专利名称：局部辅酶q10制剂及其使用方法
技术领域：
本发明提供含有辅酶QlO (CoQlO)的药物组合物和使用CoQlO治疗癌症、选择性降低癌细胞生长、诱导癌细胞凋亡和抑制肿瘤介导的血管发生的方法。
背景技术：
癌症目前是发达国家里死亡的主要原因之一。虽然近期研究已经大大增加了我们对肿瘤发生分子机理的很多了解并提供了癌症治疗的许多新方法，但对多数恶性肿瘤的标准疗法仍然是整体切除术，化疗，和放疗。虽然日趋成功，但每种这些疗法仍引起众多不受欢迎的副作用。例如，手术导致疼痛，对健康组织的外伤性损伤，以及疤痕。放疗和化疗引起恶心，免疫抑制，胃溃疡和继发性肿瘤发生。
发明内容
本发明涉及发现CoQlO的局部制剂能降低动物受试对象中肿瘤生长速率。在本文所述的实验中，显示CoQlO增加皮肤癌细胞而非正常细胞的培养物中细胞凋亡的速率。此外，显示用CoQlO局部制剂治疗负瘤动物显著降低动物中肿瘤生长的速率。配制成用于口服递送的CoQlO已经被用作膳食补充剂。然而，口服施用的CoQlO 被证明积累在肝脏——降低了它的系统利用度。与膳食补充剂形式的CoQlO相比，用局部施用CoQlO所观察到的抗肿瘤反应可能与它较高的生物利用度有关。因此，本发明特征在于一种降低对象中肿瘤细胞生长速率或增加肿瘤细胞凋亡速率的方法。该方法包括提供具有很多肿瘤细胞的对象和向该对象施用含有效量CoQlO和药物接受载体的组合物的步骤。另一方面，本发明特征在于含有效量CoQlO和制药接受载体的组合物。在一个优选实施方案中，该组合物是CoQlO的局部制剂，它包括至少约0. 01重量％直至30重量％ (w/w)的CoQlO和适于局部递送CoQlO的载体。该药物组合物优选包含作为活性成分的CoQlO和制药接受的载体。该组合物包含辅酶Q10，phospholipon 90，甘油，丁基化羟基甲苯(BHT)，乙醇，中链甘油三酯(MCT)，和薰衣草精。优选地，phospholipon 90 是 phospholipon90G 禾口 / 或 phospholipon 90H。在一个优选实施方案中，该药物组合物包含至少约0. 01%至约30% (w/w)的辅酶 QlO0该药物组合物优选含有约至约25% (w/w)之间的辅酶Q10。在另一个优选实施方案中，本发明提供一种治疗癌症患者的方法，包括向需要的患者施用含治疗有效量的辅酶QlO的组合物；使肿瘤细胞与该组合物接触导致肿瘤细胞裂解；从而治疗该癌症患者。
该药物组合物优选包含至少约0. 01 %直至30% w/w的辅酶QlO，该药物组合物优选包含约至约25% w/w的辅酶QlO。在另一个优选实施方案中，该药物组合物用任选的透皮增强剂配制为局部膏剂。在另一些优选实施方案中，治疗有效量的辅酶QlO组合物与一种或多种化疗药一起被施用。这些化疗药可与辅酶QlO联合施用，或在其前或其后施用。化疗药的非限制性实施例包括，但不限于环磷酰胺(CTX，25mg/kg/天，经口)，紫杉醇类(太平洋紫杉醇 (paclitaxel)或多烯紫杉醇(docetaxel))，白消安，顺钼，环磷酰胺，甲氨喋呤，柔红霉素， 多柔比星，美法仑，克拉屈滨，长春新碱，长春碱，和苯丁酸氮芥。在另一优选实施方案中，所述药物组合物，辅酶QlO组合物抑制对象中肿瘤细胞生长，且所述方法包括向该对象施用含治疗有效量的CoQlO的药物组合物。优选地，在所述药物组合物中辅酶QlO的治疗有效量在约0. 01%和30% w/w辅酶QlO之间。抑制肿瘤细胞生长涉及一或多个以下影响(1)在某种程度上抑制肿瘤生长，包括，⑴减慢和(ii)生长完全停滞；( 肿瘤细胞数量减少；( 维持肿瘤大小；(4)肿瘤大小缩小；( 抑制，包括 ⑴减少、(ii)减慢或(iii)完全阻止肿瘤细胞浸润周围器官；(6)抑制，包括⑴减少、 ( )减慢或(iii)完全阻止转移；(7)增强抗肿瘤免疫应答，其可导致⑴维持肿瘤大小， (ii)缩小肿瘤大小，(iii)减慢肿瘤生长，(iv)减少，减慢或阻止侵袭和/或(8)某种程度上，减轻与该疾病相关的一或多种症状的严重程度或数目。在另一个优选实施方案中，本发明提供一种选择性诱导肿瘤细胞凋亡的方法，该方法包括施用如标准测试测量的含辅酶QlO的药物组合物。该药物组合物优选包含至少约 0. 01%直至30% w/w的辅酶Q10。测量凋亡的方法包括但不限于线粒体膜染色测试和/或膜联蛋白-VPE测试。在一个优选实施方案中，当用线粒体膜染色测试和/或膜联蛋白-VPE 测试测量时，该药物组合物诱导至少约30%肿瘤细胞凋亡。优选地，当用线粒体膜染色测试和/或膜联蛋白-VPE测试测量时，该药物组合物诱导至少约60%肿瘤细胞凋亡；更优选地，当用线粒体膜染色测试和/或膜联蛋白-VPE测试测量时，该药物组合物诱导约75%肿瘤细胞凋亡；更优选地，当用线粒体膜染色测试和/或膜联蛋白-VPE测试测量时，该药物组合物诱导约 90%，91%，92%，93%，94%，95%，96%，97%，98%，99%和 100%肿瘤细胞凋亡。在另一个优选实施方案中，本发明提供抑制肿瘤中血管发生的方法，该方法包括使肿瘤与含辅酶QlO的药物组合物接触。优选地，该药物组合物含有至少约0. 01 %直至 30% w/w 的辅酶 QlO。本发明化合物的其它用途包括在治疗动脉硬化、炎症、和作为抗血管生成剂的用途，尤其是用于治疗癌症，特别是实体癌例如位于肺、乳房、肝、脑或其他组织中的癌。除非另有限定，本文所用的全部技术术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员的通常理解相同的含义。医学术语的通常理解的定义可见于Thomas LathropStedman, Stedman' s Medical Dictionary, Lippincott, Williams & Wilkins !Philadelphia, PA, 2000。本文提及的所有出版物，专利申请，专利和其他参考文献经整体引用并入本文。在有冲突时，将以本说明书，包括定义，为准。下文所讨论的具体实施方案仅是举例说明并不限于此。
本发明的其他方面由下文所述。
本发明在所附权利要求中具体指出。可通过参考以下说明并结合附图更好的理解本发明上述的和进一步的益处，其中图1是一系列光学显微图，其显示CoQlO对体外培养的人黑素瘤细胞(SKMEL28) 的影响。图2显示CoQlO降低36小时体外培养的人黑素瘤细胞系(SKMEL28)的增殖。图3显示CoQlO降低48小时体外培养的人黑素瘤细胞系(SKMEL28)的增殖。图4显示介质对照不降低48小时体外培养的人黑素瘤细胞系(SKMEL28)的增殖。图5比较CoQlO对体外培养的人黑素瘤和新生儿成纤维细胞中细胞凋亡的影响。图6显示CoQlO降低48小时体外培养的鳞状癌细胞增殖。图7显示CoQlO降低48小时体外培养的新生儿成纤维细胞增殖。图8显示CoQlO增加48小时体外培养的新生儿角质形成细胞增殖。图9显示CoQlO降低48小时体外培养的乳腺癌细胞系(MCF-7)增殖。MCF-7细胞系表达WNT7B癌基因并含有Tx-4癌基因。图10显示CoQlO降低72小时体外培养的乳腺癌细胞系(MCF-7)增殖。图11是显示对照和用CoQlO局部制剂处理30天后的CoQlO处理小鼠中诱导肿瘤的照片。图12是显示对照和用CoQlO局部制剂处理30天后的CoQlO处理小鼠中诱导肿瘤的照片。图13是显示从对照和CoQlO处理小鼠中切除的肿瘤照片。图14显示施用CoQlO对CoQlO处理小鼠或对照小鼠30天肿瘤大小的影响。对照组与处理组的平均肿瘤质量分别减少52. 3%和54. 0%。图15是一系列显微照片，显示CoQlO对体外培养的人乳腺癌细胞(SK-BR-3)的影响。SK-BR-3细胞系过表达Her2/c-erb-2基因，基因产物(ATCC)。图16显示CoQlO降低48小时体外培养的人乳腺癌细胞系(SK-BR-3)增殖。 SK-BR-3细胞系过表达Her2/c-erb-2基因基因产物(ATCC)。图17显示CoQlO降低72小时体外培养的人乳腺癌细胞系(SK-BR-3)增殖。 SK-BR-3细胞系过表达Her2/c-erb-2基因基因产物(ATCC)。图18显示CoQlO降低48小时体外培养的人乳腺癌细胞系(MDA_MB_468)增殖。 MDA-MB-468细胞系在p53基因有突变(ATCC)。图19显示CoQlO降低72小时体外培养的人乳腺癌细胞系(MDA_MB_468)增殖。 MDA-MB-468细胞系在p53基因有突变(ATCC)。图20显示CoQlO降低48小时体外培养的人乳腺癌细胞系(BT-20)增殖。BT-20 细胞系表达WNT7B和WNT3癌基因(ATCC)。图21显示CoQlO降低72小时体外培养的人乳腺癌细胞系(BT-20)增殖。BT-20 细胞系表达WNT7BHE WNT3癌基因(ATCC)。图22显示CoQlO降低48小时体外培养的人肝细胞癌细胞系Ofep 3B)增殖。
图23显示CoQlO降低72小时体外培养的人肝细胞癌细胞系Ofep 3B)增殖。图M显示CoQlO降低48小时体外培养的人骨肉瘤细胞系(143B)增殖。图25显示CoQlO降低72小时体外培养的人骨肉瘤细胞系(143B)增殖。图沈显示CoQlO降低48小时体外培养的人前列腺癌细胞系(PC_3)增殖。图27显示CoQlO降低72小时体外培养的人前列腺癌细胞系(PC_3)增殖。图28显示CoQlO对M小时体外培养的人前列腺癌细胞系(PC_3)的线粒体极化 (凋亡指标)的影响。PC-3细胞培养物经0. 05,0. 1和0. 2mM浓度QlO处理M小时，然后用JC-I以10微克/ml.处理30分钟。用流式细胞仪测量绿荧光的吸收和水平，FLl (绿色荧光)。注意在0. 2mM QlO处理的细胞(黄色图)中观察到绿荧光显著增加。图29A和29B是照片，显示与缺少含CoQlO的组合物条件下的对照比较，含CoQlO 的组合物(图^B)对组织中肿瘤介导的血管生成的抑制。
具体实施例方式本发明提供降低肿瘤细胞生长速率或增加肿瘤细胞凋亡速率的组合物及其方法。 本发明的组合物包括作为抗肿瘤剂的治疗有效量的CoQlO和载体。本发明的一种优选组合物是一种CoQlO的局部制剂，包含至少约CoQlO和辅助CoQlO局部递送的载体。本发明的一种最优选组合物是一种CoQlO的局部制剂，包含约和15%之间的CoQlO和辅助 CoQlO局部递送的载体。本发明杀死肿瘤细胞或降低其生长速率的方法包括使细胞与有效浓度CoQlO接触的步骤。下文所述的优选实施方案举例说明这些组合物和方法的适用性。尽管如此，从这些实施方案的描述中，基于下文提供的描述可实现和/或实施本发明的其他方面。在本发明公开和描述以前，应该理解，本发明不限于本文所公开的特定结构、处理步骤或材料，而应扩展到相关技术领域的普通技术人员所认可的其等同物。也应理解，本文所用的术语仅用作描述具体实施方案的目的，但并不打算限制于此。^X依照本发明并如本文所使用的，下面的术语被定义为以下含意，除非另有明确说明。如本文所使用的，“a”，“an”，和“the”包括其复数形式，除非上下文另有明确指示。如本文所使用的，“制药接受的”组分是适用于人和/或动物而没有不适当的不利副作用(例如毒性、刺激和变态反应)并具有合理的收益/风险比例的成分。如本文所使用的，术语“安全和治疗有效量”表示，当以本发明的方式使用时，足以产生期望的治疗反应而没有不适当的不利副作用(例如毒性、刺激和变态反应)并具有合理的收益/风险比的成分的量。“治疗上有效量”意思是指有效产生期望治疗反应的本发明化合物的量。例如，有效延缓癌生长或引起癌，肉瘤或淋巴瘤，或缩小癌或阻止转移的量。 具体的安全和有效量或治疗有效量将随一些因素而变化，例如具体治疗的疾病、患者身体状况、治疗的哺乳动物或动物的类型、治疗持续时间、同时治疗的本性(假如有)、及所用具体剂型和化合物或其衍生物的结构。如本文所使用的，“药用盐”包括，但不限于，碱性物质如氨的矿物或有机酸盐；酸性物质如羧酸的碱或有机盐。优选地用有机或无机酸制备这些盐。这些优选的酸盐是氯化物，溴化物，硫酸盐，硝酸盐，磷酸盐，磺酸盐，甲酸盐，酒石酸盐，马来酸盐，苹果酸盐，柠檬酸盐，甲苯酸盐，水杨酸盐，抗坏血酸盐等等。最优选的盐是盐酸盐。如本文所使用的，“癌”表示在哺乳动物中发现的所有类型的癌或新生物或恶性肿瘤，包括，但不限于白血病，淋巴瘤，黑素瘤，癌瘤和肉瘤。在优选实施方案中，CoQlO组合物用于治疗各种类型的乳腺癌、前列腺癌、肝癌、骨癌。然而，使用CoQlO组合物的治疗不限于这些类型的癌。癌的实例是脑癌，乳癌，胰癌，宫颈癌，结肠癌，头颈癌，肾癌，肺癌，非小细胞肺癌， 黑素瘤癌，间皮瘤癌，卵巢癌，肉瘤癌，胃癌，子宫癌和成神经管细胞瘤癌。如本文所使用的， 术语“癌”，“新生物”，和“瘤”，可互换并且以单数或复数形式使用，它们表示已经恶性转化的细胞，这种转化使得它们对宿主生物体是病理性的。通过公认的技术，特别是组织学检查，原发性癌细胞(即，从恶性转化位点附近获得的细胞)可以容易地与非癌细胞区别开。 如本文所用，癌细胞的定义不仅包括原发癌细胞，还包括任何源自癌细胞祖先的细胞。这包括转移的癌细胞，和来自癌细胞的体外培养物及细胞系。当提到一种通常表现为实体瘤形式的癌时，“临床可检测的”肿瘤是一种可基于肿瘤实体而检测的肿瘤；例如，通过方法例如 CAT扫描、MR成像、X-射线、超声波或触诊，和/或由于可从患者获得的样品中一或多种癌特异性抗原的表达而可以被检测到。术语“肉瘤”通常表示由象胚胎结缔组织这样的物质组成的肿瘤以及通常由嵌入纤维状或均勻物质中的紧密堆积的细胞组成的肿瘤。可用本发明组合物和任选增效剂和/或化疗剂治疗的肉瘤的实施例包括，但不限于软骨肉瘤，纤维肉瘤，淋巴肉瘤，黑素肉瘤，粘液肉瘤，骨肉瘤，Abemethy’ s肉瘤，脂肪肉瘤(adipose sarcoma)，脂肪肉瘤 (Iip0sarc0ma)，泡状软部肉瘤，成釉细胞肉瘤，葡萄状肉瘤，绿色肉瘤，绒膜癌，胚胎性肉瘤，维尔姆斯瘤肉瘤，子宫内膜肉瘤，间质性肉瘤，尤因肉瘤，筋膜肉瘤，成纤维细胞肉瘤，巨细胞肉瘤，粒细胞肉瘤，何杰金氏肉瘤，自发多发性有色出血性肉瘤，B细胞的免疫母细胞肉瘤，淋巴瘤，T细胞的免疫母细胞肉瘤，Jensen' s肉瘤，卡波西肉瘤，肝巨噬细胞肉瘤，血管肉瘤，白色肉瘤，恶性间叶瘤肉瘤，骨膜外肉瘤，网状细胞肉瘤，劳斯肉瘤，浆液囊性肉瘤，滑膜肉瘤，和毛细管扩张肉瘤。所用术语“黑素瘤”意指由皮肤和其他器官的黑素细胞系统产生的肿瘤。可用本发明组合物和任选增效剂和/或另一种化疗剂治疗的黑素瘤包括，但不限于，例如，肢端雀斑样痣黑素瘤，无黑素性黑素瘤，良性青少年黑色素瘤，Cloudman' s黑素瘤，S91黑素瘤， 哈-帕二氏黑素瘤，青少年黑素瘤，恶性雀斑样痣黑素瘤，恶性黑素瘤，结节性黑素瘤，甲下黑素瘤，和浅表扩散性黑素瘤。术语“癌瘤”表示由上皮细胞构成的恶性新生长，趋向于浸润周围组织及产生转移。可用本发明组合物和任选增效剂和/或化疗剂治疗的癌瘤包括但不限于，例如，腺泡癌，腺泡状癌，腺囊癌，囊性腺样癌，腺瘤癌，肾上腺皮质癌，蜂窝状癌，肺泡细胞癌，基底细胞癌，carcinoma basocellulare，基底样癌，基底鳞状细胞癌，细支气管肺泡癌，支气管癌，支气管源性癌，髓样癌，胆管细胞癌，绒毛膜癌，胶样癌，粉刺癌，子宫体癌，筛状癌， 胸廓癌，皮肤癌，柱状癌，柱状细胞癌，管癌，carcinoma durum，胚性癌，脑样癌，表皮样癌 (epiermoid carcinoma)，腺样上皮细胞癌，外生式癌，carcinoma ex ulcere，纤维癌，胶状癌，胶体癌，巨细胞癌，巨细胞癌(carcinomagigantocellulare)，腺癌，粒层细胞癌，毛囊基质癌，血样癌，肝细胞癌，Hurthle氏细胞癌，透明癌(hyline carcinoma)，肾上腺样癌，幼稚型胚性癌，原位癌，表皮内癌，上皮内癌，Krompecher' s癌，Kulchitzky细胞癌，大细胞癌，豆状癌，豆状癌(carcinomalenticulare)，脂肪瘤癌，淋巴上皮癌，髓样癌，髓样癌 (medullary carcinoma), 11^ ^, fe^fg fe^l (carcinoma muciparum), ^ 胞癌，粘液表皮样癌，粘液癌(carcinoma mucosum)，粘液癌(mucous carcinoma)，粘液瘤样癌，鼻咽癌，燕麦细胞癌，骨化性癌，骨样癌，乳突状癌，门静脉周癌，浸润前癌，棘细胞癌， 软糊状癌(pultaceous carcinoma)，肾的肾细胞癌，储备细胞癌，肉瘤性癌，Schneiderian 癌，硬癌(scirrhous carcinoma)，阴囊癌，印戒细胞癌，单纯癌，小细胞癌，马铃薯状癌，球状细胞癌，梭状细胞癌，海绵体癌，鳞状癌，鳞状细胞癌，绳捆癌，毛细血管性癌，毛细血管性癌(carcinoma telangiectodes),移行细胞癌，结节性癌(carcinomatubersum),结节性癌 (tuberous carcinoma),抚状癌，绒毛状癌。可用本发明组合物治疗的另外的癌包括，例如何杰金氏病，非何杰金氏淋巴瘤，多发性骨髓瘤，神经母细胞瘤，乳癌，卵巢癌，肺癌，横纹肌肉瘤，原发性血小板增多症，原发性巨球蛋白血症，小细胞肺肿瘤，原发性脑肿瘤，胃癌，结肠癌，恶性胰腺脑岛瘤，恶性类癌，膀胱癌，癌变前皮肤损伤，睾丸癌，淋巴瘤，甲状腺癌，神经母细胞瘤，食管癌，泌尿生殖道癌， 恶性血钙过多，宫颈癌，子宫内膜癌，肾上腺皮质癌，和前列腺癌。“诊断”意指鉴别病理状况的存在和本性。诊断方法在灵敏度和特异性上不同。诊断测试的“灵敏度”是检测阳性的患病个体百分比(“真阳性”百分比)。没被检验出的患病个体是“假阴性”。没患病且测试中检测为阴性的对象被称为“真阴性”。诊断测试的“特异性”是1减假阳性率，其中“假阳性”率被定义为检测阳性的非患病对象的比例。尽管特定的诊断方法不一定提供疾病的明确诊断，如果该方法提供帮助诊断的阳性指标就足够了。术语“患者”或“个体”在本文中可互换使用，并表示待治疗的哺乳动物对象，以人患者为优选。有些情况下，本发明的方法发现在实验动物、兽医应用、和开发疾病的动物模型中的用途，包括，但不限于，啮齿动物和灵长类动物，所述啮齿动物包括小鼠、大鼠和仓鼠。“样品”以其最广泛的意义用于本文。包括多核苷酸、多肽、肽和抗体等的样品可以包含体液，细胞制备物的可溶性部分、或细胞生长介质，从细胞分离或提取的染色体、细胞器或膜；在溶液中或结合到培养基上的基因组DNA、RNA或cDNA、多肽或肽，细胞，组织，组织印迹(tissue print)，指纹、皮肤或毛发等等。“治疗”是意图阻止疾病发生或改变其病理或症状而进行的干预。因此，“治疗”涉及治疗性治疗和预防性或防止性措施。需要治疗的对象包括已经有疾病的对象以及需要预防疾病的对象。在肿瘤(例如癌症)治疗中，治疗剂可以直接降低肿瘤细胞病理，或使肿瘤细胞对其他治疗剂的治疗更敏感，例如，放疗和/或化疗。如本文所用，“改善”或“治疗”涉及趋向正常化值(例如在健康患者或个体内获得的值)的症状，例如，当用常规统计学检验确定时，与正常化值的差异少于50%，优选与正常化值的差异少于约25%，更优选与正常化值的差异少于10%，以及还更优选的与正常化值没有显著差异。例如，“治疗癌症”或“肿瘤细胞”，涉及以下影响的一个或更多(1)在某种程度上抑制肿瘤生长，包括，⑴减慢和 ( )生长完全停滞；( 肿瘤细胞数量减少；( 维持肿瘤大小；(4)肿瘤大小缩小；(5)抑制，包括⑴减少、(ii)减慢或(iii)完全阻止肿瘤细胞浸润周围器官；(6)抑制，包括⑴减少、(ii)减慢或(iii)完全阻止转移；(7)增强抗肿瘤免疫应答，其可导致(i)维持肿瘤大小，(ii)缩小肿瘤大小，(iii)减慢肿瘤生长，(iv)减少，减慢或阻止侵袭和/或(8)某种程度上，减轻与该疾病相关的一或多种症状的严重程度或数目。正如本文所使用的，“改善的症状”或“已治疗的症状”表示趋向正常化值的症状， 例如，当用常规统计学检验确定时，与标准化值的差异少于50%，优选与标准化值的差异少于约25%，更优选与标准化值的差异少于10%，以及还更优选的与标准化值没有显著差异。“趋化因子”是参与细胞迁移和活化并在炎症反应中起作用的小细胞因子，所述细胞包括吞噬细胞和淋巴细胞。“细胞因子”是细胞产生的蛋白质，通过细胞因子影响的其它细胞表面的“细胞因子受体”而影响细胞行为。由淋巴细胞产生的细胞因子有时被称作“淋巴因子”。细胞因子也根据特征被分为I型(例如IL-2和IFN- Y )和II型(例如IL-4和IL-10)。术语“调节”，意指任何提及的活动，例如，增加、增强、增加、激动(作为激动剂起作用)、促进、减少、降低、抑制、阻断、或拮抗(作为激动剂起作用)。调节可以使活性增加超过基线值多于1倍、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍等。调节还能使活性减少到基线值以下。如本文所用，术语“对肿瘤细胞有选择性的”涉及所述辅酶QlO药物组合物的作用，例如抑制肿瘤生长，细胞凋亡，抗血管生成作用，并且当施用于正常细胞时这些作用不能被检测到，这正如以下实施例详细描述。CoQlO 组合物在一个优选实施方案中，本发明提供用于治疗癌症的CoQlO组合物。该组合物优选包含至少约1 %到约25 % w/w的CoQlO，更优选约1 %到约20 % w/w之间的CoQlO。在下面实施例部分描述的代表性实施方案中，CoQlO的局部制剂被施用于负瘤动物皮肤上以降低肿瘤生长速率。CoQlO可以粉末形式以任意适合数量(例如，Ikg)从Pure Prescriptions (San Diego, CA)获得。可以使用任何合适的载体递送含CoQlO的组合物。例如，脂质体可作为载体使用。脂质体制剂的一个实例具有以下组成Phospholipon 90G(American Lechitin， Stanford, CT)、Phospholipon 90H(AmericanLechitin, Stanford, CT)、甘油、丁化羟基甲苯(BHT)、乙醇、中链甘油三酯(MCT)，薰衣草精(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)和辅酶 QlO (Pure Prescriptions, San Diego, CA) 制备该制剂的方法的一个实例要求首先将IOg Phospholipon 90H、5gPhospholipon 90G、与 1. 5g 中链甘油三酯、0. 3g BHT 和 9ml 乙醇在 75°C溶解。接着，将12g辅酶QlO溶解到混合物中。加入用氮饱和水制备的65ml ImM磷酸盐缓冲液(pH 8. 2)、13. 3g甘油和50 μ L薰衣草精。在高速混合器中以12，OOORPM混合上述混合物成膏状。膏状物在4°C储存直至使用。对象因为来自许多不同物种的对象具有肿瘤并且易得肿瘤，所以本发明可兼容许多类型的动物对象。这些动物的不完全的实例清单包括哺乳动物例如小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、猪、马、牛、狗、猫和灵长类动物例如猴、猿和人。那些已知患有皮肤癌的动物对象优选用于本发明。尤其是，患有皮肤癌或其他肿瘤的人类患者是适用于本发明的动物对象。通过将本文教导的方法与医学和兽医科学中已知的其它方法相适应(例如，根据动物对象的体重调整施用物质的剂量)，本发明使用的组合物可容易的优化以供其他动物使用。
药物组合物以及向研究对象施用在一个优选实施方案中，局部施用含CoQlO的组合物。优选提供活性成分，即 CoQIO，作为药物制剂。组合物实例将详细描述于以下实施例。对于局部施用，活性成分可以包括最终产物中制剂重量的0. 001%至约20% w/w，尽管其可以包含多达制剂的30% w/ w，优选约至约20% w/w。本发明的局部制剂，包括活性成分连同其一或多种可接受载体和任选的任何其他治疗成分。载体必须是“可接受的”，意思是与制剂的其他成分兼容并对其接受者是无害的。本发明组合物既可以通过其自身施用于患者，也可以混有适合的载体或赋形剂的药物组合物的形式施用。在表现出相关疾病的患者的治疗中，施用治疗有效量的药剂，例如这些。治疗有效剂量表示导致患者症状改善或延长生存的组合物的量。这些化合物的毒性和治疗功效可通过标准药学方法在细胞培养或实验动物中来测定，例如测定LD5Q(群体中50%致死的剂量)和ED5tl(群体中50%治疗有效的剂量)。毒性和治疗效果之间的剂量比率是治疗指数并且可被表示成比率LD5(i/ED5(i。表现出大的治疗指数的化合物是优选的。从这些细胞培养测试和动物研究中获得的数据可用于设计一系列供人类使用的剂量。这些化合物的剂量优选处于包括ED5tl而很少或没有毒性的循环浓度范围内。根据所用的剂量形式和所利用的给药途径，剂量可以在此范围内变化。对用于本发明方法的任何化合物，治疗有效剂量可以从细胞培养测试中作初步估计。例如，剂量可以配制成在动物模型中达到这样的循环血浆浓度范围，该范围包括细胞培养中测定的IC5(I。可使用这些信息更精确的测定用于人的剂量。可以测量血浆水平，例如通过HPLC。具体制剂、给药途径和剂量可由医生个人视患者的状况选定(例如见Fingl et al. , inThe Pharmacological Basis of Therapeutics, 1975, Ch. 1 p. 1)。 亥 白勺 治医生将知道由于毒性或由于器官机能障碍应怎样以及何时停止、中断或调整给药。相反地，如果临床反应不足(排除毒性)，主治医生也将知道调整治疗到更高水平。感兴趣的致癌疾病治疗中施用剂量的大小将随待治疗疾病的严重程度和施用途径而变化。例如疾病的严重程度可部分地通过标准预测评估法估计。此外，剂量以及可能剂量频率也将根据年龄、 体重和个体患者反应而变化。与以上讨论相应的程序可以用于兽医学中。根据治疗的具体疾病，可以配制这些药剂并系统性或局部性给药。制剂和给药技术可见于 Remington’ s Pharmaceutical Sciences，18th ed.，Mack Publishing Co.， Easton, Pa. (1990)。合适的途径可以包括口、直肠、透皮、阴道、跨黏膜或肠给药；胃肠道外递送，包括肌肉内、皮下、髓内注射、以及胸内、直接心室内、静脉内、腹膜内、鼻内或眼内注射，仅仅列举一些。上述组合物可以任何合适的剂型施用于对象。除了用CoQlO的局部制剂治疗癌症外，在本发明的其他方面CoQlO可通过其他方法给药。例如，CoQlO可被配制为胃肠道外给药，例如，皮下、静脉内、肌肉内或肿瘤内注射。可以使用其他递送方法，例如，脂质体递送或从充有该组合物的装置中扩散。该组合物可以单次推注，多次注射，或通过连续输液(例如，静脉内的或通过腹膜透析)给药。对于胃肠道外给药，组合物优选配制成无菌无热源形式。通过简单地向含有细胞的液体中加入组合物，本发明组合物也能体外施用于细胞(例如，在体外培养中诱导癌细胞凋亡)。
根据治疗的具体疾病，可以配制这些药剂并系统性或局部性给药。制剂和给药技术可见于 Remington’ s Pharmaceutical Sciences，18th ed.，Mack Publishing Co.， Easton, Pa. (1990)。合适的途径可以包括口、直肠、透皮、阴道、跨黏膜或肠给药；胃肠道外递送，包括肌肉内、皮下、髓内注射、以及胸内、直接心室内、静脉内、腹膜内、鼻内或眼内注射，仅仅列举一些。对于注射，本发明的药剂可以配制于水溶液中，优选生理相容的缓冲液例如 Hanks' s溶液，Ringer’ s溶液，或生理盐水缓冲液。对于跨粘膜给药，制剂中使用待渗透屏障适合的渗透剂。这些渗透剂为本领域所公知。使用药学接受的载体配制本文公开用于实施本发明的组合物为适于系统给药的剂量是在本发明范围内。适当选择载体和合适的制造规范，本发明组合物，尤其是配制成溶液的本发明组合物，可以胃肠道外给药，例如通过静脉内注射。该化合物可使用本领域技术人员公知的药学接受的载体容易地配制成适合口服的剂量。为了由待治疗患者经口摄入， 这些载体能使本发明化合物配制成片、丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆(slurries)、悬液等等。意欲细胞内施用的药剂可使用本领域普通技术人员熟知的技术施用。例如，这些药剂可包裹入脂质体中，然后按上述方法给药。脂质体是具有水性内部的球形脂质双层。在脂质体形成时存在于水溶液中的所有分子结合入所述水性内部。脂质体内容物既被保护免受外部微环境影响，又因为脂质体与细胞膜溶合而被有效递送到细胞质内。此外，由于它们的疏水性，小的有机分子可以直接细胞内施用。适用于本发明的药物组合物包括这种组合物，其中含有能达到其预期目的的有效量的活性成分。例如，见图14。有效量的确定是在本领域技术人员能力范围内，尤其是根据本文所提供的详细公开。除了活性成分，这些药物组合物也可含有包括赋形剂和辅助剂的合适的药物接受载体，其帮助将活性化合物加工成可药用的制剂。配制为口服施用的制剂可以是片、糖衣丸、胶囊或溶液的形式。本发明药物组合物可用已知方式制造，例如，依靠常规混合、溶解、制粒、制糖衣、悬浮、乳化、胶囊化、俘获(entrapping)或冻干工艺。适合于局部施用的制剂包括适于透过皮肤到达所需治疗部位的液体或半液体的制剂，例如擦剂、洗剂、霜(cream)、膏(ointment)或糊，以及适合施用于眼、耳或鼻的滴剂。 根据本发明的滴剂可以包含无菌水或油溶液或悬液，并可以通过溶解活性成分于杀菌和/ 或杀真菌剂和/或任何其他合适防腐剂的合适水溶液中而制备，并优选包括表面活性剂。 然后可以通过过滤澄清并灭菌所得溶液并以无菌技术移入容器内。适合于滴剂内含物的杀菌和杀真菌剂的实例是硝酸或醋酸苯汞(0.002% )、苯扎氯胺(0.01% )和醋酸洗必泰 (0. 01%)o适合于油溶液制剂的溶剂包括甘油，稀释醇和丙二醇。根据本发明的洗剂包括那些适合应用于皮肤或眼的制剂。眼洗剂可以包括任选含杀菌剂的无菌水溶液，并可以通过类似于制备滴剂的那些方法制备。应用于皮肤的洗剂或擦剂也可以包括加速干燥和冷却皮肤的试剂，例如酒精或丙酮，和/或润湿剂例如甘油或象海狸油或花生油之类的油。根据本发明的霜、膏或糊是用于外部施用的活性成分的半固体制剂。在合适的机器帮助下，以油脂性或非油脂性为基础，将细分的或粉末形式的活性成分，单独或以溶液或悬液，混合入水或非水性流体中。该基础可以包含烃例如硬、软或液体石蜡，甘油，蜂蜡，金属皂；粘胶；天然来源的油例如杏仁、玉米、花生、海貍或橄榄油；羊毛脂或其衍生物，或脂肪酸例如硬脂酸或油酸以及醇如丙二醇或macrogel。该制剂可以掺入任何合适的表面活性剂例如阴离子、阳离子或非离子性表面活性剂例如失水山梨醇酯或其聚氧乙烯衍生物。也可以包括助悬剂如天然胶、纤维素衍生物或无机物例如silicaceous硅胶，和其它成分如羊毛脂(lanolin)。用于胃肠道外给药的药物组合物包括水溶形式活性化合物的水溶液。此外，活性化合物的悬液可以制备成适当的油性注射悬液。合适的亲脂性溶剂或介质包括脂肪油例如芝麻油，或合成的脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油三酯，或脂质体。水性注射悬液可以包含增加悬液粘性的物质，例如羧甲基纤维素钠、山梨醇或右旋糖苷。任选地，悬液还可以包含合适的稳定剂或增加化合物溶解性的试剂以允许制备高浓缩溶液。可通过组合活性组合物与固体赋形剂，任选地，在加入合适的助剂后，如果需要， 研磨所得混合物，并加工混合物颗粒，以获得片剂或糖衣丸核心，从而获得口服使用的药物制剂。合适的赋形剂是，特别是，填充剂如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖；纤维素制剂如，例如，玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可以加入崩解剂，例如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、或海藻酸或其盐例如海藻酸钠。向糖衣丸核心提供合适的包衣。为此目的，可以使用浓缩糖溶液，其任选地可以包含阿拉伯树胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、Carbopol凝胶、聚乙二醇、和/或二氧化钛、漆溶液，和合适的有机溶剂或溶剂混合物。为识别或特征化活性化合物剂量的不同组合，染料或颜料可加入到片剂或糖衣包衣中。可口服使用的药物制剂包括由明胶制成的推入配合式胶囊，以及由凝胶和增塑剂如甘油或山梨醇制成的软、密封胶囊。推入配合式胶囊可包含与填充剂如乳糖、粘合剂如淀粉和/或润滑剂如滑石粉或硬脂酸镁和任选地稳定剂混合的活性成分。在软胶囊中，活性化合物可溶解或悬于合适的液体中，例如脂肪油、液体石蜡或液态聚乙二醇。此外，可加入稳定剂。如果期望，组合物可包括缓冲体系。选择缓冲体系以维持或缓冲组合物的PH在期望的范围内。如本文所使用的术语“缓冲体系”或“缓冲液”表示溶质试剂，在水溶液中，当向其中加入酸或碱时，其可稳定该溶液避免PH(或氢离子浓度或活性)大的变化。溶质试剂从而负责阻止或PH由起始缓冲pH值在上文所指示范围内变化，这些溶质试剂是公知的。 尽管存在无数合适的缓冲液，一水合磷酸钾是优选缓冲液。药物组合物的最终pH值可在生理相容范围内变化。必要地，最终pH值不刺激人的皮肤并且优选辅助活性化合物即CoQlO的透皮肤运输。不破坏此限制，可选择pH值以提高CoQlO化合物的稳定性及需要时调整其浓度。在一实施方案中，优选pH值为约3. 0到约 7. 4，更优选地约3. 0到约6. 5，最优选地约3. 5到约6. 0。对于优选的局部给药介质，组合物的剩余成分是水，其必须经纯化，例如，去离子水。基于组合物的总重，这些递送介质组合物包含水的范围在超过约50%至约95%。水的具体存在量不是关键的，然而，可以调节水含量以获得期望粘度(通常约50cps到约 10, OOOcps)和/或其他成分的浓度。局部给药介质优选具有至少约30厘泊的粘度。也可使用其他已知的透皮皮肤渗透增强剂以辅助CoQlO的递送。比如亚砜例如二甲亚砜(DMSO)等等；环酰胺例如1-十二烷基氮杂环庚烷-2-酮(Azone^SNelsonReserch， Inc.的注册商标)等等；酰胺例如N，N-二甲基乙酰胺(DMA)N，N-二乙基甲苯酰胺，N， N-二甲基甲酰胺，N，N-二甲基辛酰胺，N，N-二甲基癸酰胺等等；吡咯烷酮衍生物例如N-甲基-2-吡咯烷酮，2-吡咯烷酮，2-吡咯烷酮-5-羧酸，N- (2-羟乙基)-2-吡咯烷酮或其脂肪酸酯，1-月桂基-4-甲氧羰基-2-吡咯烷酮，N-牛脂烷基吡咯烷酮等等；多羟基化合物例如丙二醇，乙二醇，聚乙二醇，二丙二醇，甘油，己三醇等等；直链和支链脂肪酸例如油酸， 亚油酸，月桂酸，戊酸，庚酸，己酸，肉豆蔻酸，异戊酸，新戊酸(neopentanoic)，三甲基己酸， 异硬脂酸等等；醇类例如乙醇，丙醇，丁醇，辛醇，油醇(oleyl)，十八烷醇(stearyl)，亚麻油醇(Iinoleyl)等等；阴离子表面活性剂例如月桂酸钠，月桂基硫酸钠等等；阳离子表面活性剂例如苯扎氯铵，十二烷基三甲基氯化铵，十六烷基三甲基溴化铵等等；非离子表面活性剂例如丙氧基聚氧乙烯醚,例如，Poloxamer 231, Poloxamer 182, Poloxamer 184等等， 乙氧基脂肪酸例如Tween 20，Myrj 45等等，失水山梨醇衍生物例如Tween 40，Tween 60， Tween 80, Span 60等等，乙氧基化醇例如聚氧乙烯(4)月桂醚(Brij 30)，聚氧乙烯(2)油醚(Brij 93)等等，卵磷脂和卵磷脂衍生物等等；萜类例如D-柠檬烯，α-菔烯，β _蒈烯， α-萜品醇，香草醇(carvol)，香芹酮(carvone)，薄荷酮，柠檬烯氧化物，α-菔烯氧化物， 桉树油等等。同样适合作为皮肤渗透增强剂的是有机酸和酯例如水杨酸，水杨酸甲酯，柠檬酸， 琥珀酸等等。血管发生和血管发生依赖性疾病如本文所使用的，术语“血管生成抑制”或“抗血管生成”包括血管发生，意思是指使新血管形成的程度、量或速率降低的作用。使组织中内皮细胞增殖或迁移的程度、量或速率降低的作用是抑制血管发生的具体实例。术语“血管生成抑制性组合物”涉及含CoQlO的组合物，其抑制肿瘤介导的血管发生过程例如内皮细胞迁移、增殖、管形成，且随后导致抑制从现有血管产生新血管，从而抑制血管发生依赖性疾病，例如，肿瘤介导的血管发生。例如见图29Α和^Β，其中，与缺乏任何CoQlO的对照组织比较，含CoQlO的组合物抑制组织中肿瘤介导的血管发生。含CoQlO 的组合物被详细描述于以下实施例。如本文所用，术语“血管发生依赖性疾病”意指血管发生或血管生成过程支持或增加病理状况的疾病。尤其是，血管发生依赖性疾病涉及肿瘤介导的血管发生。血管发生是从已有的毛细管或后毛细管小静脉形成新血管。血管生成是由于从作为内皮细胞前体的成血管细胞形成新血管。两种过程都导致新血管形成并包含在术语血管发生依赖性疾病含义内。相似地，如本文所使用的术语“血管发生”意思包括血管全新形成， 例如源于血管生成，以及那些源于现存动脉、毛细管和小静脉的分支和芽支的血管形成。血管发生，包括血管生成，是重要的生理过程，没有它胚胎发育及伤口愈合将不会发生。然而，作为向受影响组织内的细胞提供充足的血液和营养供应的手段，血管发生也不适当地参与众多病理状况。这些病理状况中有很多涉及异常的细胞增殖或调控。血管发生被认为对其有重要影响的这些状况在本文中被称为血管发生依赖性疾病。然而，本发明的方法也能有益的被用来抑制与正常生理过程相关的血管发生。例如，抑制与月经周期相关的血管发生可预防性用作有效的节育方法。因此，以下参考血管发生依赖性疾病治疗的说明也可应用于抑制正常血管发生反应，其中存在预防或治疗性需要或有益。血管发生依赖性疾病包括，例如，炎症性疾病例如免疫或非免疫炎症、类风湿性关节炎、慢性关节风湿症和牛皮癣；与不适宜的或不合适的血管入侵有关的疾病例如糖尿病性视网膜病、新生血管性青光眼、早产儿视网膜病、视网膜黄斑变性、角膜移植排斥、晶状体纤维增生、虹膜发红、动脉粥样硬化斑块中的毛细管增生和骨质疏松症；以及癌症相关的疾病，包括例如，实体瘤、肿瘤转移、血液中肿瘤例如白血病、血管纤维瘤、卡波西肉瘤、良性肿瘤例如血管瘤、听神经瘤、纤维神经瘤、沙眼和化脓性肉芽肿，以及需要新血管形成来支持肿瘤生长的其它癌症。血管发生依赖性疾病的其它实例包括，例如，Osier-Webber综合症； 心肌血管发生；斑块新血管形成；毛细管扩张；血友病性关节和创伤性肉芽。在其中血管发生对病理状态的维持或发展起作用的其他疾病是为本领域技术人员所知的，并且相似地包含在本文所用术语的含义内。优选地，血管发生介导的疾病是指肿瘤诱导的血管发生。血管发生抑制活性的体外生物学测试可以在几个体外测试系统中检测本发明的CoQlO化合物的血管发生抑制活性，这是本领域普通技术人员所熟知的。内皮细胞，例如，人脐静脉内皮细胞(HUVEC)或人微血管内皮细胞(HMVEC)可以制备或商业获得，以2X IO5细胞/mL的浓度与纤维蛋白原(5mg/ mL)的磷酸盐缓冲液(PBS)按1 l(v/v)比例混合。加入凝血酶(5单位/mL终浓度)并且混合物立即转入M孔板(每孔0. 5mL)。允许形成纤维蛋白胶，然后与测试化合物一起将血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)(各自以5ng/mL终浓度)加入孔内，如以下实施例所述。细胞在37°C、5%C02下培养4天，其间计数每个孔中的细胞，并按圆形、长形无分支、长形有一个分支、或长形有2个或多个分支进行分类。对每个化合物浓度，结果表示为5个不同孔的平均数。典型地，在血管发生抑制剂存在下，细胞保持圆形或形成未分化的管(例如，0或1个分支)。这种测试在本领域被认为可预测体内血管发生效力(或血管发生抑制活性)(Grant et al.，In Vitro Cell Dev. Biol. 27A 327-336(1991) ；Min et al.，Cancer Res. 56 :2428-2433(1996))。在一种替代测试中，当在Matrigel 基质包被的培养板上培养内皮细胞时可观察到内皮细胞管形成，Matrigel 基质包被培养板可从Becton Dickinson of Bedford, Pa. (Schnaper et al.，J. Cell. Physiol. 165 :107-118 (1995))商业获得。将内皮细胞 (IX IO4细胞/孔)转移到Matrigel 基质包被的M孔培养板上，48小时后对管形成进行定量。通过与内皮细胞同时或在其后的不同时间点加入抑制剂来测试抑制剂。该测试通过向内皮细胞提呈特定类型的基底膜来模拟血管发生，基底膜即迁移和分化的内皮细胞预期可能首先遇到的基质层。除了结合生长因子以外，Matrigel 基质(和在基底膜原位)中发现的基质成分或其蛋白水解产物也可以刺激内皮细胞管形成，其使得此模型可作为纤维蛋白凝胶血管发生模型的补充。此外，本发明化合物的血管发生活性可通过鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)测试来评估 (Oikawa et al. , Cancer Lett. 59 :57-66(1991))。联合疗法本发明的CoQlO治疗组合物可与一般用于治疗患者表现的特定肿瘤、疾病或障碍的任何其他方法相结合。只要已知特定治疗方法对患者状况本身是无害的，而且不明显抵消CoQlO组合物治疗，则其与本发明的结合是可以考虑的。
在实体瘤治疗中，本发明可与传统方法例如外科手术、放疗、化疗等联合使用。因此本发明提供了联合疗法，其中CoQlO治疗组合物与外科手术或放射治疗同时、在其前或其后使用；或与传统化疗剂、放疗剂或其他抗血管发生剂、或靶向免疫毒素或共凝集配体 (coaguligand)治疗同时、在其前或其后施用于患者。也可考虑将联合疗法用于其他血管疾病。其中一个具体实例是良性前列腺增生 (BPH)，其可用CoQlO组合物联合本领域目前实行的其他疗法进行治疗。例如，免疫毒素靶向定位于BPH内的标志物，如PSA。当一或多种药剂与CoQlO组合物联合使用时，不要求联合结果是分别进行每种疗法时所观察作用的累加。尽管一般期望至少是累加作用，但是超出一种单独治疗的任何增加的抗肿瘤作用都是有益的。同样，也不特别要求联合治疗表现出协同效应，虽然这的确是可能的并且是有益的。为了进行联合抗肿瘤治疗，可与另一种抗癌剂联合以有效方式向动物施用CoQlO 组合物构造物，所述方式可在动物体内有效导致联合抗肿瘤作用。因此将提供有效量的制剂并持续有效的持续时间，以导致它们联合存在于肿瘤脉管系统中并在肿瘤环境中联合发挥作用。为了达到此目标，CoQlO组合物和其他抗癌剂可同时施用于动物，或以单一组合物、 或用不同给药途径作为两种不同的组合物。作为替代，CoQlO组合物介导的治疗可在第二种抗癌剂治疗之前或之后，例如，间隔可以是几分钟到几周范围。在某些实施方案中，抗癌剂和CoQlO组合物分别施用于动物， 确保显著持续时间不短于两次给药之间的时间间隔，使得抗癌剂和CoQlO组合物仍能向肿瘤施加有益的联合作用。在此情况下，可以考虑将肿瘤与两种制剂在约5分钟至约一周内接触，并且更优选地在约12-72小时内，最优选延迟时间仅约12-48小时。在癌症治疗中一般性使用物质组合是公知的。例如，美国专利No. 5，710，134(经引用并入本文)公开了与无毒性物质或“前药”联合使用的诱导肿瘤坏死的成分。坏死过程释放的酶把无毒的“前药”切割为有毒的“药”，其导致肿瘤细胞死亡。另外，美国专利 No. 5，747，469(经引用并入本文)公开了编码p53的病毒载体和DNA破坏剂的联合使用。 任何这样的相似方法可与本发明一起使用。有些情况下，甚至期望显著延长治疗时间，其中在各次给药之间间隔几天(2、3、4、 5、6或7)、几周(1、2、3、4、5、6、7或8)或甚至几个月(1、2、3、4、5、6、7或8)。这在有些情况下是有利的，在这种情况下一种治疗意图实质性破坏肿瘤，例如CoQlO组合物治疗，而另一种治疗意图微转移或肿瘤再生长，例如施用抗肿瘤剂。也可以考虑利用多于一次施用CoQlO组合物或另一种抗癌剂。CoQlO组合物和抗癌剂可以隔若干天或周交替施用；或者可以给予一系列CoQlO组合物治疗，随后给予一系列抗癌剂治疗。无论如何，为了用联合疗法来实现肿瘤退化，所必须的是以联合的有效发挥抗肿瘤作用的量递送这两种药剂，而无论何时施用。在外科手术方面，任何外科介入可与本发明结合使用。关于放疗，可以考虑诱导局限于肿瘤细胞内DNA损伤的任何机制，例如Y-照射、X-射线、UV-照射、微波甚至电子发射等等。也可以考虑定向递送放射性同位素至肿瘤细胞，并且这可与靶向抗体或其他靶向手段联合使用。细胞因子治疗也已经被证明是联合疗法的有效伙伴。多种细胞因子可在该联合方法中施用。细胞因子的实例包括 IL-I α，IL-I β，IL-2，IL-3，IL-4，IL-5，IL-6，IL-7，IL-8， IL-9,IL-10,IL-11，IL-12，IL_13，TGF_3 ,GM-CSF,M-CSF,G-CSF,TNF α，TNF β ,LAF,TCGF, BCGF，TRF，BAF，BDG, MP, LIF, OSM, TMF，PDGF，IFN- α，IFN- β，IFN- γ。遵照临床指征如患者病况和细胞因子的相对毒性，根据标准方案施用细胞因子。子宫珠蛋白(uteroglobins) 也可用于阻止或抑制转移(美国专利No. 5，696，092 ；经引用并入本文)。
CoQlO组合物和联合化疗在某些实施方案中，本发明的CoQlO组合物可与另一化疗剂联合施用。不考虑背后的机制，多种化疗剂可用于本文所公开的联合治疗方法中。治疗剂可包括，例如，化疗剂比如，环磷酰胺(CTX，25mg/kg/天，口服)、紫杉醇类(太平洋紫杉醇或多烯紫杉醇)、 白消安、顺钼、甲氨喋呤、环磷酰胺、柔红霉素、多柔比星、美法仑、克拉屈滨、长春新碱、长春碱、苯丁酸氮芥、他莫西芬(tamoxifen)、紫杉醇、依托泊苷(etoposide (VP-16))、阿霉素、5-氟尿嘧啶(5FU)、喜树碱、放线菌素-D、丝裂霉素C、顺钼(CDDP)、A-4磷酰胆碱类 (combretastatin)及其衍生物和前药。正如将被本领域普通技术人员所理解的，化疗剂的适当剂量通常大约为那些已经用于临床治疗的剂量，其中化疗制剂被单独施用或与其他化疗制剂联合施用。仅作为举例， 可以使用药剂例如顺钼、和其他DNA烷化剂。顺钼已经被广泛用于治疗癌症，临床应用中使用的有效剂量20mg/m2，每三周5天，总共三个疗程。顺钼不能口服吸收，因此必须通过静脉内、皮下、肿瘤内或腹膜内注射给药。进一步有用的药剂包括干扰DNA复制、有丝分裂和染色体分离的化合物。这些化疗化合物包括阿霉素，也称为多柔比星(doxorubicin)，依托泊苷(etoposide)，维拉帕米 (verapamil)，鬼臼毒素(podophyllotoxin)等等。广泛用于临床治疗新生物时，这些化合物通过静脉推注法给药，剂量范围从阿霉素的25-75mg/m2间隔21天，到静脉注射依托泊苷 35-50mg/m2或口服双倍静脉内注射的剂量。也可以使用干扰多核苷酸前体合成及保真度的药剂。特别有用的药剂是已经接受过广泛检测并容易获得的药剂。如此，新生物组织优先使用药剂如5-氟尿嘧啶(5-FU)，使该药剂特别可用于靶向新生物的细胞。尽管非常毒，5-氟尿嘧啶，可应用于广泛范围的载体，包括局部的，然而通常使用静脉给药，剂量范围是从3到15mg/kg/天。对于可用于和CoQlO组合物联合治疗中的其它化疗剂的非限制性实例，技术人员可以参考 “Remington，s Pharmaceutical Sciences” 第 15 版，33 章，尤其是 624-652 页。 根据待治疗对象的病况，剂量的一些变化将必然发生。负责用药的医生将能决定对于个体治疗对象的合适剂量。抗血管发生术语“血管发生”涉及新血管的产生，这一般在组织或器官内。在正常生理条件下， 人和动物仅在非常特殊的受限情况下经历血管发生。例如，通常在伤口愈合，胎儿和胚胎发育及黄体、子宫内膜和胎盘形成时观察到血管发生。不受控制的(持续的和/或无节制的) 血管发生与多种疾病状态有关，并出现于肿瘤生长和转移中。受控制的和不受控制的血管发生都被认为以相似的方式进行。被基底膜包围的内皮细胞和外皮细胞形成毛细血管。血管发生从基底膜被内皮细胞和白细胞释放的酶侵蚀开始。内皮细胞，其排列于血管内腔表面，然后穿过基底膜伸出。血管发生刺激物诱导内皮细胞迁移通过受侵蚀的基底膜。迁移细胞形成“芽”脱离母体血管，在此内皮细胞经历有丝分裂和增殖。内皮细胞芽彼此融合形成毛细环，从而产生新血管。当持续的、无节制的血管发生出现于肿瘤生长和转移中时，本发明的治疗方法可与任何一种或多种“抗血管发生”疗法结合使用。可以和联合治疗结合使用的抗血管发生剂的实例列于表1。列于其中的每种药剂都是示例性的而决不限于此。
权利要求
1.包含CoQlO和药物接受载体的组合物。
2.权利要求1的组合物，其中该组合物包含辅酶QKKphospholipon90、甘油、丁化羟基甲苯(BHT)、乙醇、中链甘油三酯(MCT)和薰衣草精。
3.权利要求2 的组合物，其中 phospholipon 90 是 phospholipon 90G。
4.权利要求2 的组合物，其中 phospholipon 90 是 phospholipon 90H。
5.权利要求2的组合物，其中组合物进一步包含phospholipon90G和 phospholipon90H。
6.权利要求1的组合物，其中组合物包含约到约25%(w/w)之间的辅酶Q10。
7.权利要求1的组合物，其中组合物包含约到约20%(w/w)之间的辅酶Q10。
8.治疗癌症患者的方法，包括向需要的患者施用，包含治疗有效量的辅酶QlO的组合物； 使肿瘤细胞与所述组合物接触导致肿瘤细胞裂解； 从而治疗癌症患者。
9.权利要求8的方法，其中组合物包含约直至25%w/w的辅酶Q10。
10.权利要求8的方法，其中组合物包含约到约20%w/w的辅酶Q10。
11.权利要求8的方法，其中包含辅酶QlO的组合物被配制为局部霜剂。
12.权利要求8的方法，其中治疗有效量的辅酶QlO组合物与一种或多种化疗剂一起施用。
13.权利要求12的方法，其中化疗剂可与包含治疗有效量辅酶QlO的组合物共同施用、 在其前或其后施用。
14.权利要求12的方法，其中化疗剂选自环磷酰胺(CTX，25mg/kg/天，口服)、紫杉醇类(太平洋紫杉醇或多烯紫杉醇)、白消安、顺钼、环磷酰胺、甲氨喋呤、柔红霉素、多柔比星、美法仑、克拉屈滨、长春新碱、长春碱、及苯丁酸氮芥。
15.权利要求8的方法，其中治疗导致肿瘤细胞生长的抑制。
16.抑制对象中肿瘤细胞生长的方法，该方法包括向对象施用含辅酶QlO的药物组合物。
17.权利要求16的方法，其中药物组合物包含约和25%w/w之间的辅酶Q10。
18.权利要求16的方法，其中药物组合物包含约直至25%w/w的辅酶Q10。
19.权利要求16的方法，其中药物组合物包含约到约20%w/w的辅酶Q10。
20.诱导肿瘤细胞凋亡的方法，该方法包括施用包含辅酶QlO的药物组合物。
21.权利要求20的方法，其中药物组合物包含约直至25%w/w的辅酶Q10。
22.权利要求20的方法，其中药物组合物包含约到约20%w/w的辅酶Q10。
23.权利要求20的方法，其中经线粒体膜染料测试和/或膜联蛋白-VPE测试测量，药物组合物诱导至少约30%肿瘤细胞凋亡。
24.权利要求20的方法，其中经线粒体膜染料测试和/或膜联蛋白-VPE测试测量，药物组合物诱导约50%肿瘤细胞凋亡。
25.权利要求20的方法，其中经线粒体膜染料测试和/或膜联蛋白-VPE测试测量，药物组合物诱导约60%肿瘤细胞凋亡。
26.权利要求20的方法，其中经线粒体膜染料测试和/或膜联蛋白-VPE测试测量，药物组合物诱导约75%肿瘤细胞凋亡。
27.权利要求20的方法，其中经线粒体膜染料测试和/或膜联蛋白-VPE测试测量，药物组合物诱导约90%肿瘤细胞凋亡。
28.权利要求20的方法，其中经线粒体膜染料测试和/或膜联蛋白-VPE测试测量，药物组合物诱导约99. 9%肿瘤细胞凋亡。
29.抑制肿瘤中血管发生的方法，该方法包括使肿瘤与含辅酶QlO的药物组合物接触。
30.权利要求四的方法，其中药物组合物包含约直至25%w/w的辅酶Q10。
31.权利要求四的方法，其中药物组合物包含约到约20%w/w的辅酶Q10。
32.试剂盒，包含 辅酶Q10， phospholipon 90, 甘油，丁化羟基甲苯(BHT)， 乙醇，中链甘油三酯(MCT)，和薰衣草精。
33.权利要求32 的试剂盒，其中 phospholipon 90 是 phospholipon 90G。
34.权利要求32 的试剂盒，其中 phospholipon 90 是 phospholipon 90H。
35.权禾Ij要求 32 的试剂盒，其中 phospholipon 90 是 phospholipon 90G 和 phospholipon90H。
36.权利要求32的试剂盒，其中提供的辅酶QlO在约到约30%(w/w)之间。
全文摘要
CoQ10局部制剂降低动物对象中的肿瘤生长速率。在本文所述实验中，显示CoQ10增加皮肤癌细胞而不是正常细胞的培养物中细胞凋亡的速率。此外，显示用CoQ10局部制剂处理负瘤动物显著降低动物中的肿瘤生长速率。
文档编号A61K9/06GK102258503SQ20101019302
公开日2011年11月30日 申请日期2005年1月21日 优先权日2004年1月22日
发明者凯瑟琳·J·鲁塞尔, 卡鲁恩·V·沃恩, 因杜谢卡尔·佩尔绍德, 夏松澜, 尼文·拉金·纳拉因, 李 杰 申请人:迈阿密大学