专利名称：抗-a和抗-b抗体经耗竭的免疫球蛋白g(igg)浓缩物在用于治疗由母体-胎儿关于abo系统 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及抗-A(AcaA)和抗-B(AcaB)抗体经耗竭的免疫球蛋白G(IgG)浓缩物在制备用于治疗由母体-胎儿关于ABO系统的不相容性所引起的新生儿黄疸的药物中的用途。在下面的描述中，括号内([])的参考文献是指在实施例之后给出的参考文献列表。
现有技术新生儿溶血性疾病(NHD)是由于母亲的抗红细胞抗体与孩子的红细胞之间的不相容性所致的胎儿或者新生儿病症。抗红细胞抗体引起在子宫内已经发生的溶血，以及根据临床表现(clinical picture)的严重性(gravity)引起孩子的偶发性严重贫血。胆红素是在血液中转运的血红素(构成血红蛋白)的降解产物，所述表现范围可以从儿童的高胆红素血症伴有黄疸到非常严重的全身性水肿病状(胎儿水肿)以及分娩出死胎儿童。未经治疗的高胆红素血症可引起新生儿核黄疸。关于所述临床表现及其诊断探索的知识极其重要，所有目前的有效手段更是如此，其可用于防止NHD (抗-D预防或者1 因子)以及有效的治疗、子宫内/出生后交换输血法(exsanguino-transfusion)、UV 新生儿疗法。然而，所有这些方式仅在及时意识到风险时才可能实施，也就是说在怀孕之前 (特别是通过确定母亲的血型以及可能地确定父亲的血型)，在怀孕开始时(可确认血型及查找同种抗体，包括抗-A/抗B免疫抗体)，或者在怀孕期间(每3-4周检查效价的变化)。 此外，确定孩子父亲的血型可以是非常有用的(具有指标的表型用于得到可能的Mi基因型的结论)，因为这就可以由此推出孩子的可能血型。NHD的真实风险可以根据母亲的血型或者同种抗体的低效价以及推断出的孩子的血型(从父亲的血型来确定)来进行估计。如果母亲构成了有风险血型的一部分(例如0 型或者1 D阴性)，无论如何不应放弃对效价变化的检查。在罕见的情况中，当存在成群的类似风险时，可以指示从绒毛膜活组织检查中进行孩子血型的生物分子学测定。ABO不相容性通常在母亲是0型血而孩子是A或B型血的情况中发生。存在于自然状态的IgM同种型的抗ABO抗体不穿过胎盘屏障。尽管ABO系统在出生时还未完全发育和表现-在孩子6个月之前不应进行血型的明确确定-在怀孕早期可以在胎儿的红细胞上检测出A型或B型。这就是为什么即使在此群体中母亲的免疫也相对频繁。此外，抗-A和抗-B IgG免疫抗体可以由异种蛋白诱导，而不依赖于怀孕或者此前的输血。然而，在Mi不相容的情况中，抗-A或者抗-B IgG抗体与相似抗体相比几乎总是具有较低的溶血能力。因此，NHD的改变更审慎(discreet)。
黄疸在70%病例中在出生后对-72小时之间出现。其在所有病例中通过目测或者仪器检测到，经常在脐带血的结果显现之前，证明了光疗法的成功开始。只要未形成黄疸的诊断，早期获知血型结果并不导致治疗性、预防性或者治愈性的措施。其最多可引起对新生儿颜色的警觉增加。黄疸是迄今为止在新生儿期间观测到的最常见的症状。第一个特征是，与成人中不同，新生儿中的黄疸在绝大多数的病例中具有间接的胆红素(BR)。通过在生物体中累积，这种色素将涉及所有器官，但特别是肝脏(其首要的负责这种累积)、血液(其部分地运输和贮存该色素)、皮肤和脑中，具有持续的胆红素脑病的潜在风险，这证明了进行诊断和治疗时最大严密性(rigour)的合理性。传统上，通过静脉内免疫球蛋白(IVIG)和光疗法的手段来治疗儿童，在最严重的情况中通过交换输血治疗。研究已经涉及通过高剂量IVIG (静脉内免疫球蛋白)的手段治疗受ABO和/或 Mi不相容性溶血性疾病折磨的新生婴儿，并显示出施用IVIG降低了需要交换输血的儿童的数目，以及减少了通过光疗法治疗的持续时间(Gottstein et al. (2003), Archives of Disease in Childhood；Fetal and Neonatal Edition ;vol. 88, no. 1,p.F6_F10[2])。还显示出通过强剂量IVIG的手段对患有ABO和/或Rh不相容性溶血性疾病的新生婴儿进行的治疗降低溶血、降低血清中胆红素水平以及减少对交换输血疗法的需求 (Alplay et al (1999), Acta Paediatrica, International Journal of Paediatrics ； vol. 88，no. 2，p. 216_219[3])。然而，研究表明，向1 和ABO不相容性所引起的同种免疫性溶血性黄疸新生婴儿施用IVIG，会导致与ABO同种免疫作用的治疗相比，Mi同种免疫作用的治疗结果明显更好。 这是因为与通过光疗法治疗相比，在通过施用IVIG治疗结束时，由于Mi不相容性而患有高胆红素血症的新生婴儿对交换输血的需求降低。另一方面，在具有ABO不相容性的新生婴儿病例中，光疗法和施用IVIG在结果方面未显示出差异(Nasseri et al. (2006) Saudi Med J. ；27(12) :1827-30[4]) ο此外，必须考虑到施用高剂量的IVIG在一些具有ABO不相容性的患者中是具有风险的治疗。这是因为IVIG是源自人血浆的免疫球蛋白的浓缩物，并且在这一点上会包括抗-A抗体和抗-B抗体。许多科技出版物表明，注射通过常规分级分离技术如用乙醇沉淀或者通过辛酸沉淀(Steinbuch et al. (1969)Rev. Franc. Et. Clin, et Biol.，XIV，1054[5])获得的免疫球蛋白G(IgG)，在接受治疗的患者中可导致意外的溶血，包括一些严重溶血。例如可举证的有 Buchta C. et al,Biologicals. 33,2005,41-48([6])>ffilson J. R. et al,Muscle & Nerve, 29(9)，1997，1142-1145([7])、Copelan E. A. et al, Transfusion,26,1986,410-412 ([8]) 和 Misbah S. A. et al, Drug Safety, 9,1993, 254-262 ([9])等出版物。这些 IgG 对患有溶血患者血液的作用的研究，特别是通过直接Coombs测试(DCT)实施的研究，显示出红细胞被针对其表面上存在的A、B或D抗原的免疫球蛋白所覆盖，由此而导致其溶血。这就是为什么目前可商购获得的IgG得自经选择的血浆的原因，以避免高效价抗-A或者抗-B的存在。
根据欧洲药典(方法2. 6. 20，也称作间接Coombs测试(ICT)，1997)，在体外间接 Coombs测试(ICT)中，使用初始浓度调节至30g/l的以1/64稀释的IgG溶液，IVIG必须不会展示出A或者B红细胞凝集。换句话说，根据欧洲药典的方法2. 6. 20，欧洲药典允许的最大效价必须低于64 (稀释度的倒数(结果作为完整的数字给出-稀释分数的分母部分)，也就是说稀释至1/64的IVIG组合物必须不会引起红细胞凝集。ICT测试的阴性结果，也就是在根据欧洲药典稀释度低于1/64的IVIG溶液存在时没有红细胞凝集，证明了其所接受的抗-A和抗-B抗体的低水平。然而，即使IgG的浓度产生欧洲药典所规定的测试阴性结果，也就是其稀释度低于1/64的那些浓度，仍不能排除溶血反应的风险_。此外，美国和日本药典不包括需要控制残余抗-A和抗-B抗体含量的任何规定。抗-A和抗-B抗体在IgG浓缩物制备期间通过常规方法部分消除，例如乙醇分级分离方法，但是观测到残余含量可能高于欧洲药典的高标准限值。此外，根据本申请人开发并在其专利申请WO 02/092632中的描述的方法制备的浓缩物，含有多于通过乙醇分级分离获得的那些含量。一些批次的IgG浓缩物可具有高于欧洲药典对每种所认可的阈值的含量。因此，有必要具有这样的疗法，用于治疗由母体-胎儿关于ABO系统不相容性所引起的新生儿黄疸，其可施用于患有ABO不相容性的新生婴儿，而不用担心会引起溶血。发明描述为了此目的，且在深入研究期间，本发明人令人惊奇地显示出，根据在体外的间接 Coombs测试阴性结果具有抗-A和抗-B抗体相应(respective)效价的免疫球蛋白G组合物，可用于治疗由母体-胎儿关于ABO系统不相容性所引起的新生儿黄疸或者由ABO不相容性引起的新生儿溶血性疾病，而不引起现有技术的组合物中所发现的不期望的副作用。因此，本发明涉及用于治疗用途的免疫球蛋白G(IgG)组合物，包含根据间接 Coombs测试(欧洲药典的方法2. 6. 20)阴性结果的相应效价的抗A和抗B抗体，其作为药物用以治疗由母体-胎儿关于ABO系统不相容性所引起的新生儿黄疸或者由ABO不相容性所引起的新生儿溶血性疾病。“免疫球蛋白G”在本发明中是指多克隆IgG，其可以得自已富集了 IgG的血浆或者血浆级分。用于治疗性用途的IgG的组合物或者浓缩物有利地具有通常使用的IgG浓度， 优选在50g/l至100g/l之间。“治疗性用途”在本发明中是指目的在于改善患者的健康状态的用途，例如降低黄疸的毒力，或者使黄疸完全或者部分消失，或者甚至治愈患者。“抗A和抗B抗体的相应效价”在本发明中是指欧洲药典(欧洲药典2.6.20)所定义的并且通过间接Coombs测试(ICT测试)测量的效价。换句话说，该效价是这样的稀释度，从其中根据欧洲药典的方法2. 6. 20检测到凝血(agglutination)。再换句话说，所述效价是从中观测到溶血Oiaemolysis)的稀释度。所述ICT测试(欧洲药典的方法2. 6. 20)包括与本发明的IgG组合物接触将的红细胞悬浮液，针对人IgG单位的抗体(抗球蛋白)溶液。这些抗体被固定在附着于红细胞上的抗-A或者抗-B抗体上，由此通过IgG之间形成桥(bridges)而使其凝集。通过这种常规血液血清学测试(间接Coomb测试)直接进行包括查找抗-A或者抗-B抗体的测试。
在本发明的背景中，欧洲药典的方法2. 6. 20可以如下方式使用在9g/l氯化钠溶液R中制备2个等同的本发明IgG组合物的系列稀释液。向第一系列的每个稀释液中加入预先用氯化钠溶液洗涤3次的等体积的5% V/V红细胞A悬浮液。向第二系列的每个溶液中加入预先用氯化钠溶液洗涤3次的等体积的5% V/V红细胞B悬浮液。将该悬浮液在 37°C温育30分钟，然后用氯化钠溶液洗涤细胞。使每个悬浮液与多功能人抗球蛋白试剂接触30分钟。不用离心该混合物，通过显微镜检查来寻找任何凝集。如果在稀释前的所述 IgG组合物具有高于30g/l的免疫球蛋白含量，必须进行稀释达到30g/l的这个浓度，以制备用于此测试中的稀释液。稀释至1/64不出现任何凝集迹象。当IgG浓缩物中抗-A和抗-B的水平非常低时，ICT测试是阴性的，在欧洲药典条件下更是如此，考虑到红细胞凝集反应不再发生，即使加入人抗-IgG抗体，因为抗-A和抗-B抗体的密度太低以至于不能通过固定于红细胞的抗-A和抗-B抗体键在红细胞和人抗IgG抗体之间建立桥。欧洲药典测试方法2. 6. 20或者ICT测试是在监管水平认可的唯一测试法，在欧洲上市的所有IVIG必须符合这个测试，也即是说在1/64稀释度不存在凝集。该药典允许的最大效价必须(稀释度的倒数(结果作为完整数字给出-稀释分数的分母部分))低于 64 ( < 64)。也就是说，根据欧洲药典的方法2. 6. 20中的描述，在1/64稀释度，被测产物不引起凝集。“间接Coombs测试的阴性结果”在本发明中是指，当将红细胞在多功能人抗球蛋白的存在下与本发明的IgG组合物接触时，根据欧洲药典的方法2. 6. 20测量不存在红细胞凝集。本发明的免疫球蛋白G组合物因此可以有利地根据体外间接Coombs测试的阴性结果，具有64的相应抗-A和抗-B抗体效价，即稀释度的倒数(结果作为完整的数字给出 (稀释分数的分母部分)，也即是说对于稀释度1/64是阴性的。本发明的免疫球蛋白G组合物有利地具有在O (不包括O是有利的)至8之间的效价(稀释度的倒数(结果作为完整数字给出(稀释分数的分母部分)。在这些抗-A和抗-B抗体效价，本发明的IgG组合物具有依照ICT的结果，也即是说不存在凝集。也就是说，在0(未稀释，不包括O是有利的)至1/8之间的稀释度，根据欧洲药典的方法2. 6. 20 中描述，本发明的IgG组合物不引起凝集。因此，8的效价是指在超过样品8倍稀释度(稀释至1/8)观测到凝集。O的效价表示即使当样品未稀释时也检测不到凝集。有利地，以完整数字给出(稀释分数的分母部分)的抗-A抗体和抗-B抗体效价低于4，或者低于2。这种IgG组合物当各自稀释4倍(稀释至1/4)或者2倍(稀释至1/2) 时不引起凝集。因此，用于实现本发明的IgG组合物(或者浓缩物)具有略低于在标准IgG浓缩物中观测到的抗-A和抗-B效价，也就是通过乙醇分级分离和/或通过使用关联了层析而没有消除所述抗体的附加步骤的纯化技术所获得的那些。此外，所述效价略低于欧洲药典所接受的阈值，其非常显著地限制了接受治疗的一些接受者中的溶血风险。用本发明的IgG组合物来实施间接Coombs测试，可以导致阴性结果，即使用的是原样的IgG样品未经稀释也是如此。本发明的IgG浓缩物因而由明显不存在抗-A和抗-B抗体有效成分所限定，所述抗体有效成分针对红细胞上存在的表位。本申请人已经发现所述的IgG组合物特别适于治疗由母体-胎儿关于ABO系统的不相容性所引起的新生儿黄疸。有利地，本发明的免疫球蛋白G组合物因此可有利地具有等于64的相应抗-A和抗-B抗体效价，即稀释度的倒数(结果作为完整数字给出(稀释分数的分母部分)，或者在 0-8之间，或者低于4，例如低于2。有利地，在这些情况中，使用初始浓度调节为30g/l的 IgG溶液实施Coombs测试。“由母体-胎儿关于ABO系统不相容性所引起的新生儿黄疸^E本发明中是指由于关于ABO系统不相容性所引起的黄疸伴随新生儿溶血性疾病(NHD)(也称作ABO溶血性疾病，ABO不相容性新生儿溶血性疾病或者由于ABO不相容性所致的同种免疫溶血性黄疸)。 这种黄疸是由于胆红素在一些器官中累积所致，所述胆红素是在血液中运输的血红素的降解产物。更特别地，可以施用所述IgG组合物的患者可以是早产的新生婴儿，或者足月产新生婴儿，例如从出生直至产后第观天。这些婴儿通常由于ABO溶血性疾病而呈现出高胆红素血症，对于抗球蛋白新生儿测试(间接Coombs测试)是阳性并且具有高网织红细胞计数(高于或等于10% )。这些婴儿可以是男孩或者女孩。本发明的组合物因此也可用作药物用以治疗由ABO不相容性引起的新生儿溶血性疾病。如上文定义的IgG组合物、IgG浓缩物可具有非常低的多反应性(polyr6actiVe) IgG含量，其可以例如是在0.01% -0. 之间，特别是在0.7% -0. 之间。在这种背景下，多反应性IgG含量表示为摩尔百分比或者重量百分比。这个含量通过申请人在专利申请EP 1 059 088中描述的方法确定。例如，本发明的免疫球蛋白G组合物可以有利地具有64的相应抗-A和抗-B抗体效价，即稀释度的倒数(结果作为完整数字给出(稀释分数的分母部分)，或者在0-8之间， 或者低于4，例如低于2，使用初始浓度调节为30g/l的IgG溶液进行Coombs测试，多反应性IgG含量可以例如是在0.01% -0. 之间，特别是在0.7% -0. 之间。“多反应性IgG”在本发明中是指上述IgG组合物中包含的IgG级分，相应于如下抗体的总和非得自有意的免疫并对于自身抗原表现出可变亲和性的天然抗体、抗独特型抗体(也就是针对其它抗体的可变区)、以及在上述IgG组合物的纯化方法的不同步骤期间所接受的治疗之后变成多反应性的抗体。有利地，本发明中使用的IgG组合物通过其几乎完全不存在多反应性而与可商购的其它IgG组合物不同。然而，本申请人完全出乎意料地发现，在上述IgG组合物中几乎完全不存在多反应性，结合这些组合物中非常低的抗-A和抗-B抗体水平，这是治疗由母体-胎儿关于ABO系统不相容性所引起的新生儿黄疸或者由 ABO不相容性所引起的新生儿溶血性疾病的一个重要特征。因此，本发明中使用的IgG组合物作为治疗由母体-胎儿关于ABO系统不相容性所引起的新生儿黄疸或者由ABO不相容性所引起的新生儿溶血性疾病的药物是有效的，同时避免了对于红细胞的不期望反应(特别是通过抗-A和抗-B抗体消耗)以及减少了多反应性IgG的存在而引起的继发反应(特别是发热、恶心和头痛)。本发明的组合物也可以包含一或多种稳定剂。
“稳定剂”在本发明中是指长期保存所述IgG组合物的化合物。所述稳定剂可以特别使得所述IgG组合物保存指定的时间。此外，所述稳定剂与治疗用途有利地相容。所述稳定剂可有利地是由申请人在其专利申请WO 2204/091656中所开发的那些稳定剂之一，即醇糖(优选甘露糖醇、山梨糖醇或者其异构体)、甘氨酸和非离子去污剂(如 Tween 80、Tween 20、Triton XlOO或者Pluronic F68)的混合物，所有这三种化合物均是药物水平可接受的化合物。所述IgG组合物中甘露糖醇的最终浓度可以在30g/l至50g/l之间，甘氨酸的浓度在7g/l至10g/l之间。这些化合物的浓度代表IgG组合物中最终浓度。有利地，所述配制物的浓度已经由申请人确定，以稳定液体和/或冻干的形式。本发明的组合物可以静脉内施用或者皮下施用。为此，本发明的IgG浓缩物必须是经病毒防护的，例如通过本领域已知的常规溶剂/去污剂处理，使用例如TweenTM80/TnBP 或者Trit0nTMX 100/TnBP混合物，和/或进行过滤步骤以在需要时消除通过溶剂/去污剂杀病毒处理未除去的病毒和/或其它大分子，如朊病毒，这是导致播散性海绵状脑病的物质。本发明的IgG浓缩物也可以进行纳米过滤步骤。本发明的组合物可以配制为存在合适的稳定剂的液体或者冻干形式，或者贮存直至随后使用。有利地，所述组合物可以静脉内注射。在此实施方案中，本发明的组合物可以是用于注射的溶液，例如用于静脉内注射用途的5g/100ml(5% )正常人免疫球蛋白溶液。有利地，用于注射的溶液剂量可以是lg/100ml(l% )，或者2g/100mK2% )，或者 3g/100ml (3% )，或者 4g/100ml (4% )，或者 5g/100ml (5% )。有利地，所述可注射溶液的IgG剂量可以在lg/100ml至5g/100ml之间，或者在 2g/100ml 至 5g/100ml 之间，在 3g/100ml 至 5g/100ml 之间，或者等于 5g/100ml。用于实现本发明的组合物可以伴随光疗法施用或者与光疗法相继施用，例如施用量在500mg/kg-2000mg/kg之间。可以从施用500mg/kg开始，然后如果胆红素水平不降低 (可以通过已知的胆红素血症测试来检测)，则以500mg/kg的剂量逐步增加直至胆红素水平正常化。施用可以重复进行。可以施用用于实现本发明的组合物而不伴随光疗法。施用量可以在500mg/kg至 2000mg/kg之间。可以从施用500mg/kg开始，然后如果胆红素水平不降低(可以通过已知的胆红素血症测试来检测)，则以500mg/kg的剂量逐步增加直至胆红素水平正常化。施用
可以重复进行。适于实施本发明的组合物可以等同于WO 2007/077365中所描述的组合物。所述IgG组合物可以通过本领域技术人员已知的任何方法获得。特别地，所述组合物可以通过包括如下步骤的方法获得a)通过乙醇分级分离和/或通过层析分离制备IgG组合物，包括病毒失活步骤，b)通过将所述IgG组合物在载体混合物上渗滤进行免疫亲和性层析，所述载体混合物的基质用与血型A和B抗原性相似的寡糖基团接枝，以及c)大小大于20nm的病毒和/或病毒颗粒的消除过滤。
有利地，这种方法在WO 2007/077365中描述。。这种方法在工业化规模实施非常有利。此外，制备IgG组合物的步骤与消除抗-A 和抗-B抗体的特定步骤的结合使得可以获得用于治疗用途的IgG组合物，也优选包含相对于总IgG含量低于0. 水平的多反应性IgG。此外，这种组合物包含远低于欧洲药典中所述检测低限值的效价的不希望的AcaA和AcaB，即低于64 (稀释度的倒数(结果作为完整数字给出-稀释分数的分母部分))，甚至使用这种未稀释的样品通过进行ICT测试而得到阴性结果，即效价等于0。优选所述方法的步骤a)自己就可以是获得IgG浓缩物的方法，如本领域技术人员熟知的那些。其是由 Cohn et al. (Cohn et al. 1946，J. Am. Chem. Soc. 68,459 ；Oncley et al. 1949，J.Am. Chem. Soc. 71, 541 [11])开发的乙醇分级分离的情况，或者例如在EP O 703 922和WO 99/64462中描述的层析分离方法。特别优选由本申请人在专利申请WO 94/29334 和WO 02/0拟632中开发的方法，特别是在02/092632中描述的方法。在这种情况中，本发明方法的步骤a)包括从富集IgG的血浆或者血浆级分中沉淀脂质污染物的预纯化、在阴离子交换树脂载体上于碱性PH进行的单次层析，以及通过合适缓冲液于PH4-7在一个步骤中选择性洗脱IgG。“液体污染物，，在本发明中是指血浆中除了免疫球蛋白之外的组分。“富集IgG的血浆级分”在本发明中是指已经经历纯化步骤以增加此级分中IgG浓度的血浆级分。“单次层析”在本发明中是指随后不再重复进行的层析步骤。“在一个步骤中选择性洗脱IgG”在本发明中是指用于洗脱大部分免疫球蛋白G的洗脱步骤。对于本发明的目的，用于在一个步骤中选择性洗脱IgG的缓冲液可以是本领域技术人员熟知的任何缓冲液。所述方法的步骤a)包括病毒失活处理，优选通过溶剂/去污剂进行，如Horowitz 在专利US 4 764 369中所述的。若需要时，在随后特别消除这种处理的化学残余物的层析步骤之前，要特别小心地来实施。然后将这种浓缩物在与血型A和B抗原性相似的基团的两个接枝载体的混合物上进行免疫亲和性层析步骤，优选在填充了载体混合物的柱上进行。优选地，所述层析载体由琼脂糖型的交联天然聚合物制成的基质所构成，其上接枝间隔基团或者结合臂，接着接枝了寡糖，有利的是对应血型A和B的表位的三糖(寡糖)。“与血型A和B抗原性相似的寡糖基团”在本发明中是指由与识别血型A和B相同的抗体或者相同免疫球蛋白所识别的寡糖基团。特别地，使用这样的载体会获得非常好的结果，对应于血型A表位的其三糖具有 N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)-半乳糖(Gal)-岩藻糖(Fuc)结构，以及对应于血型B的表位的那些，具有半乳糖-半乳糖-岩藻糖结构。这种载体非常有利地代表可商购的凝胶或者树脂，名称为购自 Glycorex Transplantation AS (Sweden)的 GLYC0S0RB AB0。举例来说，如果使用这种载体，相应于血型A的表位的三糖具有如下结构
权利要求
1.用于治疗用途的免疫球蛋白G(IgG)组合物，包含根据间接Coombs测试(欧洲药典的方法2. 6. 20)为阴性结果的相应抗-A和抗-B抗体效价，其作为药物用以治疗由母体-胎儿关于ABO系统不相容性所引起的新生儿黄疸或者由ABO不相容性所引起的新生儿溶血疾病。
2.权利要求1的组合物，所述根据间接Coombs测试阴性结果的相应抗-A和抗-B抗体效价以稀释度的倒数为64。
3.权利要求1的组合物，所述根据间接Coombs测试阴性结果的相应抗-A和抗-B抗体效价以稀释度的倒数在0-8之间。
4.前述任一项权利要求的组合物，所述间接Coombs测试用初始浓度调节为30g/L的 IgG溶液进行。
5.前述任一项权利要求的组合物，具有相对于总IgG含量在0.01%至0. 之间的残余多反应性IgG含量。
6.前述权利要求之一的组合物，其进一步包含稳定剂。
7.前述权利要求之一的组合物，其中所述稳定剂是指醇糖，优选甘露糖醇或者山梨糖醇，甘氨酸和非离子去污剂的混合物。
8.前述权利要求之一的组合物，可经静脉内注射。
9.前述任一项权利要求的组合物，可通过包括如下步骤的方法获得a)通过乙醇分级分离和/或通过层析分离制备IgG浓缩物，包括病毒失活步骤，b)通过将所述IgG浓缩物在载体混合物上渗滤进行免疫亲和性层析，所述载体混合物的基质用与血型A和B抗原性相似的寡糖基团接枝，以及c)大小大于20nm的病毒和/或病毒颗粒的消除过滤。
10.权利要求9的组合物，所述方法的步骤a)包括通过用富集IgG的血浆或者血浆级分来沉淀脂质污染物的预纯化，在阴离子交换树脂载体上于碱性PH进行的单次层析，以及使用PH在4-7之间的合适缓冲液在一个步骤中选择性洗脱IgG。
11.权利要求9或10的组合物，所述方法的寡糖基团是指相应于血型A和B表位的三糖。
12.权利要求8-11之一的组合物，所述方法的病毒失活步骤通过溶剂/去污剂进行。
13.权利要求8-12之一的组合物，每个所述载体中与血型A及与血型B抗原性相似的基团的接枝载体的混合物的各自比例在25/75至75/25 (ν/ν)之间，优选50/50 (ν/ν)。
14.权利要求8-13之一的组合物，所述方法包括通过超滤和灭菌过滤的浓缩步骤。
15.权利要求14的组合物，所述灭菌过滤步骤通过纳米过滤来进行。
16.权利要求9-15之一的组合物，所述方法包括，在步骤c)之后，向所述IgG浓缩物中加入保存性稳定剂的步骤。
17.前述任一项权利要求的组合物在制备要用于治疗由母体-胎儿关于ABO系统不相容性所引起的新生儿黄疸的药物中的用途。
18.治疗由母体-胎儿关于ABO系统不相容性所引起的新生儿黄疸或者ABO新生儿溶血性疾病的方法，包括将权利要求1-17任一项的IgG组合物施用于有需要的人。
全文摘要
本发明涉及抗-A(AcaA)和抗-B(AcaB)抗体经耗竭的免疫球蛋白G(IgG)浓缩物在生产用于治疗由母体-胎儿关于ABO系统不相容性所引起的新生儿黄疸的药物中的用途。
文档编号A61P43/00GK102316899SQ200980156966
公开日2012年1月11日 申请日期2009年12月16日 优先权日2008年12月17日
发明者M·埃尔扎阿比 申请人:法国分裂暨生物科技实验室