专利名称：由肝素衍生的多糖混合物、其制备方法以及含有它们的药物组合物的制作方法
本申请为2003年10月8日提交的发明名称为“由肝素衍生的多糖混合物、其制备方法以及含有它们的药物组合物”的PCT申请PCT/FR2003/002960的分案申请，所述PCT申请进入中国国家阶段的日期为2005年4月6日，申请号为200380100992.5。
本发明涉及由肝素衍生得到的多糖混合物、它们的制备方法以及含有它们的药物组合物。
肝素是一种动物源的硫酸化粘多糖混合物，这种混合物主要因其抗凝血和抗血栓形成性能而得到应用。
然而，肝素本身的缺陷制约着其应用。特别是它的高抗凝血活性(抗IIa活性)可能引起出血。
人们曾提出通过肝素酯的碱解聚作用来得到低分子量肝素(EP40144)；但是，这些产物还是具有高的抗IIa活性。
在US 6 384 021中，也曾描述过极低分子量的肝素。然而，在其中的实施例中测得的抗Xa活性都没有超过120IU，并且测得的抗Xa/抗IIa比是15-50。
在WO 0208295中，采用与US 6384021不同的方法制备出极低分子量的肝素，这些肝素的活性是100-150IU，并且在一些应用实施例中测定的抗Xa/抗IIa比也是非常高的。
尽管如此，人们仍需要提高这类药物的抗Xa活性，尤其是使其活性达到150IU/mg以上，以及提高抗Xa/抗IIa比，因此，需要研制新的肝素衍生物制备方法。
因此，本发明的一个目的是通过改进现有技术中描述的方法、特别是通过控制这种解聚步骤时的水百分数，从而来提高抗Xa活性与抗Xa/抗IIa比。由此得到的肝素具有极好的抗血栓形成活性，其抗Xa活性也与肝素的抗Xa活性相近，同时还减少了出血危险性，而且抗IIa活性也非常低。同时，本发明产品的半衰期显著高于肝素的半衰期。
因此，本发明的目的是一些由肝素衍生得到的新多糖混合物，它们对活化因子X(因子Xa)和活化因子II(因子IIa)的选择性活性优于肝素。
应该理解到，可以将平均分子量1500-3000道尔顿的多糖混合物称之低聚糖。
因此，本发明的目的是这些硫酸化低聚糖混合物，它们具有组成肝素的多糖的一般结构，还具有下述特征 -它们的平均分子量是1500-3000道尔顿，抗Xa活性是120-200IU/mg，抗IIa活性小于10IU/mg，抗Xa活性/抗IIa活性的比大于30， -组成这些混合物的低聚糖含有2-26个糖单元，在一个末端有4，5-不饱和糖醛酸2-O-硫酸酯单元，并且含有下式的六糖ΔIIa-IIs-Is
在本发明描述的低聚糖混合物中含有的六糖ΔIIa-IIs-Is是一种对ATIII具有高亲合性的序列，其特征在于抗Xa活性高于740U/mg。
本发明中描述的低聚糖混合物呈碱金属或碱土金属盐形式。
对于碱金属或碱土金属盐，优选钠、钾、钙和镁盐。
可以采用高压液相色谱法，使用串联双柱，例如以商品名TSK G3000 XL和TSK G2000 XL销售的高压液相色谱仪，测定平均分子量。采用折光计进行检测。使用的洗脱剂是硝酸锂，流速是0.6ml/min。采用琼脂糖-聚丙烯酰胺凝胶层析法(IBF)分馏依诺肝素(AVENTIS)制得的标准品校正这种系统。根据Barrowcliffe等人，《Thromb.Res.》，12，27-36(1977-78)或D.A.Lane等人，《Thromb.Res.》，12，257-271(1977-78)描述的方法进行制备。采用GPC6软件(Perkin Elmer)计算这些结果。
根据Teien等人，《Thromb.Res.》，10，399-410(1977)描述的发色底物酰胺解方法，使用低分子量肝素的第一个国际标准作为标准测定了抗Xa活性。
采用Anderson L.O.等人，《Thromb.Res.》，15，531-541(1979)描述的技术，使用低分子量肝素的第一个国际标准作为标准测定了抗IIa活性。
优选六糖馏分占低聚糖混合物的15-25％。
优选在低聚糖混合物的六糖馏分中，本发明的混合物含有8-15％六糖ΔIIa-IIs-Is。
采用高压液相层析法，使用TSK G3000 XL和TSK G2000 XL柱，或者通过制备性分离六糖馏分，可以分析测定六糖馏分的百分数。在这种情况下，使用聚丙烯酰胺琼脂糖类凝胶填充柱，例如从市场上购买商标Ultrogel ACA202R(Biosepra)的填充柱，对这种混合物进行层析分离。用碳酸氢钠溶液洗脱这种混合物。优选地，这种碳酸氢钠溶液是0.1-1mol/l溶液。更优选地，用浓度1mol/l的碳酸氢钠溶液进行这种分离。采用UV光谱法(254nm)进行检测。分馏后，六糖馏分的碳酸氢钠溶液用冰乙酸进行中和。这种溶液然后在减压下浓缩达到乙酸钠浓度高于30重量％。然后加入3-5个体积的甲醇沉淀该六糖馏分。这种六糖馏分再使用3号烧结玻璃过滤器进行过滤回收。得到的六糖混合物可以采用HPLC(高效液相色谱)进行分析，测定六糖ΔIIa-IIs-Is的含量。根据本技术领域的技术人员采用的技术(M.Hook，I.Bjork，J.Hopwood and U.Lindahl，《F.E.B.Sletters》，vol 656(1)(1976))，采用制备性HPLC色谱法或采用亲合色谱法，使用抗凝血酶III琼脂糖柱，可以分离六糖ΔIIa-IIs-Is。
特别优选本发明的混合物的抗Xa活性是150-200IU/mg。
优选本发明的混合物的抗IIa活性小于5IU/mg，特别优选是0.5-3.5IU/mg。下面描述的这些应用实施例证明当采用该方法优选特征时，本发明的混合物的抗IIa活性是1.1-1.6IU/mg。
优选这些混合物的抗Xa活性/抗IIa活性比高于50，特别优选高于100。
优选本发明混合物的平均分子量是2000-3000道尔顿，特别优选平均分子量是2400-2650道尔顿。
因此，本发明的目的非常特别地是如前面定义的这些混合物，其抗Xa活性是150-200IU/mg，抗IIa活性是0.5-3.5IU/mg，平均分子量是2400-2650道尔顿。
优选地使用pKa大于20的强有机碱(优选地具有类似于例如根据R.Schwesinger等人，《Angew.Chem.Int.Ed.Engl.》26，1167-1169(1987)，R.Schwesinger等人，《Angew.Chem.》105，1420(1993)定义的膦腈类的性质)，在有机介质中，通过肝素苄酯季铵盐的解聚作用，再将解聚的肝素苄酯季铵盐转化成钠盐，这些残留酯进行皂化和任选地纯化，这样可以制备出本发明的低聚糖混合物。本发明方法重复了如在WO 0208295中所述方法的主要步骤，同时增加一个基本特征，这种特征能够使所得到的本发明低聚糖混合物具有前面描述的物理化学特征和活性。
事实上，为了得到本发明的特定低聚糖混合物，需要在解聚步骤时，通过非常精确控制在这种混合物中的水含量来控制这种碱的选择性。
事实上，本发明方法的特征在于在解聚作用时控制这种碱的高选择性。本发明能够使这种肝素解聚，同时最大限度地保持这些对ATIII亲合性的序列，例如本发明中描述的六糖ΔIIa-IIs-Is。该方法的这个关键步骤确保能够得到本发明的多糖。
所述方法的这个特征使得这种平均分子量的低聚糖混合物有出乎意料的抗Xa活性(平均分子量2000-3000道尔顿时，活性为150IU/mg＜抗Xa＜200IU/mg)。这种选择性是由于膦腈碱具有非常特别的物理化学特征所致，pKa大于20并且具有非常高的空间位阻和弱的亲核性。
这种反应介质是无水的时，这种效果充分表现出来了。相反地，反应介质中的水含量增加时，观察到解聚作用的选择性急剧降低。保持对ATIII亲合性的序列降低了，其结果是抗Xa活性大大降低。在少量水的存在下，膦腈碱变成质子化了，而这些反应物质变成季铵氢氧化物。在这种情况下，失去了非常高的空间位阻和弱的亲核性，于是严重影响了所得产品的质量。采用控制水含量进行解聚作用试验时，可以明显观察到这种效果。
下表汇集了水含量对解聚作用选择性的影响(在这些试验中只是改变这个参数根据本技术领域的技术人员已知的标准，试剂的化学计算量、稀释度与温度保持不变。使用的碱是膦腈碱2-叔-丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1，3-二甲基全氢-1，2，3-二氮杂磷杂环己烯(phosphorine))。
为了获得最佳选择性和最大保持对ATIII亲合性序列，以肝素苄酯，苄乙铵(benzethonium)盐计，使用1摩尔当量膦腈碱时，优选的是在水含量小于0.6％、非常优选在小于0.3％条件下实施这个步骤。
因此，非常特别地，本发明的目的是根据本技术领域的技术人员已知的方法得到的肝素苄酯季铵盐解聚作用步骤，其特征在于使用特别在含有0.6％以下水的二氯甲烷溶液中的膦腈类碱。优选水的百分数应该低于0.3％，特别优选低于0.2％。
最好强碱/酯摩尔比是0.2-5，优选是0.6-2，特别优选0.8-1.2。因此，使用等摩尔比为本发明优选的实施方案。
可以使用本技术领域的技术人员已知的其它非质子溶剂，例如THF或DMF。
这些肝素苄酯季铵盐优选地是苄乙铵、鲸蜡基吡啶鎓或鲸蜡基三甲基铵盐。
这些膦腈族碱优选地具有下式
式中R1-R7相同或不同，代表烷基。
在前式中，所述烷基含有1-6个直链或支链碳原子。
因此，本发明的目的是一种制备本发明低聚糖混合物的方法，该方法包括下述步骤 a)通过苯索氯铵的作用，使肝素钠盐交换(transalification)， b)通过苄基氯的作用，使苄乙铵肝素盐酯化， c)将得到的苄酯盐交换成季铵盐， d)采用前面定义的方法，使肝素苄酯季铵盐解聚， e)将季铵盐转化成钠盐， f)通过一种碱，例如氢氧化钠的作用，任选地皂化这种肝素， g)特别地通过一种氧化剂，例如过氧化氢的作用，任选地纯化。
下面反应流程图说明本发明
n＝X+Y+Z(二糖的平均硫酸化水平) X＝该位点的硫酸化度，其余由基团H代表 Y＝该位点的硫酸化度，其余由基团H代表 Z＝该位点的硫酸化度，其余由基团COCH3代表
一般地讲，在温度15-25℃下，使用乙酸钠醇溶液，优选使用10％(重量/体积)乙酸钠甲醇溶液处理这种反应介质，将解聚的肝素苄酯季铵盐转化成钠盐(步骤e)。加入乙酸盐的重量当量优选地是加入这种解聚反应中的肝素苄酯季铵盐量的三倍。
一般而言，在温度0-20℃，优选在0-10℃下，在含水介质中，使用碱金属氢氧化物，例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂进行皂化反应(步骤f)。通常使用1-5摩尔当量的碱金属氢氧化物。优选在1-2摩尔当量的碱金属氢氧化物存在下进行皂化反应。
可以采用任何已知的纯化解聚肝素的方法(例如EP 0037319B1)任选地纯化这个最后产物(步骤g)。优选地，在一种含水介质中，在温度10-50℃下使用过氧化氢进行这种纯化。优选地，在20-40℃下进行这种操作。
按照下述反应流程可以制备这种肝素苄酯季铵盐 a)使用苯索氯铵转化肝素钠，以得到苄乙铵肝素盐(盐交换)， b)使用苄基氯，通过用乙酸钠醇溶液处理，使前面得到的苄乙铵盐酯化，以得到肝素苄酯钠盐， c)将肝素苄酯钠盐盐交换成季铵盐，优选地苄乙铵、鲸蜡基吡啶鎓或鲸蜡基三甲基铵盐。
在温度15-25℃下，通过过量苯索氯铵与肝素钠的作用进行步骤a)的反应。有利地，盐/肝素钠摩尔比是3-4。
使用的原料肝素优选地是猪肝素。按照专利FR2663639描述的方法，可以预先对这种猪肝素进行纯化，以降低其硫酸皮肤素含量。
在温度25-45℃，优选地30-40℃下，优选地在含氯有机溶剂(例如氯仿或二氯甲烷)中进行步骤b)的酯化反应。然后，在一种醇(例如甲醇)中，使用10重量％乙酸钠进行沉淀，回收呈苄乙铵盐形式的酯，该盐是钠盐。每个体积的反应介质通常使用1-1.2个体积的醇。调节苄基氯的量和反应时间，以达到酯化度50-100％，优选地70-90％。优选地，每1重量份肝素苄乙铵盐使用0.5-1.5重量份苄基氯。同样地，反应时间优选10-35小时。
在含水介质中，在温度10-25℃下，使用氯化季铵，优选使用苯索氯铵、氯化鲸蜡吡啶鎓或鲸蜡基三甲基氯化铵进行步骤c)的盐交换。有利地，氯化季铵/肝素苄酯钠盐摩尔比是2-3。
呈钠盐形式的本发明混合物可以转化成另外的碱金属或碱土金属盐。采用专利FR 73 13 580描述的方法，可以任选地实现从一种盐到另一种盐的转化。
本发明的混合物无毒，因此可以用作药品。
本发明的低聚糖混合物可以用作抗血栓形成剂。特别地，它们用于治疗或预防静脉和动脉血栓形成、深静脉栓塞、肺血管梗塞、不稳定型心绞痛、心肌梗塞、心肌缺血、外周动脉梗阻疾病和心房纤颤。它们还用于预防和治疗平滑肌细胞增生、动脉粥样硬化和动脉硬化症，通过调节血管生成和生长因子用于治疗和预防癌，以及用于治疗和预防糖尿病症，例如糖尿病性视网膜病和肾病。
本发明还涉及含有一种式(I)混合物作为活性组分的药物组合物，任选地还含有一种或多种惰性赋形剂。
这些药物组合物例如是可以采用皮下或静脉内注射方式用药的溶液。它们还可以通过肺部(吸入)或通过口服用药。
其剂量可随病人的年龄、体重和健康状况而改变。成人肌内或皮下用药剂量通常是每天20-100mg。
本发明还涉及 1.硫酸化低聚糖混合物，它们具有组成肝素的多糖的一般结构，还具有下述特征 -它们的平均分子量是1500-3000道尔顿，抗Xa活性是120-200IU/mg，抗IIa活性小于10IU/mg，抗Xa活性/抗IIa活性的比大于30， 这些混合物的组分低聚糖 -含有2-26个糖单元， -在其中一个末端有4，5-不饱和糖醛酸2-O-硫酸酯单元， -含有下式的六糖ΔIIa-IIs-Is
并且这些低聚糖混合物呈碱金属或碱土金属盐形式。
2.根据项所述1的低聚糖混合物，其特征在于碱金属或碱土金属盐选自钠、钾、钙和镁盐。
3.根据项1或2所述的低聚糖混合物，其特征在于它含有六糖馏分，这种馏分占低聚糖混合物的15-25％。
4.根据项3所述的低聚糖混合物，其特征在于在低聚糖混合物的六糖馏分中，含有8-15％的六糖ΔIIa-IIs-Is。
5.根据项1-4中任一项所述的低聚糖混合物，其特征在于它的抗Xa活性是150-200IU/mg。
6.根据项1-5中任一项所述的低聚糖混合物，其特征在于它的抗IIa活性小于5IU/mg，特别是0.5-3.5IU/mg。
7.根据项1-6中任一项所述的低聚糖混合物，其特征在于它的抗Xa活性/抗IIa活性比大于50，特别是大于100。
8.根据项1-7中任一项所述的低聚糖混合物，其特征在于它的平均分子量是2000-3000道尔顿，特别是2400-2650道尔顿。
9.根据项1-8中任一项所述的低聚糖混合物，其特征在于它的抗Xa活性是150-200IU/mg，抗IIa活性是0.5-3.5IU/mg，而平均分子量是2400-2650道尔顿。
10.一种制备根据项1-9中任一项所述低聚糖混合物的方法，在制备过程中，在一种有机介质中，在一种pKa大于20的强有机碱存在下，对肝素苄酯季铵盐进行解聚，其特征在于使用的有机碱为膦腈族碱，特别是含有水百分数小于0.6％的膦腈族碱的二氯甲烷溶液。
11.根据项10所述的制备项1所述低聚糖混合物的方法，其特征在于水含量小于0.3％，优选小于0.2％。
12.根据项10或11所述的制备方法，其特征在于肝素苄酯季铵盐是苄乙铵、鲸蜡基吡啶鎓或鲸蜡基三甲基铵盐。
13.根据项10或11所述的制备方法，其特征在于膦腈族碱是下式的碱
式中R1-R7是相同或不同的，它们代表含有1-6个碳原子的直链或支链烷基。
14.根据项10或11所述的制备方法，其特征在于强碱/酯的摩尔比是0.2-5，优选0.6-2。
15.使用肝素制备项1-9中任一项项所述低聚糖的方法，其中进行下述操作 a)通过苯索氯铵的作用，使肝素钠盐交换， b)通过苄基氯的作用，使苄乙铵肝素盐酯化， c)将得到的苄酯盐交换成季铵盐， d)采用项10或11的方法，使肝素苄酯季铵盐解聚， e)将季铵盐转化成钠盐， f)通过一种碱，例如氢氧化钠的作用，任选地皂化所述肝素， g)特别地通过一种氧化剂，例如过氧化氢的作用，任选地纯化。
16.根据项15所述的方法，其特征在于在温度约15-25℃与盐/肝素钠摩尔比3-4的条件下，通过过量苯索氯铵与肝素钠的作用进行步骤a)的反应。
17.根据项15所述的方法，其特征在于在含氯有机溶剂中，在温度25-45℃、优选30-40℃下进行步骤b)的酯化反应，所述的含氯有机溶剂例如是氯仿或二氯甲烷，然后使用10重量％乙酸钠醇溶液沉淀回收呈钠盐形式的酯，所述的醇例如是甲醇，所述醇的浓度是每个体积的反应介质为1-1.2个体积的醇。
18.根据项15或17所述的方法，其特征在于肝素苄酯季铵盐的酯化度是50-100％，优选70-90％。
19.根据项15、17或18所述的方法，其特征在于每1重量份肝素苄乙铵盐使用0.5-1.5重量份苄基氯，反应时间应是10-35小时。
20.根据项15所述的方法，其特征在于在一种含水介质中，在温度10-25℃下，使用氯化季铵，优选地使用苯索氯铵、氯化鲸蜡吡啶鎓或鲸蜡基三甲基氯化铵进行步骤c)的盐交换。
21.根据项20所述的方法，其特征在于氯化季铵/肝素苄酯钠盐的摩尔比是2-3。
22.根据项15所述的方法，其特征在于在温度15-25℃下，使用乙酸钠醇溶液，优选地使用10％乙酸钠甲醇溶液(重量/体积)处理反应介质，使解聚的肝素苄酯季铵盐转化成钠盐(步骤e)。
23.根据项15所述的方法，其特征在于在一种含水介质中，在温度0-20℃、优选0-10℃下，使用碱金属氢氧化物进行该皂化作用(步骤f)，所述的碱金属氢氧化物例如是氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化锂。
24.根据项23所述的方法，其特征在于使用1-5摩尔当量碱金属氢氧化物，优选1-2摩尔当量氢氧化钠。
25.根据项15所述的方法，其特征在于在一种含水介质中，在温度10-50℃、优选20-40℃下，使用过氧化氢进行所述纯化(步骤g)。
26.根据项1-9中任一项所述的低聚糖作为药物。
27.根据项1-9中任一项所述的低聚糖作为具有抗血栓形成活性的药物。
28.根据项26或27所述的药物，它们用于治疗或预防静脉和动脉血栓形成、深静脉栓塞、肺血管梗塞、不稳定型心绞痛、心肌梗塞、心肌缺血、外周动脉梗阻疾病和心房纤颤、平滑肌细胞增生、动脉粥样硬化病和动脉硬化症，通过调节血管生成和生长因子用于治疗和预防癌，以及用于治疗和预防糖尿病症，例如糖尿病性视网膜病和肾病。
29.一种药物组合物，它含有至少一种如项26限定的药物和一种或多种药用惰性赋形剂或载体或添加剂。
30.根据项29所述的药物组合物，其特征在于它是采用皮下或静脉内注射方法给药的溶液。
31.根据项29所述的药物组合物，其特征在于它是通过肺部吸入方法给药的制剂。
32.根据项29所述的药物组合物，其特征在于它是通过口服方法给药的制剂。
33.如项1-9中任一项所限定的多糖混合物，它们可以采用项15所限定的方法得到。
下面实施例说明本发明，而不是限制本发明。
实施例A制备肝素苄酯苄乙铵盐 苄乙铵肝素盐 将25g苯索氯铵在125ml水中的溶液添加到10g肝素钠盐在100ml水中的溶液里，该产物经过滤后，用水洗涤与干燥。
肝素苄酯(钠盐) 将16ml苄基氯添加到20g肝素苄乙铵盐在80ml二氯甲烷中的溶液中。该溶液在温度30℃下加热12小时。然后添加108ml 10％乙酸钠甲醇溶液，混合物经过滤后，用甲醇洗涤与干燥。这样得到7.6g肝素苄酯，呈钠盐形式，它的酯化度是77％。
肝素苄酯(苄乙铵盐) 将36g(0.0549mol)肝素苄酯(钠盐)和540ml蒸馏水加到2升三角烧瓶A中。在温度约20℃下均化后，得到了淡黄色溶液。在磁搅拌下，在1升三角烧瓶B中制备了64.45g(0.1438mol)苯索氯铵和450ml水的溶液。在搅拌下，在约35分钟内将三角烧瓶B中的溶液倒入在三角烧瓶A中的溶液里。观察到已生成大量的白色沉淀物。用200ml蒸馏水漂洗三角烧瓶B，再将洗涤水加到三角烧瓶A中。然后停止搅拌，再使这种悬浮液沉淀12小时。这个时间一过，就除去上清液的透明部分并弃去。再将560ml水添加到沉降的沉淀物(浆体状)中，该混合物搅拌20分钟。使这种沉淀物再沉降约30分钟。除去上清液并弃去(560ml)。使用约560ml蒸馏水洗涤沉降沉淀物，这个洗涤操作重复进行两次。在最后的洗涤操作中，这种沉淀物呈悬浮液状，再用3号烧结玻璃过滤器过滤。这种滤饼然后洗涤4次，每次200ml蒸馏水。这种白色湿固体经脱水后，在减压下(2.7kPa)与温度约60℃下干燥。干燥12小时后，得到87.5g肝素苄基酯，为苄乙铵盐。其产率是94.9％。
实施例B六糖ATIII(ΔIIa-IIs-Is)的描述
在D2O中的质子谱，500MHz，T＝298K，δ，以ppm表示1.97(3H，s)，3.18(1H，dd，10和3Hz)，3.30(1H，t，8Hz)，3.37(1H，dd，10和3Hz)，3.60(2H，m)，3.65-3.85(6H，m)，3.87(2H，m)，3.95(1H，d，8Hz)，4.03(1H，d，8Hz)，4.05-4.13(4H，m)，4.16-4.45(8H，m)，4.52(1H，d，8Hz)，4.67(1H，m)，5.06(1H，d，6Hz)，5.10(1H，d，3Hz)，5.33(1H，d，4Hz)，5.36(1H，d，3Hz)，5.46(1H，d，3Hz)，5.72(1H，d，4Hz)。
4-脱氧-α-L-苏型-吡喃己烯糖基糖醛酸-(1→4)-2-脱氧-2-乙酰氨基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸-(1→4)-2-脱氧-2-磺酰氨基-3，6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-2-O-磺基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸-(1→4)-2-脱氧-2-磺酰氨基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖糖十钠盐。
实施例1-7和12说明了水含量对该聚合反应的选择性和对所得产物的抗Xa和抗IIa活性的影响。
实施例8-10说明了碱当量数对所得产物的抗Xa和抗IIa活性的影响(使用水含量0.1％) 实施例11说明了使用除2-叔-丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1，3-二甲基全氢-1，2，3-二氮杂磷杂环己烯之外的膦腈碱 使用叔-丁基亚氨基三(吡咯烷-1-基)膦。
实施例1 解聚作用并转化成钠盐(0.1％水) 在三角烧瓶A中放入70ml二氯甲烷。在搅拌下缓慢加入10g(0.006mol)如实施例A描述得到的肝素苄酯(酯化度75％，苄乙铵盐)。将反应介质的水含量调节到0.1％。该溶液在氮气下加热到40℃。在完全溶解后，该溶液冷却到温度约20℃，然后添加1.75ml(0.006mol)2-叔-丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1，3-二甲基全氢-1，2，3-二氮杂磷杂环己烯。得到的混合物在温度约20℃下搅拌24小时。在这个时间，在三角烧瓶B中制备出30g无水乙酸钠在300ml甲醇中的溶液。完全溶解后，将5g Hyflo supercel硅藻土添加到该溶液中。在磁搅拌下，在1分30秒内将三角烧瓶A中的反应混合物倒入温度约5℃的乙酸钠甲醇溶液中。在搅拌5分钟后，使这种悬浮液倾析1小时30分钟。分离上清液清澈部分，并弃去(220ml)。然后将220ml甲醇添加到这种沉降的沉淀物中，再搅拌5分钟。再使这种沉淀物再沉降约1小时20分钟。分离并弃去这种上清液(250ml)。然后将250ml甲醇添加到这种沉降的沉淀物中，混合物搅拌5分钟。悬浮液中的沉淀物然后用3号烧结玻璃过滤器过滤。得到的滤饼再用100ml甲醇洗涤。淡黄色湿固体经脱水后在减压(6kPa)与温度约40℃下干燥。干燥18小时后，得到2.5lg在硅藻土(5g)中的解聚肝素钠盐。其产率是64％。
皂化作用 将2.5g(0.0038mol)前面得到的在硅藻土(5g)中的粗制解聚肝素钠盐和17ml水放到50ml三角烧瓶中。这种悬浮液用3号烧结玻璃过滤器过滤，再用水漂洗两次，每次5ml。将得到的滤液装入150ml三角烧瓶中。在磁搅拌与温度约5℃下加入0.4ml(0.004mol)30％氢氧化钠溶液。加完后，该混合物搅拌2小时。这种溶液用1N HCl进行中和，再加入3g氯化钠。溶解后，将21ml甲醇添加到反应介质中。搅拌15分钟后，加入44ml甲醇，接着搅拌1小时。这时停止搅拌，使这种悬浮液在温度约5℃下沉降45分钟。然后分离并弃去上清液(90ml)。将90ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。使这种沉淀物再沉降约20分钟。分离并弃去上清液(80ml)。往沉降沉淀物添加80ml甲醇，再搅拌5分钟。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。得到的滤饼再用50ml甲醇洗涤。这种湿固体经脱水后在减压(6kPa)与温度约40℃下干燥。干燥18小时后，得到1.31g粗制解聚肝素(钠盐)。产率是66％。
纯化 将1.3g前面得到的粗制解聚肝素和13ml蒸馏水装入50ml三角烧瓶中。这种混合物在磁搅拌下升温到40℃。加入1N氢氧化钠将其pH调节到9.7±0.1。反应介质使用0.45μm膜进行过滤，再添加0.07ml 30％过氧化氢水溶液。在温度约20℃下搅拌约2小时，然后该混合物添加1N HCl进行中和，接着加入2g氯化钠。该溶液然后用0.45μm膜过滤，再倒入14ml甲醇。该溶液然后冷却到10℃，搅拌约15分钟。然后添加36ml甲醇，接着搅拌1小时。这时停止搅拌，使这种悬浮液倾析约15分钟。然后分离并弃去上清液(50ml)。将50ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。使沉淀物再沉降约25分钟。分离并弃去上清液(50ml)。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤悬浮液中的沉淀物。得到的白色滤饼再用50ml甲醇洗涤。这种湿固体经脱水后，在减压(6kPa)与温度约40℃下干燥。干燥18小时后，得到1.13g纯解聚肝素(钠盐)。其产率是87％。
如此得到的解聚肝素特征如下 平均分子量2600道尔顿 抗Xa活性177IU/mg 抗IIa活性1.5IU/mg 抗Xa活性/抗IIa活性比118 实施例2 解聚作用并转化成钠盐(0.2％水) 将70ml二氯甲烷装入三角烧瓶A中。在搅拌下与在氮气压力下，缓慢加入如实施例A中描述得到的10g(0.006mol)肝素苄酯(酯化度75％，苄乙铵盐)。将反应介质的水含量调节到0.2％。完全溶解后，添加1.75ml(0.006mol)2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1，3-二甲基全氢-1，2，3-二氮杂磷杂环己烯。这种混合物在温度约20℃下搅拌24小时。在这个时间，在三角烧瓶B中制备30g无水乙酸钠在300ml甲醇中的溶液。完全溶解后，将5g Hyflo supercel硅藻土添加到该溶液中。在磁搅拌与温度约5℃下，将三角烧瓶A中的反应混合物在1分30秒内倒入上述乙酸钠甲醇溶液中。在搅拌5分钟后，使这种悬浮液倾析2小时。分离并弃去上清液的清澈部分(220ml)。将220ml甲醇添加到沉降沉淀物中，搅拌5分钟。使这种沉淀物再沉降约2时。分离并弃去上清液(230ml)。将230ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤悬浮液中的沉淀物。得到的滤饼然后用150ml甲醇洗涤。淡黄色湿固体经脱水后在减压(6kPa)与温度约40℃下干燥。干燥18小时后，得到2.63g在硅藻土(5g)中的粗制解聚肝素。其产率是67％。
皂化作用 将2.5g(0.0038mol)前面得到的在硅藻土(5g)中的粗制解聚肝素钠盐和18ml水放到50ml三角烧瓶中。这种悬浮液用3号烧结玻璃过滤器过滤，再用水漂洗两次，每次5ml。将得到的滤液装入150ml三角烧瓶中。在磁搅拌与温度约5℃下加入0.4ml(0.004mol)30％氢氧化钠溶液。加完后，该混合物搅拌2小时。这种溶液用1N HCl进行中和，再加入2g氯化钠。将14ml甲醇添加到反应介质中。搅拌15分钟后，加入36ml甲醇，接着搅拌1小时。这时停止搅拌，使这种悬浮液在温度约5℃下沉降45分钟。然后分离并弃去上清液(80ml)。将80ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。往沉降沉淀物添加80ml甲醇，再搅拌5分钟。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。得到的滤饼再用50ml甲醇洗涤。这种湿固体经脱水后在减压(6kPa)与温度约40℃下干燥。干燥48小时后，得到2.3g粗制解聚肝素(钠盐)。产率是65％。
纯化 将1.4g前面得到的粗制解聚肝素和15ml蒸馏水装入50ml三角烧瓶中。这种混合物在磁搅拌下升温到40℃。加入1N氢氧化钠将其pH调节到9.7±0.1。反应介质使用0.45μm膜进行过滤，再添加0.07ml 30％过氧化氢水溶液。在温度约40℃下搅拌约2小时，然后该混合物冷却到温度20℃，再添加1N HCl进行中和。往该反应介质加入2g氯化钠。该溶液然后用0.45μm膜过滤，再倒入14ml甲醇。该溶液然后冷却到10℃，搅拌约15分钟。这时添加36ml甲醇，接着搅拌1小时。这时停止搅拌，使这种悬浮液倾析约15分钟。然后分离并弃去上清液(40ml)。将40ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。使沉淀物再沉降约20分钟。分离并弃去上清液(50ml)。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤悬浮液中的沉淀物。得到的白色滤饼再用50ml甲醇洗涤。这种湿固体经脱水后，在减压(6kPa)与温度约40℃下干燥。干燥18小时后，得到1.2g纯解聚肝素(钠盐)。其产率是86％。
如此得到的解聚肝素特征如下 平均分子量2650道尔顿 抗Xa活性161IU/mg 抗IIa活性1.4IU/mg 抗Xa活性/抗IIa活性比115 实施例3 解聚作用并转化成钠盐(0.3％水) 将70ml二氯甲烷装入三角烧瓶A中。在搅拌下与在氮气压力下，加入如实施例A中描述得到的10g(0.006mol)肝素苄酯(酯化度75％，苄乙铵盐)。将反应介质的水含量调节到0.3％。完全溶解后，添加1.75ml(0.006mol)2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1，3-二甲基全氢-1，2，3-二氮杂磷杂环己烯。这种混合物在温度约20℃下搅拌24小时。在这个时间，在三角烧瓶B中制备30g无水乙酸钠在300ml甲醇中的溶液。完全溶解后，将5g Hyflo supercel硅藻土添加到该溶液中。在磁搅拌与温度约5℃下，将三角烧瓶A中的反应混合物在1分30秒内倒入上述乙酸钠甲醇溶液中。在搅拌5分钟后，使这种悬浮液倾析1小时10分钟。分离并弃去上清液的清澈部分(220ml)。将220ml甲醇添加到沉降沉淀物中，搅拌5分钟。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤悬浮液中的沉淀物。得到的滤饼然后用100ml甲醇洗涤。湿固体经脱水后在减压(6kPa)与温度约40℃下干燥。干燥18小时后，得到2.57g在硅藻土(5g)中的粗制解聚肝素钠盐。其产率是66％。
皂化作用 将2.5g(0.0038mol)前面得到的在硅藻土(5g)中的粗制解聚肝素钠盐和18ml水放到50ml三角烧瓶中。这种悬浮液用3号烧结玻璃过滤器过滤，再用水漂洗两次，每次5ml。将得到的滤液装入150ml三角烧瓶中。在磁搅拌与温度约5℃下加入0.4ml(0.004mol)30％氢氧化钠溶液。加完后，该混合物搅拌2小时。这种溶液用1N HCl进行中和，再加入3g氯化钠。将15ml甲醇添加到反应介质中。搅拌15分钟后，加入36ml甲醇，接着搅拌1小时。这时停止搅拌，使这种悬浮液倾析1小时。然后分离并弃去上清液(70ml)。将70ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。得到的滤饼再用50ml甲醇洗涤。这种湿固体经脱水后在减压(6kPa)与温度40℃下干燥。干燥48小时后，得到1.42g粗制解聚肝素(钠盐)。产率是62％。
纯化 将1.4g前面得到的粗制解聚肝素和14ml蒸馏水装入50ml三角烧瓶中。这种混合物在磁搅拌下升温到40℃。加入1N氢氧化钠将其pH调节到9.7±0.1。反应介质使用0.45μm膜进行过滤，再添加0.07ml 30％过氧化氢水溶液。在温度约20℃下搅拌约2小时后，往该混合物添加1N HCl进行中和，然后加入2g氯化钠。溶解后，溶液再用0.45μm膜过滤，再倒入14ml甲醇。该滤液然后冷却到10℃，搅拌15分钟。这时添加36ml甲醇，接着搅拌1小时。这时停止搅拌，使这种悬浮液倾析约40分钟。然后分离并弃去上清液(50ml)。将50ml甲醇添加到这种沉降沉淀物(浆体状)中，搅拌5分钟。使沉淀物再沉降约25分钟。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤悬浮液中的沉淀物。得到的白色滤饼再用50ml甲醇洗涤。这种湿固体经脱水后，在减压(6kPa)与温度约40℃下干燥。干燥18小时后，得到1.24g纯解聚肝素(钠盐)。其产率是89％。
如此得到的解聚肝素特征如下 平均分子量2400道尔顿 抗Xa活性132IU/mg 抗IIa活性1.4I/mg 抗Xa活性/抗IIa活性比94 实施例4 解聚作用并转化成钠盐(0.4％水) 将70ml二氯甲烷装入三角烧瓶A中。在搅拌下，缓慢加入如实施例A中描述得到的10g(0.006mol)肝素苄酯(酯化度75％，苄乙铵盐)。将反应介质的水含量调节到0.4％。该溶液在氮气下于30℃下加热。完全溶解后，再降到温度约20℃，然后添加1.75ml(0.006mol)2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1，3-二甲基全氢-1，2，3-二氮杂磷杂环己烯。这种混合物在温度约20℃下搅拌24小时。在这个时间，在三角烧瓶B中制备30g无水乙酸钠在300ml甲醇中的溶液。完全溶解后，将5g Hyflo supercel硅藻土添加到该溶液中。在磁搅拌与温度约5℃下，将三角烧瓶A中的反应混合物在1分30秒内倒入上述乙酸钠甲醇溶液中。在搅拌5分钟后，使这种悬浮液倾析2小时。分离并弃去上清液的清澈部分(80ml)。将80ml甲醇添加到沉降沉淀物中，搅拌5分钟。将沉淀物再沉降约1小时。分离上清液并弃去(80ml)。将80ml甲醇添加到沉降沉淀物中，搅拌5分钟。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤悬浮液中的沉淀物。得到的滤饼然后用150ml甲醇洗涤。淡黄色湿固体经脱水后在减压(6kPa)与温度约40℃下干燥。干燥18小时后，得到3.25g在硅藻土(5g)中的粗制解聚肝素钠盐。产率是83％。
皂化作用 将3.1g(0.0018mol)前面得到的在硅藻土(10g)中的粗制解聚肝素钠盐和21ml水放到50ml三角烧瓶中。这种悬浮液用3号烧结玻璃过滤器过滤，再用水漂洗两次，每次6ml。将得到的滤液装入150ml三角烧瓶中。在磁搅拌与温度约5℃下加入0.7ml(0.007mol)30％氢氧化钠溶液。加完后，该混合物搅拌2小时。这种溶液用1N HCl进行中和，再加入4g氯化钠。将28ml甲醇添加到反应介质中。搅拌15分钟后，加入72ml甲醇，接着搅拌1小时。这时停止搅拌，使这种悬浮液倾析1小时。然后分离并弃去上清液(90ml)。将90ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。再使这种沉淀物再沉降约20分钟。然后分离并弃去上清液(90ml)。将90ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。用3号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。得到的滤饼再用50ml甲醇洗涤。这种湿固体经脱水后在减压(6kPa)与温度约40℃下干燥。干燥48小时后，得到1.9g粗制解聚肝素(钠盐)。产率是67％。
纯化 将1.9g前面得到的粗制解聚肝素和19ml蒸馏水装入50ml三角烧瓶中。这种混合物在磁搅拌下升温到40℃。加入1N氢氧化钠将其pH调节到9.7±0.1。反应介质使用0.45μm膜进行过滤，再添加0.1ml 30％过氧化氢水溶液。在温度约20℃下搅拌约2小时后，往该混合物添加1N HCl进行中和，然后加入2g氯化钠。这种溶液用0.45μm膜过滤，再倒入14ml甲醇，搅拌15分钟。这时添加36ml甲醇，接着搅拌1小时。这时停止搅拌，使这种悬浮液倾析15分钟。然后分离并弃去上清液(40ml)。将40ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。使沉淀物再沉降约20分钟。分离并弃去上清液(50ml)。将500ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。使沉淀物再沉降约20分钟。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤沉淀物。得到的白色滤饼再用50ml甲醇洗涤。这种湿固体经脱水后，在减压(6kPa)与温度约40℃下干燥。干燥72小时后，得到1.56g纯解聚肝素(钠盐)。其产率是82％。
如此得到的解聚肝素特征如下 平均分子量2350道尔顿 抗Xa活性122IU/mg 抗IIa活性1.3IU/mg 抗Xa活性/抗IIa活性比94 实施例5 解聚作用并转化成钠盐(0.57％水) 将140ml二氯甲烷装入三角烧瓶A中。在搅拌下，缓慢加入如实施例A中描述得到的20g(0.019mol)肝素苄酯(酯化度75％，苄乙铵盐)。将反应介质的水含量调节到0.57％。完全溶解后，添加3.5ml(0.012mol)2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1，3-二甲基全氢-1，2，3-二氮杂磷杂环己烯。这种混合物在温度约20℃下搅拌24小时。在这个时间，在三角烧瓶B中制备60g无水乙酸钠在600ml甲醇中的溶液。完全溶解后，将10g Hyflo supercel硅藻土添加到该溶液中。在磁搅拌与温度约4℃下，将三角烧瓶A中的反应混合物在1分30秒内倒入上述乙酸钠甲醇溶液中。在搅拌5分钟后，使这种悬浮液倾析30分钟。分离并弃去上清液的清澈部分(400ml)。将400ml甲醇添加到沉降沉淀物中，搅拌5分钟。使这种沉淀物再沉降约1小时。分离并弃去上清液(420ml)。将420ml甲醇添加到沉降沉淀物中，搅拌5分钟。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤悬浮液。得到的滤饼然后用200ml甲醇洗涤。淡黄色湿固体经脱水后在减压(6kPa)与温度约40℃下干燥。干燥18小时后，得到6.66g在硅藻土(10g)中的粗制解聚肝素钠盐。产率是85％。
皂化作用 将6.66g(0.0101mol)前面得到的在硅藻土(10g)中的粗制解聚肝素钠盐和47ml水放到50ml三角烧瓶中。这种悬浮液用3号烧结玻璃过滤器过滤，再用水漂洗两次，每次15ml。将得到的滤液装入150ml三角烧瓶中。在磁搅拌与温度约5℃下加入1.1ml(0.011mol)30％氢氧化钠溶液。加完后，该混合物搅拌2小时。这种溶液用1N HCl进行中和，再加入9.5g氯化钠。将66ml甲醇添加到反应介质中。搅拌15分钟后，加入171ml甲醇，接着搅拌1小时。这时停止搅拌，使这种悬浮液在温度约5℃下倾析3/4小时。然后分离并弃去上清液(160ml)。将160ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。再使这种沉淀物再沉降约20分钟。然后分离并弃去上清液(180ml)。将180ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。用3号烧结玻璃过滤器过滤悬浮液。得到的滤饼再用甲醇洗涤两次，每次50ml。这种湿固体经脱水后在减压(6kPa)与温度约40℃下干燥。干燥18小时后，得到4.53g粗制解聚肝素(钠盐)。产率是74％。
纯化 将4.53g前面得到的粗制解聚肝素和45ml蒸馏水装入100ml三角烧瓶中。这种混合物在磁搅拌下升温到40℃。加入1N氢氧化钠将其pH调节到9.7±0.1。反应介质使用0.45μm膜进行过滤，再添加0.25ml 30％过氧化氢水溶液。在温度约20℃下搅拌约2小时后，往该混合物添加1N HCl进行中和，然后加入5.5g氯化钠。这种溶液用0.45μm膜过滤，再在温度约10℃下倒入38ml甲醇。该溶液然后升到20℃，搅拌15分钟。这时添加100ml甲醇，接着搅拌1小时。这时停止搅拌，使这种悬浮液倾析20分钟。然后分离并弃去上清液(90ml)。将90ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。使沉淀物再沉降约25分钟。分离并弃去上清液(100ml)。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。得到的白色滤饼再用50ml甲醇洗涤。这种湿固体经脱水后，在减压(6kPa)与温度约40℃下干燥。干燥18小时后，得到3.7g纯解聚肝素(钠盐)。其产率是82％。
如此得到的解聚肝素特征如下 平均分子量2200道尔顿 抗Xa活性120IU/mg 抗IIa活生1.4IU/mg 抗Xa活性/抗IIa活性比86 实施例6 解聚作用并转化成钠盐(1.8％水) 将140ml二氯甲烷装入三角烧瓶A中。在搅拌下，缓慢加入如实施例A中描述得到的20g(0.019mol)肝素苄酯(酯化度75％，苄乙铵盐)。将反应介质的水含量调节到1.8％。完全溶解后，添加3.5ml(0.012mol)2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1，3-二甲基全氢-1，2，3-二氮杂磷杂环己烯。这种混合物在温度约20℃下搅拌24小时。在这个时间，在三角烧瓶B中制备60g无水乙酸钠在600ml甲醇中的溶液。完全溶解后，将10g Hyflo supercel硅藻土添加到该溶液中。在磁搅拌与温度约4℃下，将三角烧瓶A中的反应混合物在1分30秒内倒入上述乙酸钠甲醇溶液中。在搅拌5分钟后，使这种悬浮液倾析30分钟。分离并弃去上清液的清澈部分(400ml)。将400ml甲醇添加到沉降沉淀物中，搅拌5分钟。使这种沉淀物再沉降约1小时。分离并弃去上清液(420ml)。将420ml甲醇添加到沉降沉淀物中，搅拌5分钟。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。得到的滤饼然后用200ml甲醇洗涤。淡黄色湿固体经脱水后在减压(6kPa)与温度约50℃下干燥。干燥18小时后，得到7.54g在硅藻土(10g)中的粗制解聚肝素钠盐。产率是96％。
皂化作用 将7.54g(0.0101mol)前面得到的在硅藻土(10g)中的粗制解聚肝素钠盐和53ml水放到50ml三角烧瓶中。这种悬浮液用3号烧结玻璃过滤器过滤，再用水漂洗两次，每次15ml。将得到的滤液装入150ml三角烧瓶中。在磁搅拌与温度约4℃下加入1.25ml(0.012mol)30％氢氧化钠溶液。加完后，该混合物搅拌2小时。这种溶液用1N HCl进行中和，再加入10.5g氯化钠。将70ml甲醇添加到反应介质中。搅拌15分钟后，加入190ml甲醇，接着搅拌1小时。这时停止搅拌，使这种悬浮液在温度约4℃下沉降3/4小时。然后分离并弃去上清液(180ml)。将180ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。再使这种沉淀物再沉降约20分钟。然后分离并弃去上清液(180ml)。将180ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。用3号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。得到的滤饼再用甲醇洗涤两次，每次50ml。这种湿固体经脱水后在减压(6kPa)与温度50℃下干燥。干燥18小时后，得到5.53g粗制解聚肝素(钠盐)。产率是80％。
纯化 将5.53g前面得到的粗制解聚肝素和55ml蒸馏水装入100ml三角烧瓶中。这种混合物在磁搅拌下升温到40℃。加入1N氢氧化钠将其pH调节到9.7±0.1。反应介质使用0.45μm膜进行过滤，再添加0.31ml 30％过氧化氢水溶液。在温度约20℃下搅拌约2小时后，往该混合物添加1N HCl进行中和，然后加入7g氯化钠。这种溶液用0.45μm膜过滤，再在温度约10℃下倒入49ml甲醇。该溶液然后升到20℃，搅拌15分钟。这时添加126ml甲醇，接着搅拌1小时。这时停止搅拌，使这种悬浮液沉降20分钟。然后分离并弃去上清液(105ml)。将105ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。使沉淀物再沉降约25分钟。分离并弃去上清液(110ml)。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。得到的白色滤饼再用50ml甲醇洗涤。这种湿固体经脱水后，在减压(6kPa)与温度约55℃下干燥。干燥18小时后，得到4.53g纯解聚肝素(钠盐)。其产率是82％。
如此得到的解聚肝素特征如下 平均分子量2600道尔顿 抗Xa活性105IU/mg 抗IIa活性3.1IU/mg 抗Xa活性/抗IIa活性比34 实施例7 解聚作用并转化成钠盐(2.5％水) 将140ml二氯甲烷装入三角烧瓶A中。在搅拌下，缓慢加入如实施例A中描述得到的20g(0.019mol)肝素苄酯(酯化度75％，苄乙铵盐)。将反应介质的水含量调节到2.5％。完全溶解后，添加3.5ml(0.012mol)2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1，3-二甲基全氢-1，2，3-二氮杂磷杂环己烯。这种混合物在温度约20℃下搅拌24小时。在这个时间，在三角烧瓶B中制备60g无水乙酸钠在600ml甲醇中的溶液。完全溶解后，将10g Hyflo supercel硅藻土添加到该溶液中。在磁搅拌与温度约4℃下，将三角烧瓶A中的反应混合物在1分30秒内倒入上述乙酸钠甲醇溶液中。在搅拌5分钟后，使这种悬浮液倾析1小时。分离并弃去上清液的清澈部分(400ml)。将400ml甲醇添加到沉降沉淀物中，搅拌5分钟。使这种沉淀物再沉降约30分钟。分离并弃去上清液(400ml)。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。得到的滤饼然后用200ml甲醇洗涤。淡黄色湿固体经脱水后在减压(6kPa)与温度约50℃下干燥。干燥18小时后，得到7.78g在硅藻土(10g)中的粗制解聚肝素钠盐。产率是99.6％。
皂化作用 将7.78g(0.0119mol)前面得到的在硅藻土(10g)中的粗制解聚肝素钠盐和79ml水放到50ml三角烧瓶中。这种悬浮液用3号烧结玻璃过滤器过滤，再用水漂洗两次，每次15ml。将得到的滤液装入150ml三角烧瓶中。在磁搅拌与温度约4℃下加入1.3ml(0.012mol)30％氢氧化钠溶液。加完后，该混合物搅拌2小时。这种溶液用1N HCl进行中和，再加入10g氯化钠。将60ml甲醇添加到反应介质中。搅拌15分钟后，加入190ml甲醇，接着搅拌1小时。这时停止搅拌，使这种悬浮液在温度约4℃下沉降3/4小时。然后分离并弃去上清液(180ml)。将180ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。再使这种沉淀物再沉降约20分钟。然后分离并弃去上清液(180ml)。将180ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。用3号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。得到的滤饼再用甲醇洗涤两次，每次50ml。这种湿固体经脱水后在减压(6kPa)与温度50℃下干燥。干燥18小时后，得到5.87g粗制解聚肝素(钠盐)。产率是82％。
纯化 将5.87g前面得到的粗制解聚肝素和59ml蒸馏水装入100ml三角烧瓶中。这种混合物在磁搅拌下升温到40℃。加入1N氢氧化钠将其pH调节到9.7±0.1。反应介质使用0.45μm膜进行过滤，再添加0.34ml 30％过氧化氢水溶液。在温度约20℃下搅拌约2小时后，往该混合物添加1N HCl进行中和，然后加入7g氯化钠。这种溶液用0.45μm膜过滤，再在温度约10℃下倒入49ml甲醇。该溶液然后升到20℃，搅拌15分钟。这时添加126ml甲醇，接着搅拌1小时。这时停止搅拌，使这种悬浮液沉降20分钟。然后分离并弃去上清液(105ml)。将105ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。使沉淀物再沉降约25分钟。分离并弃去上清液(110ml)。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。得到的白色滤饼再用50ml甲醇洗涤。这种湿固体经脱水后，在减压(6kPa)与温度约55℃下干燥。干燥18小时后，得到5.21g纯解聚肝素(钠盐)。其产率是89％。
如此得到的解聚肝素特征如下 平均分子量3550道尔顿 抗Xa活性99IU/mg 抗IIa活性13.4IU/mg 抗Xa活性/抗IIa活性比7.4 实施例8 解聚作用并转化成钠盐(0.5当量碱) 将140ml二氯甲烷装入三角烧瓶A中。在搅拌下，缓慢加入如实施例A中描述得到的20g(0.019mol)肝素苄酯(酯化度75％，苄乙铵盐)。在温度约30℃下完全溶解，再降到温度约20℃后，添加1.75ml(0.006mol)2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1，3-二甲基全氢-1，2，3-二氮杂磷杂环己烯。这种混合物在温度约20℃下搅拌24小时。在这个时间，在三角烧瓶B中制备60g无水乙酸钠在600ml甲醇中的溶液。在磁搅拌与温度约4℃下，将三角烧瓶A中的反应混合物倒入上述乙酸钠甲醇溶液中。在搅拌1小时后，使这种悬浮液倾析2小时。分离并弃去上清液的清澈部分(420ml)。将420ml甲醇添加到沉降沉淀物中，搅拌30分钟。使这种沉淀物再沉降约18小时。分离并弃去上清液(400ml)。将400ml甲醇添加到沉降沉淀物中，搅拌30分钟。分离并弃去上清液的清澈部分(400ml)。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。得到的滤饼然后用甲醇洗涤两次，每次100ml。淡黄色湿固体经脱水后在减压(6kPa)与温度约60℃下干燥。干燥后，得到5.7g粗制解聚肝素钠盐。产率是73％。
皂化作用 将5.7g(0.0086mol)前面得到的粗制解聚肝素钠盐和53ml水放到100ml三角烧瓶中。在磁搅拌与温度约4℃下加入0.93ml(0.009mol)30％氢氧化钠溶液。加完后，该混合物搅拌2小时。这种溶液用1N HCl进行中和，再加入6g氯化钠。将42ml甲醇添加到反应介质中。搅拌15分钟后，加入108ml甲醇，接着搅拌30分钟。这时停止搅拌，使这种悬浮液在温度约4℃下沉降30分钟。然后分离并弃去上清液(180ml)。将180ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。再使这种沉淀物再沉降约30分钟。然后分离并弃去上清液(170ml)。将170ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌30分钟。用3号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。得到的滤饼再用甲醇洗涤两次，每次30ml。这种湿固体经脱水后在减压与温度60℃下干燥。干燥后，得到3.5g粗制解聚肝素(钠盐)。产率是67.4％。
纯化 将3.5g前面得到的粗制解聚肝素和35ml蒸馏水装入100ml三角烧瓶中。这种混合物在磁搅拌下升温到40℃。加入1N氢氧化钠将其pH调节到9.6±0.1。反应介质使用0.45μm膜进行过滤，再添加0.18ml 30％过氧化氢水溶液。在温度约20℃下搅拌约2小时后，往该混合物添加1N HCl进行中和，然后加入3.6g氯化钠。这种溶液用0.45μm膜过滤，再在温度约10℃下倒入27ml甲醇。该溶液然后升到20℃，搅拌15分钟。这时添加65ml甲醇，接着搅拌30分钟。这时停止搅拌，使这种悬浮液沉降30分钟。然后分离并弃去上清液(80ml)。将80ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌30分钟。使沉淀物再沉降约30分钟。分离并弃去上清液(70ml)。将70ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌30分钟。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。得到的白色滤饼再用甲醇洗涤两次，每次30ml。这种湿固体经脱水后，在减压与温度约60℃下干燥。干燥后，得到2.8g纯解聚肝素(钠盐)。其产率是80％。
如此得到的解聚肝素特征如下 平均分子量2900道尔顿 抗Xa活性146.1IU/mg 抗IIa活性5.1IU/mg 抗Xa活性/抗IIa活性比28.6 实施例9 解聚作用并转化成钠盐(0.6当量碱) 将280ml二氯甲烷装入三颈瓶A中。在搅拌下，缓慢加入如实施例A中描述得到的40g(0.024mol)肝素苄酯(酯化度75％，苄乙铵盐)。在温度约30℃下完全溶解，再降到温度约20℃后，添加4.2ml(0.014mol)2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1，3-二甲基全氢-1，2，3-二氮杂磷杂环己烯。这种混合物在温度约20℃下搅拌24小时。在这个时间，在三角烧瓶B中制备60g无水乙酸钠在600ml甲醇中的溶液。在磁搅拌与温度约4℃下，将三颈瓶A中的一半反应混合物倒入上述乙酸钠甲醇溶液中。在搅拌1小时后，使这种悬浮液倾析。分离并弃去上清液的清澈部分(310ml)。将310ml甲醇添加到沉降沉淀物中，搅拌1小时。使这种沉淀物再沉降约18小时。分离并弃去上清液(400ml)。将400ml甲醇添加到沉降沉淀物中，搅拌1小时。分离并弃去上清液(300ml)。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。得到的滤饼然后用甲醇洗涤两次，每次100ml。淡黄色湿固体经脱水后在减压与温度约60℃下干燥。干燥后，得到6g粗制解聚肝素钠盐。产率是77％。
皂化作用 将6g(0.0091mol)前面得到的粗制解聚肝素钠盐和56ml水放到250ml三角烧瓶中。在磁搅拌与温度约4℃下加入1ml(0.010mol)30％氢氧化钠溶液。加完后，该混合物搅拌2小时。这种溶液用1N HCl进行中和，再加入6.4g氯化钠。将45ml甲醇添加到反应介质中。搅拌15分钟后，加入115ml甲醇，接着搅拌30分钟。这时停止搅拌，使这种悬浮液在温度约4℃下沉降30分钟。然后分离并弃去上清液(170ml)。将170ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌30分钟。再使这种沉淀物再沉降约30分钟。然后分离并弃去上清液(140ml)。将140ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌30分钟。用3号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。得到的滤饼再用甲醇洗涤两次，每次30ml。这种湿固体经脱水后在减压与温度60℃下干燥。干燥后，得到3.6g粗制解聚肝素(钠盐)。产率是65.3％。
纯化 将3.5g前面得到的粗制解聚肝素和35ml蒸馏水装入100ml三角烧瓶中。这种混合物在磁搅拌下升温到40℃。加入1N氢氧化钠将其pH调节到9.6±0.1。反应介质使用0.45μm膜进行过滤，再添加0.18ml 30％过氧化氢水溶液。在温度约20℃下搅拌约2小时后，往该混合物添加1N HCl进行中和，然后加入3.5g氯化钠。这种溶液用0.45μm膜过滤，再在温度约10℃下倒入25ml甲醇。该溶液然后升到20℃，搅拌15分钟。这时添加63ml甲醇，接着搅拌30分钟。这时停止搅拌，使这种悬浮液沉降30分钟。然后分离并弃去上清液(70ml)。将70ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌30分钟。使沉淀物再沉降几分钟。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。得到的白色滤饼再用甲醇洗涤两次，每次30ml。这种湿固体经脱水后，在减压与温度约60℃下干燥。干燥后，得到2.5g纯解聚肝素(钠盐)。其产率是71.4％。
如此得到的解聚肝素特征如下 平均分子量2600道尔顿 抗Xa活性150.5IU/mg 抗IIa活性3.2IU/mg 抗Xa活性/抗IIa活性比47 实施例10 解聚作用并转化成钠盐(0.8当量碱) 将70ml二氯甲烷装入三颈瓶A中。在搅拌下，缓慢加入如实施例A中描述得到的10g(0.006mol)肝素苄酯(酯化度75％，苄乙铵盐)。在温度约30℃下完全溶解，再降到温度约20℃后，添加1.38ml(0.004mol)2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1，3-二甲基全氢-1，2，3-二氮杂磷杂环己烯。这种混合物在温度约20℃下搅拌24小时。在这个时间，在三角烧瓶B中制备30g无水乙酸钠在300ml甲醇中的溶液。在磁搅拌与温度约4℃下，将三颈瓶A中的反应混合物在1分钟15秒内倒入上述乙酸钠甲醇溶液中。在搅拌5分钟后，使这种悬浮液倾析1小时。分离并弃去上清液的清澈部分(190ml)。将190ml甲醇添加到沉降沉淀物中，搅拌5分钟。使这种沉淀物再沉降约30分钟。分离并弃去上清液(190ml)。将190ml甲醇添加到沉降沉淀物中，搅拌30分钟。分离并弃去上清液(190ml)。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。得到的滤饼然后用150ml甲醇洗涤。淡黄色湿固体经脱水后在减压(6kPa)与温度约40℃下干燥。干燥18小时后，得到3.05g粗制解聚肝素钠盐。产率是80％。
皂化作用 将3.05g(0.0048mol)前面得到的粗制解聚肝素钠盐和21ml水放到100ml三角烧瓶中。该溶液用3号烧结玻璃过滤器过滤，用水漂洗两次，每次6ml。得到的滤液装入150ml三角烧瓶中。在磁搅拌与温度约4℃下加入0.6ml(0.006mol)30％氢氧化钠溶液。加完后，该混合物搅拌2小时。这种溶液用1N HCl进行中和，再加入4g氯化钠。将28ml甲醇添加到反应介质中。搅拌15分钟后，加入72ml甲醇，接着搅拌1小时。这时停止搅拌，使这种悬浮液在温度约4℃下沉降30分钟。然后分离并弃去上清液(80ml)。将80ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。再使这种沉淀物再沉降约30分钟。然后分离并弃去上清液(80ml)。将80ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌30分钟。用3号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。得到的滤饼再用50ml甲醇洗涤。这种湿固体经脱水后在减压(6kPa)与温度40℃下干燥。干燥后，得到1.6g粗制解聚肝素(钠盐)。产率是57％。
纯化 将1.6g前面得到的粗制解聚肝素和16ml蒸馏水装入50ml三角烧瓶中。这种混合物在磁搅拌下升温到40℃。加入1N氢氧化钠将其pH调节到9.6±0.1。反应介质使用0.45μm膜进行过滤，再添加0.08ml 30％过氧化氢水溶液。在温度约20℃下搅拌约2小时后，往该混合物添加1N HCl进行中和，然后加入2g氯化钠。这种溶液用0.45μm膜过滤，再在温度约10℃下倒入14ml甲醇。该溶液然后升到20℃，搅拌15分钟。这时添加36ml甲醇，接着搅拌1小时。这时停止搅拌，使这种悬浮液沉降30分钟。然后分离并弃去上清液(50ml)。将50ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。使沉淀物再沉降约30分钟。分离并弃去上清液(50ml)。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。这种湿固体经脱水后，在减压(6kPa)与温度约40℃下干燥。干燥后，得到1.25g纯解聚肝素(钠盐)。其产率是78％。
如此得到的解聚肝素特征如下 平均分子量2400道尔顿 抗Xa活性154.3IU/mg 抗IIa活性1.6IU/mg 抗Xa活性/抗IIa活性比96.4 实施例11 解聚作用并转化成钠盐 将140ml二氯甲烷装入三颈瓶A中。在搅拌下，缓慢加入如实施例A中描述得到的20g(0.019mol)肝素苄酯(酯化度75％，苄乙铵盐)。在温度约40℃下完全溶解，再降到温度约20℃后，添加3.5ml(0.011mol)叔丁基亚氨基-三(吡咯烷-1-基)膦。这种混合物在温度约20℃下搅拌24小时。在这个时间，在三角烧瓶B中制备60g无水乙酸钠在600ml甲醇中的溶液。在完全溶解后，将10gHyflo supercel硅藻土添加到该溶液中。在磁搅拌与温度约4℃下，将三颈瓶A中的反应混合物在1分钟30秒内倒入上述乙酸钠甲醇溶液中。在搅拌5分钟后，使这种悬浮液倾析30分钟。分离并弃去上清液的清澈部分(400ml)。将400ml甲醇添加到沉降沉淀物中，搅拌5分钟。使这种沉淀物再沉降约1小时20分钟。分离并弃去上清液(250ml)。将250ml甲醇添加到沉降沉淀物中，搅拌5分钟。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。得到的滤饼然后用200ml甲醇洗涤。淡黄色湿固体经脱水后在减压(6kPa)与温度约40℃下干燥。干燥后，得到5.39g粗制解聚肝素钠盐。产率是69％。
皂化作用 将5g(0.0076mol)前面得到的粗制解聚肝素(苄酯，钠盐)和35ml水放到50ml三角烧瓶中。该溶液用3号烧结玻璃过滤器过滤，用水漂洗两次，每次10ml。得到的滤液装入250ml三角烧瓶中。在磁搅拌与温度约4℃下加入1ml(0.01mol)30％氢氧化钠溶液。加完后，该混合物搅拌2小时。这种溶液用1N HCl进行中和，再加入6g氯化钠。将42ml甲醇添加到反应介质中。搅拌15分钟后，加入104ml甲醇，接着搅拌15分钟。这时停止搅拌，使这种悬浮液在温度约4℃下沉降1小时。然后分离并弃去上清液(140ml)。将140ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。再使这种沉淀物再沉降约45分钟。然后分离并弃去上清液(160ml)。将160ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。用3号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。得到的滤饼再用100ml甲醇洗涤。这种湿固体经脱水后在减压(6kPa)与温度约40℃下干燥。干燥后，得到2.7g粗制解聚肝素(钠盐)。产率是59％。
纯化 将2.6g前面得到的粗制解聚肝素和25ml蒸馏水装入50ml三角烧瓶中。这种混合物在磁搅拌下升温到40℃。加入1N氢氧化钠将其pH调节到9.7±0.1。反应介质使用0.45μm膜进行过滤，再添加0.15ml 30％过氧化氢水溶液。在温度约20℃下搅拌约2小时后，往该混合物添加1N HCl进行中和，然后加入3g氯化钠。这种溶液用0.45μm膜过滤，再在温度约10℃下倒入21ml甲醇。该溶液然后升到20℃，搅拌15分钟。这时添加54ml甲醇，接着搅拌1小时。这时停止搅拌，使这种悬浮液沉降20分钟。然后分离并弃去上清液(50ml)。将50ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。使沉淀物再沉降约20分钟。分离并弃去上清液(50ml)。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。得到的白色滤饼再用50ml甲醇洗涤。这种湿固体经脱水后，在减压(6kPa)与温度约40℃下干燥。干燥18小时后，得到2.35g纯解聚肝素(钠盐)。其产率是90％。
如此得到的解聚肝素特征如下 平均分子量2400道尔顿 抗Xa活性167.5IU/mg 抗IIa活性1.1IU/mg 抗Xa活性/抗IIa活性比152 实施例12 解聚作用并转化成钠盐(0.05％水) 将140ml二氯甲烷装入三颈瓶A中。在搅拌下，缓慢加入如实施例A中描述得到的20g(0.019mol)肝素苄酯(酯化度75％，苄乙铵盐)。往该反应介质添加20g 4A分子筛，将水含量调节到0.05％，同时缓慢搅拌48小时。在惰性气氛下将其上清液转移到三颈瓶A中。在完全溶解后，添加3.5ml(0.012mol)2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1，3-二甲基全氢-1，2，3-二氮杂磷杂环己烯。这种混合物在温度约20℃下搅拌24小时。在这个时间，在三角烧瓶B中制备60g无水乙酸钠在600ml甲醇中的溶液。在完全溶解后，将10g Hyflo supercel硅藻土添加到该溶液中。在磁搅拌与温度约4℃下，将三颈瓶A中的反应混合物在2分钟内倒入上述乙酸钠甲醇溶液中。在搅拌5分钟后，使这种悬浮液倾析1小时。分离并弃去上清液的清澈部分(420ml)。将420ml甲醇添加到沉降沉淀物中，搅拌15分钟。使这种沉淀物再沉降约1小时。分离并弃去上清液(450ml)。将450ml甲醇添加到沉降沉淀物中，搅拌15分钟。然后用3号烧结玻璃过滤器过滤悬浮液。得到的滤饼然后用200ml甲醇洗涤。淡黄色湿固体经脱水后在减压(6kPa)与温度约50℃下干燥。干燥16小时后，得到5.36g在硅藻土(10g)中的粗制解聚肝素钠盐。产率是68.6％。
皂化作用 将5.36g(0.00817mol)前面得到的粗制解聚肝素钠盐和50ml水放到50ml三角烧瓶中。该悬浮液用3号烧结玻璃过滤器过滤，用水漂洗四次，每次15ml。得到的滤液装入150ml三角烧瓶中。在磁搅拌与温度约4℃下加入1.01ml(0.0122mol)35％氢氧化钠溶液。加完后，该混合物搅拌3小时。这种溶液用1N HCl进行中和，再加入11g氯化钠。将77ml甲醇添加到反应介质中。搅拌15分钟后，加入200ml甲醇，接着搅拌1小时。这时停止搅拌，使这种悬浮液在温度约4℃下沉降1小时。然后分离并弃去上清液(240ml)。将240ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌10分钟。再使这种沉淀物再沉降约30分钟。然后分离并弃去上清液(225ml)。将225ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌10分钟。用3号烧结玻璃过滤器过滤悬浮液。得到的滤饼再用甲醇洗涤两次，每次50ml。这种湿固体经脱水后在减压(6kPa)与温度约40℃下干燥。干燥18小时后，得到2.65g粗制解聚肝素(钠盐)。产率是53.7％。
纯化 将2.65g前面得到的粗制解聚肝素和26.5ml蒸馏水装入100ml三角烧瓶中。这种混合物在磁搅拌下升温到40℃。加入1N氢氧化钠将其pH调节到9.7±0.1。反应介质使用0.45μm膜进行过滤，再添加0.25ml 30％过氧化氢水溶液。在温度约20℃下搅拌约2小时后，往该混合物添加1N HCl进行中和，然后加入3g氯化钠。这种溶液用0.45μm膜过滤，再在温度约10℃下倒入21ml甲醇。该溶液然后升到20℃，搅拌15分钟。这时添加54ml甲醇，接着搅拌1小时。这时停止搅拌，使这种悬浮液沉降45分钟。然后分离并弃去上清液(46ml)。将46ml甲醇添加到这种沉降沉淀物中，搅拌5分钟。使沉淀物再沉降约30分钟。分离并弃去上清液(50ml)。然后用4号烧结玻璃过滤器过滤呈悬浮状的沉淀物。得到的白色滤饼再用两份甲醇洗涤，每份10ml。这种湿固体经脱水后，在减压(6kPa)与温度约50℃下干燥。干燥18小时后，得到2.363g纯解聚肝素(钠盐)。其产率是89.1％。
如此得到的解聚肝素特征如下 平均分子量2500道尔顿 抗Xa活性192IU/mg 抗IIa活性1.3IU/mg 抗Xa活性/抗IIa活性比148。
权利要求
1.一种制备下面所述低聚糖混合物的方法，在制备过程中，在一种有机介质中，在一种pKa大于20的强有机碱存在下，对肝素苄酯季铵盐进行解聚，其特征在于使用的有机碱为膦腈族碱，特别是含有水百分数小于0.6％的膦腈族碱的二氯甲烷溶液，所述硫酸化低聚糖混合物，它们具有组成肝素的多糖的一般结构，还具有下述特征
-它们的平均分子量是1500-3000道尔顿，抗Xa活性是120-200IU/mg，抗IIa活性小于10IU/mg，抗Xa活性/抗IIa活性的比大于30，
这些混合物的组分低聚糖
-含有2-26个糖单元，
-在其中一个末端有4，5-不饱和糖醛酸2-O-硫酸酯单元，
-含有下式的六糖ΔIIa-IIs-Is
并且这些低聚糖混合物呈碱金属或碱土金属盐形式。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于水含量小于0.3％，优选小于0.2％。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于肝素苄酯季铵盐是苄乙铵、鲸蜡基吡啶输或鲸蜡基三甲基铵盐。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于膦腈族碱是下式的碱
式中R1-R7是相同或不同的，它们代表含有1-6个碳原子的直链或支链烷基。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于强碱/酯的摩尔比是0.2-5，优选0.6-2。
全文摘要
本发明涉及由肝素衍生的多糖混合物，它们的平均分子量是1500-3000道尔顿，抗Xa活性/抗IIa活性的比大于30。本发明还涉及它们的制备方法和含有它们的药物组合物。
文档编号A61P7/02GK101812139SQ201010147539
公开日2010年8月25日 申请日期2003年10月8日 优先权日2002年10月10日
发明者V·比贝尔罗维科, L·格龙达尔, P·穆里耶, C·维斯科夫 申请人:安万特医药股份有限公司