专利名称：一种紫锥菊提取物散剂及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明属于兽用天然药物制剂领域，具体地说，涉及一种紫锥菊提取物散剂及其制备方法和应用。
背景技术：
动物机体的免疫预防机能和动物机体的免疫系统直接影响着动物的生产性能，维护动物机体正常的免疫预防功能，是使动物达到正常生产水平或发挥潜在最佳生产性能的前提。免疫增强剂的研究进展也是免疫生物学，中药免疫药理学，微生物学，分子生物学，动物营养学，动物生产学和人类健康学相互融合促进的过程，代表着药物开发的发展趋势，一旦养殖业不再像今天这样顾及抗生素的存在所带来的报酬，抗生素将完全被新剂型所取代。特别是中药及天然药物提取物的免疫增强抗病制剂，在“回归自然”“绿色消费”成为时尚的今天，使天然植物药物理所当然地成为现代医疗保健的良好选择，且天然植物药物提取物的免疫增强抗病制剂具有比化学药物独特的优势调节机体免疫功能，防病治病效果显著；毒副作用小，不会产生抗药性。
紫锥菊属(EchinaceaMoenck.)为原产于美洲的一类菊科植物，也称“松果菊”，是西方历史中最为悠久的植物药之一，也是闻名世界的“免疫”植物，具有突出的免疫促进和抗感染作用。该属植物共有8种及数个变种，其中已开发为药品的主要为紫锥菊(紫松果菊)、狭叶紫锥菊(松果菊)及白松果菊三种。该属植物的主要成分为咖啡酸衍生物、烷基酰胺类化合物、多糖和糖蛋白、精油、多炔化合物、黄酮类化合物、吡咯里西啶类生物碱等，其中咖啡酸衍生物、烷基酰胺类化合物、多糖和糖蛋白是其免疫增强作用的主要成分，能够活化机体的免疫反应，增强机体的特异性和非特异性免疫功能。多年以前，我国已将该植物引种成功，且研究结果表明，引种紫锥菊与原产地紫锥菊相比，其主要成分未发生明显变化，预示着该植物可以作为我国一种新的药用资源。
传统散剂是将药材直接粉碎为粗粉制成，存在给药量大，起效慢，生物利用度低，药物资源浪费较严重等缺点，而口服液存在稳定性差，运输、保存不便等缺陷。此外，紫锥菊直接粉碎制成的散剂容易吸湿结块，不便于保存和应用。
发明内容
本发明提供了一种紫锥菊提取物散剂及其制备方法和应用，可以解决常规制法制得的散剂给药量大，起效慢，生物利用度低，容易吸潮结块，药物资源浪费较严重的问题。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案予以实现 一种紫锥菊提取物散剂，包含紫锥菊提取物和微粉硅胶，其重量百分比配方为紫锥菊提取物10.0%-30.0%，微粉硅胶70.0%-90.0%，所述微粉硅胶为载体材料。
进一步地，每1g紫锥菊提取物散剂由1-3g紫锥菊药材制得，且该紫锥菊提取物散剂中菊苣酸重量百分含量为0.3%-3.0%。
再进一步地，每1g紫锥菊提取物散剂含紫锥菊原药材2g，且该紫锥菊提取物散剂中菊苣酸重量百分含量为0.4%-1.5%。
更进一步地，所述紫锥菊药材是指紫花紫锥菊Echinaceapurpurea(L.)Moench.的茎、叶、花。
一种紫锥菊提取物散剂的制备方法，包括如下步骤 (1)粗粉碎用植物粉碎机将含水量≤12%的紫锥菊药材粉碎，过60-80目筛，得到紫锥菊粗粉； (2)将上述紫锥菊粗粉置于微波提取器中，按照料液比(kgL)15-130的比例添加重量百分比50-80%的乙醇溶液，浸泡20-40分钟，微波提取1-3次，每次微波提取的条件，微波频率2400-2500MHz，提取温度40-80℃，提取时间1-20分钟，过滤并收集滤液和药渣，滤液回收乙醇，减压浓缩得到紫锥菊提取物浸膏； (3)将步骤(2)中过滤得到的药渣用20-30%的乙醇溶液微波1-3次，料液比(KgL)110-120，微波频率2400-2500MHz，提取温度40-80℃，提取时间0.5-10分钟，过滤，滤液回收乙醇得到紫锥菊提取物浸膏； (4)将步骤(2)和(3)得到的浸膏混合，加2-5倍于浸膏重量的微粉硅胶吸附，50-60℃下恒温烘干至含水量小于6%，得紫锥菊提取物混合物，然后加0.5-3倍于该提取物混合物的微粉硅胶混合至每1g紫锥菊提取物散剂含紫锥菊原药材1-3g，定量称重，装袋，封口，即得紫锥菊提取物散剂。
上述的料液比(kgL)指的是紫锥菊药材粉末重量与提取溶剂体积之比。
进一步地，步骤(1)中紫锥菊的粉碎粒度范围为50-180μm。
紫锥菊提取物散剂在制备动物免疫增强剂及各种细菌性、病毒性疾病药物方面的应用。紫锥菊提取物散剂用于免疫功能低下动物，也可用于提高疫苗免疫效果，配合其他药物治疗各种细菌性、病毒性疾病方面的应用。
下面结合试验方法来说明本发明方法的合理性。紫锥菊粗粉将紫锥菊药材粉碎过80目筛，得紫锥菊粗粉(粉体粒径小于180μm)； 紫锥菊提取物散剂按照上述发明内容所述方法制备而得。
(1)休止角的测定 称取两种试验样品各50g，置于粉末流动性测定仪上测定样品休止角，平行测定3份样品，每个样品测3次，取平均值。结果见图1； 试验结果显示，不同紫锥菊提取物散剂间差异不显著(p>0.05)，显著高于紫锥菊粗粉的休止角(p<0.05)，表明紫锥菊提取物散剂的流动性较传统工艺制得的紫锥菊粗粉好。
(2)体外溶出率测定 采用《中国药典》2005年版二部XC第三法，溶出介质为微波脱气15分钟的蒸馏水(300ml)，温度为37±0.5℃，转速为100rpm，精密称取试验样品3g均匀撒布在介质液面上，当药物粉末接触溶液时开始计时，分别于10、20、40分钟取样5ml，按附注高效液相色谱法测定，计算出溶出介质中累积菊苣酸含量，并推算溶出率。
由图2可见，与普通紫锥菊散剂相比，三个检测时间段，紫锥菊提取物散剂在脱气蒸馏水中溶出菊苣酸的量更多，说明紫锥菊提取物散剂较传统散剂溶出更快。
紫锥菊散剂中菊苣酸含量测定方法 色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱ZORBAXEclipsePlusC18(4.6×250μm，5μm)；流动相甲醇0.03%磷酸(3565)；流速1.0ml/min；柱温35℃；进样量10μl；检测波长327nm。理论塔板数按菊苣酸峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备精密称取菊苣酸对照品适量，加70%甲醇制成0.128mg/ml的溶液，即得。
供试品溶液的制备精密量取本品1ml，置100ml容量瓶中，加30%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，即得。
测定方法分别依次精密吸取菊苣酸对照品初溶液、系列对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。含量以每1ml浓缩液定容后的溶液中的菊苣酸毫克数计。
(3)吸湿性测定 将底部盛有氯化钠过饱和溶液的玻璃干燥器放入25℃烘箱中恒温5h，此时干燥器内的相对湿度为75%。在已恒重的称量瓶底部放入厚约3mm的药粉，准确称重后置于氯化钠过饱和溶液的干燥器中(称量瓶盖打开)，于25℃的恒温箱中保存，定时取样称重，平行做3份，按下式计算吸湿百分率，取均值结果见图3。
由图3可见，添加微粉硅胶后，紫锥菊提取物散剂的吸湿率明显下降，且不易结块，较传统紫锥菊散剂由明显的优势。
紫锥菊提取物散剂的使用方法为 (1)预防疾病混饲每100kg饲料，添加紫锥菊提取物散剂，鸡100-300g；猪500-1500g，连用10天。
(2)治疗疾病混饲每100kg饲料，添加紫锥菊提取物散剂，鸡300-600g；猪2000-3000g，连用5天。
与现有技术相比，本发明的优点和积极效果是 (1)本发明的紫锥菊提取物散剂分别用50-80%和20-30%乙醇微波提取，有效成分提取完全，提取时间短，温度低，有效成分损耗少，提取效率高，药材利用率低，浪费少。
(2)本发明制备方法制备的紫锥菊提取物散剂，有效成分溶出速度快，溶出率高。
(3)加入微粉硅胶作为吸潮剂、抗结剂和助流剂，便于紫锥菊超微粉的保存和使用。
(4)本发明制备的紫锥菊提取物散剂增强免疫功能效果好，用于免疫功能低下动物，也可用于提高疫苗免疫效果，配合其他药物治疗各种细菌性、病毒性疾病。
图1是不同生产工艺制备得到的紫锥菊散剂的休止角测定结果比较，经统计分析，紫锥菊提取物散剂的休止角与传统工艺制备得到的紫锥菊散剂差异显著(p<0.05)； 图2是不同生产工艺制备得到的紫锥菊散剂的在不同时间菊苣酸的溶出情况比较,由此可以看出，紫锥菊提取物散剂的溶出较传统工艺制备得到的紫锥菊散剂快； 图3是不同生产工艺制备得到的紫锥菊散剂的吸湿率测定结果比较,由此可以看出，紫锥菊提取物散剂的吸湿率较传统工艺制备得到的紫锥菊散剂低。
具体实施例方式 下面结合具体实施例对本发明作进一步详细的说明。
实施例1 一种紫锥菊提取物散剂的制备方法，步骤如下 (1)将含水量≤12%的中国引种紫锥菊用植物粉碎机粉碎，过80目筛，得到紫锥菊粗粉； (2)将步骤(1)中得到的紫锥菊粗粉称取1000g至微波提取器中，按照料液比(KgL)110的比例添加70%乙醇溶液，浸泡30分钟，微波提取2次，微波频率2400-2500MHz，提取温度70℃，提取时间10分钟，过滤，滤液回收乙醇，减压浓缩得到紫锥菊提取物浸膏； (3)将步骤(2)中过滤得到的药渣用20%的乙醇溶液微波2次，料液比(KgL)110，微波频率2400-2500MHz，提取温度70℃，提取时间10分钟，过滤，滤液回收乙醇得到紫锥菊提取物浸膏； (4)将(2)和(3)得到的浸膏混合物，加5倍于浸膏混合物重量的微粉硅胶吸附，50℃下恒温烘干至含水量小于6%，加适量微粉硅胶混合制成1000g紫锥菊提取物散剂，定量称重，装袋，封口，即得。
本品为灰黄色至灰褐色粉末，按重量百分含量，生药含量为每1g散剂含紫锥菊1g。以菊苣酸为指标，经高效液相色谱法检测，本品的菊苣酸含量为0.65%。
实施例2 (1)将含水量≤12%的中国引种紫锥菊用植物粉碎机粉碎，过80目筛，得到紫锥菊粗粉； (2)将步骤(1)中得到的紫锥菊粗粉称取2000g至微波提取器中，按照料液比(KgL)18的比例添加60%乙醇溶液，浸泡30分钟，微波提取2次，微波频率2400-2500MHz，提取温度80℃，提取时间15分钟，过滤，滤液回收乙醇，减压浓缩得到紫锥菊提取物浸膏； (3)将步骤(2)中过滤得到的药渣用20-30%的乙醇溶液微波提取2次，料液比(KgL)110，微波频率2400-2500MHz，提取温度80℃，提取时间5分钟，过滤，滤液回收乙醇得到紫锥菊提取物浸膏； (4)将(2)和(3)得到的浸膏混合物，加3倍于浸膏混合物重量的微粉硅胶吸附，50-60℃下恒温烘干至含水量小于6%，加适量微粉硅胶混合制成1000g紫锥菊提取物散剂，定量称重，装袋，封口，即得。
本品为灰黄色至灰褐色粉末，按重量百分含量，生药含量为每1g散剂含紫锥菊2g。以菊苣酸为指标，经高效液相色谱法检测，本品的菊苣酸含量为1.28%。
实施例3 实施例1所得紫锥菊提取物散剂临床试验 分组及处理 将60头21日龄断奶三元杂交仔猪随机均分为3个组。紫锥菊组在日粮中添加0.5%紫锥菊提取物散剂，药物对照组添加0.02%硫酸粘杆菌素，对照组饲喂基础日粮。添加后7、14和28d每组选5头采血，侧定外周血淋巴细胞转化活性以及血清免疫球蛋白和细胞因子含量。
试验方法 分别于试验第7、14和28天从各组中随机选5头试验猪，空腹称重后前腔静脉采血5ml加肝素抗凝，用于作淋巴细胞转化试验，10ml室温放置，凝固后3000rpm离心10min，分离血清，-20℃保存，用于免疫球蛋白和细胞因子含量侧定。
外周血淋巴细胞增殖活性将肝素抗凝血用Hanks，液稀释1倍，小心加至淋巴细胞分离液上层，2000rpmin离心20min，吸取中间云雾状白细胞层，用无血清RPMll640营养液洗2次，1500rpm离心15min。台盼蓝染色计数活细胞数(95%以上)后，用含10%小牛血清和常规量双抗(终浓度均为100U/ml)的RPMll640培养液调细胞浓度为2.5×106个/ml。将淋巴细胞悬液加人96孔细胞培养板上，每孔90μl，每个样品重复8孔，其中4孔再加人10μlConA(用RPMll640培养液配制成80μg/ml的溶液)，另外4孔加人等体积培养液，于37℃、5%CO2条件下培养。培养44h后，每孔分别加人20μl MTT(浓度5mg/ml)，继续培养4h。培养结束后，每孔加入二甲基亚砜100μl，将细胞板置于微孔板振荡器上震荡至沉淀完全溶解(约5min)，在酶联免疫仪上检测570nm处的吸光值D，作为反映淋巴细胞转化活性强弱的指标。
血清免疫球蛋白含量用CX4型全自动血液生化分析仪通过免疫比浊法测定IgG和IgM含量，试剂盒为北京利德曼生化技术公司产品。
血清细胞因子含量采用放射免疫法测定。IL-2、IL-6和TNF-α测定，试剂盒为北京科美东雅生物技术公司产品，具体测定方法严格按试剂盒操作说明进行。
试验结果 外周血淋巴细胞增殖活性 由表1可见，试验第14d、28d，紫锥菊组的ConA刺激的淋巴细胞增殖活性显著高于对照药物组(P<0.05)，28d紫锥菊组的非ConA刺激的淋巴细胞增殖活性也显著高于对照药物组(P<0.05)，说明加ConA组淋巴细胞增殖活性高于未加ConA组，说明紫锥菊对刺激淋巴细胞增殖与ConA有协同作用。
表1紫锥菊提取物散对断奶仔猪淋巴细胞增殖活性的影晌
注同行不同字母表示差异显著(P<0.05)。
血清免疫球蛋白和细胞因子含量 由表2可见，试验第7天，紫锥菊组血清IL-2和IL-6含量显著高于对照组，IL-2含量显著高于但IL-6和TNF含量显著低于粘杆菌素组。试验第14d，紫锥菊组血清IL-6含量显著低于其他两个组。试验第28天，紫锥菊组血清IgG和IgM含量显著高于其他两个组。
表2紫锥菊对断奶仔猪血清免疫球蛋白和细胞因子含量的影晌
以上试验结果表明，采用本发明方法制备的紫锥菊提取物散剂提高仔猪免疫功能的效果可靠。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
权利要求
1.一种紫锥菊提取物散剂，其特征在于包含紫锥菊提取物和微粉硅胶，其重量百分比配方为紫锥菊提取物10.0%-30.0%，微粉硅胶70.0%-90.0%，所述微粉硅胶为载体材料。
2.根据权利要求1所述的紫锥菊提取物散剂，其特征在于每1g紫锥菊提取物散剂由1-3g紫锥菊药材制得，且该紫锥菊提取物散剂中菊苣酸重量百分含量为0.3%-3.0%。
3.根据权利要求2所述的紫锥菊提取物散剂，其特征在于每1g紫锥菊提取物散剂含紫锥菊原药材2g，且该紫锥菊提取物散剂中菊苣酸重量百分含量为0.4%-1.5%。
4.根据权利要求2或3所述的紫锥菊提取物散剂，其特征在于所述紫锥菊药材是指紫花紫锥菊Echinaceapurpurea(L.)Moench.的茎、叶、花。
5.一种权利要求1所述的紫锥菊提取物散剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤
(1)粗粉碎用植物粉碎机将含水量≤12%的紫锥菊药材粉碎，过60-80目筛，得到紫锥菊粗粉；
(2)将上述紫锥菊粗粉置于微波提取器中，按照料液比15-130的比例添加重量百分比50-80%的乙醇溶液，浸泡20-40分钟，微波提取1-3次，每次微波提取的条件，微波频率2400-2500MHz，提取温度40-80℃，提取时间1-20分钟，过滤并收集滤液和药渣，滤液回收乙醇，减压浓缩得到紫锥菊提取物浸膏；
(3)将步骤(2)中过滤得到的药渣用20-30%的乙醇溶液微波1-3次，料液比110-120，微波频率2400-2500MHz，提取温度40-80℃，提取时间0.5-10分钟，过滤，滤液回收乙醇得到紫锥菊提取物浸膏；
(4)将步骤(2)和(3)得到的浸膏混合，加2-5倍浸膏重量的微粉硅胶吸附，50-60℃下恒温烘干至含水量小于6%，得紫锥菊提取物混合物，加0.5-3倍于该提取物混合物的微粉硅胶混合至每1g紫锥菊提取物散剂含紫锥菊原药材1-3g，定量称重，装袋，封口，即得紫锥菊提取物散剂。
6.根据权利要求5所述的紫锥菊提取物散剂的制备方法，其特征在于步骤(1)中紫锥菊的粉碎粒度范围为50-180μm。
7.一种权利要求1所述的紫锥菊提取物散剂在制备动物免疫增强剂及各种细菌性、病毒性疾病药物方面的应用。
全文摘要
本发明提供了一种紫锥菊提取物散剂及其制备方法和应用，可以解决常规制法制得的散剂给药量大，起效慢，生物利用度低，容易吸潮结块，药物资源浪费较严重的问题。该紫锥菊提取物散剂包含紫锥菊提取物和微粉硅胶，微粉硅胶为载体材料。制备方法是紫锥菊原药材经粉碎、微波提取、回收乙醇、减压浓缩、微粉硅胶吸附、干燥、复配、包装。有效成分溶出速度快，溶出率高，加入微粉硅胶作为吸潮剂、抗结剂和助流剂，便于紫锥菊超微粉的保存和使用，增强免疫功能效果好，用于免疫功能低下动物，也可用于提高疫苗免疫效果，配合其他药物治疗各种细菌性、病毒性疾病。
文档编号A61K36/28GK101816693SQ20101018558
公开日2010年9月1日 申请日期2010年5月28日 优先权日2010年5月28日
发明者郝智慧, 王春元, 贾德强, 王艳玲, 庞云露 申请人:青岛康地恩药业有限公司