具有外来体和皮质类固醇的组合制剂的制作方法

专利名称：具有外来体和皮质类固醇的组合制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及与皮质类固醇和外来体一起用于联合治疗的药物组合物。用该联合治疗可以治疗疾病例如骨关节炎、关节炎和/或退行性脊柱疾病，其中优选地所述治疗是局部进行的。
背景技术：
在德国，骨关节炎(Arthrose)描述的是超出年龄应有程度的“关节磨损”。它伴随有受影响关节中的软骨缺损，由此产生疼痛和功能衰退。负荷过量、先天性或创伤引起的原因例如关节错位，或者由于骨疾病例如骨质疏松症引起的骨变形被看做是原因。它还可以导致其他疾病例如骨炎症发生或伴随有过度负载引起的渗出。 原则上，所有关节都可能受骨关节炎变化影响。在德国，该疾病通常定位于膝关节。骨关节炎是普通医院事务中最经常的咨询原因。西方国家中大约10%的居民罹患骨关节炎。如果此外算上小椎骨关节炎和退行性椎间盘疾病的话，那么受影响人口甚至为大约15%-20%。骨关节炎发病的危险随着增长的年龄而增加。大约三分之二的超过65岁的人患有该疾病，然而并非所有受影响的人都遭受其症状。对于骨关节炎的治疗，已经知道几种治疗方式。保守(例如药物的)疗法和外科干预直至用假肢代替完整的关节均属于此。为了避免这样的大规模和不可逆的干预，原则上更希望有效的药物治疗，以便尽可能地拖延完全关节代替的时间点。然而，许多药物治疗也具有缺点。一方面，这是由于药物本身的副作用，但是也由于其效果部分地也只是有限提供的。用于治疗骨关节炎和类风湿性关节炎的常用药物物质是可的松(也是局部应用的)和相关的皮质类固醇。这在类风湿性关节炎情况下是全身性地而在骨关节炎的情况下是局部地作为注射剂在受影响的关节中施用。然而，在此，无论是在骨关节炎的情况下还是类风湿性关节炎的情况下，皮质类固醇施用的阳性效果在仅一周后就明显地降低。这根据随机研究和临床经验从临床上得到确证。在类风湿性关节炎的情况下，尝试通过连续施用可的松使全身效果水平处于高水平，然而，由于副作用的加强和在持久施用的情况下治疗效果的降低，这是非常成问题的。外来体是小的、由脂质膜包围起来的囊泡，其发现于例如人体的细胞外空间。它们通过从细胞质膜分离而从细胞形成和分泌。通常，这些外来体也包含蛋白质，它们从其来源细胞接收这些蛋白质。用于获得和施用外来体的方法例如描述于专利申请WO2006/007529A2中。在体外诱导预防或治疗有效的蛋白质例如IL-I Ra的情况下，通过在合适的容器例如注射器中培养血液样品来形成外来体。因此例如Orthokin包含外来体。可以通过添加促进外来体形成的添加剂来增加外来体的形成。可以例如通过在高的离心加速度下离心来增加外来体的浓度。在治疗类风湿性关节炎中使用外来体是本身已知的。可以用于治疗骨关节炎的另一种药物是内源的蛋白质IL-I Ra或其具有相似活性的亚型(isoform)或片段。如白介素-I (IL-I)那样，白介素_1受体拮抗剂(IL-1 Ra)与细胞表面上同样的受体结合，但在那里不触发通常由于IL-I结合所引起的信号级联。通过与IL-I-受体结合，IL-I Ra阻断了 IL-I的结合并且如此阻止了信号转导并因此阻止IL-I对靶细胞的促炎效果。
用其中富集IL-I Ra的内源血清治疗患者是现有技术中已知的。如此使用的IL-IRa也叫做Orthokin。与此相反，与安慰剂处理相比，一种重组的IL-I Ra片段，阿那白滞素(Anakinra)，在治疗骨关节炎中不显示丝毫的效果。阿那白滞素是人白介素_1受体拮抗剂的缩短至氨基酸26-177并在末端L-甲硫氨酰化的亚型并且具有153个氨基酸的序列长度。该制备例如用重组方法通过大肠杆菌(Escherichia coli)菌株来进行。鉴于现有技术，产生了这样的任务，即提供骨关节炎的药物治疗，其具有更好的效力，和特别是具有良好的长时效力。此外，优选地，所述治疗应当在关节炎，特别是类风湿性关节炎的情况下具有良好的效力，优选地长时效力。发明概述令人吃惊地，现在确定，在骨关节炎、关节炎和退行性脊柱疾病的情况下，可以通过额外施用外来体而显著或协同地改善皮质类固醇例如可的松的效力，特别是长时效力和起效的迅速性。这特别是在将治疗剂直接地局部施用于待治疗的关节时显示出。一个令人吃惊的认识是例如，与外来体(其例如由血液样品在Orthokin注射器中获得)相组合的皮质类固醇(例如，皮质类固醇与Orthokin—起)的使用，就在骨关节炎情况下起效的迅速性而言，看来优于不包含活性物质外来体的治疗。如果向已经有效的骨关节炎治疗(例如皮质类固醇与阿那白滞素一起)添加外来体作为额外的活性物质，还能够观察到快速起效的效果。即使在类风湿性关节炎的治疗中，皮质类固醇与外来体的组合也显示引人注目的良好效力，不仅就起效的迅速性，而且就长时效力而言。本发明显示特别有利的效果取决于令人吃惊地高的效力(取决于不同的病理生理学出发点)，及其对患者特别有利的副作用特性。该有利的副作用特性是特别重要的，这是因为长期的皮质类固醇施用与很大的副作用例如新陈代谢紊乱、骨质疏松症以及其他副作用有关。通过外来体与皮质类固醇例如可的松的组合，降低了皮质类固醇(可的松)的不利效果并且提高了治疗的效力。不依赖于适应症，可以观察到，在一些患者中，外来体与皮质类固醇组合显示治疗效果，其超过外来体和皮质类固醇两种活性物质的单个治疗效果的总和，特别是在两种活性物质单独施用不都治疗有效的情况下。因此，在第一个方面，本发明提供了在有或没有细胞因子拮抗剂和/或生长因子存在下包含皮质类固醇以及外来体的药物组合物。表述“没有细胞因子拮抗剂”，在本发明的范围内意味着，没有一种细胞因子拮抗剂存在。相应地，这也针对生长因子。根据第一个方面，所述药物组合物因此在每个情况下包含皮质类固醇和外来体。而且，给出了细胞因子拮抗剂存在的选择或不存在的选择；此外，给出了生长因子存在的选择或不存在的选择。同样，治疗剂也可以在两种不同的药物组合物中同时或在时间上相继地进行施用。相应地，在第二和第三个方面中，本发明提供了在有或没有细胞因子拮抗剂和/或生长因子存在下包含外来体的药物组合物，用于与皮质类固醇一起在联合治疗中使用；以及在有或没有细胞因子拮抗剂和/或生长因子存在下包含皮质类固醇的药物组合物，用于与外来体一起在联合治疗中使用在第四个方面中，本发明提供了包含细胞因子拮抗剂和/或生长因子的药物组合物，用于与皮质类固醇和外来体一起在联合治疗中使用。在根据本发明的第五个方面中，提供试剂盒，其包括(i)在有或没有细胞因子拮抗剂和/或生长因子存在下包含外来体的药物组合物，和(ii)在有或没有细胞因子拮抗剂和/或生长因子存在下包含皮质类固醇的药物组合物。此外，在第六个方面中，本发明涉及在有或没有细胞因子拮抗剂和/或生长因子存在下的外来体用于制备药物组合物的用途，所述药物组合物用于与皮质类固醇一起在联合治疗中使用；并且，在第七个方面中，涉及在有或没有细胞因子拮抗剂和/或生长因子存在下的皮质类固醇用于制备药物组合物的用途，所述药物组合物用于与外来体一起在联合治疗中使用。上面关于第二、第三、第四、第六和第七个方面提到的联合治疗优选地是具有细胞因子拮抗剂和/或生长因子的联合治疗，特别是在这样的情况下，其中所述药物组合物本身没有细胞因子拮抗剂和/或生长因子存在。在第八个方面，本发明涉及用于制备包含皮质类固醇和外来体的药物组合物的方法，其包括步骤提供包含外来体的血液样品，优选地浓缩该外来体，并且与皮质类固醇混
口 o本发明的其他实施方案在下面的详细描述中和在权利要求书中进行陈述。发明描述本发明基于令人吃惊的认识，即关节和脊柱疾病例如骨关节炎、关节炎和退行性脊柱疾病，以及在自身免疫性疾病例如神经性皮炎和斑秃的情况下借助皮质类固醇的治疗，通过额外施用外来体，可以明显地得到改善。因此，本发明集中于此类疾病的用皮质类固醇以及外来体的联合治疗。这可以在有或没有细胞因子拮抗剂和/或生长因子存在下来进行。细胞因子拮抗剂和/或生长因子的存在是优选的。在此，这些不同的活性物质可以同时地-以相同的制剂或以不同的制剂-或者也可以相继地进行施用。因此，根据本发明的药物组合物(其仅包含两种活性物质外来体和皮质类固醇中的一种)，以及根据本发明的试剂盒，可以被指定一方面用于外来体和皮质类固醇的同时施用，和另一方面用于它们的相继施用。然而，同时施用是优选的，特别是仅以一种制剂。这样，可以例如在向患者施用之前，以合适的比例混合本发明试剂盒的两种药物组合物，然后作为一种制剂进行施用。在相继施用外来体和皮质类固醇的情况下，在一周的时期内，优选地在5天、3天、I天内或在12小时内施用各种活性成分。在包含外来体和/或皮质类固醇的本发明药物组合物中，可以有或没有细胞因子拮抗剂和/或生长因子存在。细胞因子拮抗剂和/或生长因子的存在是优选的。因为在关节和脊柱疾病的情况下，如果额外施用细胞因子拮抗剂例如Orthokin (天然的IL-I Ra)和阿那白滞素(重组的IL-IRa)，特别是在直接将治疗剂局部施用于待治疗的关节的情况下，那么它对皮质类固醇的效力，特别是长时效力产生明显有利的影响。对于自身免疫性疾病，也观察到这些活性物质组合的相似的、令人吃惊的良好效力，其中特别是抗炎效果发挥了作用。在关节和脊柱疾病例如骨关节炎、关节炎和退行性脊柱疾病的情况下，用皮质类固醇和外来体的联合治疗的效力通过额外施用细胞因子拮抗剂同样得到很大改善。在用重组的IL-I Ra，阿那白滞素治疗的情况下，令人吃惊地，只有通过与皮质类固醇的组合才产生效力。在天然的IL-I Ra,Orthokin的情况下,效力的明显改善恰好在炎性疾病的情况下观察到。对于这种情况的一种可能解释是，细胞因子拮抗剂具有合成代谢效果并且可能抵消或甚至于逆转皮质类固醇的分解代谢效果。因此，在治疗例如骨关节炎中，除了细胞因子拮抗剂外，还将皮质类固醇备选地或额外地与合成代谢生长因子相组合，以取得相似的效果。通常，可以用生长因子代替细胞因子拮抗剂或者与生长因子相组合。包含与皮质类固醇和外来体一起在联合治疗中使用的细胞因子拮抗剂和/或生长因子的根据本发明的药物组合物(根据本发明的第四个方面)，可以被指定一方面用于细胞因子拮抗剂和/或生长因子、皮质类固醇和外来体的同时施用和另一方面用于它们的相继施用。同时施用是优选地，特别是仅以一种制剂。如此可以例如在向患者施用之前，以 合适的比例将细胞因子拮抗剂和/或生长因子与皮质类固醇和外来体相混合，然后作为一种制剂进行施用。备选地，在同时施用的情况下，可以将细胞因子拮抗剂和/或生长因子、外来体或者皮质类固醇分开施用，而将其他成分作为一种制剂混合。然而，也可以将细胞因子拮抗剂和/或生长因子、外来体和皮质类固醇以任何顺序相继施用，或者在与其他两种不同的时间点施用这些活性物质中的一种。在相继施用的情况下，优选地在一周的时期内，优选地在5天、3天、I天内或在12小时内施用这些不同的活性物质。在其他根据本发明的药物组合物的情况下以及在根据本发明的试剂盒和根据本发明的应用(本发明的第一、第二、第三、第五、第六和第七方面)的情况下，细胞因子拮抗剂在药物组合物中的存在或不存在是可能的。细胞因子拮抗剂的存在是优选的。此外，根据本发明的联合治疗优选地是用一种细胞因子拮抗剂的联合治疗，特别是在所述药物组合物本身没有细胞因子拮抗剂(参见上面)的情况下。根据本发明使用的细胞因子拮抗剂可以是这样的每种物质或每种物质混合物，其在患者的体内降低或抑制一种或多种细胞因子的至少一种，优选地基本上所有的生物学活性。在此，拮抗效果可以通过拮抗剂直接地实现或间接地实现，例如通过激活或抑制其他信号途径，其在它那方面对细胞因子的生物学活性产生影响。优选地，细胞因子的生物学活性通过阻止其与一个或多个它可以与其结合的受体的相互作用被抑制。这可以例如通过拮抗剂与相应的受体竞争性结合或通过拮抗剂与细胞因子本身结合来达到。优选地，所述细胞因子拮抗剂抑制细胞因子IL-I的效果。所述细胞因子拮抗剂可以例如是蛋白质、肽、核酸、脂质或有机化合物。所述细胞因子拮抗剂也可以由本文中所描述的两种或多种细胞因子拮抗剂的混合物组成。特别地，细胞因子拮抗剂可以是天然存在的肽或蛋白质，或也可以是重组制备的肽或蛋白质。此外，细胞因子拮抗剂可以是抗体或抗体的抗原结合片段，或者包含抗体或抗体的抗原结合片段，其可以结合所涉及的细胞因子或细胞因子受体。适合于细胞因子拮抗剂的例子为白介素拮抗剂，特别是IL-I拮抗剂例如IL-I Ra，肿瘤坏死因子(TNF)拮抗剂，特别是TNF- a -拮抗剂例如抗-TNF- a -抗体，干扰素拮抗剂，和趋化因子拮抗剂。特别优选的是天然存在的或重组的IL-IRa蛋白，优选人IL-I Ra。IL-I Ra优选地包含下述的氨基酸序列或由其构成根据SEQ ID N0s:l、2、3、4或5的人的IL-I Ra的亚型或同源物、根据SEQ IDNOs:6或7的马的IL-I Ra的亚型，或根据SEQ ID NO:8的狗的IL-I Ra。
此外，根据本发明，可以使用IL-I Ra的片段或衍生物作为细胞因子拮抗剂，只要其可以产生所希望的功能，即降低或抑制IL-I的一种或多种生物学功能。优选地，IL-I Ra的片段包含天然IL-I Ra序列的至少20个，更优选地40、60、80或100个氨基酸。优选地，该片段为IL-I Ra的天然存在的分泌型片段。在一个实施方案中，IL-I Ra包含人IL-I Ra的氨基酸26-177，优选地，根据SEQ ID NO: I的序列的氨基酸26-177。IL-I Ra的衍生物优选地与天然IL-I Ra同源，并且优选地在IL-I Ra的至少20个连续氨基酸，优选地至少40、60、80或至少100个连续氨基酸的范围内，最优选地在IL-I Ra的整个长度内，具有与天然IL-I Ra至少60%，更优选地至少70%、75%、80%、85%、90%、95%和最优选地至少98%的同源性或同一性。特别优选的是从天然生物样品例如血液分离IL-I Ra(也称为Orthokin)，以及具有人IL-IRa的氨基酸26-177的IL-I Ra片段(也称为阿那白滞素)。Orthokin的获得尤其在专利申请WO 00/46249 Al和WO 03/080122 Al中作了描述。可以应用于本发明中的阿那白滞素以及其他IL-I拮抗剂，尤其在专利申请EP 0 343 684 Al中作了描述。在从天然生物样品例如血液中获得IL-I Ra的情况下，例如在Orthokin的情况下，所获得的IL-I Ra溶液优选地也包含生长因子。因此，根据本发明，细胞因子拮抗剂也与一种或多种生长因子相组合地存在或者被一种或多种生长因子代替。根据本发明，所述生长因子优选地具有合成代谢效果。适合于生长因子的例子为TGF-P、IGF、BMP、HGF和VEGF。也包括这些生长因子的类似物、衍生物和片段，只要其具有所希望的效果，即特别是作为生长因子的效果。根据本发明使用的皮质类固醇可以是任何天然存在的以及合成制备的皮质类固醇。特别地，它可以是糖皮质激素、盐皮质激素或雄激素，其中优选地使用糖皮质激素。同样地，也可以使用由如本文中所描述的两种或多种皮质类固醇所组成的混合物。适合于糖皮质激素的例子为可的松、氢化可的松、泼尼松、泼尼松龙、氯泼尼醇、地夫可特、氟可丁、曲安西龙、地塞米松、甲基泼尼松龙、氟泼尼松龙、氯可托龙、氯倍他松、阿氯米松、氟米松、氟泼尼定、氟氢缩松、倍他米松、倍氯米松、氟可龙、莫米松、氟替卡松、齒米松、氟轻松(Fluocinolon)、二氟拉松、去轻米松、氟西奈德、安西奈德、哈西奈德、二氟可龙、氯倍他索和帕拉米松。适用于盐皮质激素的例子为醛固酮、去氧皮质酮和氟氢可的松，和适合于雄激素的例子为脱氢表雄酮(DHEA)和雌激素。皮质类固醇可以以自由的化合物或以盐、酯或前药的形式来使用。在优选的实施方案中，所使用的皮质类固醇为曲安西龙、可的松、氢化可的松、泼尼松龙或泼尼松。优选地，在包含根据本发明的外来体的药物组合物或在根据本发明的试剂盒中的外来体是通过包括下述步骤的方法可制备的提供包含外来体的血液样品和优选地浓缩该外来体。所述浓缩优选地通过以至少100 OOOg的离心步骤来进行，这是因为这样的高离心加速度特别适合于浓缩外来体。该步骤优选地进行至少30分钟，特别地，至少60分钟，这是因为此后浓缩就是特别有效的。提供包含外来体的血液样品的步骤优选地包括下述步骤提供从患者获得的血液样品，任选地添加促进外来体形成的添加剂，并将该血液样品在适合于外来体制备的容器中进行温育。该温育导致经处理的血液组合物。适合于外来体制备的容器为例如注射器、 小试管例如真空小试管，微滴定板和输液袋。用于与血液样品接触的表面，在适合于外来体制备的容器的情况下，优选地包括玻璃、合成材料(例如聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚乙烯和聚丙烯)、刚玉和石英，并且优选地由这些材料之一组成。优选地，为了外来体制备，在这些容器中添加由玻璃、合成材料、刚玉或石英组成的扩大表面的添加剂，例如球粒、凝胶、羊毛、磨粉、颗粒或微粒。促进外来体形成的添加剂优选地为IL-I Ra。促进外来体形成的添加剂优选地以1-20 ii g/ml全血的量进行使用。在与外来体一起用于在联合治疗中使用的根据本发明的药物组合物的情况下，适合的是所述外来体从血液样品中获得。该外来体优选地对于待治疗患者是自体的或外源的。关于外来体的获得，参阅上面所做的制备外来体的论述。优选地，上面所描述的具有至少100 OOOg (优选地，至少30分钟，特别地至少60分钟)的离心步骤在有理由提高外来体浓度的疾病治疗中进行，优选地在类风湿性关节炎治疗中。特别优选地，这样的离心步骤通常针对这样的情况进行，即联合治疗涉及从患者的血液样品获得的外来体。因此，上面所做的制备外来体的详细论述被看做是根据本发明的用于制备包含皮 质类固醇和外来体的药物组合物的方法，其包括步骤提供包含外来体的血液样品，优选地浓缩该外来体，并且与皮质类固醇混合。该混合可以以专业人员常用的任何方式来进行。在优选的实施方案中，根据本发明的药物组合物或根据本发明的试剂盒指定用于关节疾病例如骨关节炎、关节炎、关节发炎以及炎性软骨缺损、退行性脊柱疾病、关节疼痛以及自身免疫性疾病的治疗。待治疗的骨关节炎可以由于过量负荷而产生，具有先天性或创伤性原因或者是其他疾病例如炎症的结果。待治疗的骨关节炎优选地是发作中的骨关节炎或炎性骨关节炎。根据本发明的药物组合物可以用于每个任何关节例如膝关节、髋关节、踝关节、肩根据、脊柱关节、指关节、肘关节、趾关节、颌关节、腕关节处的骨关节炎和关节炎的治疗。待治疗的关节炎可以是感染引起的关节炎例如细菌性关节炎或非感染引起的关节炎例如类风湿性关节炎、牛皮癣关节炎或痛风性关节炎。备选地，根据本发明的药物组合物和/或根据本发明的试剂盒也指定用于与所提及的一种或多种疾病(例如类风湿性关节炎)不同的疾病的治疗。待治疗的退行性脊柱疾病可以例如是椎间盘突出。自身免疫性疾病尤其包括关节的自身免疫疾病例如白赫铁列夫症(Morbus Bechterew)、类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮，以及其他自身免疫性疾病例如特别是神经性皮炎和斑秃(环形脱发)。
根据本发明的药物组合物或根据本发明的试剂盒优选地适合于局部施用。优选地指定它们用于局部施用。因此，在优选的实施方案中，指定它们用于注射，特别地用于注射入待治疗的身体区域，特别是注射入受影响的关节，注射入受影响的神经根处或受影响的椎间盘中，或其局部环境中。因此，指定所述药物组合物特别地用于关节内和/或根周注射。备选地，可以将根据本发明的药物组合物特别配制为霜剂或凝胶剂用于局部施用，或配制为片剂、胶囊剂或锭剂的形式用于全身施用。因此施用方式尤其取决于待治疗的疾病。因此，在局部骨关节炎或退行性脊柱疾病的情况下，根据本发明的药物组合物的局部施用是优选的。在优选的实施方案中，根据本发明的药物组合物或根据本发明的试剂盒仅指定用于或适合于与全身施用不同的施用。总是以专业人员已知的方式，为不同的施用途径适当地配制根据本发明的药物组合物。因此，适合于注射的药物组合物优选地作为溶液或分散体存在，或者甚至作为干燥的形式例如粉剂或冻干物存在，其在注射之前，必须溶解在合适的溶剂例如水中。根据本发明的药物组合物包含治疗有效量的外来体和/或皮质类固醇。所述皮质类固醇优选地以l-80mg/剂，更优选地5-40mg/剂的浓度存在于包含皮质类固醇的药物组合物中。如果需要，所存在的细胞因子拮抗剂优选地以0. 5-150mg/剂的浓度存在于包含细胞因子拮抗剂的药物组合物中，但是也可以以非常小的浓度例如Ing/剂或更多，例如I-IOOOng/剂存在。小的剂浓度可以特别地在与生长因子组合的情况下使用和/或在天然IL-I Ra制备物例如具有Orthokin的组合物的情况下使用。高的剂浓度例如在重组制备的细胞因子拮抗剂例如阿那白滞素的情况下是优选的。此外，根据本发明的药物组合物还可以包含一种或多种载体物质和/或一种或多种赋形剂。也可以指定本发明的药物组合物用于这样的患者的治疗，其已经经历了相关疾病，即例如骨关节炎、关节炎和/或退行性脊柱疾病的其他治疗，特别是如果该其他治疗没有成效或者尽管治疗开头有成效但疾病症状至少部分复发。在优选的实施方案中，该其他治疗是用外来体、但不用皮质类固醇的治疗；或者是用皮质类固醇，特别是例如上面所描述的皮质类固醇，但不用外来体的治疗。 在根据本发明的范围内，患者可以是患有本文中所描述疾病的人或动物。因此，根据本发明的药物组合物可以适合于人和/或动物，例如狗、猫、马、牛、猪、山羊、骆驼等的治疗。附图
简述图IA至图IC显示神经性皮炎患者的脚的照片，其病例在下文中作为病例IX进行描述(实施例4)。图IA再次给出了紧临近用外来体和曲安西龙治疗之前双脚的皮肤病学改变。图IB显示对于右脚在治疗后一周的状况。图IC显示对于左脚在治疗后一周的状况。
实施例下面描述了具有晚期骨关节炎的患者的各种不同的病理研究。用细胞因子拮抗剂(例如，重组IL-I Ra或从自体血液样品获得的IL-I Ra)和皮质类固醇对其进行治疗。缩写re 右边Ii 左边bds 双侧IRO内旋转ARO外旋转VAS痛觉的视觉模拟评分(0至10)WOMAC对骨关节炎的患者调查表CRP C-反应蛋白，在血液中可检测到的炎症标志物OSG髋骨关节在骨关节炎情况下用Orthokin和可的松的治疗患者人数N=129平均复查时间3个月平均疼痛降低71%(即从治疗前的100%疼痛降低至治疗后的29%)引人注目的快速起效
I.阿那白滞素和可的松和外来体的局部施用病例I:T.，56岁，女性诊断临床上通过放射学方法，存在中间和髌后左膝关节炎，IV度。从外部看，已经计划整个左膝置换；治疗在左膝盖中注射3次组合阿那白滞素和IOmg曲安西龙的外来体(2x每周)，以避免膝盖手术。结果在第三个注射时间点，100%疼痛改善。明显的功能改善。宣布取消手术约期，治疗结束后5个月患者仍无疼痛。2.阿那白滞素和可的松和Orthokin的局部施用病例II:L.，57岁，男性诊断自6个月起，强烈的左肩疼痛(VAS 8);自此明显地干扰睡眠。患者在最近6个月中几乎不能睡眠，由此也干扰了一般健康。在左肩中注射可的松多次没有成效。已商议好左肩手术约期。在此应当进行尝试以避免手术。放射学和临床上显示部分旋转套囊断裂和肩峰下狭窄，完全的左肩僵硬；左臂感觉不舒适，手及左前臂力量不足，4度。治疗在左肩中从腹面和侧面应用注射。在左肩中，与IOmg阿那白滞留素和IOmg曲安西龙一起通过注射器应用2ml Orthokin。治疗进行连续4天。结果在第二个治疗日，患者已经产生极度的疼痛好转，具有大约90%的疼痛降低。VAS从8降落到1，肩部自由了并且可正常活动。患者自6个月以来第一次可以连续睡眠。由此患者在其一般健康方面得到明显改善。治疗继续到第4个治疗日。在治疗后6个月的复查给出未改变的阳性检查结果的情况下，仍然显示如在第2个治疗日那样的未改变的明显改善。手术被取消，活动性是自由的，患者可以重新没问题地将箱子和书举过肩高。病例III:F.，45 岁，女性诊断自大约8个月起，完全的右肩僵硬。所有迄今的治疗都没有效果，计划进行手术。患者愿意尝试另一种保守治疗。自几周以来，夜间睡眠不再可能。左侧开始肩疼，但主要检查结果是右肩，那里VAS为9，严重急性发作时直至10，由此一般健康状况总体下降。治疗在6个连续日，以分开应用的2ml的Orthokin与另一注射器相组合来治疗右肩，所述另一注射器由150mg阿那白滞素和5mg曲安西龙的组合组成。结果从第5天，85%疼痛改善。自第2次治疗开始，整夜连续睡眠是可能的，由此显著地改善了一般健康状况。在治疗末期，治疗后8个月的第I次复查中，VAS继续显示非常好的未改变的结果；手术被取消。3.与IL-I Ra和曲安西龙/泼尼松一起温育的外来体病例IV: S.，25岁，男性诊断自大约15岁起，严重的青少年类风湿性关节炎。用25mg Enbrel (2次/周)、10mg密都锭、5mg去氧皮质酮和萘普生(2x1/天) 进行治疗。两个OSG和双肩严重的滑膜炎和疼痛。治疗前双肩60度的外展。实验室CRP值5.35(至0.511^是正常的)；白细胞增多。治疗抽取血液以在6ml注射器(Orthokin注射器)中制备外来体。然后在37度下进行24小时温育，其中在注射器中应用Img阿那白滞素(IL-1 Ra)和2mg泼尼松之前，用血液充满注射器。在不同的离心步骤(直至100 OOOg)后，将混合物在OSG和肩处应用给患者。结果3天后关节开始明显消肿。9天后临床和实验室检查80%的疼痛改善，OSG正常，无肿胀。CRP值现在至I. 93。也在未经局部注射的其他受影响的关节中得到改善。一般生活质量显著改善。在3个月后的检查中显示未改变的稳定状况。治疗前VAS 9，自注射后第一周起VAS 3。患者非常满意，可以重新工作了。4.在注射中用外来体和额外的曲安西龙的注射病例V :M.，64岁，女性严重的抵抗治疗的RA,尽管用泼尼松15mg(每天)、Lantarel 20mg(每周)、 Humira(每2周)的基础治疗。腕关节中的放射性滑I旲切除术仅显不最小的影响，以IOmg至40mg曲安西龙剂量的关节内注射仅显示非常弱的(一周后20%的疼痛改善)对疼痛以及对炎症参数的影响。在自荐进行外来体治疗的情况下，尽管有上面所描述的基础治疗CRP为120mg/l，手和双肩中仍有剧烈疼痛。在双侧和双肩注射外来体(在与IL-I Ra —起温育后)并在MCP2-5中混入20mg总量的曲安西龙。之后，在2天后开始临床上强烈的改善(I周后，80%的疼痛减轻)，其持续保持超过3个月。3个月后CRP检查CRP 42.6mg/l，基础治疗未改变，因而该效果与外来体与曲安西龙的组合有关。如上面所描述的单独曲安西龙的高剂量则无可比较的效果。病例VI:M.，25岁，男性已知的牛皮癣关节炎；基础治疗5mg泼尼松和IOmg MTX;基础治疗下的主要问题还是具有滑膜炎的明显左膝肿胀，和与对侧相比2cm的肿胀。腕关节范围内额外的肿胀，尽管进行基础治疗。以20_40mg剂量的膝和腕关节内的关节内可的松注射仅显不在几天内非常弱的效果，具有10-30%的疼痛降低。施行外来体治疗。在紧临近注射前CRP5.6mg/l。在完成外来体后，在左膝(外来体+曲安西龙IOmg)中和在MCP2+3双侧(各自外来体与2mg曲安西龙/关节)中应用外来体(如上文所述温育IL-I Ra之后制得)。不复杂的过程，几天后,90%的明显的疼痛缓解；3个月后CRP 3. Omg/1; I周后膝盖完全消肿,没有双侧区别在基础治疗的背景下，5mg泼尼松可以完全停止，这是因为外来体和曲安西龙的关节内注射的效果是持久的。病例VII: R.，32 岁，男性已知数年的完全脱发，全部治疗尝试包括以高的全身和局部剂量(IO-SOmg泼尼松)的全身和局部可的松应用，无效果施行用外来体的治疗。以上面所描述的技术来制备外来体，外来体与IOmg曲安西龙一次性肌内注射。正常的进程检查，3个月后，在患病前长头发的面积的大约一半中检测到头发生长。病例VIII: H.，47 岁，男性:右侧膝关节炎,具有软骨缺损，在Outerbridge后，关节镜下验证2-4度。患者希望撤销OP和关节置换。既往病史的以10_40mg剂量的曲安西龙关节内注射毫无效果。注射以如所描述的技术那样在与IL-IRa —起温育后所制备得的外来体1ml。一次性关节内注射2ml外来体，4周后，患者对就疼痛和功能而目的临床效果不丨两意。随后，决定在右膝中关节内注射IOmg曲安西龙。不复杂的过程，I周后，95%的疼痛改善，功能重又完全恢复，患者几年来第一次可以重又参加网球比赛。病例IX: J.，27 岁，男性
严重的皮肤学上验证的神经性皮炎，具有特别是在手和脚范围内的强烈改变。全部已知的皮肤病学治疗显示无持续改善，特别是在以80mg的剂量肌内局部应用皮质类固醇类和全身应用泼尼松和曲安西龙后，只观察到I周的短期效果。以所描述的技术来制备外来体，肌内应用；3周后，对皮肤改变和疾病没有令人满意的效果。随后，尝试肌内应用2ml外来体，结合20mg曲安西龙。2周内明显改善，其保持不变超过6个月。因此，虽有轻的恶化，但与检查结果相比有进一步的改善。图IA描绘了紧临近治疗前双脚的皮肤学改变，图IB和图IC是右或左脚治疗后一周。

病例X :B.，69岁，女性严重的白赫铁列夫关节炎，具有左眼虹膜睫状体炎。作为基础治疗，患者得到交替剂量的泼尼松和MTX。CRP 20. 3mg/l ;相对于另一侧，左边OSG明显肿胀+2cm ;左边MCP和第I左手指末端指节明显肿胀和疼痛，右肩肿胀、疼痛，相对于正常情况下外展降低至30度。随后，以已知技术在受影响的关节中注射外来体，无疼痛缓解和CRP降低，随后在所有受影响的关节中以40mg的总剂量注射曲安西龙，I周内20%的轻微改善。4周后20mg总剂量的外来体和曲安西龙注射，随后肩膀80%的改善，手指50%的改善，具有左拇指环MCP关节从8. 2cm消肿至6. 6cm。踝尚无明显效果。I周内CRP从20. 3mg/l降低至2. 9mg/l。
权利要求
1.药物组合物，其在有或没有细胞因子拮抗剂和/或生长因子存在下包含皮质类固醇以及外来体。
2.在有或没有细胞因子拮抗剂和/或生长因子存在下包含外来体的药物组合物，用于与皮质类固醇一起在联合治疗中使用。
3.在有或没有细胞因子拮抗剂和/或生长因子存在下包含皮质类固醇的药物组合物，用干与外来体一起在联合治疗中使用。
4.包含细胞因子拮抗剂和/或生长因子的药物组合物，用干与皮质类固醇和外来体一起在联合治疗中使用。
5.试剂盒，其包含(i)在有或没有细胞因子拮抗剂和/或生长因子存在下包含外来体的药物组合物，和(ii)在有或没有细胞因子拮抗剂和/或生长因子存在下包含皮质类固醇的药物组合物。
6.根据权利要求2或3的药物组合物或根据权利要求书5的试剂盒，其中所述药物组合物被指定用于外来体和皮质类固醇的同时或相继施用。
7.根据权利要求I至6之一的药物组合物或试剂盒，其中所述皮质类固醇为 (a)糖皮质激素例如可的松、氢化可的松、泼尼松、泼尼松龙、氯泼尼醇、地夫可特、氟可丁、曲安西龙、地塞米松、甲基泼尼松龙、氟泼尼松龙、氯可托龙、氯倍他松、阿氯米松、氟米松、氟泼尼定、氟氢缩松、倍他米松、倍氯米松、氟可龙、莫米松、氟替卡松、南米松、氟轻松、ニ氟拉松、去羟米松、氟西奈德、安西奈德、哈西奈德、ニ氟可龙、氯倍他索和帕拉米松； (b)盐皮质激素例如醛固酮、去氧皮质酮和氟氢可的松；或 (c)雄激素例如脱氢表雄酮(DHEA)和雌激素； 或其盐、酷或前药。
8.根据权利要求1、3、5、6或7之一的药物组合物或试剂盒，其中所述皮质类固醇以l-80mg/剂的浓度存在于含皮质类固醇的药物组合物中。
9.根据权利要求1、2、5、6、7或8之一的药物组合物或试剂盒，其中所述外来体通过包括下述步骤的方法来制备提供包含外来体的血液样品并优选地浓缩该外来体。
10.根据权利要求3、4、6、7或8之一的药物组合物，其用于与在外来体一起在联合治疗中使用，其中所述外来体从血液样品获得。
11.根据权利要求10的药物组合物或试剂盒，其中所述外来体对于待治疗的患者是自体的或外源的。
12.根据权利要求I至11之一的药物组合物或试剂盒，用于在关节疾病例如骨关节炎、关节炎、关节发炎和炎性软骨缺损、退行性脊柱病和/或关节疼痛的治疗中使用。
13.根据权利要求12的药物组合物或试剂盒，其中所述骨关节炎是发作中的骨关节炎或炎性骨关节炎。
14.根据权利要求12的药物组合物或试剂盒，其中所述关节炎是感染引起的关节炎例如细菌性关节炎，或非感染引起的关节炎例如类风湿性关节炎、牛皮癣关节炎或痛风性关节炎。
15.根据权利要求12的药物组合物或试剂盒，其中所述退行性脊柱疾病为椎间盘突出。
16.根据权利要求I至11之一的药物组合物或试剂盒，用于在自身免疫性疾病的治疗中使用。
17.根据权利要求16的药物组合物或试剂盒，其中所述自身免疫性疾病为神经性皮炎或斑秃。
18.根据权利要求I至17之一的药物组合物或试剂盒，其中所述药物组合物适合于局部施用。
19.根据权利要求18的药物组合物或试剂盒，其中所述局部施用选自在受影响的身 体区域，特别是在受影响的关节中、在受影响的神经根上或在受影响的椎间盘中或在其局部环境中注射；关节内注射；和外部施用。
20.根据权利要求I至19之一的药物组合物或试剂盒，其中所述药物组合物进ー步包含载体和/或赋形剂。
21.根据权利要求I至20之一的药物组合物或试剂盒，其中存在细胞因子拮抗剂，且所述细胞因子拮抗剂选自白介素拮抗剂，特别是IL-I拮抗剂例如IL-I Ra,肿瘤坏死因子(TNF)拮抗剂，特别是TNF- a -拮抗剂例如抗TNF- a -抗体，干扰素拮抗剂和趋化因子拮抗齐U。
22.根据权利要求21的药物组合物或试剂盒，其中所述细胞因子拮抗剂是天然存在的或重组的IL-I Ra-蛋白，特别是Orthokin或阿那白滞素。
23.根据权利要求21或22的药物组合物或试剂盒，其中所述细胞因子拮抗剂以0.5-150mg/剂的浓度存在于含细胞因子拮抗剂的药物组合物中。
24.根据权利要求I至23之一的药物组合物或试剂盒，其中存在生长因子，且所述生长因子选自TGF- P、IGF、BMP、HGF 和 VEGF。
25.在有或没有细胞因子拮抗剂和/或生长因子存在下的外来体用于制备药物组合物用途，所述药物组合物与皮质类固醇一起在联合治疗中使用。
26.在有或没有细胞因子拮抗剂和/或生长因子存在下的皮质类固醇用于制备药物组合物用途，所述药物组合物与外来体一起在联合治疗中使用。
27.用于制备包含皮质类固醇和外来体的药物组合物的方法，其包括下述步骤提供包含外来体的血液样品，优选地浓缩外来体，并且与皮质类固醇混合。
全文摘要
本发明涉及与皮质类固醇和外来体一起用于联合治疗的药物组合物。通过该联合治疗可以治疗疾病例如骨关节炎、关节炎和/或退行性脊柱疾病。
文档编号A61P19/02GK102652020SQ201080055617
公开日2012年8月29日 申请日期2010年12月10日 优先权日2009年12月10日
发明者J·赖内克, P·韦林 申请人:奥索根股份公司