专利名称：大孔吸附树脂技术纯化小叶榕叶黄酮类化合物的方法
技术领域：
本发明属于一种大孔吸附树脂技术纯化小叶榕叶黄酮类化合物的方法。
背景技术：
小叶榕为桑科植物榕树FicusmicrocarpaL.f.,异名落地金线。小叶榕叶主要含黄酮、 三萜类、鞣质、脂肪族化合物和甾体化合物等，入药主用其叶。用其浸膏作为主要成分的哮 喘和慢性支气管炎治疗药咳特灵胶囊已收藏在部颁标准中。小叶榕叶中黄酮类等有效成分对 治疗冠心病、老年性痴呆、脑血栓、神经系统疾病和消除自由基、抗炎、抑菌、抗癌等方面 都有显著的效果，无毒副作用，并以此开发出多种药品和保健食品。因此，小叶榕叶黄酮具 有良好的开发前景。
关于小叶榕叶黄酮类化合物的提取分离技术己有不少报道，主要有水浸提、乙醇回流提 取、超声波提取等，这些方法的提取率一般为4. 12%，总黄酮含量15%-18%。由于总黄酮含 量不高，制约了其药效的发挥。本发明采用小叶榕叶水提物浸膏作为原料液，经过大孔吸附 树脂技术纯化后，可使黄酮含量提高到50%以上，达到中药五类新药的要求。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种利用大孔吸附树脂技术，纯化小叶榕叶黄酮类化合 物、保证小叶榕叶的有效成分发挥更好药效的方法。 本发明以如下技术方案解决上述技术问题 纯化方法为
(1)将小叶榕叶水提物浸膏按1 : 20 1 : 200 (g/ml)溶于去离子水中，待充分溶解 后减压抽滤，除去水不溶成分；
(2) 用醋酸水溶液和氢氧化钠或氢氧化钾水溶液调节pH值至1.0 10.0;
(3) 在瓶中静态吸附、解吸或上大孔吸附树脂柱动态吸附，再用乙醇-水组合动态洗脱， 控制吸附速度和洗脱速度；
(4) 收集各解吸液或洗脱液，减压浓縮，得高黄酮含量的小叶榕叶浸膏。 大孔吸附树脂型号包括DM130， AB-8， DlOl， DM301， X-5五种。 用本发明方法生产的小叶榕叶浸膏，为黑色黏稠膏状，总黄酮含量大于50。/。，较现有小
叶榕叶浸膏黄酮含量提高三倍以上，可直接入药。且生产成本低，安全无毒副作用，为工业化生产提供了必要的条件，将使医药企业获得显著的经济效益和社会效益。
具体实施例方式
大孔吸附树脂法明显的好处是不需要复杂的设备，处理方法简单，树脂可再生，树脂再 生所用的酸和碱可互相中和，对环境造成的危害小，制备的成本较低，制备方法容易得到推 广。
本发明的方法将预处理或再生后的大孔树脂装柱(或放置瓶中)，用树脂柱(或瓶中树 脂)对小叶榕叶水提物浸膏中水溶解完全的部分进行吸附，待吸附充分后，用乙醇-水洗脱， 分别收集过柱后的吸附液和解吸液，减压浓縮，溶剂可以回收再利用。
本发明采用的主要原料小叶榕叶水提物浸膏，是采用现有技术由小叶榕叶经水浸提工艺 得到的产品，其含水量一般不超过35.6%。
本发明的具体工艺是
(1) 称取定量的小叶榕叶水提物浸膏，加入去离子水溶解。浸膏与去离子水的比例为
1:20 1: 200 (g/ml);室温静置3h 6h分层后减压抽滤，加水静置分层1 5次，合并滤 液，即得吸附液；
(2) 加入醋酸水溶液和氢氧化钠或氢氧化钾水溶液调节经(1)所得的吸附液pH值。 醋酸水溶液浓度可为10% 95%，氢氧化钠或氢氧化钾水溶液的重量百分比浓度为4% 20%。吸附液pH为1.0 10.0;
(3) 采用大孔吸附树脂静态吸附、解吸时，大孔吸附树脂用量与吸附液用量之比为l :
2~1: 200 (g/ml)，放置恒温摇床震荡，温度0。C 8(TC，震荡速度40 200(rad/min)，吸 附、解吸时间0. lh 24h;
(4) 若釆用大孔吸附树脂柱进行动态吸附，大孔吸附树脂柱径高比为1 : 1 1: 30， 树脂用量与吸附液用量比为1 :2~1: 200 (g/ml)，吸附次数1 5次，控制吸附速度1~20 (ml/min)，吸附时间0.1 h 7h;
(5) 用乙醇水溶液洗脱。加入醋酸水溶液和氢氧化钠或氢氧化钾水溶液调节洗脱液 pH值为1.0 10.0，洗脱液乙醇浓度为10% 95%，洗脱液用量为吸附液用量的0.1 3倍， 洗脱速度l~20(ml/min)，洗脱时间0.1h 3.5h。
(6) 利用紫外分光光度法，在500nm处，以芦丁标准液为对照，测定各样品原液、吸 附液、洗脱液的黄酮浓度。分别精确移取各样品原液、洗脱液lml 50ml浓縮至干，计算黄 酮纯度和提取率。
(7) 分别收集各段洗脱液(解吸液)，减压浓缩，得高黄酮含量的小叶榕叶浸膏。实施例l:
精确称取3.97g (滤纸吸干)已预处理DM130大孔吸附树脂于250ml锥形瓶中；称取小 叶榕叶水提物浸膏4.28g，加入去离子水溶解，静置6h分层一次后过滤，滤渣千燥称重，滤 液加水定容至50ml，得到质量浓度为50.79mg/ml (浸膏与去离子水的比例为1: 20 (g/ml)) 的样品原液。原液中加几滴10%醋酸水溶液，调节样品原液PH至5.0，移取40ml原液于锥 形瓶中(大孔吸附树脂用量与吸附液用量之比为1: 10 (g/ml))，密封瓶口，放入恒温摇床 震荡，温度为O'C,转速为40rad/min， 24h后取出吸附液；加入10ml去离子水，室温下充 分振摇6min,取出水洗液；加入40ml 10%乙醇水溶液(洗脱液用量与吸附液用量相等)，放 入恒温摇床同上述条件下震荡12h，取出醇洗液。分别测定原液、水洗液、醇洗液的黄酮浓 度。精确移取10ml原液、水洗液、醇洗液浓缩得到干浸膏，通过计算，原液黄酮纯度为15.33%， 水洗液纯度为5.63%,醇洗液纯度为46.87%，提取率为30.69%。
实施例2:
精确称取4.21g (滤纸吸干)已预处理X-5大孔吸附树脂于250ml锥形瓶中；称取小叶 榕叶水提物浸膏0.84g，加入去离子水溶解，静置3h分层一次后过滤，滤渣干燥称重，滤液 加水定容至100ml，得到质量浓度为5.03mg/ml的样品原液(浸膏与去离子水的比例为1: 200 (g/ml))。原液中加几滴95%醋酸水溶液，调节pH至l.O，移取80ml原液于锥形瓶中
(大孔吸附树脂用量与吸附液用量之比为1: 20 (g/ml))，密封瓶口，放入恒温摇床震荡， 温度为80'C，转速为200rad/min， 12h后取出吸附液；加入8ml去离子水，室温下充分振 摇6min,取出水洗液；加入8ml 50%乙醇水溶液(洗脱液用量为吸附液用量的0.1倍)，放入 恒温摇床同上述条件下震荡24h，取出醇洗液。分别测定原液、水洗液、醇洗液的黄酮浓度。 精确移取lml原液、水洗液、醇洗液浓縮得到干浸膏，通过计算，原液黄酮纯度为18.33%， 水洗液纯度为4.21%，醇洗液纯度为42.57%,提取率为34.63%。
实施例3:
精确称取4.52g (滤纸吸干)己预处理DIOI大孔吸附树脂于250ml锥形瓶中；称取小 叶榕叶水提物浸膏0.94g，加入去离子水溶解，静置3h分层一次后过滤，滤渣干燥称重，滤 液加水定容至100ml，得到质量浓度为5.53mg/ml的样品原液(浸膏与去离子水的比例为1: 200 (g/ml))。原液中加几滴95°/。醋酸水溶液，调节pH至l.O，移取80ml原液于锥形瓶中
(大孔吸附树脂用量与吸附液用量之比为1: 20 (g/ml))，密封瓶口，放入恒温摇床震荡， 温度为80'C，转速为200rad/min， 0. lh后取出吸附液；加入8ml去离子水，室温下充分振摇6min,取出水洗液；加入8ml 50%乙醇水溶液(洗脱液用量为吸附液用量的0.1倍)，放入 恒温摇床同上述条件下震荡0. lh，取出醇洗液。分别测定原液、水洗液、醇洗液的黄酮浓 度。精确移取lml原液、水洗液、醇洗液浓縮得到干浸膏，通过计算，原液黄酮纯度为18.73%, 水洗液纯度为3.21%，醇洗液纯度为37.57%,提取率为28.53%。
实施例4:
称取10gDM-301湿树脂装柱，径高比为1:8。称取小叶榕叶水提物浸膏50.17g，分次 加入去离子水溶解，静置3h分层5次，滤渣干燥称重，合并滤液加水定容至2000ml,得到 质量浓度为15.79mg/ml的样品原液(浸膏与去离子水的比例为1: 70 (g/mD)。调节吸附速 度为20ml/min，对2000ml原液进行动态吸附(大孔吸附树脂用量与吸附液用量之比为h 200 (g/ml))，吸附次数1次，吸附时间1.7h。控制洗脱速度为lml/min，用200ml95。/。乙醇 洗脱(洗脱液用量为吸附液用量的0.1倍)，洗脱时间3.5h，收集洗脱液200ml。分别测定原 液、洗脱液的黄酮浓度，移取50ml洗脱液浓縮得到干浸膏，通过计算，原液黄酮纯度为 16.97%，浓组分洗脱液黄酮纯度为68.23%，提取率为28.66%。
实施例5:
称取50gD-101湿树脂装柱，径高比为1:30。称取小叶榕叶水提物浸膏8.55g，分次加 入去离子水溶解，静置6h分层3次，滤渣干燥称重，合并滤液加水定容至200ml，得到质 量浓度为25.78mg/ml的样品原液(浸膏与去离子水的比例为1: 40 (g/ml))。原液中几滴加 入20%氢氧化钾水溶液，调节PH至IO.O,控制吸附速度为lml/min,对200ml原液进行动 态吸附(大孔吸附树脂用量与吸附液用量之比为1: 4 (g/ml))，吸附次数2次，吸附时间 7.0h。控制洗脱速度为20ml/min，用600ml 30%乙醇洗脱(洗脱液用量为吸附液用量的3倍)， 洗脱时间0.5h，收集洗脱液596ml。分别测定原液、洗脱液的黄酮浓度，移取50ml洗脱液 浓縮得到干浸膏，通过计算，原液黄酮纯度为17.07%，浓组分洗脱液黄酮纯度为51.23%， 提取率为47.66%。
实施例6:
称取10gAB-8湿树脂装柱，径高比为1 : 1。称取小叶榕叶水提物浸膏3.65g，分次加入
去离子水溶解，静置3h分层5次，滤渣干燥称重，合并滤液加水定容至200ml，得到质量
浓度为10.27mg/ml的样品原液(浸膏与去离子水的比例为1: 100 (g/ml))。原液中加入几
滴4%氢氧化钠水溶液，调节PH至8.0，控制吸附速度为5.0ml/min，对20ml原液进行动态吸附(大孔吸附树脂用量与吸附液用量之比为l: 2)，吸附次数5次，吸附时间0.4h。控制 洗脱速度为5.0ml/min，用60ml 70%乙醇洗脱(洗脱液用量为吸附液用量的3倍)，洗脱时 间0.2h，收集洗脱液58ml。分别测定原液、洗脱液的黄酮浓度，移取lml洗脱液浓縮得到 干浸膏，通过计算，原液黄酮纯度为16.53%，浓组分洗脱液黄酮纯度为61.03%，提取率为 57.66%。
实施例7:
称取10g D101湿树脂装柱，径高比为1: 1。称取小叶榕叶水提物浸膏3.89g，分次加 入去离子水溶解，静置6h分层3次，滤渣干燥称重，合并滤液加水定容至200ml，得到质 量浓度为10.57mg/ml的样品原液(浸膏与去离子水的比例为1: 100 (g/ml))。原液中加入 几滴4%氢氧化钠水溶液，调节PH至8.0，控制吸附速度为3.34ml/min，对20ml原液进行 动态吸附(大孔吸附树脂用量与吸附液用量之比为1: 2 (g/ml))，吸附次数l次，吸附时间 0.1h。控制洗脱速度为10.0ml/min，用60ml 70%乙醇洗脱(洗脱液用量为吸附液用量的3倍)， 洗脱时间O. lh，收集洗脱液60ml。分别测定原液、洗脱液的黄酮浓度，移取lml洗脱液浓 縮得到干浸膏，通过计算，原液黄酮纯度为16.83%，浓组分洗脱液黄酮纯度为52.18%，提 取率为40.39%。
实施例8:
称取10gAB-8湿树脂装柱，径高比为l: 1。称取小叶榕叶水提物浸膏3.65g，分次加入 去离子水溶解，静置3h分层2次，滤渣干燥称重，合并滤液加水定容至200ml，得到质量 浓度为10.27mg/ml的样品原液(浸膏与去离子水的比例为1: 100 (g/ml))。原液中几滴加 入20%氢氧化钠水溶液，调节PH至10.0，控制吸附速度为1.0ml/min，对20ml原液进行动 态吸附(大孔吸附树脂用量与吸附液用量之比为1: 2 (g/ml))，吸附次数3次，吸附时间 lh。控制洗脱速度为1.0ml/min，用60ml70。/。乙醇洗脱(洗脱液用量为吸附液用量的3倍)， 洗脱时间lh，收集洗脱液60ml。分别测定原液、洗脱液的黄酮浓度，移取lml洗脱液浓縮 得到干浸膏，通过计算，原液黄酮纯度为16.53%,浓组分洗脱液黄酮纯度为54.18%，提取 率为44.39%。
权利要求
1. 一种大孔吸附树脂技术纯化小叶榕叶黄酮类化合物的方法，其特征是纯化方法为(1)将小叶榕叶水提物浸膏按重量与体积比1∶20～1∶200溶于去离子水中，待充分溶解后减压抽滤，除去水不溶成分；(2)用醋酸水溶液和氢氧化钠或氢氧化钾水溶液调节pH值至1.0～10.0；(3)在瓶中静态吸附、解吸或上大孔吸附树脂柱动态吸附，用乙醇-水组合洗脱，控制吸附速度和洗脱速度；(4)收集各段洗脱液，减压浓缩，得高含量黄酮的小叶榕叶浸膏。
2. 如权利要求1所述的大孔吸附树脂技术纯化小叶榕叶黄酮类化合物的方法，其特征 是大孔吸附树脂是DM130、 AB-8、 D101、 DM301或X-5。
3. 如权利要求1或2所述的大孔吸附树脂技术纯化小叶榕叶黄酮类化合物的方法，其 特征是大孔吸附树脂用量与吸附液重量与体积比g/ml为1 : 2~1 : 200。
4. 如权利要求1所述的大孔吸附树脂技术纯化小叶榕叶黄酮类化合物的方法，其特征 是洗脱液pH值为1.0 10.0,洗脱液乙醇浓度为10% 95%，洗脱液用量为吸附液体积的 0.1~3倍，洗脱速度1 20ml/min，洗脱时间0.1h 24h。
全文摘要
一种大孔吸附树脂技术纯化小叶榕叶黄酮类化合物的方法，其纯化方法为将小叶榕叶水提物浸膏溶于去离子水中，充分溶解后减压抽滤，除去水不溶成分；调节pH值至1.0～10.0；在瓶中静态吸附、解吸或上大孔吸附树脂柱动态吸附，用乙醇-水组合洗脱，收集各段洗脱液，减压浓缩，得高含量黄酮的小叶榕叶浸膏。用本发明的方法生产的小叶榕叶浸膏，总黄酮含量大于50％，较现有小叶榕叶浸膏黄酮含量提高三倍以上，可直接入药。且生产成本低，安全无毒副作用，经济效益显著。
文档编号A61P9/10GK101428068SQ20081007391
公开日2009年5月13日 申请日期2008年11月14日 优先权日2008年11月14日
发明者冯丹丹, 刘力恒, 鑫 李, 王元春, 王立升 申请人:广西大学