专利名称：建立前列腺间质增生大鼠实验动物模型的方法
粒前列腺间鹏狄鼠^^^^rfe
技术领域：
本发明涉及一种^前列腺间 生大鼠实验动物模型的方法，适用于前列腺间质
增生病理改M:程分子机制的研究和相关防治药物的筛选。属于医疗评价和药效分析fe^领域。
背景fe^良性前列腺增，(BPH)是l男性泌尿夕卜科最常见的疾病，是一种以间质增生 为主的疾病。Basche對艮道，在BPH组织中间质与上皮的比例由正常的2:1增加至5:1。邓方明 等用免疫组化结合计穀几辅助图像分析的研究结果表明，间质与上皮比例由正常的1.8:1上升到 3.7:1。李涛等的研究结果显示，BPH组织中上皮、腺腔、平滑肌、结纟辭且织的面积百分比分别为 14.81%士5.90%， 22.54%士 16.99%， 37.98%士 19.33%和24.60%士 7.78%。
男性随着年龄的增长，血浆和前列膨且织中撒維麟比例均明显增加。有J,旨出，在中青 年男性血浆中嫩緞^^浓度比例为1:150，而群人贝伪1:120-1:80。 BPH并未发生于睾酮水平较高 而,維麟比例较低的群，却发生于睾酮水平下降、嫩維麟比例及雌'麟受体水平升高的老 年男性，际雌^m在良性前列腺增生症的发生和赚中发歸錢的作用。
关于雌麟在前列腺增生症病理改变中的作用也有许對艮争Collins對艮道，雌二,使体 夕卜培养的人前列腺间质细胞胸腺嘧啶的结合量增力0(164±10)%; SmithJ隨了雌麟可以iS3ft前列 腺间质细胞中与增殖密切相关的生长因子FGF2和FGF7的表达；Zhang J.等发现雌二醇可明显促 滑 胞的表型；Bektic等用生物芯片技^t发现，雌激素會嫩调节一些与细胞增殖、分化相关 基因的自。Patricia Simone對随，用雌#*分别处理# 前、##^后和,豚鼠，其前列 腺组织均出现增厚的平滑鹏，各种间质纤维成分也明显增加。Zhang等发现，lttTl雜ERa的 介导下，MM快速激活MAPK途径的非基因组效应ISia前列腺间质细M殖。
动物实验结果表明，雌m可诱导前列腺间质增生，用帷 ^1*成赛滅物的前列腺可引 起间质细胞的增殖和大多lth皮细胞的萎縮；用雌麟处理去势的成 物，前列腺的间质和上 皮细胞均增殖；单纯去势的大鼠在实验第一周内前列腺出现萎縮，去^#湖雌髓的大鼠前列 腺萎縮出S^^，而且雌^m能,去势后大鼠平滑l/llffl胞的萎縮。
^S当的动辦莫M^在衝本水平上研M病机理的，手段。目前用于研究前列腺增生的
动trf莫型有以下几种(1)异##植将BPH患者病变组织异^^植到实验动MT列腺内，可形 成典型的前列腺上皮和间质增生。(2)基因导入将M-2 (成辩飾M长因子家族成员之一)
导入小鼠受精卵中可以引起前列腺腺体及膀胱增生，但未观察到前列腺间质增生。(3)鄉丙酸
睾酮以大鼠和犬为实验动物，肌肉注射丙酸睾酮，组织学观察大鼠前列J3肚皮增生明显，而间 Mli生并不明显；而,犬前列腺间，生较为明显。(4)尿生殖窦t!A法将同系胎鼠尿生殖 窦IIA成年維性小鼠的前列腺可诱导上皮和间质明显增生。(5)自,生动槲莫型群犬可用 作为研究前列腺自然增生的动辦莫型。以上动物模型的建立方法旨在着操作繁琐或者所需费用 较高的缺点。另夕卜关于粒前列腺间鹏生实验动辦莫型的研究尚未魁艮道。
发明内容本发明的目的在于^i共一种前列腺间质增生实^物模型的建立方法。
本发明所需的动物及关键试剂为动物翻250-300g雄性Wistar大鼠(SPF级)。关键试剂 为丙酸睾,±#液和苯甲酸雌二^#液。
本发明麟的建立前列腺间鹏生大鼠实验动榭莫型的方法，包括
第一、,250-300gWISTAR雄性大鼠为建立所述动tlt莫M^用的动物；
第二将苯甲酸雌二醇和丙酸睾酮以i^油配制成混合液，在混合液中苯甲酸雌二醇的浓度
为100ng/ml，苯甲酸雌二醇和丙酸睾酮的浓度比为l: 100;
第三第一步戶;f^动物WISTAR雄性大鼠去势21天后，每日皮下注射第二步配制成的,雄
'麟混合液，^ 掛28天，即完成前列腺间鹏生大鼠实驗辦莫型的建立。Mil测定PI指数
和HE以及a-actin免疫组化染m其进行鉴定。
该动辦莫MM用于前列腺间^i^理改M:程分子机制的研究和相关防治药物的筛选。
本发明的做糊^m:
采用本方法建立的实^物模型与传统的丙酸睾酮注射法建立的前列腺增生动辦莫型的方 法相比，其病理特征以间质增生为主，分布于腺泡周围的平滑鹏胞織由l-2层增至34层，导 管周围的平滑鹏胞层数最多可达10-20层。该模型具有操作简单，造模周期短，重现性好和病
变部位易于观察等优点，适用于前列腺间质增生病理改M:程分子机制的研究和相关防治药物的筛选。
图1为HE染色照片(40x)，其中左侧为实施例1中正常组大鼠前列腺组织；右侧为实施例1 中造模组大鼠前列，且织。
图2为平滑鹏胞特异蛋白a"actin的免鄉化染色照片(200x),其中左侧为实施例1中正常 组大鼠前列月7鬆且织；右侧为实施例1中造模组大鼠前列腺组织。
具^l^式
下面结合，例，对本发明实^J辦IM的建立方謝故详细描述。 鄉例i
1实驗物和材料
Wistar雄性大鼠，体重250~300克，由北京纟iS利华实验动物公司鄉。动物房鹏和 破 分别维持在20"和70%左右，全价懒輜养。
平滑M胞特异蛋白(X"actin抗体(sigma产品)。
丙酸睾酮^^液(25m^mL,批号0406171，刃聿^1^^酸有限公司)，苯甲酸雌二l^主射 液(lmg/mL，批号0401141，天津 限公司)，以5^油配制,維,比例为1: 100 的混合液，其中苯甲酸雌二,度固定为100Mg/mL。
2造模旅
将15只Wistar維性大鼠鹏性饲^^周。实驗物随机分为3组，分别为正常组、去鄉和 造模组，每组5只。对正常组行假手术，麻醉后无菌剝牛下艱切开大鼠阴*^、包膜组织、 提睾肌，牵拉睾丸，然后送回繊组织内，缝合舰。对其余2组行去辩术，離后切开大鼠 阴敏肤、鹏组织、提睾肌，暴露睾丸，摘除双侧睾丸和附睾，结扎嫩瑞，彻底她，然后全
层缝合，对^s，生as水棉w^阴數卜iftiia。去势后正常,21天开^tt模。造模方法为正
常组和去势组每日皮下注射玉米油0.1mL/300g体重，造模组每日皮下注射雌/雄激素混合液 0.1mU300g体重，,给药4周。；Sjg—次给药24小时后，将大 重，处死，剖开腹月繊取前 列腺，除去周围脂肪组织，fflOT电T^平精确称量前列腺驢，称能，用10%^1尔马林固定， 用于HE她和ohactin免疫组化她。鉴定方法为前列腺指数(PI)，腺泡和导管周围平滑鹏胞 层的层数。
3实验结果
如下表所示，去辦且前列月i l数明显低于正常对照组(".05);造模组组大鼠的前列腺指数
(PI)明显高于正常对照逮(".05)。
正常组 0.18±0.02 去势组 0.03±0.003' 造模组 0.33±0.06*
与正常组相比，*p<0.05
病理分析和免疫组化染色结^l示，与正常组相比，去，大鼠前列腺出现萎縮，腺上皮细 MM扁平状，腺泡腔明显縮小，腺泡数目敏1>，间质成分相 加；造模组前列腺间质中平滑肌 成分明显增加，分布于腺泡周围的平滑鹏胞层数由1-2层增至3>6层，导管周围的平滑鹏胞 层数最多可达10-20层。同时，腺上皮细鹏柱状或高柱状，腺泡跡张。
权利要求
1、一种建立前列腺间质增生大鼠实验动物模型的方法。其特征在于第一、选用250-300g WISTAR雄性大鼠为建立所述动物模型所用的动物；第二、将苯甲酸雌二醇和丙酸睾酮以玉米油配制成混合液，在混合液中苯甲酸雌二醇的浓度为100μg/ml，苯甲酸雌二醇和丙酸睾酮的浓度比为1100；第三、第一步所选的动物WISTAR雄性大鼠去势21天后，每日皮下注射第二步配制成的雌/雄激素混合液，连续注射28天即完成前列腺间质增生大鼠实验动物模型的建立。
2、权利要求1 ^M方法粒的前列腺间质增生大鼠实验动槲莫型的用途，翻于前列腺间 ，生病理改M^^T机制的研究和相关防治药物的筛选。
全文摘要
本发明属于医疗评价和药效分析领域。具体涉及一种建立前列腺间质增生大鼠实验动物模型的方法。通过给去势WISTAR大鼠皮下注射浓度比为1∶100的雌/雄激素混合液建立前列腺间质增生大鼠实验动物模型。该模型与传统的丙酸睾酮注射法建立前列腺增生模型的方法相比，其病理特征以间质增生为主，分布于腺泡周围的平滑肌细胞层数由1-2层增至3-6层，导管周围的平滑肌细胞层数最多可达10-20层。该模型具有操作简单，造模周期短，重现性好和病变部位易于观察等优点，适用于前列腺间质增生病理改变过程分子机制的研究和相关防治药物的筛选。
文档编号A61K49/00GK101385662SQ20081015233
公开日2009年3月18日 申请日期2008年10月15日 优先权日2008年10月15日
发明者杰 刘, 琚 张, 杜小玲, 睿 杨, 石建党, 肖向茜 申请人:南开大学