增强髓过氧化物酶的抗细菌活性的组合物及其使用方法

专利名称：增强髓过氧化物酶的抗细菌活性的组合物及其使用方法
增强髓过氧化物酶的抗细菌活性的组合物及其使用方法
背景技术：
本发明涉及用于抑制或治疗微生物感染的方法及组合物。更具体而言，本发明 涉及使用氨基酸与髓过氧化物酶的组合来增强系统的杀微生物性质的方法及组合物。如公开于美国专利No.5,888,505及6,294,168，髓过氧化物酶可用来在靶微生物 环境中选择性结合靶微生物，及在过氧化物及卤化物存在下不消除期望微生物或显著损 伤其他培养基成分(例如宿主细胞及正常菌群)地抑制靶微生物生长。之前已知当给予适 当的卤化物辅因子(X_)及过氧化氢作为底物时，髓过氧化物酶在天然系统中表现出杀微 生物活性(Klebanoff，J.Bacteriol.95 2131-2138，1968)。但是，最近已知髓过氧化物酶 结合的选择性性质及这些系统在治疗，研究及工业应用中的利用。由于新发现髓过氧化 物酶的选择性结合性质，当靶微生物(例如病原性微生物)具有大于期望微生物(例如正 常菌群成员)的结合髓过氧化物酶的能力时，靶微生物选择性结合所述髓过氧化物酶， 而期望微生物少或不结合所述髓过氧化物酶。在过氧化物及卤化物存在下，结合靶的髓 过氧化物酶在靶微生物表面催化商化物氧化及促进过氧化物歧化为单个分子氧(1O2),导 致伴随对期望微生物或生理培养基的最小损伤而选择性杀靶微生物。因此，如公开于美 国专利No.5,888,505及6,294,168，髓过氧化物酶可在治疗或预防性治疗人或动物受试者 中用作抗菌剂以伴随对宿主细胞及宿主正常菌群的最小损伤地选择性结合及杀病原性微 生物。所述系统还可用作抑制靶微生物体外生长的消毒或灭菌剂，尤其在生物医疗装 置(例如绷带，手术器械，缝合装置，导管，牙科设备，接触镜等)经抗菌性处理以当生 物医疗装置随后在体内利用时无对受试者宿主细胞损伤地抑制靶微生物生长中应用。如公开于美国专利No.5,389,369及5,451,402，而已发现公开于美国专利 No.5,888,505及6,294,168的髓过氧化物酶抗菌剂系统高度有效于治疗病原性微生物，可 需要抗微生物活性增强剂来有效杀酵母及孢子形成微生物。微生物生命周期的孢子阶段 的特征是代谢休眠及对会摧毁在营养阶段中的微生物的环境因素的抗性。孢子发芽的最 早阶段的特征是膨胀及从休眠转到活跃代谢。后随营养生长，例如萌发及终极繁殖。细菌内生孢子及真菌孢子发芽与增加的代谢及降低的对热及化学试剂的抗性 相关。对于发芽发生而言，孢子必需感知环境足以支持营养生长及繁殖。氨基酸， L-丙氨酸被报道刺激细菌孢子发芽(Hills，J.Gen.Microbiol.4 38，1950 ； Halvorson and Church, Bacteriol.Rev.21 112，1957)。L-丙氨酸及L-脯氨酸也被报道起始真菌孢子 发芽(Yanagita，Arch.Mikrobiol.26 329，1957)。简单α -氨基酸(例如甘氨酸及L-丙氨酸)在代谢中占中心地位。α -氨基酸的 转氨作用或去氨基作用产生需于代谢及生长的生糖原或生酮基碳水化合物及氮。例如， L-丙氨酸的转氨作用或去氨基作用产生丙酮酸，其为糖酵解代谢(恩布顿-迈耶霍夫-帕 纳斯途径)的终产物。由丙酮酸脱氢酶复合物的丙酮酸氧化产生乙酰CoA，NADH, H+ 及C02。乙酰CoA是三羧酸循环(克雷伯氏循环)的起始物底物，其反过来补给线粒体 电子传递链。乙酰CoA也是脂肪酸合成以及留醇合成的最终碳源。简单α-氨基酸可提供氮，CO2,生糖原，和/或需于随后的发芽及代谢活性的生酮基相当物。因此，美国专利No.5,389,369及5,451,402公开髓过氧化物酶抗酵母及孢子形式 的微生物的杀微生物作用可通过用髓过氧化物酶联合某些α-氨基酸(其提供对酵母发 芽，生孢子微生物发芽的刺激作用及可能加速营养生长的微生物的代谢)处理微生物来 增强。为此目的公开的代表性的α-氨基酸包括甘氨酸及丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸， 异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，赖氨酸，苯丙氨酸，酪氨酸的L-或D-对映体及它们的烷 基酯。而美国专利No.5,389,369及5,451,402公开用α -氨基酸的髓过氧化物酶抗酵母及 孢子形式的微生物的杀微生物活性的增强，但这些专利未公开抗非孢子细菌的髓过氧化 物酶杀微生物系统的增强或进一步如本文公开通过使用髓过氧化物酶及至少2种氨基酸 来增强抗细菌活性。发明概述此概述旨在以简化的形式引出概念的选择，所述概念将在发明详述部分进一步 描述。此概述不旨在确定要求保护的主题的关键特征，也不旨在确定要求保护的主题的 范围。本发明涉及通过接触感染位点与组合物来杀或抑制微生物感染(例如细菌感染) 的组合物及方法，所述组合物含髓过氧化物酶及通过联合作用增强髓过氧化物酶的杀 微生物活性的至少2种氨基酸。本发明的实践中，通过接触微生物与一定量的髓过氧化 物酶及在过氧化物及溴或氯存在下对抑制微生物生长或杀微生物有效的至少2种氨基酸 来杀或抑制易感微生物。因此，在一实施方式中，本发明提供用于抑制易感微生物生长的组合物，其 含髓过氧化物酶及通过联合作用增强所述髓过氧化物酶的杀微生物活性的至少2种氨 基酸。在一些实施方式中，所述至少2种氨基酸选自甘氨酸，L-丙氨酸，D-丙氨 酸，L-丙氨酸酐，L-谷氨酰胺，L-谷氨酸，甘氨酸酐，马尿酸，L-组氨酸，L-亮氨 酸，D-亮氨酸，L-异亮氨酸，D-异亮氨酸，L-赖氨酸，L-鸟氨酸，D-苯丙氨酸， L-苯丙氨酸，L-脯氨酸，L-羟脯氨酸，L-丝氨酸，牛磺酸，L-苏氨酸，D-苏氨酸， L-酪氨酸，L-缬氨酸，D-缬氨酸，如β丙氨酸、L-β-高亮氨酸、D-β-高亮氨酸 的β氨基酸、3-氨基丁酸，L-2，3-二氨基丙酸单盐酸盐，D-2，3-二氨基丙酸单盐 酸盐，L-3-氨基异丁酸，D-3-氨基异丁酸，3-氨基丁酸乙酯，肌氨酸甲酯盐酸盐及哌 啶酸，或者它们的烷基酯或药学可接受盐。在其他实施方式中，所述至少2种氨基酸选 自甘氨酸，L-丙氨酸，D-丙氨酸，L-丙氨酸酐，L-谷氨酰胺，L-谷氨酸，甘氨酸 酐，马尿酸，L-组氨酸，L-亮氨酸，D-亮氨酸，L-异亮氨酸，D-异亮氨酸，L-赖氨 酸，L-鸟氨酸，D-苯丙氨酸，L-苯丙氨酸，L-脯氨酸，L-羟脯氨酸，L-丝氨酸，牛 磺酸，L-苏氨酸，D-苏氨酸，L-酪氨酸，L-缬氨酸及D-缬氨酸，或者它们的烷基酯 或药学可接受盐。在其他方面，本发明提供用于抑制易感微生物生长的组合物，其含髓过氧化 物酶及至少3种氨基酸，所述至少3种氨基酸选自甘氨酸，L-丙氨酸，D-丙氨酸， L-丙氨酸酐，L-谷氨酰胺，L-谷氨酸，甘氨酸酐，马尿酸，L-组氨酸，L-亮氨酸， D-亮氨酸，L-异亮氨酸，D-异亮氨酸，L-赖氨酸，L-鸟氨酸，D-苯丙氨酸，L-苯 丙氨酸，L-脯氨酸，L-羟脯氨酸，L-丝氨酸，牛磺酸，L-苏氨酸，D-苏氨酸，L-酪氨酸，L-缬氨酸，D-缬氨酸，如β丙氨酸、L-β-高亮氨酸、D-β-高亮氨酸的β 氨基酸、3-氨基丁酸，L-2，3-二氨基丙酸单盐酸盐，D-2，3-二氨基丙酸单盐酸盐， L-3-氨基异丁酸，D-3-氨基异丁酸，3-氨基丁酸乙酯，肌氨酸甲酯盐酸盐及哌啶酸， 或者它们的烷基酯或药学可接受盐。在其他方面，所述至少3种氨基酸选自甘氨酸， L-丙氨酸，D-丙氨酸，L-丙氨酸酐，L-谷氨酰胺，L-谷氨酸，甘氨酸酐，马尿酸， L-组氨酸，L-亮氨酸，D-亮氨酸，L-异亮氨酸，D-异亮氨酸，L-赖氨酸，L-鸟氨 酸，D-苯丙氨酸，L-苯丙氨酸，L-脯氨酸，L-羟脯氨酸，L-丝氨酸，牛磺酸，L-苏 氨酸，D-苏氨酸，L-酪氨酸，L-缬氨酸及D-缬氨酸，或者它们的烷基酯或药学可接 受盐。在一些实施方式中，本发明的组合物还含过氧化氢或过氧化氢源。本发明的 此方面中，组合物可含在氧化酶底物存在下产生过氧化氢的产生过氧化物的氧化酶。在 一些实施方式中，组合物含对在所述氧化酶底物存在下产生IOOpmol 50 μ mol过氧化物 /ml/分钟有效的产生过氧化物的氧化酶。在一实施方式中，本发明的组合物含1 50,000 μ g/ml的髓过氧化物酶。在其 他实施方式中，本发明的组合物含0.1 约500mM的各所述至少2种氨基酸。在一代表 性的实施方式中，本发明的组合物含10 5,000 μ g/ml的髓过氧化物酶，0.3 50mM的 甘氨酸，0.3 50mM的L-丙氨酸，0.3 50mM的L-脯氨酸及1 500U/ml的葡萄糖
氧化酶。在其他方面，本发明提供治疗需要所述治疗的人或动物受试者方法，包括将 组合物施用于所述受试者感染位点，所述组合物含髓过氧化物酶及在过氧化氢及氯或 溴存在下通过联合作用来增强所述髓过氧化物酶的杀微生物活性的至少2种氨基酸。在 本发明此方面的一些实施方式中，所述至少2种氨基酸选自甘氨酸，L-丙氨酸，D-丙 氨酸，L-丙氨酸酐，L-谷氨酰胺，L-谷氨酸，甘氨酸酐，马尿酸，L-组氨酸，L-亮 氨酸，D-亮氨酸，L-异亮氨酸，D-异亮氨酸，L-赖氨酸，L-鸟氨酸，D-苯丙氨酸， L-苯丙氨酸，L-脯氨酸，L-羟脯氨酸，L-丝氨酸，牛磺酸，L-苏氨酸，D-苏氨酸， L-酪氨酸，L-缬氨酸，D-缬氨酸，如β丙氨酸、L-β-高亮氨酸、D-β-高亮氨酸 的β氨基酸、3-氨基丁酸，L-2，3-二氨基丙酸单盐酸盐，D-2，3-二氨基丙酸单盐酸 盐，L-3-氨基-异丁酸，D-3-氨基异丁酸，3-氨基丁酸乙酯，肌氨酸甲酯盐酸盐及哌啶 酸，或者它们的烷基酯或药学可接受盐。在本发明的此方面的其他实施方式中，所述至 少2种氨基酸选自甘氨酸，L-丙氨酸，D-丙氨酸，L-丙氨酸酐，L-谷氨酰胺，L-谷 氨酸，甘氨酸酐，马尿酸，L-组氨酸，L-亮氨酸，D-亮氨酸，L-异亮氨酸，D-异亮 氨酸，L-赖氨酸，L-鸟氨酸，D-苯丙氨酸，L-苯丙氨酸，L-脯氨酸，L-羟脯氨酸， L-丝氨酸，牛磺酸，L-苏氨酸，D-苏氨酸，L-酪氨酸，L-缬氨酸及D-缬氨酸，或者 它们的烷基酯或药学可接受盐。在其他实施方式中，本发明提供治疗需要所述治疗的人或动物受试者方法，包 括将组合物施用于所述受试者感染位点，所述组合物含髓过氧化物酶及在过氧化氢 及氯或溴存在下通过联合作用来增强所述髓过氧化物酶的杀微生物活性的至少3种氨基 酸。在一些实施方式中，所述至少3种氨基酸选自甘氨酸，L-丙氨酸，D-丙氨酸， L-丙氨酸酐，L-谷氨酰胺，L-谷氨酸，甘氨酸酐，马尿酸，L-组氨酸，L-亮氨酸，D-亮氨酸，L-异亮氨酸，D-异亮氨酸，L-赖氨酸，L-鸟氨酸，D-苯丙氨酸，L-苯 丙氨酸，L-脯氨酸，L-羟脯氨酸，L-丝氨酸，牛磺酸，L-苏氨酸，D-苏氨酸，L-酪 氨酸，L-缬氨酸，D-缬氨酸，如β丙氨酸、L-β-高亮氨酸、D-β-高亮氨酸的β 氨基酸、3-氨基丁酸，L-2，3-二氨基丙酸单盐酸盐，D-2，3-二氨基丙酸单盐酸盐， L-3-氨基异丁酸，D-3-氨基异丁酸，3-氨基丁酸乙酯，肌氨酸甲酯盐酸盐及哌啶酸， 或者它们的烷基酯或药学可接受盐。在其他实施方式中，所述至少3种氨基酸选自甘 氨酸，L-丙氨酸，D-丙氨酸，L-丙氨酸酐，L-谷氨酰胺，L-谷氨酸，甘氨酸酐，马 尿酸，L-组氨酸，L-亮氨酸，D-亮氨酸，L-异亮氨酸，D-异亮氨酸，L-赖氨酸， L-鸟氨酸，D-苯丙氨酸，L-苯丙氨酸，L-脯氨酸，L-羟脯氨酸，L-丝氨酸，牛磺 酸，L-苏氨酸，D-苏氨酸，L-酪氨酸，L-缬氨酸及D-缬氨酸，或者它们的烷基酯或 药学可接受盐。在其他实施方式中，施用于人或动物受试者的组合物可还含过氧化氢或过氧化 氢源。在一些实施方式中，所述过氧化氢源含在氧化酶底物存在下产生过氧化氢的产生 过氧化物的氧化酶。例如，施用于人或动物受试者的组合物可还含对在所述氧化酶底物 存在下产生IOOpmol 50 μ mol过氧化物/ml/分钟有效的产生过氧化物的氧化酶。在一些实施方式中，施用于人或动物受试者的组合物可含1 50,000 μ g/ml 的髓过氧化物酶。在其他实施方式中，施用于人或动物受试者的组合物可含0.1 约 500mM的各所述至少2种氨基酸。在一代表性的实施方式中，施用于人或动物受试者的 组合物可含10 5,000 μ g/ml的髓过氧化物酶，0.3 50mM的甘氨酸，0.3 50mM的 L-丙氨酸，0.3 50mM的L-脯氨酸，1 500U/ml的葡萄糖氧化酶及1 500mM葡 萄糖。在本发明的一些方面，待治疗的人或动物受试者患牙龈、眼、耳、皮肤、软组 织、创伤、阴道区、腹股沟区、褥疮或烧伤区的微生物感染。在一些实施方式中，感染 是多微生物感染。在其他实施方式中，感染至少部分通过多药物抗性微生物所致。在其他方面，本发明提供杀或抑制易感微生物生长的方法，包括在过氧化氢 及氯或溴存在下使所述微生物与组合物接触，所述组合物含髓过氧化物酶及通过联合 作用增强所述髓过氧化物酶的杀微生物活性的至少2种氨基酸。附图简述通过参考下列发明详述及附图，本领域技术人员将更清楚地理解之前所述的本 发明的方面及许多优点，其中

图1是如实施例11中所述用含9( □ )，6(0), 3(Δ)，l(O), 0.3(*)及 0.1⑴μ g MPO/ml的增强的MPO溶液处理的金黄色葡萄球菌ATCC 6538 (图1A)及大肠 杆菌ATCC 25922 (图1B)的时间-杀分析。使用悬浮_中和方法显示了快速杀细菌活性 (从初始接种物减少>31og)。以更高MPO浓度的增强的MPO溶液杀率更大，及随更长 暴露时间杀幅增加。以3 μ g MPO/ml及以上的浓度在暴露5分钟内未观察到可检测的存 活者；图2是如实施例11中所述用含200(口)，100 ( )及50 (Δ) μ g MPO/ml的增强 的MPO溶液处理的金黄色葡萄球菌ATCC 6538 (图2A)及铜绿假单胞菌ATCC 27317 (图 2B)的时间-杀分析。在3%全人血存在下通过悬浮-中和方法测试分离物。血对增强的MPO溶液的抗微生物活性的干扰作用以更高MPO浓度克服；图3 是如实施例 11 中所述用含 256( □ )，64( O ), 16(Δ)，4(X)，1 (*)， 0.025 (〇)及0.06 (+) μ g MPO/ml的增强的MPO溶液处理的金黄色葡萄球菌ATCC 29213 (图3A)，大肠杆菌ATCC 25922 (图3B)，粪肠球菌ATCC 29212 (图3C)及铜绿假 单胞菌ATCC 27853 (图3D)的时间-杀分析。使用修饰的CLSI肉汤微量稀释方法显示 杀细菌活性(从初始接种物减少>31og)。在所有生物体观察到可比的杀模式，及以更高 MPO浓度的增强的MPO溶液杀率更大，及随更长暴露及时间杀幅增加。分别以256及 16 Ug MPO/ml的浓度，在30分钟及4小时内，在所有所测生物体未观察到可检测的存活 者；图4是如实施例12中所述用含18.75 ( )，75GU/ml ( ■)及150 ( · ) GU/ml的 增强的MPO溶液处理的大鼠全厚度创伤模型中的金黄色葡萄球菌ATCC 6538的时间-杀 分析。在60分钟时从未处理的创伤回收生物体(O)。此坐标图表示在5，15，30及 60分钟的处理时间分离自各处理组的平均IoglOCFU存活者。对于各处理组显示各数据 点的95%置信区间；图5是如实施例12中所述在大鼠部分厚度创伤模型中增强的MPO溶液对抗甲氧 西林耐受型金黄色葡萄球菌(MRSA)及甲氧西林敏感型金黄色葡萄球菌(MSSA)的杀微 生物活性的比较。此坐标图表示处理后15分钟时分离的平均IoglOCFU存活者；及图6 是如实施例 12 中所述用含 18.75 ( )，75GU/ml ( ■)及 150 ( · ) GU/ml 的增强的MPO溶液处理的大鼠全厚度创伤模型中的大肠杆菌ATCC 25922的时间-杀分 析。在60分钟时从未处理的创伤回收生物体(〇)。此坐标图表示在5，15，30及60 分钟的处理时间分离自各处理组的平均log IOCFU存活者。对于各处理组显示各数据点 的95%置信区间。发明详述本发明广义涉及使用髓过氧化物酶及通过联合作用增强髓过氧化物酶的杀微生 物活性的至少2种氨基酸杀或抑制细菌感染的组合物及方法。本发明的实践中，通过接 触微生物与一定量的髓过氧化物酶及在过氧化物及溴或氯存在下对抑制微生物生长或杀 微生物有效的至少2种氨基酸来杀或抑制易感微生物。在尤其优选的实施方式中，本发明的组合物及方法被用作表现出增强的对抗广 泛的病原性微生物(包括细菌及真菌)的髓过氧化物酶抗微生物活性的抗菌剂。一方 面，本发明的组合物及方法高度适于局部治疗人或非人哺乳动物受试者中在允许直接接 触本发明的组合物与微生物感染的位点的易感感染，例如，皮肤，目艮，耳，口，鼻及窦 通道，跌打损伤位点，手术位点的感染等。对于用于与宿主组织接触，抗菌剂系统基于 使用表现出对于病原性微生物选择性亲和性的二氧合髓过氧化物酶。照这样，高潜力杀 微生物作用可不伴随宿主组织破坏或正常菌群破坏地针对靶微生物，即抗菌作用是选择 性的且限于靶微生物。因此，在一实施方式中，本发明提供用于抑制易感微生物生长的组合物，其 含髓过氧化物酶及在过氧化物及氯或溴存在下组合工作来增强所述髓过氧化物酶的杀 微生物活性的至少2种氨基酸。当不是在组合物的使用位点以足够量另行应用时，组合 物还可含过氧化氢或过氧化氢源及氯或溴。相关实施方式中，本发明提供治疗需要所述治疗的人或动物受试者方法，包括将组合物施用于所述受试者感染位点，所述组合物 含髓过氧化物酶及通过联合作用增强所述髓过氧化物酶的杀微生物活性的至少2种氨 基酸。再者，组合物还可含过氧化氢或过氧化氢源及氯或溴，以补充在感染位点的天然
存在量。在其他实施方式中，本发明提供用于抑制易感微生物体外生长的组合物及方 法，尤其在生物医疗装置，例如绷带，手术器械，缝合装置，导管，牙科设备，接触镜 等需要消毒或灭菌中应用，且其中装置待随即与宿主组织接触。因此，本发明的高潜力 髓过氧化物酶制剂可充当体外消毒或灭菌制剂。通过限制过氧化氢有效性时期，增强髓 过氧化物酶的制剂可制得在与宿主组织接触前足够有效确保材料或装置的消毒及甚至灭 菌。当过氧化物耗尽及如此时，伴随这些高潜力制剂使用的对正常菌群及宿主组织的任 何潜在毒性停止，经制剂处理的材料或装置可不再洗涤或脱毒地使与宿主组织接触。因此，在一实施方式中，本发明提供杀或抑制易感微生物体外生长的方法，包 括在过氧化氢及氯或溴存在下使所述微生物与组合物接触，所述组合物含髓过氧化 物酶及通过联合作用增强所述髓过氧化物酶的杀微生物活性的至少2种氨基酸。又一方面，本发明提供含髓过氧化物酶及至少2种氨基酸的组合物用于制备治 疗人或动物受试者感染的药物的用途，其中所述氨基酸在过氧化氢及氯或溴存在下通过 联合作用来增强所述髓过氧化物酶的杀微生物活性。在一些实施方式中，本发明提供含 髓过氧化物酶及至少2种氨基酸的组合物用于制备杀或抑制易感微生物生长的药物的用 途，其中所述氨基酸通过联合作用增强所述髓过氧化物酶的杀微生物活性。本发明的代表性的组合物包含(1)髓过氧化物酶(MPO) ； (2)至少2种活性增 强氨基酸；及任选(3)过氧化氢(H2O2)或H2O2源；及(4)氯或溴。有用于本发明的髓过氧化物酶是卤化物过氧化氢氧化还原酶(例如国际生物 化学联合会编号的EC No.l.11.1.7及EC Nal.lU.10)，其中卤化物(即氯或溴)是电子 供体或还原剂，及过氧化物是电子受体或氧化剂。髓过氧化物酶溶液的酶活性可通过在 磷酸钠缓冲液中的过氧化氢存在下与愈创木酚反应来测定。反应产生在470nm处具有强 吸光度的产物。由相比参照标准物的吸光度增加的动力学测定活性。髓过氧化物酶活 性通常以愈创木酚单位/mL(GU/mL)表示，及也表示为μ g MPO/ml ( μ g/mL)。基于 0.375GU/ygMPO将yg转换为GUMPO。具体活性由其活性及总蛋白浓度计算，及以 GU/mg蛋白表示。本发明的组合物中使用的髓过氧化物酶的可用量将依赖于使用组合物 的条件，使用环境及期望结果广泛变化。对于多数目的，本发明的组合物将一般含至少 约0.05μ§/ιη1(0.01875θυ/ιη1)髓过氧化物酶。在一些实施方式中，本发明的组合物将含 约1 约50,000 μ g/ml的髓过氧化物酶(即约0.375 约18,750GU/ml)，更优选约5 约10,000 μ g/ml的髓过氧化物酶(即约1.875 约3,750GU/ml)及甚至更优选约10 约 5,000 μ g/ml的髓过氧化物酶(即约3.75 约l,875GU/ml)。如本文所述包括至少2种活性增强氨基酸会大大提高对抗易感微生物的氧化 酶-髓过氧化物酶系统的杀微生物能力。本发明的实践中有用的氨基酸是这样的氨基 酸，其当与过氧化物及氯或溴组合使用及在过氧化物及氯或溴存在下，增强对抗易感微 生物的髓过氧化物酶抗微生物系统的抗微生物活性。至少2种氨基酸以不产生对系统髓 过氧化物酶活性的不良作用或者组合物及方法使用环境中不期望的作用的浓度使用。
在一些实施方式中，本发明的组合物含至少2种氨基酸，所述至少2种氨基酸选 自甘氨酸，L-丙氨酸，D-丙氨酸，L-丙氨酸酐，L-谷氨酰胺，L-谷氨酸，甘氨酸 酐，马尿酸，L-组氨酸，L-亮氨酸，D-亮氨酸，L-异亮氨酸，D-异亮氨酸，L-赖 氨酸，L-鸟氨酸，D-苯丙氨酸，L-苯丙氨酸，L-脯氨酸，L-羟脯氨酸，L-丝氨酸， 牛磺酸，L-苏氨酸，D-苏氨酸，L-酪氨酸，L-缬氨酸，D-缬氨酸，如β丙氨酸、 L-β-高亮氨酸、D-β-高亮氨酸的β氨基酸、3-氨基丁酸，L-2，3-二氨基丙酸单盐 酸盐，D-2，3-二氨基丙酸单盐酸盐，L-3-氨基异丁酸，D-3-氨基异丁酸及3-氨基丁 酸乙酯，以及它们的烷基酯及药学可接受盐，例如，L-丙氨酸甲酯，D-丙氨酸甲酯， L-赖氨酸甲酯二盐酸盐，甘氨酸甲酯盐酸盐，L-脯氨酸甲酯盐酸盐，L-缬氨酸乙酯盐 酸盐及2-氨基丙酸乙酯及N-取代的氨基酸，例如肌氨酸甲酯盐酸盐及哌啶酸。在其他实施方式中，本发明的组合物含至少2种氨基酸，所述至少2种氨基酸选 自甘氨酸，L-丙氨酸，D-丙氨酸，L-丙氨酸酐，L-谷氨酰胺，L-谷氨酸，甘氨酸 酐，马尿酸，L-组氨酸，L-亮氨酸，D-亮氨酸，L-异亮氨酸，D-异亮氨酸，L-赖氨 酸，L-鸟氨酸，D-苯丙氨酸，L-苯丙氨酸，L-脯氨酸，L-羟脯氨酸，L-丝氨酸，牛 磺酸，L-苏氨酸，D-苏氨酸，L-酪氨酸，L-缬氨酸及D-缬氨酸，以及它们的烷基酯 及药学可接受盐。在一些实施方式中，本发明的组合物含髓过氧化物酶及通过联合作用增强髓过 氧化物酶的杀微生物活性的至少3种氨基酸。因此，在一些实施方式中，本发明的组 合物含至少3种氨基酸，所述至少3种氨基酸选自甘氨酸，L-丙氨酸，D-丙氨酸， L-丙氨酸酐，L-谷氨酰胺，L-谷氨酸，甘氨酸酐，马尿酸，L-组氨酸，L-亮氨酸， D-亮氨酸，L-异亮氨酸，D-异亮氨酸，L-赖氨酸，L-鸟氨酸，D-苯丙氨酸，L-苯 丙氨酸，L-脯氨酸，L-羟脯氨酸，L-丝氨酸，牛磺酸，L-苏氨酸，D-苏氨酸，L-酪 氨酸，L-缬氨酸，D-缬氨酸，如β丙氨酸、L-β-高亮氨酸、D-β-高亮氨酸的β 氨基酸、3-氨基丁酸，L-2，3-二氨基丙酸单盐酸盐，D-2，3-二氨基丙酸单盐酸盐， L-3-氨基-异丁酸，D-3-氨基异丁酸及3-氨基丁酸乙酯，以及它们的酯及药学可接受 盐，例如，L-丙氨酸甲酯，D-丙氨酸甲酯，L-赖氨酸甲酯二盐酸盐，甘氨酸甲酯盐酸 盐，L-脯氨酸甲酯盐酸盐，L-缬氨酸乙酯盐酸盐及2-氨基丙酸乙酯及N-取代的氨基 酸，例如肌氨酸甲酯盐酸盐及哌啶酸。再其他实施方式中，本发明的组合物含至少3种氨基酸，所述至少3种氨基酸选 自甘氨酸，L-丙氨酸，D-丙氨酸，L-丙氨酸酐，L-谷氨酰胺，L-谷氨酸，甘氨酸 酐，马尿酸，L-组氨酸，L-亮氨酸，D-亮氨酸，L-异亮氨酸，D-异亮氨酸，L-赖 氨酸，L-鸟氨酸，D-苯丙氨酸，L-苯丙氨酸，L-脯氨酸，L-羟脯氨酸，L-丝氨酸， 牛磺酸，L-苏氨酸，D-苏氨酸，L-酪氨酸，L-缬氨酸及D-缬氨酸，以及它们的酯及 药学可接受盐。本发明此方面的一个目前优选的代表例中，本发明的组合物含对增强髓 过氧化物酶的抗微生物活性有效量的髓过氧化物酶及氨基酸甘氨酸，L-丙氨酸及L-脯氨 酸。本发明的组合物中使用的氨基酸的可用量将依赖于使用环境中存在的组合物中 及情况中髓过氧化物酶的量变化。对于多数目的，本发明的组合物将一般含约0.1 约 500mM，更优选约0.2 约IOOmM及甚至更优选约0.3 约50mM的本发明的各氨基酸。在一代表性的实施方式中，例如，本发明的组合物含10 5,000 μ g/ml的髓过氧化 物酶，0.3 50mM的甘氨酸，0.3 50mM的L-丙氨酸，0.3 50mM的L-脯氨酸及 1 500U/ml的葡萄糖氧化酶。由于本发明的髓过氧化物酶组合物的抗菌活性涉及过氧化物与氯或溴反应形成 次卤酸盐，及过氧化物与次卤酸盐反应形成单个分子氧，本发明的组合物活性依赖于抗 微生物活性位点存在适宜过氧化物及卤化物。在一些情况中，过氧化物(例如过氧化氢) 可存在于抗微生物活性位点，由于例如天然存在的菌群活性，及足够量的氯可存在于生 理环境以在转变反应中作为辅因子。在这些情况中，无需额外过氧化物或卤化物施用于 或包括于本发明的组合物。在其他情况中，可需要或期望在微生物处理位点额外提供过 氧化氢和/或卤化物。因此，本发明的组合物可再包含(如果需要)过氧化物或能够 体内或体外产生过氧化物的制剂，及氯或溴。有用于本发明的的组合物及方法的过氧化物包括过氧化氢，下式的烷基氢过 氧化物R-OOH其中R是氢或具有1 3个碳原子的短链烷基基团及无机过氧化物(例如硼过氧 化物或脲过氧化物)。如下，有机过氧化物的氧化活性一般随着R链长度渐增而降低R = H > > CH3 > CH3CH2 > CH3 (CH2) 2用于本发明的组合物的目前优选的过氧化物是过氧化氢。通过包括组合物，能 够体内或体外产生过氧化氢的制剂，过氧化氢还可制得用于抗微生物活性位点。尤其用 于此目的的有用的制剂包括，例如，氧化酶，例如葡萄糖氧化酶，胆固醇氧化酶及半乳
糖氧化酶。当过氧化氢直接包括于本发明的用于体内应用的组合物时，应用量可优选设计 为提供最大消毒活性。通过避免高H2O2暴露期间直接接触来避免对宿主细胞及组织及对 正常菌群的损伤。因此，本发明的组合物可含约Inmol 约10 μ mol的过氧化氢/ml的 组合物，更优选约5nmol 约5 μ mol的过氧化氢/ml的组合物及最优选约IOnmol 约 1 μ mol的过氧化氢/ml的组合物。能够体内产生过氧化氢的制剂(例如产生过氧化物的 氧化酶)尤其有用于存在于抗微生物活性位点的过氧化氢量的动态控制。此类制剂通过 提供及维持稳定，低水平浓度的H2O2最大化组合物的抗微生物活性。因此，此类制剂 应用量将高度取决于制剂性质及所需作用，但将优选能够产生定态水平的约Ipmol 约 1 μ mol的过氧化氢/ml的液体/分钟，依赖于可用在抗微生物活性位点的卤化物的类型及 浓度。当制剂待被用作消毒_灭菌溶液，可调节氧化酶及其底物来提供相对高定态浓度 的H2O2持续所需灭菌期。随着氧化酶底物耗尽或相对于氧化酶降解速率，消毒-灭菌作 用终结。作为代表例，当氧化酶是葡萄糖氧化酶及其底物是葡萄糖(或右旋糖)，本发明 的组合物可含约0.05 约3,000U/ml，更优选约0.1 约l,OOOU/ml及甚至更优选约1 约500U/ml的葡萄糖氧化酶及约0.1 约l,000mM，更优选约0.5 约800mM及甚至更 优选约1 约500mM葡萄糖。当溴或氯包括于本发明的组合物中时，应用在特定应用的溴或氯的使用，选择 及量将取决于各种因素，例如期望治疗效果，过氧化物利用度及其他因素。由于氯作为 卤化物辅因子以足以非限制性的水平存在于多数生理介质中，所以一般不需要外源氯。当需要外源氯时，氯的应用量将优选落入约10 μ mol氯 约150 μ mol氯/ml的溶液至近 似生理条件的范围。本发明的组合物可包括约Inmol溴 约20 μ mol溴/ml的液体组 合物，更优选约IOnmol溴 约10 μ mol溴/ml的液体组合物及最优选约IOOnmol溴 约 1 μ mol溴/ml的液体组合物。卤化物与过氧化物的比例是在形成有效杀微生物环境中重要的考虑因素。因 此，除了如上所述确保微生物攻击位点卤化物及过氧化物的有效水平之外，优选以提 供最佳杀微生物活性的卤化物过氧化物比例实践本发明的方法。例如，当卤化物是 Cr时，在杀微生物活性环境中Cr与过氧化物的比例优选维持在约1 约40,000，更优选 约50 约40,000，及最优选约200 约40,000的范围。当卤化物是Br—时，在杀微生物 活性环境中Br_与过氧化物的比例优选维持在约0.1 约4,000，更优选约0.5 约2,000 及最优选约1 约1,000的范围。本发明的组合物及方法可用来优选以对正常菌群的最小损伤抑制广泛的病原性 微生物生长。如实施例中所述，本发明的组合物高度有效于抑制革兰氏阳性及革兰氏 阴性生物体，例如，粪肠球菌，屎肠球菌，金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，无乳链球 菌，链球菌组C，链球菌组F，链球菌组G，酿脓链球菌，弗氏柠檬酸杆菌，阴沟肠杆 菌，大肠杆菌，肺炎克雷伯菌，奇异变形杆菌，不动杆菌属，铜绿假单胞菌，嗜水气单 胞菌及多杀巴斯德菌。此外，本发明的组合物有用于抑制孢子形成微生物，例如，细菌 (例如芽孢杆菌属及梭菌属)及真菌(例如曲霉属，镰刀菌属，发癣菌属等)。由于它 们广泛的活性，在一些实施方式中，本发明的组合物可有利地用于治疗多微生物感染。 多微生物疾病包括多个感染剂，及被称为复合的，复杂的，混合的，二元的，二级的， 协同的，并行的，多微生物的，或共感染。多微生物疾病包括，例如，脓疮相关感染， AIDS相关的机会性感染，结膜炎，胃肠炎，肝炎，多发性硬化，中耳炎，牙周病，呼吸 道疾病及生殖器感染。此外，由于本发明的组合物通过与常规抗生素治疗完全不同的作 用机制运作，在一些实施方式中，本发明的组合物也高度有用于治疗至少部分由多药物 抗性病原体，例如MRSA (甲氧西林耐受型金黄色葡萄球菌)，VRSA (万古霉素耐受型金 黄色葡萄球菌)，VRE(万古霉素耐受型肠球菌)，青霉素耐受型肠球菌，PRSP(青霉素 耐受型肺炎链球菌)，异烟胼/利福平耐受型结核分枝杆菌及其他大肠杆菌，沙门氏菌， 弯曲杆菌及链球菌的抗生素耐受型株所致的感染。此类细菌在本文中被称为"抗生素耐 受型"或"药物耐受型"或"多药物耐受型"或其他本领域熟知的类似术语。本文中的术语"正常菌群"是指通常以共生水平位于或在健康宿主身体表面的 细菌。正常菌群包括，例如，人受试者口，小肠，或阴道中的乳酸科细菌，例如口中的 链球菌(viridans)及哺乳婴儿小肠，外生殖器，前尿道及阴道中的乳杆菌属(例如Tissier 氏杆菌及Doderlein氏杆菌)。构成宿主正常菌群的微生物为人熟知(例如参见Principles and Practice of Infectious Diseases, supra, New York, pp.3436 and 161)。 已发现本发明的 髓过氧化物酶先于正常菌群选择性结合许多病原性细菌及真菌。体内应用中，宿主优选 用一定量的对消除宿主中正常菌群有效的髓过氧化物酶处理。用于消毒_灭菌的体外应 用中，足够高浓度的髓过氧化物酶可用于确保完全杀所有营养生长及酵母形式。此类条 件下，通过在与宿主组织接触之前消耗H2O2或H2O2产生系统来避免对宿主组织及正常菌 群的损伤。
本发明的组合物一般含一定量的髓过氧化物酶及对在过氧化物及卤化物存在下 杀易感微生物或抑制易感微生物生长有效的至少2种氨基酸。组合物还可含药学可接受 载体。在一些实施方式中，组合物可便利提供于液体载体中。可使用一般用于此目的的 任何液体载体，前体是载体不显著干扰髓过氧化物酶的选择性结合能力或干扰酶活性。 或者，组合物可以固体形式提供，在液体中增溶而活化。如上所述，本发明的组合物可再包含过氧化物或能够产生过氧化物的制剂， 例如氧化酶，如上详述。氧化酶_髓过氧化物酶系统本身构建为二元制剂，其中组合物 活性剂配制为使用时合并的2个分开的部分。例如，二元制剂的一个部分可包含含氧化 酶，髓过氧化物酶及至少2种活性-增强氨基酸(例如甘氨酸，L-丙氨酸及L-脯氨酸) 的溶液。二元制剂的第二部分可含所述氧化酶底物(例如葡萄糖或右旋糖，在葡萄糖氧 化酶的情况下)或分子氧，02。可例如以固体晶片的形式提供底物。对于物品灭菌而 言，例如手术器械或接触镜，底物晶片可沿着待灭菌的物品放置于灭菌室。加入髓过氧 化物酶，活性增强氨基酸及氧化酶，起始灭菌。在一些实施方式中，髓过氧化物酶组合 物还可含醇，以促进氧化酶底物增溶及由氧化酶利用。此系统将产生持续的杀微生物作 用，只要存在充足底物来驱动反应。本发明的组合物可单独施用或与一种或多种其他治疗剂组合施用。可与本发 明的组合物组合使用的代表性的其他治疗剂包括，例如，抗生素或抗菌剂(例如抗细菌 剂，抗真菌剂，抗病毒剂和/或抗寄生虫剂)。在一些实施方式中，其他治疗剂可为 青霉素，头孢菌素，碳头孢烯，头霉素，碳青霉烯，单酰胺菌素，氨基糖苷，糖肽，喹 诺酮，四环素，大环内酯，和/或氟喹诺酮中的一种或多种。在一些实施方式中，其他 治疗剂可为碘，银，铜，氯己定，聚己缩胍，双胍，壳多糖，和/或乙酸。本发明的 一种或多种其他治疗剂可合并为所述组合物的一部分或可与所述组合物分开施用。作为体内应用，抗菌剂组合物可以任何有效药学可接受形式施用于温血动物， 包括人及动物受试者，例如以局部，灌洗，口服，阴道，或栓剂剂型，作为局部，含 服，鼻腔喷雾，吸入用气雾剂，或以对将有活性的髓过氧化物酶递送到微生物感染位点 有效的任何其他方式。施用途径将优选设计为获得抗菌剂组合物与感染性微生物的直接 接触。本发明的一方面，本发明的组合物被局部递送或施用到人或动物受试者易感于感 染的区域，例如，到牙龈，目艮，耳，皮肤，创伤，阴道区，腹股沟区，褥疮，烧伤区， 医疗包扎下的区域，尿布，或其他可能被弄湿的覆盖物等。对于局部应用，药学可接受载体可取液体，乳膏，泡沫，洗剂，软膏，悬浮 剂，栓剂，或凝胶的形式及还可含通常用于局部施用药物组合物的水性或有机溶剂，缓 冲剂，乳化剂，胶凝剂，润湿剂，稳定剂，表面活性剂，润湿剂，防腐剂，缓释剂及少 量的保湿剂，螯合剂，染剂，香料及其他成分。此外，本发明的组合物可浸透应用到受 试者的包扎或覆盖物。本发明的另一实施方式中，本发明的组合物可特别设计用于体外应用，例如医 疗装置，接触镜等的消毒或灭菌，尤其在装置或透镜待用于与患者或穿戴者接触时。对 于此类型的应用，组合物可便利提供为液体，乳膏，泡沫，洗剂，或凝胶形式及可与乳 化剂，表面活性剂，缓冲剂，润湿剂，防腐剂及通常见于此类型的组合物的其他成分提 供。本发明的组合物可浸透入吸收材料，例如缝线，绷带及纱布，或包被到固相材料表面，例如肘钉，拉链及导管，以将组合物递送到预防微生物感染的位点。其他此类型的 递送系统将为本领域技术人员所熟知。如上详述，可根据需要包括其他成分，例如用于过氧化物产生的氧化酶，氧化 酶底物及卤化物。此外，成分可配制成单剂，或可分成用于使用期间后期混合的二元制 剂，如特定应用所期望。对于单剂，优选将可用在应用位点的一种需要的系统成分，例 如卤化物，氧化酶，氧化酶用假体组，氧化酶的还原底物，或分子氧排出制剂，以排除 未完结的反应及系统成分的耗尽。作为阐释例，适于用作抗微生物(或抗感染)溶液的组合物可含约1 50,000 μ g/ml(即约 0.375 约 18,750GU/ml)髓过氧化物酶，0.1 500 μ mol/mL(即 0.1 500mM)甘氨酸，0.1 500 μ mol/mL (即 0.1 500mM) L-脯氨酸，O IOOymol/ mL( BP O ~ IOOmM)L-丙氨酸，0.01 500单位/ml的葡萄糖氧化酶及10 150 μ mol/ ml的氯。上述组合物与1 500 μ mol/mL ( S卩1 500mM)葡萄糖或右旋糖组合，及用 作液体消毒剂或灭菌溶液。可结合下列代表例更好地了解上述发明，这些代表例仅旨在说明，不旨在限 制。
实施例实施例1 在血存在下L-赖氨酸对髓过氧化物酶系统对抗金黄饩葡萄球菌的抗 微牛物活件的影响L-赖氨酸对髓过氧化物酶系统对抗金黄色葡萄球菌的活性的影响显示如下。材料通过摇瓶法制备细菌(特别在此实施例中是金黄色葡萄球菌)悬浮液以达到晚期 对数至早期平台期生长。细菌于35°C在胰蛋白大豆肉汤(TSB)中生长24小时。培养物 以4,OOOrpm离心10分钟及除去上清。收集沉淀及用无菌的0.9%生理盐水(NS)洗涤2 次。悬浮洗涤的微生物及用生理盐水稀释至3个马克法兰氏标准，即约IO9个菌落形成单 位(CFU) /mL。通过平铺于TSA的连续稀释液(ΙΟ—1 10_5或10_6)证实实际菌落计数， 及于35°C温育过夜。为获得IO7CFUAnL的近似最终工作靶接种物，使用15 μ 1的生物体 /ml的最终反应混合物。黑曲霉的葡萄糖氧化酶(GO)购自Biozyme，Inc., United Kingdom, Catalog#G03A，270U/mg)。猪髓过氧化物酶(p_MPO) (Exoxemis，Inc., Little Rock, Arkansas, U.S.A., 375U/mg)。制备D-葡萄糖及氯化钠的无菌的储存溶液及以各150mM 的最终浓度使用。L-赖氨酸盐酸盐(Spectrum Chemical Catalog#Ll 142)制备为IOOmM储 存溶液。过氧化氢酶(Sigma，Catalog#C-40)在无菌的0.9%生理盐水中制备为储存 溶液。通过静脉穿刺收集血及在同一天内用作全血。方法使用无菌技术，由pH6.5的20mM磷酸盐缓冲液(含0.02%Tween_80，150mEq/ L氯及0，1.25，5，或20 μ mol/mL的L-赖氨酸)制备表1中所示浓度的p-MPO及葡萄 糖氧化酶溶液。使用金黄色葡萄球菌给出2 3X107CFU(7.41og 10)/mL的最终靶浓度， 及使用静脉全血给出3%的最终浓度。将葡萄糖加入反应混合物至150mM的最终浓度，起始杀微生物反应。反应混合物的最终体积是lmL。如果需要，使反应于室温或于37°C 在于浴中进行30分钟 2小时。在特定时间点，将反应混合物用100 μ 1过氧化氢酶溶 液(含最小100单位/ μ L)处理，以消耗剩下的过氧化物及终结氧化杀。各管内容物进 行无菌盐水的连续稀释液平板计数，及在定量培养用胰蛋白酶大豆琼脂(TSA)中温育。 然后将平板于37°C温育及在24小时时计数。温育后，菌落形成单位(CFU)计为相比接 种物对照的生物体活力量度及结果。结果示于表1，作为2次重复的平均值。表1.在血存在下L-赖氨酸对髓过氧化物酶系统对抗金黄色葡萄球菌的杀微生物
活性的影响
权利要求
1.用于抑制易感微生物生长的组合物，其含 髓过氧化物酶、及 通过联合作用增强所述髓过氧化物酶的杀微生物活性的至少2种氨基酸。
2.权利要求1的组合物，其中所述至少2种氨基酸选自甘氨酸、L-丙氨酸、D-丙 氨酸、L-丙氨酸酐、L-谷氨酰胺、L-谷氨酸、甘氨酸酐、马尿酸、L-组氨酸、L-亮 氨酸、D-亮氨酸、L-异亮氨酸、D-异亮氨酸、L-赖氨酸、L-鸟氨酸、D-苯丙氨酸、 L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-羟脯氨酸、L-丝氨酸、牛磺酸、L-苏氨酸、D-苏氨酸、 L-酪氨酸、L-缬氨酸、D-缬氨酸、如β丙氨酸、L-β-高亮氨酸、D-β-高亮氨酸 的β氨基酸、3-氨基丁酸，L-2，3-二氨基丙酸单盐酸盐、D-2，3-二氨基丙酸单盐酸 盐、L-3-氨基异丁酸、D-3-氨基异丁酸、3-氨基丁酸乙酯、肌氨酸甲酯盐酸盐及哌啶 酸，或者它们的烷基酯或药学可接受盐。
3.权利要求2的组合物，其中所述至少2种氨基酸选自甘氨酸、L-丙氨酸、D-丙 氨酸、L-丙氨酸酐、L-谷氨酰胺、L-谷氨酸、甘氨酸酐、马尿酸、L-组氨酸、L-亮 氨酸、D-亮氨酸、L-异亮氨酸、D-异亮氨酸、L-赖氨酸、L-鸟氨酸、D-苯丙氨酸、 L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-羟脯氨酸、L-丝氨酸、牛磺酸、L-苏氨酸、D-苏氨酸、 L-酪氨酸、L-缬氨酸及D-缬氨酸，或者它们的烷基酯或药学可接受盐。
4.权利要求1的组合物，其含至少3种氨基酸，所述至少3种氨基酸选自甘氨酸、 L-丙氨酸、D-丙氨酸、L-丙氨酸酐、L-谷氨酰胺、L-谷氨酸、甘氨酸酐、马尿酸、 L-组氨酸、L-亮氨酸、D-亮氨酸、L-异亮氨酸、D-异亮氨酸、L-赖氨酸、L-鸟氨 酸、D-苯丙氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-羟脯氨酸、L-丝氨酸、牛磺酸、L-苏 氨酸、D-苏氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸、D-缬氨酸、如β丙氨酸、L-β-高亮氨酸、 D-β-高亮氨酸的β氨基酸、3-氨基丁酸、L-2，3-二氨基丙酸单盐酸盐、D-2，3-二 氨基丙酸单盐酸盐、L-3-氨基异丁酸、D-3-氨基异丁酸、3-氨基丁酸乙酯、肌氨酸甲 酯盐酸盐及哌啶酸，或者它们的烷基酯或药学可接受盐。
5.权利要求4的组合物，其中所述至少3种氨基酸选自甘氨酸、L-丙氨酸、D-丙 氨酸、L-丙氨酸酐、L-谷氨酰胺、L-谷氨酸、甘氨酸酐、马尿酸、L-组氨酸、L-亮 氨酸、D-亮氨酸、L-异亮氨酸、D-异亮氨酸、L-赖氨酸、L-鸟氨酸、D-苯丙氨酸、 L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-羟脯氨酸、L-丝氨酸、牛磺酸、L-苏氨酸、D-苏氨酸、 L-酪氨酸、L-缬氨酸及D-缬氨酸，或者它们的烷基酯或药学可接受盐。
6.权利要求1的组合物，其还含过氧化氢或过氧化氢源。
7.权利要求6的组合物，其中所述过氧化氢源是在氧化酶底物存在下产生过氧化氢的 产生过氧化物的氧化酶。
8.权利要求7的组合物，其含对在所述氧化酶底物存在下产生IOOpmol 50μ mol过 氧化物/ml/分钟有效的产生过氧化物的氧化酶。
9.权利要求1的组合物，其含1 50,000μ g/ml的髓过氧化物酶。
10.权利要求1的组合物，其含0.1 约500mM的各所述至少2种氨基酸。
11.组合物，其含10 5,000μ g/ml的髓过氧化物酶，0.3 50mM的甘氨酸，0.3 50mM的L-丙氨酸，0.3 50mM的L-脯氨酸及1 500U/ml的葡萄糖氧化酶。
12.治疗需要所述治疗的人或动物受试者的方法，包括将组合物施用于所述受试者感染位点，所述组合物含 髓过氧化物酶、及 在过氧化氢及氯或溴存在下通过联合作用来增强所述髓过氧化物酶的杀微生物活 性的至少2种氨基酸。
13.权利要求12的方法，其中所述至少2种氨基酸选自甘氨酸、L-丙氨酸、D-丙 氨酸、L-丙氨酸酐、L-谷氨酰胺、L-谷氨酸、甘氨酸酐、马尿酸、L-组氨酸、L-亮 氨酸、D-亮氨酸、L-异亮氨酸、D-异亮氨酸、L-赖氨酸、L-鸟氨酸、D-苯丙氨酸、 L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-羟脯氨酸、L-丝氨酸、牛磺酸、L-苏氨酸、D-苏氨酸、 L-酪氨酸、L-缬氨酸、D-缬氨酸、如β丙氨酸、L-β-高亮氨酸、D-β-高亮氨酸 的β氨基酸、3-氨基丁酸、L-2，3-二氨基丙酸单盐酸盐、D-2，3-二氨基丙酸单盐酸 盐、L-3-氨基异丁酸、D-3-氨基异丁酸、3-氨基丁酸乙酯、肌氨酸甲酯盐酸盐及哌啶 酸，或者它们的烷基酯或药学可接受盐。
14.权利要求13的方法，其中所述至少2种氨基酸选自甘氨酸、L-丙氨酸、D-丙 氨酸、L-丙氨酸酐、L-谷氨酰胺、L-谷氨酸、甘氨酸酐、马尿酸、L-组氨酸、L-亮 氨酸、D-亮氨酸、L-异亮氨酸、D-异亮氨酸、L-赖氨酸、L-鸟氨酸、D-苯丙氨酸、 L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-羟脯氨酸、L-丝氨酸、牛磺酸、L-苏氨酸、D-苏氨酸、 L-酪氨酸、L-缬氨酸及D-缬氨酸，或者它们的烷基酯或药学可接受盐。
15.权利要求12的方法，其中所述组合物含至少3种氨基酸，所述至少3种氨基酸选 自甘氨酸、L-丙氨酸、D-丙氨酸、L-丙氨酸酐、L-谷氨酰胺、L-谷氨酸、甘氨酸 酐、马尿酸、L-组氨酸、L-亮氨酸、D-亮氨酸、L-异亮氨酸、D-异亮氨酸、L-赖 氨酸、L-鸟氨酸、D-苯丙氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-羟脯氨酸、L-丝氨酸、 牛磺酸、L-苏氨酸、D-苏氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸、D-缬氨酸、如β丙氨酸、 L-β-高亮氨酸、D-β-高亮氨酸的β氨基酸、3-氨基丁酸、L-2，3-二氨基丙酸单盐 酸盐、D-2，3-二氨基丙酸单盐酸盐、L-3-氨基异丁酸、D-3-氨基异丁酸、3-氨基丁 酸乙酯、肌氨酸甲酯盐酸盐及哌啶酸、或者它们的烷基酯或药学可接受盐。
16.权利要求15的方法，其中所述至少3种氨基酸选自甘氨酸、L-丙氨酸、D-丙 氨酸、L-丙氨酸酐、L-谷氨酰胺、L-谷氨酸、甘氨酸酐、马尿酸、L-组氨酸、L-亮 氨酸、D-亮氨酸、L-异亮氨酸、D-异亮氨酸、L-赖氨酸、L-鸟氨酸、D-苯丙氨酸、 L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-羟脯氨酸、L-丝氨酸、牛磺酸、L-苏氨酸、D-苏氨酸、 L-酪氨酸、L-缬氨酸及D-缬氨酸，或者它们的烷基酯或药学可接受盐。
17.权利要求12的方法，其中所述组合物还含过氧化氢或过氧化氢源。
18.权利要求17的方法，其中所述过氧化氢源含在氧化酶底物存在下产生过氧化氢的 产生过氧化物的氧化酶。
19.权利要求18的方法，其中所述组合物含对在所述氧化酶底物存在下产生 IOOpmol 50 μ mol过氧化物/ml/分钟有效的产生过氧化物的氧化酶。
20.权利要求12的方法，其中所述组合物含1 50,000μ g/ml的髓过氧化物酶。
21.权利要求12的方法，其中所述组合物含0.1 约500mM的各所述至少2种氨基酸。
22.权利要求12的方法，其中所述组合物含10 5,000μ g/ml的髓过氧化物酶，.0.3 50mM的甘氨酸，0.3 50mM的L-丙氨酸，0.350mM的L-脯氨酸及1 500U/ml的葡萄糖氧化酶。
23.权利要求12的方法，其中所述人或动物受试者患牙龈、眼、耳、皮肤、软组织、 创伤、阴道区、腹股沟区、褥疮或烧伤区的微生物感染。
24.权利要求23的方法，其中所述感染是多微生物感染。
25.杀或抑制易感微生物生长的方法，包括在过氧化氢及氯或溴存在下使所述微生 物与组合物接触，所述组合物含 髓过氧化物酶、及 通过联合作用增强所述髓过氧化物酶的杀微生物活性的至少2种氨基酸。
26.含髓过氧化物酶及至少2种氨基酸的组合物用于制备治疗人或动物受试者感染的 药物的用途，其中所述氨基酸在过氧化氢及氯或溴存在下通过联合作用来增强所述髓过 氧化物酶的杀微生物活性。
27.权利要求26的用途，其中所述至少2种氨基酸选自甘氨酸、L-丙氨酸、D-丙 氨酸、L-丙氨酸酐、L-谷氨酰胺、L-谷氨酸、甘氨酸酐、马尿酸、L-组氨酸、L-亮 氨酸、D-亮氨酸、L-异亮氨酸、D-异亮氨酸、L-赖氨酸、L-鸟氨酸、D-苯丙氨酸、 L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-羟脯氨酸、L-丝氨酸、牛磺酸、L-苏氨酸、D-苏氨酸、 L-酪氨酸、L-缬氨酸、D-缬氨酸、如β丙氨酸、L-β-高亮氨酸、D-β-高亮氨酸 的β氨基酸、3-氨基丁酸、L-2，3-二氨基丙酸单盐酸盐、D-2，3-二氨基丙酸单盐酸 盐、L-3-氨基异丁酸、D-3-氨基异丁酸、3-氨基丁酸乙酯、肌氨酸甲酯盐酸盐及哌啶 酸，或者它们的烷基酯或药学可接受盐。
28.权利要求26或27的用途，其中所述至少2种氨基酸选自甘氨酸、L-丙氨酸、 D-丙氨酸、L-丙氨酸酐、L-谷氨酰胺、L-谷氨酸、甘氨酸酐、马尿酸、L-组氨酸、 L-亮氨酸、D-亮氨酸、L-异亮氨酸、D-异亮氨酸、L-赖氨酸、L-鸟氨酸、D-苯丙 氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-羟脯氨酸、L-丝氨酸、牛磺酸、L-苏氨酸、D-苏 氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸及D-缬氨酸，或者它们的烷基酯或药学可接受盐。
29.权利要求26的用途，其中所述组合物含至少3种氨基酸，所述至少3种氨基酸选 自甘氨酸、L-丙氨酸、D-丙氨酸、L-丙氨酸酐、L-谷氨酰胺、L-谷氨酸、甘氨酸 酐、马尿酸、L-组氨酸、L-亮氨酸、D-亮氨酸、L-异亮氨酸、D-异亮氨酸、L-赖 氨酸、L-鸟氨酸、D-苯丙氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-羟脯氨酸、L-丝氨酸、 牛磺酸、L-苏氨酸、D-苏氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸、D-缬氨酸、如β丙氨酸、 L-β-高亮氨酸、D-β-高亮氨酸的β氨基酸、3-氨基丁酸、L-2，3-二氨基丙酸单盐 酸盐、D-2，3-二氨基丙酸单盐酸盐、L-3-氨基异丁酸、D-3-氨基异丁酸、3-氨基丁 酸乙酯、肌氨酸甲酯盐酸盐及哌啶酸，或者它们的烷基酯或药学可接受盐。
30.权利要求29的用途，其中所述至少3种氨基酸选自甘氨酸、L-丙氨酸、D-丙 氨酸、L-丙氨酸酐、L-谷氨酰胺、L-谷氨酸、甘氨酸酐、马尿酸、L-组氨酸、L-亮 氨酸、D-亮氨酸、L-异亮氨酸、D-异亮氨酸、L-赖氨酸、L-鸟氨酸、D-苯丙氨酸、 L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-羟脯氨酸、L-丝氨酸、牛磺酸、L-苏氨酸、D-苏氨酸、 L-酪氨酸、L-缬氨酸及D-缬氨酸，或者它们的烷基酯或药学可接受盐。
31.权利要求26的用途，其中所述组合物还含过氧化氢或过氧化氢源。
32.权利要求31的用途，其中所述过氧化氢源含在氧化酶底物存在下产生过氧化氢的 产生过氧化物的氧化酶。
33.权利要求32的用途，其中所述组合物含产生过氧化物的氧化酶，所述产生过氧 化物的氧化酶对在所述氧化酶底物存在下产生IOOpmol 50 μ mol过氧化物/ml/分钟有效。
34.权利要求26的方法，其中所述组合物含1 50,000μ g/ml的髓过氧化物酶。
35.权利要求26的方法，其中所述组合物含0.1 约500mM的各所述至少2种氨基酸。
36.权利要求26的用途，其中所述组合物含10 5,000μ g/ml的髓过氧化物酶， 0.3 50mM的甘氨酸，0.3 50mM的L-丙氨酸，0.3 50mM的L-脯氨酸及1 500U/ml的葡萄糖氧化酶。
37.权利要求26的用途，其中所述人或动物受试者患牙龈、眼、耳、皮肤、软组织、 创伤、阴道区、腹股沟区、褥疮或烧伤区的微生物感染。
38.权利要求37的用途，其中所述感染是多微生物感染。
39.含髓过氧化物酶及至少2种氨基酸的组合物用于制备杀或抑制易感微生物生长的 药物的用途，其中所述氨基酸通过联合作用增强所述髓过氧化物酶的杀微生物活性。
全文摘要
提供了通过在过氧化物及氯或溴存在下使所述微生物与髓过氧化物酶及至少2种活性增强剂氨基酸接触来抑制易感微生物生长的方法及组合物。
文档编号A61K38/44GK102014950SQ200980114532
公开日2011年4月13日 申请日期2009年5月7日 优先权日2008年5月9日
发明者O·阿布里尔-霍佩尔, S·沃尔瓦尼, S·贝克雷尔, W·哈吉 申请人:埃欧艾米斯公司