶向性，可达到高效、 低毒的效果。
但是，使用乳剂作为药物载体有两个关键问题需要解决l.能否将药物制 备成乳剂取决于药物本身的理化特性及其临床适应症，并非任何原料药均适合 制备成乳剂，也没有任何一个载药乳剂的处方和制备工艺是能够直接套用已有 ，术简单获得。2.将药物制备成乳剂后能否达到预期的效果是无法简单推知的， 必须进行试验加以验证。迄今为止，国内外尚未见任何有关水飞蓟宾脂肪乳剂 的文献及专利报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种静脉注射用水飞蓟宾类化合物乳剂及其制备方 法，它是以水飞蓟宾或其同分异构体的一种为主要活性成分，加上药学上常用 的甘油三酯类化合物、乳化剂、注射用水或制药用水，经乳化技术制备而得到。
体外研究发现，脂质乳剂可被激活的巨噬细胞、中性粒细胞、血管内皮细 胞所摄取。静脉注射乳剂后，由于炎症的存在，使得有较正常组织更多的大量 蓄积的单核巨噬细胞可摄取和清除血循环中的脂质，从而使乳剂载体可选择性地在炎症部位蓄积，使其成为抗炎药物的理想载体。在通常的药物治疗中，能 够达到病变部位的药物仅为给药量的1%甚至更少，而利用乳剂与炎症病变部 位的特殊亲和性，可使病变部位药物量高于正常部位的数十倍至数百倍，从而 显著提高了药物治疗指数。
由此可见，药物是否适宜制成乳剂，应考虑药物本身的药理活性。研究表 明水飞蓟宾及其同分异构体对肝细胞膜有稳定作用，它阻止或避免溶解的细 胞成分(例如转氨酶)流失。水飞蓟宾可限制某些肝毒性物质(如a-鹅膏菌 素)穿透进入细胞内部，增强蛋白质合成能力，增强肝细胞的修复能力和再生 能力。因此，将水飞蓟宾制成乳剂，可以将水飞蓟宾的疗效与靶向给药技术理 想结合。
在确定水飞蓟宾适合制成乳剂后，进而应考虑其能否制成乳剂。 一般而言， 药物能否制成乳剂，主要取决于其在甘油三酯类化合物中及水中的溶解行为。 因此，首先应对水飞蓟宾在各种药用溶剂中的溶解行为进行研究，进而优选处 方。经过实验研究发现水飞蓟宾在甘油三酯类化合物(如大豆油)中的溶解 f与在水中的溶解度均较差，但对其油水分配行为的研究表明，水飞蓟宾在等 体积的油水两相中的含量比例约为22: 1 24: 1，通过特殊的方法增加乳化剂 的量，其油水分配系数可达30: 1 33: 1。此溶解特性表明水飞蓟宾亲脂性 明显大于亲水性，可以被制备成乳剂。
为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下
一种静脉注射用水飞蓟宾类化合物乳剂，它是以水飞蓟宾类化合物为主要 活性成分，加上药学上常用的甘油三酯类化合物、乳化剂、注射用水制备而成， 其特征在于按重量/体积百分比，配制1000ml的原料组成包括水飞蓟宾类
化合物0.08 8%，甘油三酯类化合物10 48 %，乳化剂0.08 1$%，水溶性 或油溶性附加剂1 15 %，其余为注射用水，该乳剂粒径的分布范围在0.1 1微米，平均粒径为0.2 0.4微米。
其中，所述的甘油三酯类化合物为符合中国药典规定的长链甘油三酯，或 者是中链甘油三酯的一种或二种，亦或者是长链甘油三酯与中链甘油三酯的一 种或二种的混合物。其中长链甘油三酯为大豆油、蓖麻油、橄榄油、玉米油、 麻油、椰子油、红花油、棉子油、茶油或可可豆油；中链甘油三酯为脂肪酸甘 油酯、油酸甘油酯、亚油酸甘油酯、聚乙二醇月桂酸甘油酯、油酸乙酯、亚油 酸乙酯、辛酸甘油三酯或癸酸甘油三酯中的一种或者一种以上的混合物。
所述的乳化剂为符合中国药典规定的豆磷脂、卵磷脂、大豆卵磷脂、帕洛 沙姆188(F-68)、泊洛沙姆188、 Tween80、 Tween20或Span20中的一种或一种 以上的混合物。
所述的水溶性附加剂选自符合中国药典规定的pH调节剂或等渗调节剂 中的一种或一种以上的物质。其中pH调节剂为O.lmol/L的盐酸或O.lmol/L 的氢氧化钠；等渗调节剂为氯化钠以及葡萄糖、山梨醇、木糖醇、甘露醇或甘 油中的一种或一种以上的混合物。
' 所述的油溶性附加剂选自符合中国药典规定的稳定剂或抗氧剂中的一种或 一种以上的物质。其中稳定剂为油酸、油酸钠或辛酸钠中的一种或一种以上的 混合物；抗氧剂为维生素A、维生素E或维生素C中的一种或一种以上的混 合物。
在本发明所述的乳剂中加入一种或几种药学上可接受的冷冻保护剂和/或 骨架形成剂，经冷冻干燥处理，即可得到无水乳液组合物，该组合物加水又可 再分散而形成具有相应粒径大小及分布的液态乳剂。
本发明所述静脉注射用乳剂的制备方法如下
a、按上述重量/体积百分比称取水飞蓟宾类化合物、甘油三酯类化合物、 乳化剂、附加剂及注射用水备用；b、 将水飞蓟宾类化合物或者于其中加入油溶性附加剂后，再加入预热至 6(TC的甘油三酯类化合物中，混合形成油相；
c、 将乳化剂与水溶性附加剂溶解分散于预热至6(TC的注射用水中，混合 形成水相；
d、 在10000转/分钟的高速搅拌条件下，将b步骤制得的油相缓慢加人c 步骤制得的水相中，至油相均匀分散于水相中即制得初乳；
e、 将d步骤制得的初乳转移至高压乳匀机内，反复匀化至初乳的平均粒径 达0.4微米以下，充氮灌装，灭菌，即得成品乳剂。
本发明的优点在于
1、 本发明通过增加水飞蓟宾的溶解性和稳定性，从而有效提髙了其生物利 用度，提高了水飞蓟宾在肝脏组织的靶向性，增加了药物的作用时间和作用效 果，降低了毒副作用。
2、 本发明制得的静脉注射乳剂，突破了水飞蓟宾在油中对其溶解度的限制，
显著增加了乳剂的载药量与药物浓度，从而降低了生产成本，更方便于临床用 药。
体外研究发现，脂质乳剂可被激活的巨噬细胞、中性粒细胞、血管内皮细 胞所摄取。静脉注射乳剂后，由于在炎症存在有较正常组织更多的大量蓄积的 单核巨噬细胞，可摄取和清除血循环中的脂质，从而使乳剂载体可选择性地在 炎症部位蓄积，使其成为抗炎药物的理想载体。在通常的药物治疗中，能够达 到病变部位的药物仅为给药量的1%甚至更少，而利用乳剂与炎症病变部位的 特殊亲和性，可使病变部位药物量高于正常部位的数十倍至数百倍，从而显著 提高药物治疗指数。
图1为本发明水飞蓟宾静脉乳剂的粒径分布结果图
图2为本发明水飞蓟宾静脉乳剂的Zeta电位测定结果图具体实施方式
实施例1
将10g卵磷脂和30g甘油溶解分散于700ml预热至60'C的注射用水中， 搅拌使磷脂均匀分散在水相中；另取3g水飞蓟宾加入200g预热至6(TC的大 豆油中，溶解完全后得油相。将注射用大豆油缓慢加入以10000转/分钟搅拌的 水相中，于60'C的温度下搅拌5分钟，得初乳；将初乳加注射用水至1000毫 升，置高压乳匀机内反复匀化至平均粒径达0.4微米以下，充氮灌装，灭菌， 即得成品静脉注射用乳剂。
实施例2
将10g豆磷脂、4g帕洛沙姆188(F-68)与20g甘露醇溶解分散于650ml预 热至60'C的注射用水中，制备成均匀分散的水相；另取4g水飞蓟宾加入250g 预热至6(TC的注射用蓖麻油中，溶解完全后得油相。将油相缓慢加入以10000 转/分钟搅拌的水相中，于6(TC的温度下搅拌10分钟，制备得初乳；将初乳加 注射用水至1000毫升，置高压乳匀机内匀化3次，至平均粒径达0.4微米以 下，充氮灌装，灭菌，即得成品静脉注射用乳剂。
实施例3
将20g豆磷脂和25g甘油溶解分散于600ml预热至6(TC的注射用水中， 制备得到均匀分散的水相；另取2g水飞蓟宾加入150g预热至6(TC的大豆油中， 溶解完全后得油相。将油相缓慢加入以10000转/分钟搅拌的水相中，于60。C 的温度下搅拌10分钟，制备得初乳；将初乳加注射用水至1000毫升，置高 压乳匀机反复内匀化至平均粒径达0.4微米以下，充氮灌装，灭菌，即得成品 静脉注射用乳剂。
实施例4
将20g卵磷脂和50g甘露醇溶解分散于700ml预热至60。C的注射用水中， 制备得到均匀分散的水相；另取3g水飞蓟宾加入200g预热至60。C的大豆油中，溶解完全后得油相。将油相缓慢加入以10000转/分钟搅拌的水相中，于6(TC 的温度下搅拌10分钟，得初乳；将初乳加注射用水至1000毫升，置高压乳匀 机内反复匀化至平均粒径达0.4微米以下，充氮灌装，灭菌，即得成品静脉注 射用乳剂。 实施例5
将15g豆磷脂、3g吐温-80与30g甘露醇溶解分散于600ml预热至60'C的 注射用水中，制备成均匀分散的水相；另取3g水飞蓟宾加入200g预热至6(TC 的玉米油中，溶解完全后得油相。将油相缓慢加入以10000转/分钟搅拌的水相 中，于60'C的温度下搅拌10分钟，制备得初乳。将初乳加注射用水至1000毫 升，置高压乳匀机内反复匀化至平均粒径达0.4微米以下，充氮灌装，灭菌， 即得成品静脉注射用乳剂。
实施例6
将10g豆磷脂和20g甘油溶解分散于500ml预热至6(TC的注射用水中，制 备得到均匀分散的水相；另取2g水飞蓟宾加入150g预热至6(TC的大豆油中， 溶解完全后得油相。将油相缓慢加入以10000转/分钟搅拌的水相中，于60°C 的温度下搅拌10分钟，制备得初乳。将初乳加注射用水至1000毫升，置高压 乳匀机内反复匀化至平均粒径达0.4微米以下，充氮灌装，灭菌，即得静脉注 射用成品乳剂。
实施例7
将10g注射用大豆卵磷脂和50g注射用甘露醇溶解分散于500ml预热至 6(TC的注射用水中，制备得到均匀分散的水相；另取3g水飞蓟宾加入300g预 热至6(TC的橄榄中，溶解完全后得油相。将油相缓慢加入以10000转/分钟搅 拌的水相中，于60'C的温度下搅拌10分钟，得初乳，将初乳加注射用水至1000 毫升，置高压乳匀机内反复匀化至平均粒径达0.4微米以下，充氮灌装，灭菌， 即得静脉注射用成品乳剂。实施例8
将15g蛋黄卵磷脂、20g泊洛沙姆188与35g甘油溶解分散于700ml预热 至60'C的注射用水中，制备得到均匀分散的水相；另取3g水飞蓟宾、10g油酸 钠，加入100g预热至60。C的大豆油中，溶解完全后得油相。将油相缓慢加入 以10000转/分钟搅拌的水相中，于6(TC的温度下搅拌10分钟，制备得初乳。 将初乳加注射用水至1000毫升，置高压乳匀机内反复匀化，至平均粒径达0.4 微米以下，充氮灌装，灭菌，即得静脉注射用成品乳剂。
实施例9
将10g大豆卵磷脂与30g甘油溶解分散于600ml在6(TC水浴中预热的注射 用水中，制备得到均匀分散的水相；另取10g水飞蓟宾、10g维生素E，加入100g 在6(TC水浴中预热的蓖麻油中，溶解完全后得油相。将油相缓慢倒入水相，用 高速剪切分散乳化机分散5分钟，转速10000转/分钟，于6(TC的温度下搅拌10 分钟，制备得初乳。将初乳加注射用水至1000毫升，在高压均质机上反复匀化， 至平均粒径达0.4微米以下，充氮灌装，灭菌，即得静脉注射用成品乳剂。
下面通过相关实验数据结果对本发明乳剂的药理、药效及有益效果作进一 步说明
试验例l药物粒径分布与Zeta电位检查
我们对本发明实施例中所制备的乳剂粒径分布与Zeta电位进行了测定，粒 径分布测定结果见图l， Zeta电位测定结果见图2 (仪器Malvern—3000型粒 径分布及Zeta电位测定仪)。由图1可知，本发明制备的乳剂粒径分布均匀， PDI为0.086，呈正态分布，平均粒径279.3nm;由图2可知，本发明制备的乳 剂Zeta电位为一24.72mV。粒径分布与Zeta电位测定结果表明该乳剂粒径分 布均匀，稳定性良好，符合静脉注射乳剂要求。
试验例2 药物过敏性检査
方法将豚鼠按体重随机分为3组，每组6只。第1组各豚鼠间日一次，连续四次腹腔注射本发明制备的乳剂0.5ml/只致敏，然后于末次致敏后的第10 天，豚鼠足趾静脉注射本发明制备的乳剂l.Oml/只激发；第2组各豚鼠间日一 次，连续四次腹腔注射生理盐水0.5ml/只致敏，然后于末次致敏后的第10天， 豚鼠足趾静脉注射生理盐水l.Oml/只激发；第3组各豚鼠间日一次，连续四次 腹腔注射15X鸡蛋清液0.5inl/只致敏，然后于末次致敏后的第10天，豚鼠足趾 静脉注射15%鸡蛋清液1.0ml/只激发。三组均在激发注射后立刻至30分钟观察 每只动物的反应。
结果第l、 2组豚鼠激发注射后30分钟内，无一只出现竖毛、呼吸困难、 喷嚏、搔鼻、咳嗽、跳跃、痉挛、旋转及死亡；第3组豚鼠激发注射后2分钟 内，全部发生呼吸困难跳跃、痉挛及死亡。
结论本发明乳剂无致敏作用，可用于静脉注射。
试验例3 药物溶血性检査
方法取21只洗净并经生理盐水注射液淌过的干燥试管，分成平行三组，
每组7只试管，编号为1 7。每组由一人负责试验及结果观察。每组各试管分 别加入2%红细胞悬液2.5ml，其中1 5号试管分别加入本发明制备的乳剂 0.5ml、 0.4ml、 0.3ml、 0.2ml、 O.lml及生理盐水注射液2.0ml、 2.1ml、 2.2ml、 2.3ml、2.4ml; 6号试管加入生理盐水注射液2.5ml; 7号试管加入蒸馏水2.5ml， 全部摇匀后，置37'C恒温水箱中温孵，开始时每15分钟观察一次，l小时后每 隔1小时观察一次，连续观察4小时。
结果各组1 6号试管4小时内均未见溶血，红细胞沉入管底，上层液体 无色澄明，振摇红细胞能分散；7号试管15分钟内溶血，上层液体显红色。
结论本发明乳剂无溶血作用，可用于静脉注射。
试验例4 药物刺激性检査
方法取健康新西兰兔3只，均于左耳耳缘静脉滴注本发明制备的乳剂
25ml/kg，右耳耳缘静脉滴注生理盐水25ml/kg，每日一次，连续静滴三天，于静滴第一天开始，每天给药前、给药3小时、24小时观察注射部位有无水肿、 红斑，末次注射后24小时，颈动脉放血，处死动物，从耳根剪下耳朵置10% 甲醛溶液中固定，石蜡包埋切片，H.E染色，作组织病理学镜检。
结果兔耳缘静脉注射部位未见有水肿和红斑；组织病理学观察兔耳缘静 脉附近表皮和真皮组织结构完好，未见变性、坏死、缺失和过度角化，耳缘静 脉血管结构正常，未见血栓，血管无变性、坏死。
结论本发明乳剂无刺激性，可用于静脉注射。
试验例5 药物生物利用度与药代动力学试验
以本发明实施例中所制备的药物为试验用药，自制的水飞蓟宾注射液为对 照药物，给药剂量均为10mg/kg，比较两种制剂在正常犬体内的药代动力学指 标，结果见下表。
组别试验用药物对照药物
AUC(—> (ug/l^min)3. 165±0.0191.825±0.013
Ti/2 (min)128. 67±7. 4268. 56±5. 66
结果表明在相同给药剂量下，本发明制备的乳剂与注射液相比，生物利用
度有明显提高，半衰期延长(P〈0.01)。
1权利要求
1、一种静脉注射用水飞蓟宾类化合物乳剂，它是以水飞蓟宾类化合物为主要活性成分，加上药学上常用的甘油三酯类化合物、乳化剂、注射用水制备而成，其特征在于按重量/体积百分比，配制1000ml的原料组成包括水飞蓟宾类化合物0.08～8％，甘油三酯类化合物10～48％，乳化剂0.08～18％，水溶性或油溶性附加剂1～15％，其余为注射用水，该乳剂粒径的分布范围在0.1～1微米，平均粒径为0.2～0.4微米。
2、 根据权利要求1所述的水飞蓟宾类化合物乳剂，其特征在于所述的甘 油三酯类化合物为大豆油、蓖麻油、橄榄油、玉米油、麻油、椰子油、红花油、 棉子油、茶油或可可豆油。
3、 根据权利要求1所述的水飞蓟宾类化合物乳剂，其特征在于所述的甘 油三酯类化合物为脂肪酸甘油酯、油酸甘油酯、亚油酸甘油酯、聚乙二醇月桂 酸甘油酯、油酸乙酯、亚油酸乙酯、辛酸甘油三酯或癸酸甘油三酯中的一种或 者一种以上的混合物。
4、 根据权利要求1所述的水飞蓟宾类化合物乳剂，其特征在于所述的乳化剂为豆磷脂、卵磷脂、大豆卵磷脂、帕洛沙姆188、泊洛沙姆188、 Tween80、 Tween20或Span20中的一种或一种以上的混合物。
5、 根据权利要求1所述的水飞蓟宾类化合物乳剂，其特征在于所述的所 述的水溶性附加剂选自0.1mol/L盐酸、0.1mol/L氢氧化钠、氯化钠以及葡萄糖、 山梨醇、木糖醇、甘露醇或甘油中的一种或一种以上的混合物。
6、 根据权利要求1所述的水飞蓟宾类化合物乳剂，其特征在于所述的油 溶性附加剂选自油酸、油酸钠或辛酸钠中的一种或一种以上的混合物。
7、 根据权利要求l所述的水飞蓟宾类化合物乳剂，其特征在于所述的油 溶性附加剂为维生素A、维生素E或维生素C中的一种或一种以上的混合物。
8、 根据权利要求1所述的水飞蓟宾类化合物乳剂的制备方法，其特征在于:a、 按重量/体积百分比称取水飞蓟宾类化合物、甘油三酯类化合物、乳化 剂、附加剂及注射用水备用；b、 将水飞蓟宾类化合物或者于其中加入油溶性附加剂后，再加入预热至 60。C的甘油三酯类化合物中，混合形成油相；c、 将乳化剂与水溶性附加剂溶解分散于预热至6(TC的注射用水中，混合 形成水相；d、 在10000转/分钟的高速搅拌条件下，将b步骤制得的油相缓慢加人c 步骤制得的水相中，至油相均匀分散于水相中即制得初乳；e、 将d步骤制得的初乳转移至高压乳匀机内，反复匀化至初乳的平均粒径 达0.4微米以下，充氮灌装，灭菌，即得成品乳剂。
9、 根据权利要求8所述的水飞蓟宾类化合物乳剂的制备方法，其特征在于 将10g卵磷脂和30g甘油溶解分散于700ml预热至6(TC的注射用水中，搅拌 使磷脂均匀分散在水相中；另取3g水飞蓟宾加入200g预热至6(TC的大豆油 中，溶解完全后得油相；将油相缓慢加入以10000转/分钟搅拌的水相中，于 6'(TC的温度下搅拌5分钟，得初乳；将初乳加注射用水至1000毫升，置高压 乳匀机内反复匀化至平均粒径达0.4微米以下，充氮灌装，灭菌，即得成品静 脉注射用乳剂。
10、 根据权利要求8所述的水飞蓟宾类化合物乳剂的制备方法，其特征在 于将20g卵磷脂和50g甘露醇溶解分散于700ml预热至6(TC的注射用水中， 制备得到均匀分散的水相;另取3g水飞蓟宾加入200g预热至6(TC的大豆油中， 溶解完全后得油相；将油相缓慢加入以10000转/分钟搅拌的水相中，于6(TC 的温度下搅拌10分钟，得初乳；将初乳加注射用水至1000毫升，置高压乳匀 机内反复匀化至平均粒径达0.4微米以下，充氮灌装，灭菌，成品静脉注射用 乳剂。
全文摘要
本发明涉及一种静脉注射用水飞蓟宾类化合物乳剂及其制备方法，配制1000ml的原料组成包括水飞蓟宾类化合物0.08～8％，甘油三酯类化合物10～48％，乳化剂0.08～18％，水溶性或油溶性附加剂1～15％，其余为注射用水，该乳剂粒径的分布范围在0.1～1微米，平均粒径为0.2～0.4微米，其制备方法包括初乳制备、高压均质与灭菌等步骤；所述乳剂疗效显著、生物利用度高，并具有载药量高、缓释、被动肝靶向、毒副作用低等特点。
文档编号A61P1/00GK101439018SQ200810046529
公开日2009年5月27日 申请日期2008年11月11日 优先权日2008年11月11日
发明者彭熙林, 李元波, 殷建华, 毛声俊, 薛立安 申请人:扬子江药业集团四川海蓉药业有限公司