专利名称：人参皂苷Rb3组合物及在制备治疗糖尿病药物的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于医药配制品领域范畴，涉及来源于植物人参的提取物作为药物对治疗 糖尿病的应用。
背景技术：
有关人参化学成分的研究迄今已有百余年的历史。人参的化学成分比较复杂，包 括皂苷、糖类、蛋白质、多肽、氨基酸、有机酸、维生素、挥发油等成分。其中人参皂苷是人参 的主要活性成分。许多国内外学者研究了人参在抗糖尿病及减肥方面的作用，其中既包括 人参、人参提取物、人参二醇组及三醇组皂苷，也包括单体人参皂苷。人参皂苷Rb3在抗糖 尿病方面的作用及在体内的减肥作用尚未有报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种人参皂苷组合物，其对改善葡萄糖耐量、改善糖尿病 患者肾脏、心脏、神经系统以及视网膜并发症、改善糖尿病患者高胰岛素血症有效的产品。本发明中的药物组合物，其中含人参皂苷Rb3纯品-20%，还含有其他人参皂 苷、多糖、蛋白质、氨基酸、微量元素等。本领域技术人员可以理解到，这些物质的存在会维 持或者增强本发明的药物组合物的作用。人参皂苷Rb3提纯方法西洋参(或者人参、三七)茎叶粗提物，水溶后用NKA-12 大孔树脂进行分离，乙醇水梯度洗脱，得到人参三醇组皂苷及人参二醇组皂苷，人参二醇组 皂苷用硅胶柱(氯仿-甲醇-水，正丁醇-乙酸乙酯-水系统)反复层析得到人参皂苷Rb3 纯品(纯度98% )。另外，应该特别指出的是，可以根据需要在发明的药物组合中加入一种或多种天 然或合成的其它与本活性物质具有协同或辅助作用的成分，这些可能被加入的天然或合成 的辅助成分是本领域技术人员已知的和可以想象到的。可将所说的组合物配制成经口给药 的剂型，如片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂、散剂等。为了制备适于口服给药的片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂等，可以使用蔗糖、半乳糖、 玉米淀粉、明胶、微晶纤维、滑石粉等作为载体或赋形剂。在这些经口给药的剂型中，还可以 含有合适的其它添加剂，诸如崩解剂、润滑剂、填充剂、黏合剂、矫味剂、防腐剂、分散剂、表 面活性剂、着色剂等。本发明药物组合物最优选的给药途径是各种口服给药的剂型，例如片剂、颗粒剂、 胶囊剂或丸剂，这些经口给药剂型的每日剂量一般含有10 IOOOmg本活性物质。下列实 验进一步证明了本发明药物的药理作用。人参皂苷Rb3对动物实验表明对四氧嘧啶型糖尿病小鼠空腹血糖、口服糖耐量、 体重、摄食量和饮水量的影响，具有一定的降血糖和改善葡萄糖耐量的功能。同时人参皂苷 Rb3对高脂饮食诱导的肥胖小鼠的影响实验表明降低高脂饮食诱导的肥胖小鼠血清中总 胆固醇含及子宫周围脂肪重量，并改善高脂饮食诱导的肥胖小鼠口服糖耐量，以人参皂苷
3Rb3为主要原料的组方具有一定的减肥作用以及预防或者治疗因肥胖而产生的胰岛素抵抗 的作用。
图1 人参皂苷Rb3对四氧嘧啶型糖尿病小鼠空腹血糖的影响图。图2 人参皂苷Rb3对四氧嘧啶型糖尿病小鼠糖耐量的影响图。图3 人参皂苷Rb3对四氧嘧啶型糖尿病小鼠摄食量的影响图。图4 人参皂苷Rb3对四氧嘧啶型糖尿病小鼠饮水量的影响图。图5 人参皂苷Rb3对高脂饮食小鼠血清中总胆固醇含量的影响图。图6 人参皂苷Rb3对高脂饮食小鼠子宫周围脂肪重量的影响图。图7 人参皂苷Rb3对高脂饮食小鼠糖耐量的影响图。
具体实施例方式一 .人参皂苷诎3对动物实验实验例1人参皂苷Rb3对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠的降血糖作用1.实验材料、动物、仪器及试剂1. 1实验材料西洋参(或者人参、三七)茎叶粗提物，水溶后用NKA-12大孔树脂进行分离，乙醇 水梯度洗脱，得到人参三醇组皂苷及人参二醇组皂苷，人参二醇组皂苷用硅胶柱(氯仿-甲 醇-水，正丁醇-乙酸乙酯-水系统)反复层析得到人参皂苷Rb3纯品(纯度98% )。动物系昆明种小鼠，体重20_22g，雌性。购自吉林大学基础医学院实验动物中心。1. 2 仪器稳豪倍易型血糖仪及血糖试纸，强生(中国)医疗器械有限公司；BS-400全自动 生化分析仪，深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司；BP211D型电子天平(十万分之一)，德 国 Sartorius 公司。1. 3药物及试剂人参皂苷Rb3如1. 1项所述由本实验组自制。四氧嘧啶，Sigma公司；葡萄糖、柠檬酸、柠檬酸钠，北京化工厂；氯仿、甲醇为分析 纯，北京化工厂；基础饲料，吉林大学基础医学院实验动物中心。2.试验方法2. 1对四氧嘧啶型糖尿病小鼠血糖的影响取健康小鼠60只，随机取8只作为空白对照，即正常组，其余小鼠均腹腔注射四 氧嘧啶200mg/kg，6天后，将造模成功的小鼠随机分为四组(每组8只)模型对照组，人 参皂苷Rb3 5mg/kg，15mg/kg，25mg/kg三个剂量治疗组。分组后分别灌胃给药，每天上午 8 30-9 30给药一次，连续给药14天。分别在第0天，第7天，第14天测空腹12h血糖。2. 2对四氧嘧啶型糖尿病小鼠糖耐量的影响取健康小鼠60只，随机取8只作为空白对照，即正常组，其余小鼠均腹腔注射四 氧嘧啶200mg/kg，6天后，将造模成功的小鼠随机分为四组(每组8只)模型对照组，人 参皂苷Rb3 5mg/kg，15mg/kg，25mg/kg三个剂量治疗组。分组后分别灌胃给药，每天上午8:30-9:30给药一次，连续给药14天。第14天，灌胃给予空腹小鼠葡萄糖2g/kg，断尾取血 分别测定 0min,30min,60min, 120min 血糖。2. 3对四氧嘧啶型糖尿病小鼠体重的影响取健康小鼠60只，随机取8只作为空白对照，即正常组，其余小鼠均腹腔注射四 氧嘧啶200mg/kg，6天后，将造模成功的小鼠随机分为四组(每组8只)模型对照组，人 参皂苷Rb3 5mg/kg，15mg/kg，25mg/kg三个剂量治疗组。分组后分别灌胃给药，每天上午 8:30-9:30给药一次，连续给药14天。每天给药前记录小鼠体重。2. 4对四氧嘧啶型糖尿病小鼠摄食量的影响取健康小鼠60只，随机取8只作为空白对照，即正常组，其余小鼠均腹腔注射四 氧嘧啶200mg/kg，6天后，将造模成功的小鼠随机分为四组(每组8只)模型对照组，人 参皂苷Rb3 5mg/kg，15mg/kg，25mg/kg三个剂量治疗组。分组后分别灌胃给药，每天上午 8 30-9 30给药一次，连续给药14天。每天上午称鼠粮，计算摄食量。2. 5对四氧嘧啶型糖尿病小鼠饮水量的影响取健康小鼠60只，随机取8只作为空白对照，即正常组，其余小鼠均腹腔注射四 氧嘧啶200mg/kg，6天后，将造模成功的小鼠随机分为四组(每组8只)模型对照组，人 参皂苷Rb3 5mg/kg，15mg/kg，25mg/kg三个剂量治疗组。分组后分别灌胃给药，每天上午 8:30-9:30给药一次，连续给药14天。每天上午记录饮水量。3.实验结果3. 1对四氧嘧啶型糖尿病小鼠空腹血糖水平的影响分别在第0天、第7天、第14天测定小鼠血糖。第0天，人参皂苷Rb3治疗组5mg/ kg, 15mg/kg, 25mg/kg和模型组的血糖水平都明显高于正常组。第14天，15mg/kg组小鼠血 糖(6. 58mmol/L)与25mg/kg组小鼠血糖(6. 50mmol/L)与模型组(10. 40mmol/L)相比分别 降低36. 7%及37. 5%,25mg/kg组小鼠的血糖已恢复正常水平。(见附图1)3. 2对四氧嘧啶型糖尿病小鼠口服糖耐量的影响经过14天治疗，15mg/kg组小鼠的糖耐量与模型组相比明显改善，AUC降低 34. 47% (P <0.05)。120min时，15mg/kg组小鼠的血糖已恢复正常水平。然而，三个剂量 组的AUC仍明显高于正常组。(见附图2)3. 3对四氧嘧啶型糖尿病小鼠体重的影响人参皂苷Rb3对四氧嘧啶型糖尿病小鼠体重没有明显的影响。3. 4对四氧嘧啶型糖尿病小鼠摄食量的影响与模型组相比，人参皂苷Rb3治疗后，15mg/kg组与25mg/kg组小鼠的摄食量显著 降低(P <0.01)。(见附图3)3. 5对四氧嘧啶型糖尿病小鼠饮水量的影响经过5mg/kg，15mg/kg, 25mg/kg三个剂量人参皂苷Rb3的治疗，糖尿病小鼠的饮水 量与模型组相比均显著降低。(见附图4)4.讨论人参皂苷Rb3能够降低四氧嘧啶型糖尿病小鼠血糖，改善小鼠口服糖耐量，降低 糖尿病小鼠摄食量和饮水量，然而，人参皂苷Rb3对糖尿病小鼠体重没有明显的影响。综 上，人参皂苷Rb3具有一定的降血糖和改善葡萄糖耐量的功能。
实验例2人参皂苷Rb3对高脂饮食诱导的肥胖小鼠的影响1实验材料、仪器与试剂1. 1 材料人参皂苷Rb3如实例1中1. 1项所述由本实验组制备，Rb3含量为20%。1. 2仪器与试剂总胆固醇试剂盒购自中生北控生物科技有限公司；BS-400全自动生化分析仪，深 圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司；BP211D型电子天平(十万分之一)，德国Sartorius公 司；稳豪倍易型血糖仪及血糖试纸，强生(中国)医疗器械有限公司。1. 3实验动物动物系昆明种小鼠，雌性，购自吉林大学基础医学院实验动物中心，体重在 19-22g，鼠龄3周。1. 4动物饲料常规饲料为吉林大学实验动物中心配制，总热量为5. 23J/g。高脂饲料实验室自 制，总热量为14.6J/g。饲料均保存在超低温冰箱中-30°C储藏备用。2.试验方法2. 1小鼠血清中总胆固醇含量的测试取健康小鼠M只，分笼饲养在常温的饲养室中，明暗1 循环，实验之前适应1周 新的环境。在此期间，饲喂小鼠普通饲料，动物自由采食饲料和自由饮水，适应新环境1周。 随机取8只作为空白对照，即正常组，饲喂常规饲料；其余小鼠随机分为两组模型对照组， 饲喂高脂饲料；人参皂苷Rb3预防组，饲喂添加0. 02%人参皂苷Rb3的高脂饲料。饲养8 周。8周后，将小鼠摘眼球取血，2500r/min离心IOmin取上清，制得小鼠血清，采用试剂盒 通过全自动生化分析仪分别测定血清中总胆固醇(TC)。2. 2小鼠子宫周围脂肪的称量取健康小鼠M只，分笼饲养在常温的饲养室中，明暗12h循环，实验之前适应1周 新的环境。在此期间，饲喂小鼠普通饲料，动物自由采食饲料和自由饮水，适应新环境1周。 随机取8只作为空白对照，即正常组，饲喂常规饲料；其余小鼠随机分为两组模型对照组， 饲喂高脂饲料；人参皂苷Rb3预防组，饲喂添加0. 02%人参皂苷Rb3的高脂饲料。饲养8 周。8周后，将小鼠摘眼球取血后，颈椎脱臼处死，取出子宫周围脂肪，称量。2. 3小鼠糖耐量的测定取健康小鼠M只，分笼饲养在常温的饲养室中，明暗12h循环，实验之前适应1周 新的环境。在此期间，饲喂小鼠普通饲料，动物自由采食饲料和自由饮水，适应新环境1周。 随机取8只作为空白对照，即正常组，饲喂常规饲料；其余小鼠随机分为两组模型对照组， 饲喂高脂饲料；人参皂苷Rb3预防组，饲喂添加0. 02%人参皂苷Rb3的高脂饲料。饲养8 周。8周后，灌胃给予空腹小鼠葡萄糖2g/kg，断尾取血分别测定Omin，30min, 60min, 120min 血糖。2. 4统计处理数据以平均值士标准差来表示。用SPSS软件进行统计分析，使用单因素方差分 析来分析数据，P < 0. 05判定为统计学上差异显著，P < 0. Ol判定为统计学上差异极显著。3.实验结果
3. 1对高脂饮食诱导的肥胖小鼠血清中总胆固醇含量的影响饲喂8周后，模型组小鼠血清中总胆固醇含量明显高于正常组。与模型组相比，人 参皂苷Rb3预防组小鼠血清中的TC降低了 27. 42%，具有显著性差异(P < 0. 05)。(见附 图5)3. 2对高脂饮食诱导的肥胖小鼠子宫周围脂肪重量的影响饲喂8周后，模型组小鼠子宫周围脂肪重量明显高与正常组。与模型组相比，人参 皂苷Rb3预防组小鼠小鼠子宫周围脂肪重量明显降低(P <0.05)。(见附图6)3. 3对高脂饮食诱导的肥胖小鼠糖耐量的影响饲喂8周后，人参皂苷Rb3明显改善了高脂饮食小鼠糖耐量，与模型组相比，AUC降 低对.43% (P <0.05)。此外，30min时，人参皂苷Rb3预防组小鼠的血糖与模型组相比差 异显著(P <0.05)。(见附图7)4.讨论以人参皂苷Rb3为基础的配方能够降低高脂饮食诱导的肥胖小鼠血清中总胆固 醇含及子宫周围脂肪重量，并改善高脂饮食诱导的肥胖小鼠口服糖耐量。综上，以人参皂苷 Rb3为主要原料的组方具有一定的减肥作用以及预防或者治疗因肥胖而产生的胰岛素抵抗 的作用。二.药物的制备实施例1 人参皂苷Rb3的提取西洋参(人参、三七)茎叶粗提物200g，水溶后用NKA-12大孔树脂进行分离， 30%,40%, 50%乙醇梯度洗脱，得到人参三醇组皂苷及人参二醇组皂苷。所得到的人参二 醇组皂苷用硅胶柱反复层析(氯仿-甲醇-水，正丁醇-乙酸乙酯-水系统)得到人参皂 苷Rb3纯品10. 5g。实施例2 降糖片剂的制备取实施例1人参皂苷Rb3纯品2g，环糊精20g，干燥淀粉适量，羧甲基纤维素适量， 滑石粉适量，蔗糖适量。蔗糖与滑石粉用于包糖衣，混勻，制粒压片，制得片剂重0. 50g,含人 参皂苷Rb3 1%-5% (g/g)0其他要求符合《中华人民共和国药典》2010版有关片剂的相 关规定。实施例3 改善糖耐量胶囊的制备取实施例1活性物质lg，玉米淀粉20g，环糊精适量，混勻，装入胶囊，每粒含人参 皂苷Rb3 1-10% (g/g)。其他要求符合《中华人民共和国药典》2010版有关胶囊剂的相关 规定。实施例4:降糖茶的制备取实施例1人参皂苷Rb3 IOg,糊精100g，可溶性淀粉100g，糖粉适量，混勻，制茶 块，分包装，装量5. Og/袋。其他要求符合《中华人民共和国药典》2010版有关茶剂的相关 规定。实施例5 降糖浓缩丸剂的制备取实施例1中人参皂苷Rb3 lg，环糊精20g，羧甲基纤维素适量，混勻，粉碎，纯净 水，泛制成丸，每粒含人参皂苷Rb3 1%-10% (g/g)。其他要求符合《中华人民共和国药典》 2010版有关丸剂的相关规定。
7
实施例6 降糖颗粒剂的制备取实施例1人参皂苷Rb3 10g，可溶性淀粉200g，糖粉适量，硬脂酸镁3g，混勻，制 颗粒，复合铝塑袋分装，装量5. Og/袋。其他要求符合《中华人民共和国药典》2010版有关 颗粒剂的相关规定。实施例7 降胆固醇片剂的制备取实施例1人参皂苷Rb3纯品2g，环糊精20g，干燥淀粉适量，羧甲基纤维素适量， 滑石粉适量，蔗糖适量。蔗糖与滑石粉用于包糖衣，混勻，制粒压片，制得片剂重0. 50g,含人 参皂苷Rb3 1%-5% (g/g)0其他要求符合《中华人民共和国药典》2010版有关片剂的相 关规定。实施例8 抗肥胖片剂的制备取实施例1人参皂苷Rb3组分IOg (其中含有人参皂苷Rb3 lg_5g，另有其他人参 成分)，环糊精200g，干燥淀粉适量，羧甲基纤维素适量，滑石粉适量，蔗糖适量。蔗糖与滑 石粉用于包糖衣，混勻，制粒压片，制得片剂重0.50g，含人参皂苷Rb3 1%-5% (g/g)。其 他要求符合《中华人民共和国药典》2010版有关片剂的相关规定。实施例9 抗肥胖散剂的制备取实施例1中的人参(或者西洋参、三七)人参皂苷Rb3组分10g，淀粉200g，磷 酸钙5g，乳糖、食用色素适量，混勻，过筛，分剂量，包装。其他要求符合《中华人民共和国药 典》2010版有关片剂的相关规定。
权利要求
1.人参皂苷Rb3组合物，以人参皂苷Rb3为主，配以载体、赋形剂、甜味剂、黏合剂、矫味 剂、防腐剂、分散剂、表面活性剂、着色剂中1 5种辅剂，制成的片剂、丸剂、颗粒剂、冲剂、 胶囊剂和散剂；其中片剂、丸剂、胶囊剂中每剂含人参皂苷RB31 10wt% ；颗粒剂、冲剂和 散剂为袋装，每袋5.0克；所述人参皂苷Rb3使用以下方法提取而得的西洋参、人参或三七的茎叶粗提物，水溶后用NKA-12大孔树脂进行分离，乙醇水梯度 洗脱，得到人参三醇组皂苷及人参二醇组皂苷，人参二醇组皂苷用硅胶柱反复层析得到人 参皂苷诎3纯品，纯度98%。
2.人参皂苷Rb3组合物，在制备治疗糖尿病药物的应用。
全文摘要
一种人参皂苷Rb3组合物及在制备治疗糖尿病药物的应用。以人参皂苷Rb3为主，配以载体、赋形剂、甜味剂、黏合剂、矫味剂、防腐剂、分散剂、表面活性剂、着色剂中1～5种辅剂，制成的片剂、丸剂、颗粒剂、冲剂、胶囊剂和散剂；人参皂苷Rb3提取方法为西洋参、人参或三七的茎叶粗提物，水溶后用NKA-12大孔树脂进行分离，乙醇水梯度洗脱，得到人参三醇组皂苷及人参二醇组皂苷。人参二醇组皂苷用硅胶柱反复层析得到人参皂苷Rb3纯品，纯度98％。经动物实验证明人参皂苷Rb3对糖尿病症和肥胖病症有着显著的改善病状和治疗作用。
文档编号A61P3/04GK102091082SQ20111000585
公开日2011年6月15日 申请日期2011年1月12日 优先权日2011年1月12日
发明者刘发贵, 刘文丛, 卜其涛, 弓晓杰, 张成中, 郑毅男 申请人:大连大学