专利名称：野漆树苷、金丝桃苷组合物及其制备药物用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种野漆树苷、金丝桃苷组合物及其制备药物用途。
背景技术：
目前流行性感冒病毒日益严重，并且流行性感冒病毒与呼吸道疾病及引起的全身 性疾病密切相关，我国是流感高发国家之一，不但人口众多，而且生活习惯也有利于流感病 毒的转播，每年人平均发病次数达到0. 3 0. 7次不等，重点人群达到2 4次。流感对人 类存在严重威胁，尤其是新发品种流感病毒，其不但引起继发性其它微生物感染，而且会直 接导致器官破坏和变态反应致人死亡。但目前并没有有效的治疗流行性感冒病毒及其疾病 (流感)的方法和治疗手段，如针对临床症状进行炎症反应治疗，治标不治本。目前最常见 的预防和治疗流行性感冒病毒的方法是使用流感病毒疫苗接种，非特异性抗病毒中药或西 药磷酸奥司他韦(达菲)_神经氨酸酶抑制剂。然而流感病毒疫苗预防接种弊端在于接种 人群有选择性，不是人人可以接种。此外，流感病毒疫苗保护率不高，保护时间也较短(3 6个月)。目前大多数非特异性抗病毒中药虽然宣称有抗病毒作用，但是并非针对流感病 毒，且抗病毒作用机理不清楚。在我们以往研究的许多种治疗外感风寒，西医所认为的感冒 的中药组方并没有直接抗流感病毒的作用。简单的说，不是所有的治疗感冒的中药组方都 有明确的抑制流感病毒的作用。西药“磷酸奥司他韦(达菲，(3R，4R，5S)-4-乙酰胺-5-氨 基-3(1-丙氧乙酯)-1_环己烯-1羧酸乙酯磷酸盐)”是神经氨酸酶抑制剂，对流感病毒进 入细胞有特异性抑制作用，但是不仅价格昂贵，而且有一些患者服用后出现呕吐、恶心、失 眠、头痛、腹痛、腹泻、头晕、疲劳、鼻塞、咽痛和咳嗽等副反应。达菲是在体内被位于肝脏和 肠道的酯酶转化为活性代谢产物而起着抑制神经氨酸酶作用，如果患者肝脏和肠道器官功 能不正常也将影响其药效。此外，肾功能不全患者也要慎用。传统的中医学认为山香圆叶具有清热解毒，利咽消肿，活血止痛。用于乳蛾喉痹， 咽喉肿痛，疮疡肿毒，跌扑伤痛；野漆树苷、金丝桃苷为山香圆叶的主要成分之一。化橘红具 有散寒，燥湿，利气，消痰。用于风寒咳嗽，喉痒痰多，食积伤酒，呕恶痞闷；野漆树苷为化橘 红主要成分之一。贯叶金丝桃具有舒肝解郁，清热利湿，消肿止痛。用于情志不畅，气滞郁 闷，关节肿痛，小便不利。金丝桃苷是贯叶金丝桃的主要成分之一，金丝桃苷对心肌缺血再 灌注，脑缺血再灌注，脑梗塞都显示良好的保护作用，还具有镇痛，抗氧化，保护心肌、肝脏 作用。但未发现山香圆叶及其所含的野漆树苷和金丝桃苷、化橘红及其所含的野漆树苷、贯 叶金丝桃及其所含的金丝桃苷具有抑制流感病毒感染、复制的作用，也未发现具有抑制神 经氨酸酶的作用。
发明内容
本发明的目的是提供野漆树苷、金丝桃苷组合物，其可以抑制流感病毒神经氨酸 酶水解细胞表面唾液酸，导致流感病毒不能与细胞表面受体结合而进入细胞内，以及减少 流感病毒在细胞内的产生，从而有效地针对性地抑制流感病毒复制，更重要地是本发明提
4供一种野漆树苷、金丝桃苷组合物可以克服现有药物的副反应弊端。本发明提供的野漆树苷、金丝桃苷组合物，其中所述野漆树苷的分子式=C27H3tlO14, 分子量578. 52，所述野漆树苷的结构式如下 所述金丝桃苷的分子式=C21H2tlO12,分子量464. 38，所述金丝桃苷的结构式如下 其中所述的野漆树苷、金丝桃苷组合物是由下列重量配比制成的野漆树苷 80 % 20 %、金丝桃苷20 % 80 %。优选的，其中所述的野漆树苷、金丝桃苷组合物是由下列重量配比制成的野漆树 苷75% 25%、金丝桃苷25% 75%。优选的，其中所述的野漆树苷、金丝桃苷组合物是由下列重量配比制成的野漆树 苷60 % 40 %、金丝桃苷40 % 60 %。优选的，其中所述的野漆树苷、金丝桃苷组合物是由下列重量配比制成的野漆树 苷55% 45%、金丝桃苷45% 55%。优选的，其中所述的野漆树苷、金丝桃苷组合物是由下列重量配比制成的野漆树 苷50%、金丝桃苷50%。另一方面，本发明还提供了所述的野漆树苷、金丝桃苷组合物的提取方法，其中所 述的野漆树苷、金丝桃苷是从山香圆叶中提取获得的，所述提取方法如下取山香圆叶，加 5 15倍量的30% 90%乙醇回流提取1 3次，每次回流提取1 3小时，滤过；合并 滤液，回收乙醇，水溶液通过大孔树脂柱洗脱，收集洗脱部分，减压浓缩，干燥，得野漆树苷、 金丝桃苷的混合总苷，经分离，分别合并野漆树苷、金丝桃苷流份，结晶，得到野漆树苷、金 丝桃苷纯品。优选的，其中所述的野漆树苷、金丝桃苷采用如下的提取方法获得取山香圆叶， 加12倍量70%乙醇回流提取1. 5小时，滤过，滤渣再加10倍量70%乙醇回流提取1. 5小时，滤过，合并两次提取液，回收乙醇，水溶液通过大孔树脂柱洗脱，收集洗脱部分，减压浓
缩，干燥。优选的，其中水溶液通过已处理好的DlOl大孔树脂柱，分别用水、5% 10%乙 醇、30 % 55 %乙醇、1 %氢氧化钠溶液洗脱，收集30 % 55 %乙醇洗脱部分，减压浓缩，干燥。优选的，其中混合总苷经硅胶柱层析、S^hadex LH-20柱层析分离，分别合并野漆 树苷、金丝桃苷流份，结晶，得到野漆树苷和金丝桃苷的纯品。本发明还提供了野漆树苷、金丝桃苷组合物用于制备预防和治疗流感及其并发症 疾病的药物的用途。优选的，野漆树苷、金丝桃苷组合物用于抑制流感病毒。优选的，野漆树苷、金丝桃苷组合物用于抑制流感病毒FM1。
优选的，野漆树苷、金丝桃苷组合物用于抑制神经氨酸酶。优选的，其并发症是指肾功能衰竭。优选的，其并发症是指脾损伤或/和肺损伤。本发明所述的野漆树苷、金丝桃苷可以是从含野漆树苷、金丝桃苷的各种药材中 如山香圆叶、化橘红、贯叶金丝桃叶中提取获得野漆树苷、金丝桃苷粗品或野漆树苷、金丝 桃苷单体化合物。最后，本发明还提供了 一种野漆树苷、金丝桃苷组合物制剂，该制剂以本发明上述 的野漆树苷、金丝桃苷组合物为主要活性成分。实验数据证明，本发明的野漆树苷、金丝桃苷组合物是有效的抑制神经氨酸酶成 分，野漆树苷、金丝桃苷组合物随着使用剂量大小变化，其抑制神经氨酸酶活性的能力，即 神经氨酸酶抑制率的高低也相应发生变化，并且成正相关，野漆树苷、金丝桃苷组合物能够 通过抑制流感病毒表面神经氨酸酶，进而抑制流感病毒进入细胞里面、抑制已经进入细胞 里面的流感病毒复制、增殖，从而减少了流感病毒对细胞的感染、生长，以及预防和治疗流 感及其并发症，还可以抑制流感病毒神经氨酸酶水解细胞表面唾液酸，导致流感病毒不能 与细胞表面受体结合而进入细胞内，以及减少流感病毒在细胞内的产生，更重要地是本发 明提供一种野漆树苷、金丝桃苷组合物可以克服现有药物的副反应弊端。而医学和药学研究人员无法预先在不做抑制流感病毒感染、复制，或抑制神经氨 酸酶的实验的前提下，预先得知野漆树苷、金丝桃苷组合物具有预防和治疗流感病毒性感 冒的良好效果。综上所述，本发明提供的野漆树苷、金丝桃苷组合物及其用途带来显著的技术效果。
具体实施例方式实施例1本发明的野漆树苷、金丝桃苷组合物，其中所述野漆树苷的分子式=C27H3tlO14，分子 量578. 52，所述野漆树苷的结构式如下 所述金丝桃苷的分子式=C21H2tlO12,分子量464. 38，所述金丝桃苷的结构式如下 取山香园叶1000g，W 12倍量70%乙醇回流提取2小时，滤过，滤渣再加10倍 量70%乙醇回流提取1.5小时，滤过，合并两次提取液，回收乙醇，水溶液通过已处理好 的DlOl大孔树脂柱，分别用水、10 %乙醇、45 %乙醇、1 %氢氧化钠溶液洗脱，收集45 % 乙醇洗脱部分，减压浓缩，干燥，得30以上野漆树苷、金丝桃苷的混合总苷，经硅胶柱层 析、Sephadex LH-20柱层析分离，分别合并野漆树苷、金丝桃苷流份，结晶，得到野漆树苷 (3. 5g，纯度98. 5% )和野漆树苷(1. 5g，纯度98. 5% )纯品，经分别与野漆树苷、金丝桃 苷标准品的UV、IR, ESI-MS^iH-NMR, 13C-NMR比较，确定了上述二个化合物的结构。另外，本发明提供的女贞苷、金丝桃苷也可以分别提取获得，如以下列举的实施 例。实施例2取化橘红lOOOOOg，加12倍量70%乙醇回流提取2小时，滤过，滤渣再加10倍 量70%乙醇回流提取1. 5小时，滤过，合并两次提取液，回收乙醇，水溶液通过已处理好的 D101大孔树脂柱，分别用水、10 %乙醇、45 %乙醇、1 %氢氧化钠溶液洗脱，收集45 %乙醇洗 脱部分，减压浓缩，干燥，得30%以上野漆树苷的混合总苷，经硅胶柱层析、S^hadex LH-20 柱层析分离，合并野漆树苷流份，结晶，得到野漆树苷(450g，纯度98. 9% )纯品，经分别与 野漆树苷标准品的UV、IR, ESI-MS, 1H-NMR, 13C-NMR比较，确定了野漆树苷的结构。实施例3取化橘红lOOOOOg，加10倍量60%乙醇回流提取2小时，滤过，滤渣再加8倍 量60 %乙醇回流提取1. 5小时，滤过，合并两次提取液，回收乙醇，水溶液通过已处理好的 DlOl大孔树脂柱，分别用水、10 %乙醇、45%乙醇、1 %氢氧化钠溶液洗脱，收集45%乙醇洗 脱部分，减压浓缩，干燥，得30%以上野漆树苷的混合总苷，经硅胶柱层析、S^hadex LH-20 柱层析分离，合并野漆树苷流份，结晶，得到野漆树苷(455g，纯度98. 6% )纯品，经分别与野漆树苷标准品的UV、IR, ESI-MS^iH-NMR, 13C-NMR比较，确定了野漆树苷的结构。实施例4取贯叶金丝桃10000g，W 12倍量70%乙醇回流提取1. 5小时，滤过，滤渣再加10 倍量70%乙醇回流提取1. 5小时，滤过，合并两次提取液，回收乙醇，水溶液通过已处理好 的DlOl大孔树脂柱，分别用水、10%乙醇、45%乙醇、氢氧化钠溶液洗脱，收集45%乙 醇洗脱部分，减压浓缩，干燥，得30 %以上金丝桃苷的混合总苷，经硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱层析分离，合并金丝桃苷流份，结晶，得到金丝桃苷(85g，纯度98.6%)纯品，经分 别与金丝桃苷标准品的UV、IR, ESI-MS^iH-NMR, 13C-NMR比较，确定了金丝桃苷的结构。实施例5将野漆树苷(14g)与金丝桃苷(6g)以7 3的比例混合，搅拌、研磨、混合均勻后 得野漆树苷、金丝桃苷组合物。实施例6将野漆树苷(12g)与金丝桃苷(8g)以6 4的比例混合，搅拌、研磨、混合均勻后 得野漆树苷、金丝桃苷组合物。实施例7将野漆树苷(IOg)与金丝桃苷(IOg)以5 5的比例混合，搅拌、研磨、混合均勻 后得野漆树苷、金丝桃苷组合物。实施例8将野漆树苷(6g)与金丝桃苷(14g)以3 7的比例混合，搅拌、研磨、混合均勻后 得野漆树苷、金丝桃苷组合物。实施例9将野漆树苷(8g)与金丝桃苷(12g)以2 3的比例混合，搅拌、研磨、混合均勻后 得野漆树苷、金丝桃苷组合物。下面结合表1给出本发明野漆树苷与金丝桃苷质量百分比的一些优选实施例，但 本发明二者的组成成份的含量不局限于该表中所列数值，对于本领域的技术人员来说，完 全可以在表中所列数值范围的基础上进行合理概括和推理。表1 野漆树苷、金丝桃苷占组合物的重量百分比(％ ) 实验数据1 野漆树苷、金丝桃苷组合物对神经氨酸酶活性的抑制作用取实施例6制备方法所获得的野漆树苷、金丝桃苷组合物，加适量水使溶解，应用 神经氨酸酶抑制剂鉴定试剂盒测定野漆树苷、金丝桃苷组合物抑制神经氨酸酶(Ni)的效 价见表2。(1).标准曲线准备a.在96孔荧光酶标板内每孔加入70 μ 1神经氨酸酶检测缓 冲液；b.每孔再分别加入0、1、2、5、7. 5、10μ 1 H5m神经氨酸酶；c.每孔再加入0 20 μ 1 Milli-Q 水。(2).样品检测的准备a.在96孔荧光酶标板内每孔加入70 μ 1神经氨酸酶检测 缓冲液；b.每孔再加入10 μ 1 Η5Ν1神经氨酸酶；C.每孔再加入0 10 μ 1野漆树苷、金丝 桃苷组合物样品；d.每孔再加入0 10 μ 1 Milli-Q水。(3).检测步骤a.振动混勻约Imin;b. 37°C孵育2min使抑制剂和H5W神经氨酸酶充分相互作用，做标准曲线的样品 也一起孵育；c.每孔加入10 μ 1神经氨酸酶荧光底物；d.再振动混勻约Imin ；e. 37°C孵育20 30min后进行荧光测定。激发波长为360nm，发射波长为440nm。(4).根据标准曲线计算出样品对于H5W神经氨酸酶的抑制百分比，以及做浓度 曲线后计算出野漆树苷、金丝桃苷组合物对于H5m神经氨酸酶的IC50。野漆树苷、金丝桃 苷组合物达到对神经氨酸酶的抑制率IC50为0. 045g/L。见表2。表2.野漆树苷、金丝桃苷组合物抑制神经氨酸酶的活性 根据上述实验结果可以清楚地看到(1).野漆树苷、金丝桃苷组合物能够提取出有效的抑制神经氨酸酶成分；(2).野漆树苷、金丝桃苷组合物随着使用剂量大小变化，其抑制神经氨酸酶活性 的能力，即神经氨酸酶抑制率的高低也相应发生变化，并且成正相关；(3).由上述实验可见，野漆树苷、金丝桃苷组合物能够通过抑制流感病毒表面神 经氨酸酶，进而抑制流感病毒进入细胞里面、抑制已经进入细胞里面的流感病毒复制、增 殖，从而减少了流感病毒对细胞的感染、生长，以及预防和治疗流感及其并发症。医学和药学研究人员无法预先在不做抑制流感病毒感染、复制，或抑制神经氨酸 酶的实验的前提下，预先得知野漆树苷、金丝桃苷组合物具有预防和治疗流感病毒性感冒 的良好效果。实验数据2 野漆树苷、金丝桃苷组合物对流感病毒感染鸡胚的抑制作用取实施例6制备方法所获得的野漆树苷、金丝桃苷组合物，应用流感病毒亚甲型 鼠肺适应株(FMl) (HlNl)鉴定野漆树苷、金丝桃苷组合物抑制FMl流感病毒在鸡胚中复制 和抑制的能力。(1).将FMl流感病毒液接种于IOd龄无特定病原体鸡胚尿囊腔内，每胚 0.2ml，37°C孵育72h，观察并计算半数鸡胚感染量(EID50)。(2).野漆树苷、金丝桃苷组合 物对鸡胚的毒性作用采用，无菌生理盐水对野漆树苷、金丝桃苷组合物作系列稀释后接种 于IOd龄无特定病原体鸡胚尿囊腔内，每胚0. 2ml，每个浓度接种6胚，37°C孵育，观察鸡胚 生长发育情况，以鸡胚可存活96h的最大浓度作为药物的TD。(3).野漆树苷、金丝桃苷组 合物在鸡胚中对流感病毒的抑制作用采用，0. Iml的流感病毒液和不同稀释度的野漆树苷、 金丝桃苷组合物混合，37°C作用2h，接种于IOd龄无特定病原体鸡胚尿囊腔，每组接种6胚， 37°C孵育72h。病毒攻击量为50EID50，同时设病毒对照、无菌生理盐水正常对照，计算野漆 树苷、金丝桃苷组合物对病毒抑制作用的半数有效剂量(ED50)。(1).FM1流感病毒对鸡胚的毒力经Reed-Muench法计算，其EID50为10_5_°7。(2). 野漆树苷、金丝桃苷组合物接种于鸡胚后，其生长发育与正常对照组基本一致。96h鸡胚均 存活。鸡胚给予野漆树苷、金丝桃苷组合物原液未见鸡胚死亡，所以可认为TDO为1. 9g/L。 (3).野漆树苷、金丝桃苷组合物在鸡胚中对流感病毒的抑制作用见表3。表3.野漆树苷、金丝桃苷组合物对流感病毒感染鸡胚的抑制作用 与病毒对照组比较*P < 0. 05由表3可知，野漆树苷、金丝桃苷组合物在0. 059 0. 475g/L对流感病毒有显著 的抑制作用(P < 0. 05)，ED50 为 0. 059 士0. 0029g/L, TI 为 81. 36 士4. 27。实验数据3 野漆树苷、金丝桃苷组合物对FMl流感病毒影响取实施例6制备方法所获得的野漆树苷、金丝桃苷组合物，应用流感病毒亚甲型 鼠肺适应株(FMl) (HlNl)鉴定野漆树苷、金丝桃苷组合物抑制FMl流感病毒毒力的能力。
(1).FMl对狗肾传代细胞(MDCK)的毒力测定采用细胞半数感染量(TCID50)微量法。(2). 野漆树苷、金丝桃苷组合物对MDCK细胞的毒性测定采用无血清的DMEM对野漆树苷、金丝 桃苷组合物作系列稀释后接种于已形成单层的MDCK细胞孔中，每孔100μ 1，每个稀释度重 复4个孔，同时设正常细胞对照。将培养板置37°C、5% CO2培养箱内培养，每日观察细胞 病变(CPE)，连续观察3d，以“+ ++++”记录结果，按Reed-Muench法计算药物半数中毒 浓度(TD50)和最大无毒浓度(TDO)。(3).野漆树苷、金丝桃苷组合物抑制FMl流感病毒 作用测定:MDCK细胞5X105/ml，每孔100μ 1，分别于96孔板中，37°C、5% C02培养箱内培 养，次日吸去孔中培养液，加入100TCID50流感病毒液，每孔100μ 1，37°C吸附Ih后吸去上 清液。用磷酸盐缓冲液(PBS)洗2次，以药物的TDO为第1孔，再用无血清的DMEM液对野 漆树苷、金丝桃苷组合物作系列稀释，分别加入上述已感染病毒的细胞中，同时设病毒对照 和正常对照组，37°C,5% CO2温箱内培养，每日观察流感病毒产生的MDCK细胞病变特征，即 单层细胞变性变圆等，连续3d，计算出药物的50%抑制病变浓度(IC50)及治疗指数(Tl)。 TI的计算TI = TD50/IC50, TI值越大，表明药物的安全范围越大。以Kruskal-Walis和 Mann-Whitney检验法比较试验组与病毒对照组细胞病变的差异，对药物剂量和对病毒感染 细胞避免发生细胞病变(CPE)的抑制率进行相关性分析，判断是否存在量效反应关系。(1). FMl流感病毒对MDCK细胞的毒力经Reed-Muench法计算，其TCID50为10_4 81。
(2).野漆树苷、金丝桃苷组合物MDCK细胞的TDO分别为0.77g士0.042g/L。(3).将野漆树 苷、金丝桃苷组合物作系列稀释后，对100TCID50流感病毒进行抑制试验，计算药物的半数 有效量IC50及TI值大小，结果见表4。表4.野漆树苷、金丝桃苷组合物对FMl流感病毒的IC5tl (mg/100ml)及TI (χ士s) 由表4可知，野漆树苷、金丝桃苷组合物的IC50低，TI高。野漆树苷、金丝桃苷组 合物抑制FMl流感病毒致细胞病变的作用均随着药物剂量的增加而增强。对药物剂量和药 物对CPE的抑制率进行的相关性分析表明，野漆树苷、金丝桃苷组合物的剂量与药物对CPE 抑制率之间呈明显的正相关。实验数据4 野漆树苷、金丝桃苷组合物对小鼠体内感染流感病毒FMl株的脾指数 和肺指数的影响取实施例6制备方法所获得的野漆树苷、金丝桃苷组合物，应用流感病毒亚甲型 鼠肺适应株(FMl) (HlNl)鉴定野漆树苷、金丝桃苷组合物对小鼠体内感染流感病毒FMl株 的死亡保护作用。(1).流感病毒FMl株病毒做10倍倍比稀释后分别接种每组10只BALB/ C小鼠，雌雄各半。乙醚轻度麻醉后，每组分别给与不同稀释度的病毒，每只小鼠滴鼻接种 20 μ 1。观察IOd的小鼠死亡情况，按Reed-Muench法计算LD50为10_136。故确定实验所 用的造模浓度为10LD50。(2).野漆树苷、金丝桃苷组合物对小鼠体内感染流感病毒FMl 株的死亡保护作用正常对照组、流感病毒FMl株病毒对照组、野漆树苷、金丝桃苷组合物 0. 11875g/L、0. 2375g/L、0. 475g/L、0. 95g/L剂量组等分别灌胃，灌胃容量均为0. 4ml/只。 3d后，除正常对照组外各组在乙醚轻度麻醉下用10LD50流感病毒FMl株滴鼻感染小鼠 20μ 1/只。同时正常对照组给予同体积的生理盐水。给药的4组继续给药，正常对照组和流 感病毒FMl株病毒对照组给生理盐水8天，剂量同上。逐日观察动物发病和记录死亡数，共 观察14天，计算死亡率(死亡率=每组死亡数/每组小鼠总数X 100 % )，结果见表5。(3). 野漆树苷、金丝桃苷组合物对小鼠体内感染流感病毒FMl株肺指数的影响正常对照组、流 感病毒FMl株病毒对照组、野漆树苷、金丝桃苷组合物0. 11875g/L、0. 2375g/L、0. 475g/L、 0. 95g/L剂量组等分别灌胃，灌胃容量均为0. 4ml/只。3天后，除正常对照组外各组在乙醚 轻度麻醉下用1.0LD50流感病毒FMl株滴鼻感染小鼠20μ1/只。同时正常对照组给予同 体积的生理盐水。给药的4组继续给药，正常对照组和流感病毒FMl株病毒对照组给生理 盐水8天，剂量同上。于病毒感染后第8天处死小鼠，称体重，取肺称肺重，计算肺指数(肺 指数=肺质量/体质量X 100% )；此外，取脾称脾重，计算脾指数(脾指数=脾质量/体质 量Χ100% )，结果见表6。表5.野漆树苷、金丝桃苷组合物对小鼠体内感染流感病毒FMl株的死亡保护结果 注※※P < 0. OlVS流感病毒模型组 ※？ < 0. 05VS流感病毒模型组表6.野漆树苷、金丝桃苷组合物对小鼠体内感染流感病毒FMl株的脾指数和肺指
数的影响 注:#P < 0. 05VS正常对照组 注※※ρ < 0. 001 VS流感病毒模型组 ※？ < 0. 05VS流感病毒模型组(1).由表5可知，野漆树苷、金丝桃苷组合物在0.2375 0.95g/L对流感病毒感 染小鼠有显著的保护作用(P < 0. Ol-P < 0. 05)。(2).由表6可知，野漆树苷、金丝桃苷组合物在0.475 0.95g/L对流感病毒感染 小鼠的肺指数抑制率有显著的作用(P < 0.01)。实验数据5 野漆树苷、金丝桃苷组合物对肾功能损伤的影响1) SD大鼠，200 240g，上海西普尔-必凯实验动物责任有限公司，动物合格证号 SCXK(沪)2003-00022)试剂及药物腺嘌呤，腺嘌呤，(含量> 98%，为进口分装，中国上海，批号 20010520)，实施例3制备方法所获得的野漆树苷、金丝桃苷组合物；3)试验方法雄性SD大鼠，体重220g左右，先用普通饲料喂养10天正常生长后， 按体重随机分为正常对照组、给药实验组和造模对照组，每组13 15只。给药实验组和造 模对照组用腺嘌呤灌胃制作慢性肾功能衰竭(CRF)模型，以腺嘌呤320mg/(kg*d)灌胃，用 蒸馏水制成混悬液约2ml/只，共20天；20天后给药，给药实验组以野漆树苷、金丝桃苷组 合物2. 0g/(kg.d)灌胃，野漆树苷、金丝桃苷组合物以蒸馏水制成混悬溶液(0. 25g/ml)，每 次约2ml/只，分次灌胃，正常对照组和造模对照组以等体积水灌胃，给药35天后将大鼠用 乙醚麻醉，鼠尾动脉采血观察各项指标。4)结果
表7.野漆树苷、金丝桃苷组合物对CRF大鼠肾功能的影响 注经T检验，给药野漆树苷、金丝桃苷组合物与造模对照组和正常对照组比较 “*” 表示 P < 0. 05，“**” 表示 P < 0. 01本实验用腺瞟呤灌胃建立大鼠CRF模型后，造模对照组大鼠精神萎靡，体重明显 降低，血清BuruSer明显升高，Hb明显下降，Ret明显升高，表明大鼠肾功能受损，经给予野 漆树苷、金丝桃苷组合物治疗后大鼠与正常对照组差异不显著，而与模型组比较差异十分 显著，故野漆树苷、金丝桃苷组合物对对肾脏无毒性作用。
权利要求
一种野漆树苷、金丝桃苷组合物，其中所述野漆树苷的分子式C27H30O14，分子量578.52，所述野漆树苷的结构式如下所述金丝桃苷的分子式C21H20O12，分子量464.38，所述金丝桃苷的结构式如下其中所述的野漆树苷、金丝桃苷组合物是由下列重量配比制成的野漆树苷80％～20％、金丝桃苷20％～80％。FSA00000229859400011.tif,FSA00000229859400012.tif
2.根据权利要求1所述的野漆树苷、金丝桃苷组合物，其中所述的野漆树苷、金丝桃苷 组合物是由下列重量配比制成的野漆树苷75% 25%、金丝桃苷25% 75%。
3.根据权利要求2所述的野漆树苷、金丝桃苷组合物，其中所述的野漆树苷、金丝桃苷 组合物是由下列重量配比制成的野漆树苷60% 40%、金丝桃苷40% 60%。
4.根据权利要求3所述的野漆树苷、金丝桃苷组合物，其中所述的野漆树苷、金丝桃苷 组合物是由下列重量配比制成的野漆树苷55 % 45 %、金丝桃苷45 % 55 %。
5.根据权利要求4所述的野漆树苷、金丝桃苷组合物，其中所述的野漆树苷、金丝桃苷 组合物是由下列重量配比制成的野漆树苷50 %、金丝桃苷50 %。
6.权利要求1、2、3、4或5所述的组合物用于制备预防和治疗流感及其并发症疾病的药 物的用途。
7.如权利要求6的用途，其特征在于所述的组合物用于抑制流感病毒。
8.如权利要求7的用途，其特征在于所述的组合物用于抑制流感病毒FM1。
9.权利要求6的用途，其特征在于所述的组合物用于抑制神经氨酸酶。
10.权利要求6的用途，其并发症是指肾功能衰竭。
11.权利要求6的用途，其并发症是指脾损伤或/和肺损伤。
12.一种野漆树苷、金丝桃苷组合物制剂，其中该制剂以权利要求1 5任一项所述的 野漆树苷、金丝桃苷组合物为主要活性成分。
13.权利要求1、2、3、4或5所述的野漆树苷、金丝桃苷组合物的提取方法，其中所述的 野漆树苷、金丝桃苷是从山香圆叶中提取获得的，所述提取方法如下取山香圆叶，加5 15倍量的30% 90%乙醇回流提取1 3次，每次回流提取1 3小时，滤过；合并滤液， 回收乙醇，水溶液通过大孔树脂柱洗脱，收集洗脱部分，减压浓缩，干燥，得野漆树苷、金丝 桃苷的混合总苷，经分离，分别合并野漆树苷、金丝桃苷流份，结晶，得到野漆树苷、金丝桃 苷纯品。
14.如权利要求13所述的方法，其中所述的野漆树苷、金丝桃苷采用如下的提取方法 获得取山香圆叶，加12倍量70%乙醇回流提取1.5小时，滤过，滤渣再加10倍量70%乙 醇回流提取1. 5小时，滤过，合并两次提取液，回收乙醇，水溶液通过大孔树脂柱洗脱，收集 洗脱部分，减压浓缩，干燥。
15.如权利要求13或14所述的方法，其中水溶液通过已处理好的大孔树脂柱，分别用 水、5% 10%乙醇、30% 55%乙醇、氢氧化钠溶液洗脱，收集30% 55%乙醇洗脱部 分，减压浓缩，干燥。
16.如权利要求13或14所述的方法，其中混合总苷经硅胶柱层析、SephadexLH-20柱 层析分离，分别合并野漆树苷、金丝桃苷流份，结晶，得到野漆树苷和金丝桃苷的纯品。
全文摘要
本发明涉及一种野漆树苷、金丝桃苷组合物，其是通过按野漆树苷20％～80％、金丝桃苷80％～20％的重量配比制成的组合物，该组合物可作神经氨酸酶抑制剂用在预防和治疗流感，制成药学上可以接受的剂型。
文档编号A61P11/00GK101904859SQ20101025377
公开日2010年12月8日 申请日期2010年8月16日 优先权日2010年8月16日
发明者刘地发, 叶劲英, 吕武清, 李志勇, 杨小玲, 王燕平, 程帆, 蔡永红, 谢宁 申请人:江西山香药业有限公司