具有促进胰岛素分泌及抑制高级糖基化终产物生成作用的组合物的制作方法

专利名称：具有促进胰岛素分泌及抑制高级糖基化终产物生成作用的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种具有促进胰岛素分泌及抑制高级糖基化终产物生成作用的组合 物。
背景技术：
糖尿病是由于体内胰岛素缺乏或拮抗胰岛素的激素增加，或胰岛素在靶细胞内不 能发挥正常生理作用而引起的葡萄糖、蛋白质及脂质代谢紊乱的一种综合病症。糖尿病及 其并发症如白内障、肾病及心血管疾病严重影响着人类健康。传统的口服降糖药疗效有限 并且单一，研制新的天然来源的多作用靶点的糖尿病及其并发症的组合药物已成为热点， 本发明针对这种需求，研制了既具有胰岛素促泌作用又具有高级糖基化终产物生成抑制作 用的源于肉桂、金荞麦原花青素提取物及源于龙血竭二氢查耳酮的组合物的制备方法。近年大量研究表明，持续高血糖引起体内多种蛋白质非酶糖基化及由此形成的晚 期糖基化终末产物AGEs (Advanced Glycation Endproducts)在糖尿病慢性并发症如糖尿 病肾病、糖尿病眼病、糖尿病心血管病的发病机制中起重要作用。抑制AGEs的产生是减缓 与控制该类疾病发生与发展的有效手段之一，因此AGEs抑制剂的研究与开发已引起人们 极大的关注。目前最有前途的药物是氨基胍(Amin0gUanidine，AG)。氨基胍是一种亲核胼 类化合物，它主要与糖基化反应中间产物3-脱氧葡萄糖醛酮(3-deoxyglucosone)反应，从 而抑制AGEs的形成。但药理实验证实氨基胍会降低胰岛的血供，高浓度时会抑制胰腺B细 胞分泌胰岛素，从而限制其在临床应用，在AGEs抑制剂筛选实验中只将氨基胍作为阳性对 照药物。因此寻找理想的既具有胰岛素促泌又能抑制非酶糖基化生成的单一药物或组合物 是一个重要的研究方向。高级糖基化终末产物AGEs，是还原糖与蛋白质发生非酶促反应形成的一类不可逆 聚合物。糖基化反应分为两个阶段在糖基化反应的早期，在无酶的条件下，开链的葡萄糖 分子游离醛基或酮基和蛋白质氨基酸残基侧链氨基或氨基末端的α-氨基通过亲核结 合，迅速生成一个可逆的不稳定的中间产物醛亚胺(aldimine)即schiff碱，在体内很快达 到平衡，随后，schiff碱基可缓慢发生分子结构重排，形成较稳定的但反应可逆性大大减低 的糖-蛋白质酮胺结合物，经重新排列，可形成性质更为稳定的ι-氨基-ι-去氧-d-酮糖， 即amadori产物；糖基化反应的晚期，amadori产物经过多步脱水和分子重排产生的多种 高度反应性羰基化合物，进一步与其他游离氨基反应，最后形成不可逆的糖基化最终产物 AGEs0 AGEs的理化生化化特性是呈棕褐色；存在广泛性、具有荧光性，交联性与不可逆性、 结构的异质性、对酶稳定、不易被降解，却能与许多细胞膜特异性受体结合发挥有害于健康 的生物学效应。

发明内容
本发明的目的之一在于提供一种具有促进胰岛素分泌及抑制高级糖基化终产物生成作用的组合物。本发明的目的之二在于提供该组合物的制备方法。血竭(Dragon’ s Blood)是一种天然产物，也是传统的中药品种之一，有棕榈科麒 麟血竭禾口百合科龙血丰对属[Dracaena cochinchinensis (Lour.) S. C. Chen]龙血竭。动物血 清药化学及药代动力学的基础研究证明龙血竭具有显著的降血糖作用，龙血竭中4个原型 成分二氢查耳酮，具有显著的胰岛素促泌作用。将其作为先导化合物的母体结构合成了数 十种二氢查耳酮衍生物，筛选出促胰岛素分泌更强的前五种化合物，其中化合物4'-甲氧 基-2'，3，4-三羟基二氢查耳酮和化合物2，4-二甲氧基-2' ,5' - 二羟基二氢查耳酮同 时还具有高于氨基胍的AGEs抑制作用。肉桂为樟科樟属常绿乔木肉桂的干燥树皮，是一种药食两用植物资源。当前肉桂 的实际应用以香辛料和中药配方为主，对于肉桂用作AGEs生成抑制剂及其制备方法的研 究尚未见报道。野生金荞麦(Fagopyrum dibotrys)为蓼科荞麦属多年生草本植物，是一种营养丰 富并具有重要药用价值的资源植物。现代研究证实金荞麦根茎主要含的有效成分是一类原 花青素的混合物。金荞麦原花青素用作AGEs生成抑制剂及其制备方法的研究尚未见报道。研究发现在天然产物中，龙血竭、肉桂与金荞麦具有胰岛素促泌作用及AGEs生 成抑制作用。而在肉桂、金荞麦的各种提取物中，经筛选发现肉桂、金荞麦的原花青素具有 比氨基胍更强的AGEs抑制作用，将源于血竭的二氢查耳酮衍生物化合物4'甲氧基-2'， 3，4-三羟基二氢查耳酮和化合物2，- 二甲氧基-2' ,5' -二羟基二氢查耳酮两种化合物 及肉桂与金荞麦两种提取物按一定比例组合相配，即得到一系列既具有胰岛素促泌作用又 具有高级糖基化终产物AGEs生成抑制作用的组合物。根据上述理论，本发明采用如下技术方案一种具有促进胰岛素分泌及抑制高级糖基化终产物生成作用的组合物，其特征在 于该组合物的组成及质量百分含量为原花青素提取物5 95%，二氢查耳酮5 95%;所述的原花青素提取物的主要成分为原花青素，其质量百分含量为提取物的 50% 70%。上述的原花青素提取物是从肉桂或金荞麦中提取出来的。上述的从肉桂中提取的原花青素的具体方法为将中药肉桂粉碎后，过40 60目 筛，得到肉桂粗粉料；将该肉桂粗粉料用石油醚索氏抽提，挥干溶剂；将经索氏抽提后的肉 桂粉，按肉桂粉蒸馏水=1 10 3 10质量比混合，50 60°C搅拌浸提30 120分 钟，过滤除渣，再加入2 5倍体积乙醇，冰水浴搅拌30 120分钟，过滤去除沉淀，回收乙 醇，得提取液；将该提取液进行柱层析分离提纯，减压浓缩，真空干燥，得原花青素提取物， 其中原花青素的质量百分含量为65 75%。上述的柱层析分离提纯方法为采用大孔树脂柱层析，先用3 5倍柱体积蒸馏水 冲洗，然后用30 90%乙醇洗脱，收集洗脱液。上述的大孔树脂柱为HP20、D101、LSA21或ADS17。从金荞麦中提取的原花青素的制备方法，请参见中国专 《金荞麦高聚原花青素的提取及其催化降解制备低聚原花青素的方法》，其专利申请号20090050368.8中的方法 进行，现将方法叙述如下a)将金荞麦进行粉碎至粒径为1 3cm，得到金荞麦粗品；b)上述金荞麦粗品用体积百分比浓度为40% 90%乙醇水溶液浸提，温度为 50 70°C，时间为1 2天，得浸提液；c)将上述浸提液挥去乙醇，加水至挥醇前的一半体积，搅拌后离心10 20min，转 速为3000 5000rpm，弃沉淀，将上清液用有机溶剂乙酸乙酯等体积萃取，得水相萃余液；d)将水相萃余液上LSA-21大孔树脂柱，首先用2 5倍柱体积蒸馏水洗涤，再用 2 4个柱体积的体积百分比浓度为30% 70%的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；e)将收集的洗脱液减压浓缩、干燥后得到金荞麦高聚原花青素提取物。其中原花 青素的质量百分含量为55 70% ；4'-甲氧基-2'，3，4-三羟基二氢查耳酮和2，4-二甲氧基-2' ,5' - 二羟基 二氢查耳酮的合成工艺，请参考中国专利《4'-羟基-2，4-二甲氧基二氢查耳酮的制备方 法》，(专利号:ZL200810034743. 5)。目前现有的口服降糖药一般只有单靶点药理作用，例如胰岛素促泌作用的格列齐 特，抑制糖苷酶作用的拜糖平、胰岛素增敏作用的二甲双胍以及抑制高级糖基化终产物生 成作用的氨基胍等，疗效单一，缺乏既能降血糖又能治疗糖尿病并发症的多作用靶点的组 合药物。本发明针对这种需求，研制了既具有促胰岛素分泌作用又具有抑制高级糖基化终 产物生成作用的组合物的制备方法。源于肉桂与金荞麦的原花青素具有比氨基胍更强的 AGEs抑制作用，源于血竭的二氢查耳酮衍生物中的化合物4'-甲氧基-2'，3，4_三羟基 二氢查耳酮和2，4-二甲氧基-2' ,5' _ 二羟基二氢查耳酮除了具有强于格列齐特的胰岛 素促泌作用外，还具有AGEs抑制作用。组合物可为今后复合药的诞生奠定基础，将有利于 糖尿病患者的血糖控制又有利于糖尿病并发症的预防和治疗。本发明的组合物的优点在于 多功能协同效应，明显优于各组分单独使用。
具体实施例方式实施例1 10 组合物中各种组分的比例列于表1表1组合物中各种组分的比例
权利要求
一种具有促进胰岛素分泌及抑制高级糖基化终产物生成作用的组合物，其特征在于该组合物的组成及质量百分含量为原花青素提取物5～95％，二氢查耳酮5～95％；所述的原花青素提取物的主要成分为原花青素，其质量百分含量为提取物的50％～70％；所述的二氢查耳酮为4′ 甲氧基～2′，3，4 三羟基二氢查耳酮和2，4 二甲氧基 2′，5′ 二羟基二氢查耳酮中的一种或两种。
2.根据权利要求1所述的具有促进胰岛素分泌及抑制高级糖基化终产物生成作用的 组合物，其特征在于所述的原花青素提取物是从肉桂或金荞麦中提取出来的。
3.根据权利要求2所述的具有促进胰岛素分泌及抑制高级糖基化终产物生成作用的 组合物，其特征在于从肉桂中提取的原花青素的具体方法为将中药肉桂粉碎后，过40 60目筛，得到肉桂粗粉料；将该肉桂粗粉料用石油醚索氏抽提，挥干溶剂；将经索氏抽提后 的肉桂粉，按肉桂粉蒸馏水=1 10 3 10质量比混合，50 60°C搅拌浸提30 120分钟，过滤除渣，再加入2 5倍体积乙醇，冰水浴搅拌30 120分钟，过滤去除沉淀， 回收乙醇，得提取液；将该提取液进行柱层析分离提纯，减压浓缩，真空干燥，得原花青素提 取物，其中原花青素的质量百分含量为65 75%。
4.根据权利要求3所述的具有促进胰岛素分泌及抑制高级糖基化终产物生成作用的 组合物，其特征在于所述的柱层析分离提纯方法为采用大孔树脂柱层析，先用3 5倍柱 体积蒸馏水冲洗，然后用30 90%乙醇洗脱，收集洗脱液。
5.根据权利要求4所述的具有促进胰岛素分泌及抑制高级糖基化终产物生成作用的 组合物，其特征在于所述的大孔树脂柱为HP20、D101、LSA21或ADS17。
全文摘要
本发明涉及一种具有促进胰岛素分泌及抑制高级糖基化终产物生成作用的组合物。该组合物的组成及质量百分含量为原花青素提取物5～95％，二氢查耳酮5～95％；所述的原花青素提取物的主要成分为原花青素，其质量百分含量为提取物的50％～70％。组合物可为今后复合药的诞生奠定基础，将有利于糖尿病患者的血糖控制又有利于糖尿病并发症的预防和治疗。本发明的组合物的优点在于多功能协同效应，明显优于各组分单独使用。
文档编号A61K31/353GK101972245SQ20101029508
公开日2011年2月16日 申请日期2010年9月28日 优先权日2010年9月28日
发明者吕敬慈, 汤燕金, 雍克岚, 黎超 申请人:上海大学