专利名称：黄芪多糖微生态调节剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种黄芪多糖制备的中药微生态调节，剂属于中药新制剂。
背景技术：
随着抗生素、化疗、放疗、免疫抑制剂、细胞毒类制剂及其它现代医疗措施在临床广泛应用，干扰了正常微生物与宿主之间生态平衡，菌群失调症大量增加，且成为临床危重病人常见并发症，造成许多不良后果，甚至导致死亡。目前，国内外治疗菌群失调主要有抗生素疗法和应用活菌制剂两种方法。抗生素疗法治疗菌群失调存在弊端，它对肠道菌群平衡产生强烈影响，在杀灭致病菌的同时也杀灭了有益菌，会引发更严重的菌群失调，即二重感染，一旦正常肠道菌群失调，条件致病菌大量繁殖，即可降低常驻菌的定植抗力，促使肠道菌群易位，内毒素入侵，同时抗生素还促使肠道内耐药菌株的产生，发生这些改变的原因是抗生素杀灭了肠道内正常菌群，特别是专性厌氧菌的数量大减，形成“细菌真空”，而这一真空只能通过外来的致病菌、条件致病菌和肠道内的耐药共生菌的过度生长来填补。长期无目的地反复、连续、多种抗生素的应用，不但可导致腹泻和肠炎，而且在严重创伤和免疫功能低下的病人中，肠道菌群易位常能发展为严重的脓毒血症，多器官功能衰竭， 甚至造成死亡。抗菌谱越广，抗生素活性成分在肠道内的浓度越高，对肠道菌群的影响就越大。常用于调节菌群失调的药物有阿莫西林、罗红霉素、阿奇霉素、呋喃唑酮等。活菌制剂主要以益生菌制剂为主，目前常用的有乳酸杆菌、双歧杆菌、粪链球菌等制剂，如培非康、整肠生、乳酶生、丽珠肠乐(回春生胶囊)等。实践证明，以活菌制剂为主的菌群调整疗法，是调整肠道菌群失调的有效方法，可使大部分病人得到缓解或治愈，且比以往单用抗生素治疗疗效迅捷。但益生菌制剂的应用仍存在许多问题，如活菌进入肠道的存活率、定植抗力、 耐氧、耐胃酸、耐胆汁酸等。
发明内容
本发明的目的在于克服上述缺点，提供一种以黄芪多糖为活性成分的中药微生态调节剂，避免了抗生素疗法和活菌制剂的不足，可促进有益菌的定植生长，并且安全、无毒、无副作用。本发明的目的是这样实现的，黄芪多糖微生态调节剂由黄芪饮片 2000-3000g为原料加工提取制备而成。其提取制备方法是，取黄芪2000-3000g，加入8倍量蒸馏水浸泡I2h，回流提取池过滤，再加入5倍量的水回流提取池，弃去滤渣，合并滤液， 浓缩至2000mL-3000mL，4°C冷藏16h，3000r · mirT1离心15min，取上清液加高浓度乙醇，浓度大于80 %，沉淀，室温静置16h，取沉淀挥尽乙醇，得黄芪多糖，加入蒸馏水溶解，定容积至IOOOmL,灌封、灭菌、制成100支制剂。本发明具有以下生物活性，黄芪多糖微生态调节剂与阴性对照组相比，肠道内双歧杆菌和乳酸杆菌含量显著上升，肠杆菌和肠球菌显著下降， 挥发性脂肪酸含量显著上升，细菌易位明显减少，血液内毒素含量显著下降，腹腔巨噬细胞吞噬功能显著增强，肠粘膜SIgA含量显著提高，血浆IL-2含量显著升高，肠粘膜病理标本观察表明小鼠肠粘膜微绒毛排列紧密整齐。该制剂具有高效快速，无毒副作用等特点。本发明克服了中药粗提取制剂服用量大，杂质多，可控性差等问题，是一种高效、可控、服用方便的中药微生态调节剂。黄芪多糖微生态调节剂药效学实验报告1 材料黄芪多糖微生态调节剂，佳木斯大学药学院提供；BBL (双歧杆菌)培养基，购于青岛高科园海博生物技术有限公司；EMB(肠杆菌)培养基，购于北京奥博星生物技术责任有限公司。清洁级昆明种小鼠，雌雄各半，体重18 22g，清洁级Wista大鼠(雄性)，体重 180 士 10g，佳木斯大学实验动物中心提供。2动物分组与肠道菌群失调模型建立清洁级昆明小鼠40只于实验室适应喂养7d，随机取出10只作为正常对照组，其余30只进行造模。正常对照组灌服生理盐水0. 3mL · cf1，其余30只灌服盐酸林可霉素 0. 3mL · cf1。连续给药3d后随机分成3组，10只为模型组，10只为治疗组，10只为阳性对照组。各组小鼠经盐酸林可霉素处理后，分别以生理盐水稀释液、黄芪多糖微生态调节齐 、丽珠肠乐连续灌胃7d进行治疗，每天2次，每次0. 3mL，然后将各组小鼠处死，采集标本进行各种指标检测。3黄芪多糖微生态调节剂药效学检测指标的测定3.1菌群检测将小鼠处死，常规消毒后找出回盲部，无菌取出盲肠内容物0. lg，按常规培养细菌。其中BBL培养基厌氧培养72h、肠球菌琼脂需氧培养Mh。待菌落长出后，以菌落形态、 革兰染色、生化反应鉴定所需目的菌。培养好的细菌经鉴定后计算每克盲肠内容物中双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠杆菌和肠球菌的数量。3. 2肠内容物挥发性脂肪酸定量检测无菌条件下取0. 05g盲肠内容物，立即放入无菌试管中，置于-20°C冰箱中，待测。 测指标当天，将0. 05g盲肠内容物溶于ImL蒸馏水中，加50%硫酸0. ImL,乙醚0. 5mL,密塞， 来回倒转20次，使乙醚和培养物充分混勻，IOOOr · HiirT1离心lOmin，置于_20°C冰箱至试管底部水结冰，迅速倒出乙醚于另一试管，取1 μ L作色谱分析。3. 3细菌易位检测无菌条件下称取肝组织0. lg，置于无菌勻浆器中，加0. 9mL生理盐水勻浆，此即为第一稀释度10、将标本稀释至10_3，用微量加样器吸取标本20 μ 1由高稀释度向低稀释度滴种在EMB培养基上，待培养基吸干后，置于37°C温箱中培养Mh，菌落计数同菌群检测计算方法。3. 4血液内毒素含量测定采用眼球采血法采集小鼠血液，将血液装入去热原处理的离心管中。SOOr^mirT1 离心5min后，取血浆，置于无菌试管中，样品置于-20°C保存。取样品0. ImL与鲎试剂 0. 05mL混勻，置于37°C水浴25min，再加入鲎三肽0. 05mL,置于37°C水浴3min，取出后加入亚硝酸钠溶液0. 5mL,混勻后加入氨基磺酸0. 5mL混勻，加入萘乙二胺0. 5mL混勻，于M5nm 比色。3. 5肠黏膜SlgA检测切取回肠末端，生理盐水冲洗肠腔，称取0. 5g肠黏膜加生理盐水0. 5mL,勻浆器制备勻浆，4°C冷藏过夜，3000r .HiirT1低温离心15min。收集上清液_20°C冷藏备用。严格按照说明书操作步骤进行操作，测定肠黏膜slgA的含量。3. 6 血浆 IL-2 检测
眼球采血法采集小鼠血液，将血液装入去热原处理的离心管，500r · mirT1离心 5min，取血浆，置于无菌试管中，样品置于-20°C保存。采用酶联免疫试剂盒检测IL-2。4黄芪多糖微生态调节剂的药效学试验结果4. 1菌群检测与模型对照组比较，治疗组和阳性对照组的双歧杆菌、乳酸杆菌含量显著上升(P
<0. OLp < 0. 05)，其中治疗组比阳性对照组作用更加显著(ρ < 0. 05)。检测结果见表1。表1黄芪多糖药物治疗后各组肠道菌群定量检测结果(IgN ·士 S )
权利要求
1.一种黄芪多糖微生态调节剂，其特征在于它由黄芪2000-3000g药物制成。
2.权利要求1所述的黄芪多糖微生态调节剂的制备方法，其特征在于取黄芪 2000-3000g,加入8倍量蒸馏水浸泡12h，回流提取池过滤，再加入5倍量的水回流提取池， 弃去滤渣，合并滤液，浓缩至2000mL-3000mL，4°C冷藏16h，3000r .mirT1离心15min，取上清液加高浓度乙醇，浓度大于80 %，沉淀，室温静置16h，取沉淀挥尽乙醇，得黄芪多糖，加入蒸馏水溶解，定容积至IOOOmL,灌封、灭菌、制成100支制剂。
全文摘要
本发明涉及一种黄芪多糖微生态调节剂。它由黄芪按一定重量加工提取制备成的口服液，可扶植肠道益生菌，抑制有害菌，使肠道内双歧杆菌和乳酸杆菌含量显著上升，肠杆菌和肠球菌显著下降，挥发性脂肪酸含量显著上升，细菌易位明显减少，血液内毒素含量显著下降，腹腔巨噬细胞吞噬功能显著增强，肠粘膜SIgA含量显著提高，血浆IL-2含量显著升高；肠粘膜病理标本观察表明小鼠肠粘膜微绒毛排列紧密整齐。该制剂具有高效快速、无毒副作用等特点。本发明克服了中药粗提取制剂服用量大、杂质多、可控性差等问题，是一种高效可控、服用方便的中药微生态调节剂。
文档编号A61K36/481GK102451221SQ20101051568
公开日2012年5月16日 申请日期2010年10月15日 优先权日2010年10月15日
发明者于莲, 张宇, 杨景云, 胡新俊, 苏瑾, 马淑霞 申请人:佳木斯大学