专利名称：一种医疗装置基因涂层的制备方法
技术领域：
本发明涉及医疗装置，具体涉及一种在医疗装置上制备基因涂层 的方法。
背景技术：
由于动脉粥样硬化引起血管管腔狭窄,从而造成肌肉供血供氧障
碍而引起相应部位的肌肉缺血坏死。1976年德国学者安德里亚.格隆 茨戈首次提出了动脉血管内安装支架的设想，到卯年代冠状动脉支架 已广泛地应用于临床治疗的一种医疗器械。
目前常用的血管支架按照表面状态可分为裸支架、药物洗脱支 架、聚合物包被支架、金属涂层支架、放射性支架和人造血管覆盖支 架，为了克服植入带来的炎症反应和高居不小的再狭窄率，人们开发 出放射性支架和药物洗脱支架，其中所述药物是各种起治疗作用的药 剂等，现在药物洗脱支架已被公认为在冠心病的介入治疗中，解决冠 脉血管内再狭窄问题的最有效的方法。
但现有的药物洗脱支架大多釆用聚合物作为载体来携带药物并 控制其释放，典型的作法是将活性药物和聚合物混合涂覆在裸支架 部分或全部表面上，聚合物一般最少要占涂层质量的70%以上才能起 到载体的作用，支架本体上涂覆一层包含活性药物的聚合物涂层，聚 合物涂层上又涂覆一层多聚物涂层。这种含有聚合物涂层的药物支架 在临床应用中可以将再狭窄发生率降低到10%以下，但是，这种医疗 装置在植入人体后，由于药物的不断减少而聚合物浓度相应的不断增 高，可能导致后期血栓的形成。
随着分子生物学的发展，许多疾病的发病机理在基因水平上得以 阐明，这使得从基因水平诊断和根治疾病成为可能。在医治心脏病、
5肿瘤、糖尿病等方面的基因转移和调位的治疗方法正在成为研究热 点，例如将促进内皮修复和抑制内膜增殖的基因导入心血管内，使之 在血管内表达，从而达到抑制血管再狭窄的目的。
但基因治疗方面存在的主要问题还在于不能将安全性好的质粒 DNA有效、足量地运送到体内细胞，并提高其转染效率以得到基因 的高效表达；对心血管内基因治疗来说，主要问题还在于很难把基因 专一性递送到血管组织中，而不进入血液循环系统或进入血液循环系 统，从而不产生毒性或仅有得极小的毒性。有研究表明，采用球囊导 管向血管内灌注转基因病毒的悬浮液，灌注到血管中的病毒颗粒大部 分随血液进入全身循环系统，最后被截留在肝和肺中，很难在冠脉病 灶局部血管中达到有效的基因浓度，此外病毒在体内器官中的广泛扩 散，潜伏着致命的全身毒副作用，无论安全性还是有效性都不符合临 床应用的要求。
因此，人们开展了大量可携载治疗性基因的载体的研究，如药物 洗脱支架常用的聚合物载体，但虽然有许多载体系统在研究和使用， 但是没有一个载体可以达到导向、高效地把基因导入体内的靶细胞，
如与高分子接触的细胞发生过度的增殖，将质粒DNA包埋在明胶海 绵体中植入骨中可成功地转入核酸，但是大部分的DNA在短时间内 (<1小时)逃逸。其他的DNA运载体系包括包载核酸的微球，都存 在递送效率的问题。不少临床治疗方案失败的原因是使用不适当的载 体。因此缺乏高效、局部的基因导入系统是基因治疗面临的主要技术 难关。
目前将能够促进内皮修复和抑制内膜增殖的不同阶段信号因子 及其相关基因，包括能产生血管内皮细胞生长因子(VEGF)的基因、 一氧化氮合酶的一氧化氮合酶基因、雌激素、17P雌二醇等涂敷在植 入支架的表面成为研究热点，这些支架在动物实验阶段大部分都表现 了较好的抑制再狭窄和促进内皮修复的结果。2006年1月美国PNAS杂志报道了费城大学Levy研究小组用聚乙烯亚胺双磷酸酯在金属支
架表面形成亚胺双磷酸酯单分子层，结合反义腺病毒抗体再偶联病毒 基因，植入实验兔体内，显著地有效抑制了血管的增殖。
中国专利申请02136779.5提供了一种携载基因支架及其制备方 法和应用，所述携载基因支架包括支架、涂覆在支架表面的吸附基因 的蛋白吸附层和吸附层表面的载体治疗基因层，其特征在于吸附层包 括97-100wt。/。的经过交联处理的分子量大于10000的蛋白质，0-3wt%
的添加剂。
中国专利申请200610148261.3提供了 一种用于植入到体内血管 和管腔结构中的生物支架的制备方法，是将支架表面的基质涂层为载 体，将治疗性基因通过电泳的方法负载到涂层支架表面。
以上器械或装置的特点是均在装置本体表面涂布了基质层，利用 基质的连接作用把基因或寡核苷酸或药物涂覆和/或固定在基质涂层 上。但由于基质的存在，增加了基质带来的炎症和再狭窄发生的几率。
发明内容
基于上述缺点，本发明提供一种在医疗装置上携载基因涂层的方 法。该方法无需涂覆基质，就能在金属材质的医疗装置的表面携载基 因活性物质，充分发挥所涂覆的基因活性物质的促进内皮修复和抑制 平滑肌增殖的作用。
本发明所提供的携载基因涂层医疗装置的制备方法，是将医疗装 置本体作为阳极，将其与阴极一起，置于基因或寡核苷酸的溶液中进
行阳极极化反应，基因或寡核苷酸在电源电场力的作用下，电离而带 负电，向医疗装置阳极移动，均匀地涂覆在医疗装置的表面，得到表 面携载基因层的医疗装置。
本发明所述的携载基因涂层医疗装置的制备方法，还包括将涂覆 基因层后的医疗装置自然晾干，经预冷冻后，放入真空冷冻干燥机干 燥。
7其中，所述的医疗装置本体的材质为不锈钢、钴铬合金、镁合金、 Ni-Ti合金或其它医用金属材料。
所述的医疗装置本体为冠脉血管支架、颈动脉血管支架、外周血 管支架、肾动脉血管支架、颅内动脉血管支架、移植片固定膜、移植 片固定膜移植物、合成的人造血管、心脏瓣膜、血管修补筛、起搏器、
起搏器导子、除纤颤器、PFO隔膜封闭装置、血管夹、动脉血管瘤闭
锁器、血液透析移植物、血液透析导管、房室吻合分流、大动脉血管 瘤移植物装置、静脉瓣、血管接合夹、留置式动脉导管、血管护鞘、 药物输送口中的一种或多种的组合，优选表面具有载药孔洞的医疗装 置，更优选具有纳米载药孔洞的医疗装置，所述纳米载药孔洞的尺寸
优选100-800nm。所述孔洞可参照本公司的专利(CN 101161299 )进行。
所述的医疗装置本体优选包括冠脉血管支架、颈动脉血管支架、
外周血管支架、肾动脉血管支架、颅内动脉血管支架的支架；更优选
表面具有载药孔洞的支架；进一步优选具有纳米载药孔洞的医疗装 置，所述纳米载药孔洞的尺寸优选100-800nm。所述孔洞可参照本公 司的专禾ll (CN 101161299)进行。
所述电源阴极可釆用本领域常用的惰性电极，如Pt电极等。 所述基因或寡核苷酸溶液是以蒸馏水、生理盐水、pH值为3.0-9.0 的硼酸盐缓冲溶液、pH值为8.0-10.0碳酸盐缓冲溶液、pH值为3.0-9.0 醋酸盐缓冲溶液、浓度为1%-20%的乙醇溶液或pH值为3.0-9.0磷酸盐 缓冲溶液为溶剂，浓度为0.00lmg/ml-lmg/ml的基因或寡核苷酸溶液； 所述基因是一氧化氮合成酶(eNOS、 nNOS、 iNOS)基因、血 管内皮生长因子(VEGF)基因、成纤维细胞生长因子(HGF)基因、 胰岛素样生长因子(IGF)基因、细胞分裂调控基因(c-myc)、抗癌 基因(p53)、肝细胞生长因子(HGF)基因、血小板衍生生长因子 (PDGF)基因、PTEN、 Keratin8基因、尿激酶前体(Pro-UK)基因、EGF基因或其片段中的一种或多种。
所述寡核苷酸是上述基因的寡核苷酸或反义寡核苷酸或其片段
中的一种或多种；
所述阳极极化反应采用直流电进行，电压0.1-2.5V，反应时间 l-100min;
所述基因层的重量是医疗装置重量的1/102-1/106;.
本发明所提供的携载基因涂层医疗装置的制备方法，还包括医疗 装置本体的预处理将医疗装置本体用四氢呋喃、丙酮、乙醇或甲醇 超声清洗，然后再用去离子水进行清洗；
本发明所提供的携载基因涂层医疗装置的制备方法，在医疗装置 本体的预处理之前，还包括将医疗装置本体进行前处理表面清洗和 防腐处理；其中，所述表面清洗的过程为
1) 用砂带打磨医疗装置本体表面，用于去除表面的氧化物，调 整表面粗糙度；
2) 利用超声波，依次用75%的医用乙醇溶液、99.5%的丙酮溶液、 去离子水清洗，超声波频率为28-100KHz,清洗时间为5-15min;
3) 将医疗装置本体放入15-60g/L、 70-100。C的氢氧化钠溶液中浸 泡5-10min,用于去除油脂和氧化皮；
4) 将清洗后的医疗装置本体放置在真空干燥机中，温度设定在 30-40°C，干燥30-60min后取出。
所述防腐处理是釆用化学氧化处理或阳极氧化处理的方法进行， 其中，化学氧化处理的过程为将医疗装置本体浸入含重铬酸钾15-20 g/L、硝酸15-25 g/L、氯化钠0.75-1.25 g/L的混合溶液中，在70-80。C 下，氧化0.5-2.0min，在支架本体表面生成氧化膜；
阳极氧化处理的过程为釆用交流电氧化，在两电极上分别安装 完全相同的支架本体，阳极氧化处理用槽液为高锰酸钾15-20g/L、磷 酸三钠15-55g/L、氟化钾25-55 g/L、氢氧化钾65-165 g/L、氢氧化铝
915-65 g/L的混合液，在20-60。C下，电流密度为O.l-lO A/dm2,交流电 压为50-90V下，氧化10-50min，支架本体表面生成氧化膜。
除上方法外，还可采用离子注入、激光表面处理、热扩散、金属 镀层、气相沉积、有机涂层等方式中的一种或多种对支架本体表面进 行防腐处理。
具体的说，上述釆用阳极极化的方法涂覆生物支架，包括如下步
1、 医疗装置本体的预处理用四氢吹喃、丙酮、乙醇或甲醇超 声清洗，然后再用去离子水进行清洗；
2、 基因或寡核苷酸涂覆液的配制以蒸馏水、生理盐水、pH值 为3.0-9.0的硼酸盐缓冲溶液、pH值为8.0-10.0碳酸盐缓冲溶液、pH值 为3.0-9.0醋酸盐缓冲溶液、浓度为1%-20%的乙醇溶液或pH值为 3.0-9.0磷酸盐缓冲溶液为溶剂，加入基因或寡核苷酸使其终浓度为 0.001mg/ml隱lmg/ml;
3、 涂覆液的涂覆釆用阳极极化包被的方式涂覆医疗装置，以 医疗装置本体为阳极，在直流电源下，控制电压在0.1-2.5V,基因或 寡核苷酸电离带负电，向阳极移动，均匀牢固地涂覆在医疗装置本体 表面，涂覆时间为l-100min，涂覆量为医疗装置重量的1/102-1/106。
阳极极化的原理当把支架作为阳极，溶液中釆用基因或寡核苷 酸溶液时，该基因或寡核苷酸在溶液中电离变为阴离子，通电后基因 或寡核苷酸向阳极医疗装置处移动，在静电力作用下，克服医疗装置 表面的液面张力，使基因或寡核苷酸与医疗装置表面牢固均匀的结 合，与电镀的原理基本相同。
此外，在医疗装置本体表面涂覆基因或寡核苷酸前，可先涂覆治 疗性药物。其中，所述治疗性药物为肝素、阿司匹林、水蛭素、秋水 仙碱、抗血小板GPIIb/IIIa受体拮抗剂、白甲氨蝶呤、嘌呤类、嘧啶 类、植物碱类和埃坡破霉素(Epothilone)类、雷公藤系列化合物、
10抗生素、激素、抗体治癌药物、环孢霉素、他克莫司及同系物(FK506)、
脱精胍菌素(15-deoxyspergualin)、霉酚酸脂(MMF)、雷帕霉素 (Rapamycin)及其衍生物、FR 900520、 FR 900523、 NK 86-1086、 戊酰胺(depsidomycin)、康乐霉素C (kanglemycin C )、斯博格埃林 (spergualin)、 灵菌*工素2 5 c(prodigiosin2 5 -c)、 曲尼斯净寺(tranilast)、 多球壳菌素(myriocin)、 FR651814、 SDZ214-104、环孢霉素C、布 雷青霉素(bredinin)、麦考酚酸、布雷菲得菌素A、 WS9482、糖皮质 类固醇、替罗非班(tirofiban)、埃替非巴肽(eptifibatide )、紫杉醇、 放线菌素-D等中的一种或多种。
上述治疗性药物溶液的涂覆处理，其过程为以甲醇作溶剂配置 浓度为l-15ug/ml的上述治疗性药物的溶液，对医疗装置本体表面进 行定向超声喷涂，匀速旋转医疗装置本体，根据支架本体表面药物含 量要求喷涂1-15次；
上述治疗性药物的涂覆处理，其过程也可为以四氢呋喃作有机 溶剂，加入浓度为l-15jag/ml的药物，将医疗装置本体浸泡在上述溶 液中5-10分钟，重复浸涂1-10次。
本发明所提的基因涂层医疗装置的制备方法，其具有如下有益效
果
1. 简单易行，在医疗装置本体原材料的表面，即直接与人体病 变组织接触的表面上制备有孔洞或者没有孔洞分布，无需额外制备载 药涂层，无明显界面，能够在医疗装置本体全部或者部分表面通过静 电作用均匀包被一层基因；
2. 医疗装置本体全部或者部分表面包被基因或寡核苷酸后，医 疗装置本体上基因或寡核苷酸包被量稳定性较好，体外冲刷实验和动 物实验研究证明纳米孔支架携带基因由于其纳米孔和静电吸附作用 能够耐受一定时间的血液冲刷，并作为基因传递系统提供治疗基因， 随冲刷时间基因或寡核苷酸量均平稳减少，从而阻止支架内再狭窄和潜在的血管疾病；
3. 使用安全，满足临床需要。基因包被所使用的药品器材都是临 床证明安全的医用级药品和器材，本身产品就比较安全，所使用的医 疗装置为治疗性基因，能够直接作用于人体；
4. 工业实用性强。该种基因或寡核苷酸包被方式能够进行大规
模的工业化生产，且操作简单，成本较低。
而且本发明是直接在装置本体上涂覆治疗性基因，无须引入负载 基因的基质，也可以避免在本体和基因涂层之间设置一层基质，从而 避免了基质带来的炎症和再狭窄，降低了炎症和再狭窄发生率。
图l为表面具有纳米载药孔的医疗装置本体的表面的扫描电镜照片。
图2为涂敷基因层的表面具有纳米载药孔的医疗装置本体表面的
基因分布扫描电镜照片。
图3为阳极极化涂覆过程示意图；图中1、操控电脑2、阳极极 化仪3、储液容器4、电极。
具体实施例方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不 背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的 修改或替换，均属于本发明的范围。
本发明医疗装置本体的材质可为医用316L不锈钢，也可以为钴络 合金、镁合金、Ni-Ti合金或其它医用金属材料，都可以通过激光雕 刻或机械加工制成血管支架，除此以外，还可制成骨缝合线、骨钉、 骨连接件，脊推骨盘、缝合用锚、止血钳、止血螺丝、止血板、止血 夹，以及组织粘合剂、密封剂、人造骨等医疗设备。支架表面通过化 学或物理方法，如腐蚀、阳极氧化、微弧氧化、微弧氮化等方法或这 些方法的结合，在装置本体原材料的局部表面直接制备形成孔洞，孔
12洞可以是载药槽或孔结构，孔洞的直径优选100-800nm。 实施例l iNOS基因涂层纳米孔支架的制备
316L不锈钢合金经抛光后，用激光雕刻成血管支架，然后通过 酸液腐蚀和阳极氧化法的结合，在器械本体原材料的局部表面直接制 备载药孔洞，孔洞的直径为200-300 nm。
然后按照如下步骤制得基因或寡核苷酸涂层生物支架
1、 支架本体表面的清洗
(1) 砂带打磨支架本体表面，机械去除表面的氧化物，调整表 面粗糙度；
(2) 利用超声波，依次用75%的医用乙醇溶液、99.5%的丙酮溶 液、去离子水清洗，超声波频率为lOOKHz，清洗时间为10min;
(3) 将支架本体放入30 g/L、 80 t:的氢氧化钠溶液中浸泡10 min,去除油脂和氧化皮；
(4) 将清洗后的支架本体放置在真空干燥机中，温度设定在40 。C，干燥45min后取出。
2、 支架本体表面的防腐处理采用交流电氧化，在两电极上安 装同样的支架，阳极氧化处理用槽液成份为高锰酸钾18g/L、磷酸 三钠55g/L、氟化钾40 g/L、氢氧化钾165g/L、氢氧化铝65 g/L;在 60°C，氧化50min,电流密度为10A/dm2，交流电压为90V，支架本 体表面即可生成氧化膜。
3、 支架本体表面基因或寡核苷酸涂覆液的涂覆处理
(1) 支架本体的预处理用四氢呋喃超声清洗，超声波频率为 lOOKHz，清洗时间为10min;再用去离子水清洗三次；
(2) iNOS基因涂覆液的配制以浓度为0.05mo1/1、 pH值为9.6 的碳酸盐缓冲溶液为溶剂，加入iNOS基因使iNOS基因的终浓度为 0.1mg/ml;;
(3) 阳极极化涂覆如图4所示，将支架本体串联到阳极极化仪的阳极4上，将配制好的基因或寡核苷酸溶液注入阳极极化的基因或 寡核苷酸储存容器3中，调节阳极电压为2.5V，进行极化，极化时间
为600s，通电后基因或寡核苷酸离子向阳极支架处移动，在阴阳相吸
作用下，克服支架表面的液面张力，使基因或寡核苷酸与支架表面牢
固均句的结合，在支架表面形成一层均匀的基因或寡核苷酸涂层；
(4)基因或寡核苷酸生物支架的干燥将支架自然稍晾干后， 冰箱中预冷冻后放入真空冷冻干燥机中干燥4 h。 实施例2
具有纳米孔的iNOS基因与雷帕霉素药物联合涂层生物支架的制备
选用钴铬合金材质经抛光后，用激光雕刻成血管支架；然后通过 酸液腐蚀、微弧氧化和微弧氮化的结合，在支架表面制备载药孔洞，
孔洞为载药槽，孔洞的直径为100-200nm。按照如下步骤制得基因涂 层生物支架
1、 支架本体表面的清洗
(1) 砂带打磨支架本体表面，机械去除表面的氧化物，调整表 面粗糙度；
(2) 利用超声波，依次用75%的医用乙醇溶液、99.5%的丙酮溶 液、去离子水清洗，超声波频率为60KHz，清洗时间为15min;
(3) 将支架本体放入60g/L、 70 。C氢氧化钠溶液中浸泡8min，
去除油脂和氧化皮；
(4) 将清洗后的支架本体放置在真空干燥机中，温度设定在30 。C，干燥60min后取出。
2、 支架本体表面的防腐处理采用交流电氧化，上安装同样的 支架，阳极氧化处理用槽液成份为高锰酸钾15g/L、磷酸三钠15g/L、 氟化钾25 g/L、氢氧化钾65g/L、氢氧化铝15 g/L;在25°C ,氧化10min, 电流密度为0.1A/dm2,交流电压为50V，支架本体表面即可生成氧化 膜。3、 治疗性药物溶液的涂覆处理以四氢吹喃作溶剂，加入浓度 为15yg/ml的雷帕霉素对支架表面进行定向超声喷涂，句速旋转支， 喷涂4次，使支架表面药物含量达到支架重量的1/102。
4、 支架本体表面iNOS基因溶液的涂覆处理
(1) 支架本体的预处理用丙酮超声清洗，超声波频率为100 KHz，清洗时间为15min;使用去离子水清洗三次；
(2) iNOS基因涂覆液的配制以浓度为0.1mo1/1、 pH值为6.0 的硼酸盐缓冲溶液为溶剂，加入iNOS基因使iNOS基因的终浓度为 0.005mg/ml;
(3) 阳极极化涂覆如图4所示，将支架本体串联到阳极极化仪 的阳极4上，将配制好的iNOS基因溶液注入阳极极化的基因或寡核 苷酸储存容器3中，调节阳极电压为1.5v，极化时间为20min,通电后 基因或寡核苷酸离子向阳极支架处移动，在阴阳相吸作用下，克服支 架表面的液面张力，使iNOS基因与支架表面牢固均匀的结合。并在 支架表面形成一层均句的iNOS基因涂层；
(4) iNOS基因涂层生物支架的干燥将支架自然稍晾干后， 冰箱中预冷冻后放入真空冷冻干燥机中干燥4 h。
实施例3
具有纳米孔的iNOS基因与雷帕霉素药物联合涂层生物支架的制备
选用镍铬合金材质经抛光后，用激光雕刻成血管支架；然后通过 酸液腐蚀、微弧氧化和微弧氮化的结合，在支架表面制备载药孔洞， 孔洞为载药槽，孔洞的直径为150-300nm。按照如下步骤制得基因涂 层生物支架
1、支架本体表面的清洗
(1) 砂带打磨支架本体表面，机械去除表面的氧化物，调整表 面粗糙度；
(2) 利用超声波，依次用75%的医用乙醇溶液、99.5%的丙酮溶液、去离子水清洗，超声波频率为28KHz，清洗时间为15min;
(3) 将支架本体放入30g/L、 100 'C氢氧化钠溶液中浸泡5min，
去除油脂和氧化皮；
(4) 将清洗后的支架本体放置在真空干燥机中，温度设定在40 。C，干燥35min后取出。
2、 支架本体表面的防腐处理采用化学氧化处理将支架浸入 含重铬酸钾20g/L、硝酸20g/L、氯化钠l g/L的混合溶液中，在8(TC 下，氧化2min，在支架本体表面生成氧化膜；
3、 治疗性药物溶液的涂覆处理以甲醇作溶剂，加入浓度为15 yg/ml的雷帕霉素对支架表面进行定向超声喷涂，匀速旋转支，喷涂 2次，使支架表面药物含量达到支架重量的1/105。
4、 支架本体表面iNOS基因溶液的涂覆处理
(1) 支架本体的预处理用无水乙醇超声清洗，超声波频率为 60KHz，清洗时间为15min;使用去离子水清洗三次；
(2) iNOS基因涂覆液的配制以浓度为10%的乙醇溶液为溶 剂，加入iNOS基因使iNOS基因的终浓度为lmg/ml;
(3) 阳极极化涂覆如图4所示，将支架本体串联到阳极极化仪 的阳极4上，将配制好的iNOS基因溶液注入阳极极化的基因或寡核 苷酸储存容器3中，调节阳极电压为0.5v,极化时间为100min,通电 后基因或寡核苷酸离子向阳极支架处移动，在阴阳相吸作用下，克服 支架表面的液面张力，使iNOS基因与支架表面牢固均匀的结合。并 在支架表面形成一层均匀的iNOS基因涂层；
(4) iNOS基因涂层生物支架的干燥将支架自然稍晾干后， 冰箱中预冷冻后放入真空冷冻干燥机中干燥4 h。
权利要求
1、一种携载基因涂层医疗装置的制备方法，是将医疗装置本体作为阳极，将其与阴极一起，置于基因或寡核苷酸的溶液中进行阳极极化反应，得到表面携载基因层的医疗装置。
2、 如权利要求l所述的制备方法，其特征在于，还包括医疗装置 本体的预处理将医疗装置本体用四氢呋喃、丙酮、乙醇或甲醇超声 清洗，然后再用去离子水进行清洗；还包括将表面携载基因层的医疗 装置自然晾干，经预冷冻后，放入真空冷冻干燥机干燥。
3、 如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在医疗装置本体 的预处理之前，还包括将医疗装置本体进行前处理表面清洗和防腐 处理。
4、 如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述表面清洗的 过程为1) 用砂带打磨医疗装置本体表面，用于去除表面的氧化物，调 整表面粗糙度；2) 利用超声波，依次用75%的医用乙醇溶液、99.5%的丙酮溶液、 去离子水清洗，超声波频率为28-100KHz,清洗时间为5-15min;3) 将医疗装置本体放入15-60g/L、 70-100'C的氢氧化钠溶液中浸 泡5-10min，用于去除油脂和氧化皮；4) 将清洗后的医疗装置本体放置在真空干燥机中，温度设定在 30-40°C，干燥30-60min后取出；所述防腐处理是釆用化学氧化、阳极氧化、离子注入、激光表面 处理、热扩散、金属镀层、气相沉积、有机涂层中的一种或多种来进 行。
5、 如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述化学氧化处 理的过程为将医疗装置本体浸入含重铬酸钾15-20 g/L、硝酸15-25 g/L、氯化钠0.75-1.25 g/L的混合溶液中，在70-80。C下，氧化0.5-2.0min，在支架本体表面生成氧化膜；阳极氧化处理的过程为釆用交流电氧化，在两电极上分别安装完全相同的支架本体，阳极氧化处理用槽液为高锰酸钾15-20g/L、磷 酸三钠15-55g/L、氟化钾25-55 g/L、氢氧化钾65-165 g/L、氢氧化铝 15-65 g/L的混合液，在20-6(TC下，电流密度为O.l-lO A/dm2,交流电 压为50-卯V下，氧化10-50min，支架本体表面生成氧化膜。
6、 如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的医疗装置 本体的材质为包括不锈钢、钴铬合金、镁合金、Ni-Ti合金的医用金 属材料；所述的医疗装置本体为冠脉血管支架、颈动脉血管支架、外周血 管支架、肾动脉血管支架、颅内动脉血管支架、移植片固定膜、移植 片固定膜移植物、合成的人造血管、心脏瓣膜、血管修补筛、起搏器、 起搏器导子、除纤颤器、PFO隔膜封闭装置、血管夹、动脉血管瘤闭 锁器、血液透析移植物、血液透析导管、房室吻合分流、大动脉血管 瘤移植物装置、静脉瓣、血管接合夹、留置式动脉导管或血管护鞘和 药物输送口中的一种或多种的组合，优选表面具有载药孔洞的医疗装 置，更优选具有纳米载药孔洞的医疗装置，所述纳米载药孔洞的尺寸 优选100-800nm;所述的医疗装置本体优选包括冠脉血管支架、颈动脉血管支架、 外周血管支架、肾动脉血管支架、颅内动脉血管支架的支架；更优选 表面具有载药孔洞的支架；进一步优选具有纳米载药孔洞的医疗装置，所述纳米载药孔洞的尺寸优选100-800nm。
7、 如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述基因或 寡核苷酸溶液是以蒸馏水、生理盐水、pH值为3.0-9.0的硼酸盐缓冲溶 液、pH值为8.0-10.0碳酸盐缓冲溶液、pH值为3.0-9.0醋酸盐缓冲溶液、 浓度为l。/。-20。/。的乙醇溶液或pH值为3.0-9.0磷酸盐缓冲溶液为溶剂， 浓度为O.OOl -111^/1111的基因或寡核苷酸溶液；所述基因是一氧化氮合成酶基因、血管内皮生长因子基因、成纤 维细胞生长因子基因、胰岛素样生长因子基因、细胞分裂调控基因、 抗癌基因、肝细胞生长因子基因、血小板衍生生长因子基因、PTEN、Keratin8基因、尿激酶前体基因、EGF基因或其片段中的一种或多种；所述寡核苷酸是上述基因的寡核苷酸或反义寡核苷酸或其片段 中的一种或多种。
8、 如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，如权利要求l 所述的制备方法，其特征在于，所述阳极极化反应釆用直流电进行， 电压0.1-2.5V,反应时间l-100min。
9、 如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，在医疗装 置本体表面涂覆基因前，可先涂覆治疗性药物。
10、 如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述治疗性药 物为肝素、阿司匹林、水蛭素、秋水仙碱、抗血小板GPIIb/IIIa受体 拮抗剂、白甲氨蝶呤、嘌呤类、嘧啶类、植物碱类和埃坡破霉素类、 雷公藤系列化合物、抗生素、激素、抗体治癌药物、环孢霉素、他克 莫司及同系物、脱精胍菌素、霉酚酸脂、雷帕霉素及其衍生物、FR 900520、 FR900523、 NK 86-1086、戊酰胺、康乐霉素C、斯博格埃 林、灵菌红素25c、曲尼斯特、多球壳菌素、FR651814、 SDZ214-104、 环孢霉素C、布雷青霉素、麦考酚酸、布雷菲得菌素A、 WS9482、 糖皮质类固醇、替罗非班、埃替非巴肽、紫杉醇、放线菌素-D等中 的一种或多种。
全文摘要
本发明涉及一种携载基因涂层医疗装置的制备方法。本发明利用阳极极化原理，将医疗装置本体作为阳极，将其与电源阴极一起，置于基因或寡核苷酸的溶液中进行阳极极化反应，得到表面携载基因层的医疗装置。该方法简单易行，无需引入负载基因的基质，避免了因基质而带来的炎症及副作用；装置本体上均匀包被基因或者寡核苷酸，基因或者寡核苷酸包被稳定性好，活性不受工艺过程的影响，基因或者寡核苷酸容易缓慢释放到血管细胞中，从而在血管壁细胞中表达，该种医疗装置能够更加有效地预防和治疗医疗装置内的炎症反应和再狭窄。
文档编号A61F2/82GK101491468SQ20091007853
公开日2009年7月29日 申请日期2009年2月25日 优先权日2009年2月25日
发明者余占江, 冉玉凤, 张正才, 王长青, 蒲忠杰, 陈永强 申请人:乐普(北京)医疗器械股份有限公司