专利名称：一种当归黄芪提取物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种当归黄芪提取物以及该提取物制备方法和用途，属于医药领域。
背景技术：
肺纤维化是现代社会中老年人的多发病和常见病，是一种原因不明、以弥漫性肺 泡炎和肺泡结构紊乱最终导致肺间质纤维化为特征的疾病。主要临床表现是逐渐加重的呼 吸困难，伴有刺激性干咳，病情一般持续进展，最终因呼吸衰竭而病死，其发病率和死亡率 很高，预后极差。近年来特发性肺纤维化发病率呈不断上升趋势，然而目前肺纤维化治疗尚 无特效药物。因此，寻找行之有效的治疗药物是目前医学界迫切需要解决的课题。当归补血汤为金元时期名方，出自名医李东垣所著的《内外伤辨惑论》。该处方中 含黄芪，当归，具有补气生血的功效，临床主要用于等多种疾病的治疗，但由于汤剂的煎煮 比较麻烦，落后，因此不能起到急救作用；此外，汤剂还具有携带、存贮不便等缺陷，不利于 当归补血汤的推广与临床应用。鉴于以上原因，开发高标准，高效，速效的当归补血有效部 位制剂成为当务之急。
发明内容
因此，本发明的一个目的是提供一种当归黄芪提取物的制备方法，该方法可以去 粗存精，保留当归黄芪原料中的有效部分。本发明的另一个目的是提供通过本发明方法制备得到的当归黄芪提取物。本发明的再一个目的是提供本发明的当归黄芪提取物在治疗和/或预防肺纤维 化疾病中的用途。本发明的再一个目的是提供含有本发明的当归黄芪提取物的药物组合物在治疗 和/或预防肺纤维化疾病中的用途。本发明的再一个目的是提供一种药物组合物，该组合物含有本发明方法得到的当 归黄芪提取物。本发明一方面提供了一种当归黄芪提取物的制备方法，该方法包括以下步骤a.将当归、黄芪水提醇沉或醇提取得到的提取液通过大孔吸附树脂，并依次用水 和醇洗脱，收集醇洗脱液；b.浓缩所述的醇洗脱液，再经醇沉处理，得到所述的当归黄芪提取物。作为优选，所述的大孔吸附树脂选自型号为Dltll的大孔吸附树脂。优选地，在所述的步骤a中，首先将当归、黄芪水提醇沉或醇提取得到的提取液减 压浓缩得浓缩液，接着将所述浓缩液过滤，再将得到的滤液通过大孔吸附树脂，并依次用水 和醇洗脱，收集醇洗脱液。优选地，步骤a中的当归和黄芪的重量比为1 2-8。更优选地，步骤a中的当归和黄芪的重量比为1 3-7。最优选地，步骤a中的当归和黄芪的重量比为1 5。
优选地，所述步骤a中的水提醇沉为用丹参黄芪总重量8-12倍的水煎煮1_3次， 每次1-3小时，得到提取物，再向提取物中加入乙醇沉淀。优选地，在所述步骤a中，所述的醇提取为用当归和黄芪总重量6-10倍的45_95% 乙醇提取1-3次，每次1-3小时；或者，所述的醇提取为用当归和黄芪总重量8倍的70%的 乙醇提取2次，每次2小时。优选地，在所述的步骤a中所述的减压浓缩条件为50-80 °C，真空度 为-0. 05—0. 1。更优选地，减压浓缩条件为70°C，真空度为-0. 08。优选地，步骤a中所述的醇洗脱为乙醇洗脱。更优选地，所述乙醇为80%的乙醇。优选地，在所述的步骤b中，将醇洗脱液浓缩至无乙醇味，加乙醇至含醇量达 90%，冷藏后过滤，回收乙醇，减压浓缩至干粉，得到所述的当归黄芪提取物。本发明另一方面提供了本发明的方法制备得到的当归黄芪提取物。优选地，在本发明的当归黄芪提取物中的当归黄芪总苷含量大于提取物重量的 50%。优选地，所述的当归黄芪提取物中含有黄芪甲苷、黄芪苷II和阿魏酸。更优选地，所述的当归黄芪提取物中含有提取物总重量2-8%黄芪甲苷、1-3%黄 芪苷II和1-5%阿魏酸。更优选地，所述的当归黄芪提取物中含有提取物总重量3飞％的黄芪甲苷、 1. 0(Γ2%的黄芪苷II和2. 0(Γ4%的阿魏酸。本发明再一方面还提供的当归黄芪提取物在制备用于预防和/或治疗肺纤微化 疾病的药物的用途。本发明提供了一种药物组合物，其中所述的药物组合物中含有本发明的当归黄芪 提取物。优选地，所述的药物组合物包括片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、水针剂和粉针剂中的 一种或几种。本发明的有益效果在于1.本发明当归黄芪提取物的制备，通过对提取条件中的 乙醇浓度、乙醇用量、提取时间和提取次数的多次实验，得到了最适宜的提取方法。该法 精密度、重现性良好，简便易行、快速准确。2.本发明制备方法得到的当归黄芪提取物与 传统的当归补血汤相比，通过对IPF大鼠的干预作用比较发现，本发明制备方法得到的当 归黄芪提取物能明显降低IPF大鼠血清中透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、III型前胶原 (PCIII)和IV型胶原(CIV)含量，提示本发明制备方法得到的当归黄芪提取物能够明显减 少IPF大鼠ECM(细胞外基质)的生成，其作用明显优于当归补血汤。3.通过本发明方法制 备得到的当归黄芪提取物中黄芪甲苷、黄芪苷II和阿魏酸的平均含量稳定，均在上面提到 的保护范围内，从而可见，本发明方法得到的当归黄芪提取物中的主要成分含量稳定，药效 稳定。
图1 对肺纤维化大鼠的干预作用
其中，图I-A表示模型组^d的Masson染色病理组织图片，图I-B表示 TCDGBX (32mg -kg-1)组28d的Masson染色病理组织图片，图I-C表示模型组28d的HE染色 病理组织图片，图I-D表示TCDGBX (32mg · kg-1)组^d的HE染色病理组织图片(X 100)。 造模后28d模型组大鼠肺组织中胶原纤维排列纵横交错，而TGDGBX(32mg-kg-1)组胶原纤 维显著减少。
具体实施例方式棚列1 H日月削3·馳_吿丨丨細去黄芪、当归均符合《中国药典》2005年版一部有关规定。取黄芪、当归加水8倍量 煎煮三次，每次1. 5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至(温度70°C，真空数-0. 08Pa (帕 斯卡))每Iml相当于原生药材2g，用95%乙醇沉淀至含醇量达80%，冷藏静置48小时，滤 过，取滤液浓缩回收乙醇，冷藏静置M小时，滤过，滤液通过大孔树脂，大孔树脂柱购自中 国科学技术大学玻璃仪器厂，大孔树脂柱内径为(01.5(3!1^30(^，0 5.0(311^80(^)，水洗除 去水溶性杂质，用70%乙醇洗脱，收集洗脱液，滤过，回收乙醇，并浓缩至无醇味，加95%乙 醇至含醇量达90%，冷藏M小时，滤过，回收乙醇，减压浓缩至干粉。棚列2 H日月削3·馳_吿丨丨細去取黄芪、当归加水12倍量煎煮三次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩 至(温度70°C，真空数-O.OSPa)每Iml相当于原生药材2g，用95%乙醇沉淀至含醇量达 80%,冷藏静置48小时，滤过，取滤液浓缩回收乙醇，冷藏静置M小时，滤过，滤液通过大孔 树脂，大孔树脂柱购自中国科学技术大学玻璃仪器厂，大孔树脂柱内径为(Φ1. 5cmX30cm, Φ 5. OcmX 80cm)。水洗至无糖反应，用80 %乙醇洗脱，收集洗脱液，滤过，回收乙醇，并浓缩 至无醇味，加95%乙醇至含醇量达90%，冷藏M小时，滤过，回收乙醇，减压浓缩至干粉。^MM 3本发日月当Ifllll^是耳对勿的泡丨备方法取黄芪、当归加95%乙醇8倍量提取三次，每次1. 5小时，合并提取液，滤过，滤液 减压浓缩至(温度70°C，真空数-0. 08Pa)每Iml相当于原生药材lg，再加水稀释至每細1 相当于原生药材lg，冷藏静置48小时，滤过，滤液通过大孔树脂，大孔树脂柱购自中国科学 技术大学玻璃仪器厂，大孔树脂柱内径为(O1.5CmX30Cm，Φ5. OcmX80cm)，水洗除去水溶 性杂质，用80%乙醇洗脱，收集洗脱液，滤过，回收乙醇，并浓缩至无醇味，加95%乙醇至含 醇量达90 %，冷藏M小时，滤过，回收乙醇，减压浓缩至干粉。^MM 4本发日月当Ifllll^是耳对勿的泡丨备方法取黄芪、当归加70 %乙醇10倍量提取三次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液减 压浓缩至(温度70°C，真空数-0. 08Pa)每Iml相当于原生药材lg，再加水稀释至每3ml相 当于原生药材lg，冷藏静置48小时，滤过，滤液通过大孔树脂，大孔树脂柱购自中国科学技 术大学玻璃仪器厂，大孔树脂柱内径为(Φ1.5οπιΧ30(3Π ，Φ5.0ΟΠΙΧ80(3ΠΙ)。水洗除去水溶 性杂质，用70 %乙醇洗脱，收集洗脱液，滤过，回收乙醇，并浓缩至无醇味，加95%乙醇至含 醇量达90%，冷藏M小时，滤过，回收乙醇，减压浓缩至干粉。实施例5当归黄芪提取物组分的确定黄芪甲苷、黄芪苷II的含量测定1. 1色谱条件
色谱柱Kromail C18(4. 6mm*250mm, 5 μ m)；流动相乙腈-水(37.5 62.5)；流速 0. 8mL · min-1 ；进样量 20 μ L ；漂移管温度 100°C ;Ν2 气流流速 2. 60L · mirT1。1.2供试品溶液的制备取实施例4的制得的样品约50mg，精密称定，用200mL水饱和的正丁醇溶解后置分 液漏斗中，用氨试液(40 — IOOmL)提取2次，每次IOOmL,弃去氨液，正丁醇液减压蒸干，残 渣用甲醇溶解，转移置IOmL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇勻，微孔滤膜(0.45μπι) 过滤，即得。1.3对照品溶液制备精密称取黄芪甲苷、黄芪苷II对照品适量，加甲醇溶解并稀释，制成浓度分别约 为120μ g/ml、240y g/ml的混合溶液，作为对照品溶液。1.4系统适应性试验在上述的色谱实验条件下，取供试品溶液及对照品溶液各20μ 1，注入液相色谱仪 中，由色谱图可见，黄芪甲苷对照品峰的保留时间约为6. 5 7. 5min左右，理论塔板数约 10000，拖尾因子约1. 07 ；黄芪苷II对照品峰的保留时间约为10. 0 11. Omin左右。理论 塔板数约13000，拖尾因子约1. 01 ；供试品在与黄芪甲苷、黄芪苷II对照品色谱峰相对应位 置上均出现特征色谱峰，且与杂质峰分离良好。1. 5线性关系考察1. 6黄芪甲苷的线性关系考察精密称取黄芪甲苷对照品16. 92mg，置IOml量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻 度，分别精密量取0. 25ml,0. 5ml、lml、l. 5ml、2ml置IOml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，照 上述色谱条件分别进样20 μ L，记录色谱峰面积。以浓度的对数值(IgC)为横坐标，以峰 面积的对数值(IgQ为纵坐标，进行线性回归，回归方程见下表。从结果可知，进样量在 0. 85ug 6. 76ug的范围内，IgC与IgS具有良好的线性关系(见下表1)。表1黄芪甲苷线性范围考察表
权利要求
1.一种当归黄芪提取物的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤a.将当归和黄芪，用水提醇沉或醇提取得到的提取液通过大孔吸附树脂，并依次用水 和醇洗脱，收集醇洗脱液；作为优选，所述的大孔吸附树脂选自型号为Dltll的大孔吸附树 脂；b.浓缩所述的醇洗脱液，再经醇沉处理，得到所述的当归黄芪提取物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤a中的当归和黄芪的重量比为 1 2-8，优选地，步骤a中的当归和黄芪的重量比为1 3-7，更优选地，步骤a中的当归和 黄芪的重量比为1 5。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的步骤a中水提醇沉为用丹参和 黄芪总重量8-12倍的水煎煮1-3次，每次1-3小时，得到提取物，再向提取物中加入乙醇沉 淀。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，所述的醇提取为用当归和黄 芪总重量6-10倍的45-95%乙醇提取1-3次，每次1_3小时；作为优选，所述的醇提取为用 当归和黄芪总重量8倍的70%乙醇提取2次，每次2小时。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，步骤a中所述的醇洗脱为乙醇 洗脱，优选地，所述乙醇为80%的乙醇。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，在所述的步骤b中，将所述的 醇洗脱液浓缩至无醇味，加乙醇至含醇量达90 %，冷藏后过滤，滤液回收乙醇，减压浓缩至 干粉，得到所述的当归黄芪提取物。
7.通过权利要求1-6中任一项所述的方法制备得到的当归黄芪提取物，其中，所述的 当归黄芪提取物中的当归黄芪总苷含量大于提取物重量的50%。
8.根据权利要求7所述的当归黄芪提取物，其特征在于所述的当归黄芪提取物中含有 黄芪甲苷、黄芪苷Π和阿魏酸，优选地，所述的当归黄芪提取物中含有提取物总重量1-8% 黄芪甲苷、0. 5-3%黄芪苷II和0. 5-5%阿魏酸，更优选地，所述的当归黄芪提取物中含有 提取物总重量3飞％的黄芪甲苷、1. 00 2%的黄芪苷II和2. 00 4%的阿魏酸。
9.权利要求7或8所述的当归黄芪提取物在制备用于预防和/或治疗肺纤维化疾病的 药物的用途。
10.一种药物组合物，其特征在于含有权利要求7或8所述的当归黄芪提取物作为药物 活性成分以及药学上可接受的辅料。
全文摘要
本发明提供一种当归黄芪提取物的制备方法，该方法包括以下步骤a.将当归和黄芪，用水提醇沉或醇提取得到的提取液通过大孔吸附树脂，并依次用水和醇洗脱，收集醇洗脱液；b.浓缩所述的醇洗脱液，再经醇沉处理，得到所述的当归黄芪提取物。上述方法所制得的当归黄芪提取物，可用于预防和/或治疗肺纤维化疾病，因此本发明还提供了一种药物组合物，其中含有上述所述的当归黄芪提取物作为药物活性成分。
文档编号A61P11/00GK102138963SQ20101010476
公开日2011年8月3日 申请日期2010年2月3日 优先权日2010年2月3日
发明者许杜鹃, 高建 申请人:许杜鹃, 高建