专利名称：：一种可注射的生物活性因子组合物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种可注射的生物活性因子组合物及其制备方法和应用。
背景技术：
：生长因子是一类存在于体内的生物活性因子，具有多种调节功能，对机体组织的修复和再生有重要作用，但生物活性因子在体内具有非常短的半衰期，会迅速被组织液稀释、转运、降解而不能发挥作用。因此，生物活性因子作用的发挥，有赖于一种适当载体从而在体内缓慢释放。亲水凝胶对蛋白质高分子具有良好的吸附作用，可以起到缓释、延效作用，从而有利于生物活性因子的发挥。在众多的水凝胶中，有一种在低温时为溶液状态，而在人体温度附近为凝胶状态的温敏水凝胶材料近年来引起了人们的注意。这种可注射性温敏水凝胶在偏离体温时，以溶液状态存在，在此状态下可以包埋生物活性因子，当注射于皮下组织、肌肉组织后，由于温度的变化，包含有活性生长因子的溶液迅速转变为凝胶，生长因子在扩散作用和凝胶自身降解作用双重推动下，从凝胶内平稳释放出来，达到了长效缓释的效果。在包埋过程中，不涉及任何有机溶剂，不易使包埋的活性物质失活。有关温敏水凝胶材料的研究很多，如聚(氧化乙烯一氧化丙烯一氧化乙烯体系和聚异丙基丙烯酰胺都是可注射型的温敏材料，但由于在体内不能生物降解和具有细胞毒性，不适合用作植入材料；而聚氧乙烯和聚乳酸的共聚物虽具有生物降解性和生物相容性，但形成凝胶时的温度较高(45°C)，限制了其应用，尤其在传递生物活性因子时容易使活性组分失活。壳聚糖是天然聚阳离子多糖，具有独特的分子结构、化学性质及多种生物活性，具有良好的生物相容性、可降解性，且壳聚糖中的N-乙酰胺基结构单元也是糖胺聚糖(GAGs)的主要组成部分，由于两者结构上的相似性，具有许多与生长因子、细胞受体和粘连蛋白的特异性相互作用，可增强对成骨细胞的亲和性。但壳聚糖大分子链上分布着许多羟基、氨基，还有一些乙酰氨基，它们会形成各种分子内和分子间氢键，同时由于它的结晶结构的存在，使得壳聚糖不溶于水，只能溶于稀酸如盐酸、醋酸等。CheniteA等(Novelinjectableneutralsolutionsofchitosanformbiodegradablegelsinsitu.Biomaterials,2000,21(21):2155-2161)在低温下将甘油磷酸盐加入壳聚糖的酸性水溶液中，制备壳聚糖/甘油磷酸盐水溶性组合物，这种组合物具有生理PH并能在室温以下保持为液体以包封细胞和生长因子，当注入到体内时原位形成凝胶植入物而没有任何化学修饰或交联，该系统已被用作于体内传递药物和生物活性生长因子以及包封软骨细胞。专利CN101574514A制备了可注射的基于壳聚糖温敏水凝胶的促血管生长因子混合物，用于治疗心肌梗死。马志伟等(同时缓释骨形态发生蛋白和氯己定的功能性壳聚糖温敏凝胶的制备，生物工程学报，2007，23(6)=1049-1054)通过先与环糊精包结共混的方法，制备了同时缓释生长因子重组人骨形态发生蛋白-2和抗菌药物氯己定的温敏壳聚糖水凝胶，具有较好的缓释效果。然而这些壳聚糖温敏体系需要高浓度的甘油磷酸盐以具有低胶凝时间，而高浓度的甘油磷酸盐导致形成高渗溶液，不利于包覆细胞和生物活性生长因子，另外高浓度的甘油磷酸盐可在其施用位点引起水凝胶的沉淀。但降低甘油磷酸盐浓度，又会导致壳聚糖/甘油磷酸盐水溶性组合物在高于生理温度时才能胶凝。CromptonK.E.等(CromptonK.E.，etal.Biomaterials,2007,28:441-449.)通过降低壳聚糖浓度以及在壳聚糖分子链上接枝多聚赖氨酸的方法来降低壳聚糖/甘油磷酸钠水凝胶的等渗点，促进细胞的存活，但同时减低了水凝胶的强度。专利W02004/006961采用在等渗中性的壳聚糖溶液中添加双功能基团的乙醛以及少量乙二醛进行交联，在接近体温时形成水凝胶，并用于包覆活细胞或生物活性因子。
发明内容本发明旨在提供一种制备简单、没有任何化学修饰或交联，适用于骨或软骨修复的可注射的生物活性因子组合物。本发明另一目的在于提供上述生物活性因子组合物的制备方法。本发明的再一目的在于提供上述生物活性因子组合物的应用。本发明的可注射的生物活性因子组合物，包含一种或一种以上具有生物活性的细胞生长因子、等渗壳聚糖溶液以及悬浮在溶液中的壳聚糖微球，其组合物经过温度依赖性胶凝可以形成水凝胶。所述的可注射的生物活性因子组合物中，等渗壳聚糖溶液和生物活性因子、壳聚糖微球的体积质量比(mL/mg/mg)为10.015150。所述的可注射的生物活性因子组合物的pH值为6.87.4，胶凝温度为3538"C。所述的可注射的生物活性因子进一步包括骨形态发生蛋白、转化生长因子、胰岛素样生长因子、血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、成骨蛋白中的一种或两种以上，其来源可以是人基因重组，经发酵、分离得到，也可以直接从动物体内提取得到，其中优选BMP-2、BMP-7以及其同其它生长因子的复合物。所述的等渗壳聚糖溶液是指1.02.5%(w/v)壳聚糖稀酸溶液和2050%(w/w)甘油磷酸钠溶液的均勻混合物(壳聚糖稀酸溶液和甘油磷酸钠溶液的体积比为10.020.3，而壳聚糖稀酸溶液是指壳聚糖原料分散于0.050.15mol/L的盐酸溶液或醋酸溶液中、充分溶解滤去不溶物后所配制的溶液，配制的壳聚糖溶液PH值为5.36.1。所述的壳聚糖微球是指未交联的纯壳聚糖微球，或者为离子交联壳聚糖微球再经过氢氧化钠溶液处理而制得的微球，所采用的壳聚糖微球的平均粒径为300nm50μm。壳聚糖微球的制备选自以下任何一种方法(1)将壳聚糖溶液滴加到NaOH溶液中或NaOH-甲醇混合溶液中凝聚，收集微球，用水充分洗涤或在水中反复透析，干燥后即得壳聚糖微球；(2)以硫酸、三聚磷酸钠、硫酸纳或柠檬酸钠为交联剂，通过与壳聚糖溶液的交联反应制得离子交联壳聚糖微球，然后再将离子交联壳聚糖微球分散于水中，加入浓度为0.15%(w/v)的氢氧化钠溶液，直至反应体系最终PH值大于7；收集微球，用水充分洗涤或在水中反复透析，干燥后即得壳聚糖微球；(3)将壳聚糖溶液通过喷雾干燥法先制得微球，再将微球用氢氧化钠溶液中和处理，收集微球用水充分洗涤或在水中反复透析，干燥后即得壳聚糖微球；(4)将壳聚糖原料通过机械或气流粉碎所制得的超细壳聚糖颗粒。上述制备壳聚糖微球用的壳聚糖溶液可以是与制备等渗溶液用的壳聚糖溶液相同，也可以是文献报道的制备壳聚糖微球用的常规壳聚糖稀酸溶液。壳聚糖微球的制备方法采用常规的技术如凝聚法、乳化交联法、喷雾干燥法和粉碎法，许多文献也均有所报道，本发明不再赘述。所述的可注射的生物活性因子组合物的制备方法，包括如下步骤先将生物活性因子加到壳聚糖稀酸溶液中，在430°C之间、持续搅拌下再向上述壳聚糖稀酸溶液中逐滴加入甘油磷酸钠溶液，形成均勻溶液；然后继续往其中加入壳聚糖微球，即得到生物活性因子组合物；或先在430°C之间、持续搅拌下向壳聚糖稀酸溶液中逐滴加入甘油磷酸钠溶液，形成等渗壳聚糖溶液；再将生物活性因子加到上述等渗溶液中；然后继续往其中加入壳聚糖微球，即得到生物活性因子组合物；或首先将壳聚糖微球分散于水中制成220%(w/v)的微球悬浮液，再往悬浮液中加入生物活性因子进行被动吸附负载30分钟6小时；其次在430°C之间、持续搅拌下向壳聚糖稀酸溶液中逐滴加入甘油磷酸钠溶液，形成等渗壳聚糖溶液；最后将负载生物活性因子的壳聚糖微球悬浮液加到等渗壳聚糖溶液中，即得到生物活性因子组合物。所述的生物活性因子组合物，可采用注射方法应用于骨缺损重建、软骨修复等方本发明的优点在于(1)本发明提供了一种新型可注射的生物活性因子组合物及其制备方法。以等渗壳聚糖溶液和壳聚糖微球为生物活性因子的载体，可以以液体形式通过注射器注入所需部位，在体温和生理PH值条件下原位成型约2-15分钟形成凝胶，并缓慢释放出生物活性因子，植入创伤小，临床应用方便。(2)本发明中，壳聚糖溶液和甘油磷酸钠溶液形成等渗溶液，使溶液等渗点控制在280320m0sm，有利于生物活性因子的存活与缓释，降低对周围组织的不良刺激。(3)本发明通过添加壳聚糖微球，缩短胶凝时间，提高凝胶强度，使本组合物的制备更为可控。(4)本发明方法制备工艺简单、材料易得，并且无需外加交联剂，反应条件温和，能够维持生物活性因子的活性。(5)本发明适用范围广，制作工艺可用于多种生物活性因子的携载和输送，能适应不同形状的骨缺损修复和重建。图1为红外光谱图，a为壳聚糖原料，b为壳聚糖微球。图2为壳聚糖微球扫描电镜照片。图3为本发明的生物活性因子组合物及其形成的凝胶。图4为本发明的生物活性因子组合物的干凝胶的扫描电镜照片。图5为本发明负载重组人骨形态蛋白-2的组合物异位成骨的苏木精一伊红染色切片。图6为本发明负载重组人骨形态蛋白-2的生物活性因子组合物异位成骨活性。图7为本发明负载重组人骨形态蛋白-2的生物活性因子组合物用于颅骨缺损8周时照片(圆圈表示为缺损处)。图8为本发明负载重组人骨形态蛋白-2的生物活性因子组合物用于颅骨缺损8周时的苏木精一伊红染色切片。图9为本发明负载重组人骨形态蛋白-2和骨形态发生蛋白-7的生物活性因子组合物用于股骨缺损8周时照片(圆圈表示为缺损处)。图10为本发明负载重组人骨形态蛋白-2和转化生长因子TGF的生物活性因子组合物用于颅骨缺损8周时照片(圆圈表示为缺损处)。具体实施例方式以下结合具体实施例，对本发明做进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限制本发明的范围。实施例1将壳聚糖溶于乙酸溶液中，配制成3%壳聚糖溶液，缓慢加入含乳化剂的油相液体石蜡中(乳化剂为Span-80和Tween-80的混合物，两者体积比为21，乳化剂和油相的体积比为1100。)，搅拌形成W/0乳液，加入20%(w/w)硫酸溶液进行交联，形成硫酸交联壳聚糖微球，再分别用丙酮、无水乙醇和馏水进行洗涤。然后将硫酸交联壳聚糖微球分散于水中，在缓慢搅拌下滴加浓度为2%(w/v)的氢氧化钠溶液，直至反应体系最终pH值为7.6；再用丙酮、无水乙醇和水充分洗涤，冷冻干燥后即得壳聚糖微球。图1为壳聚糖微球的红外谱图，表明离子交联壳聚糖微球经氢氧化钠处理后和壳聚糖原料具有相同的化学结构。微球形貌如图2所示，微球形貌完整，平均粒径为25μπι。实施例2将壳聚糖充分溶于0.08mol/L盐酸溶液中并滤去不溶物，配制成1.8%(w/w)壳聚糖溶液&11值5.8)。先将IOmg重组人骨形态发生蛋白-2溶解于IOmL壳聚糖溶液中，再在4°C缓慢滴入45%(w/w)甘油磷酸钠溶液0.5mL，形成等渗溶液(300m0sm)；然后再将50mg壳聚糖微球缓慢加入到上述均勻溶液中，制成重组人骨形态发生蛋白-2组合物，其pH值为7.0，在室温下为可流动液体，将温度增加至37°C，5分钟形成稳定的半固态凝胶，如图3所示。采用扫描电镜观察干凝胶，结果如图4所示，干凝胶孔径在100-200μm之间。实施例3先将生长2w的昆明种小鼠按体重的3%进行戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，仰卧固定于手术板上，将右大腿后外侧剃毛消毒，用ImL注射器注射如上制备的含100μg重组人骨形态蛋白-2的组合物100μL。手术后放入饲养盒中，进行正常的洁净级标准饲料喂养。于手术后4周处死小鼠，其中1只小鼠迅速取出植入材料及其周围软组织浸入10%的福尔马林溶液中固定，切片，苏木精一伊红染色观察成骨情况进行组织学观察，如图5所示，发现横纹肌组织中可见骨组织，包括骨小梁及骨髓。另外3只小鼠解剖其右腿取出新长的骨头，如图6所示，新骨的平均鲜重为7Mmg；把新骨放在高温炉中600°C下煅烧6h，随炉冷却后，取出称其灰分平均重量为93.%ig，证实所制备的重组人骨形态发生蛋白-2组合物具有很好的诱导成骨活性。实施例4先将250g的SD大鼠进行水合氯醛腹腔注射麻醉，固定于手术板上，将颅骨剃毛消毒，在中间切开约Icm的皮肤切口，用环形空心钻造成5mm的颅骨缺损，并在缺损处注射如上制备的含20μg重组人骨形态蛋白-2的组合物20μL，缝合伤口。手术后放入饲养盒中，进行正常的洁净级标准饲料喂养。于手术后8周处死小鼠，发现颅骨缺损处已修复，如图7所示，取出颅骨浸入10%的福尔马林溶液中固定，切片，苏木精一伊红染色观察成骨情况，如图8所示，缺损处可见骨组织，包括骨小梁及骨髓，证实所制备的重组人骨形态发生蛋白-2组合物非常适合于骨缺损的修复重建。实施例5将壳聚糖充分溶于0.10mol/L盐酸溶液中并滤去不溶物，配制成2%(w/w)壳聚糖溶液(PH值5.8)。在10°C往IOmL壳聚糖溶液中缓慢滴入20%(w/w)甘油磷酸钠溶液1.ImL,形成等渗溶液(约^5m0sm)；再加入3mg的骨形态发生蛋白_2和2mg的骨形态发生蛋白-7进行混合；最后将60mg壳聚糖微球缓慢加入到上述均勻溶液中，制成生物活性因子组合物，其PH值为7.0。在大鼠股骨缺损处注入30μL该组合物，8周时股骨缺损处已修复，如图9所示。实施例6将壳聚糖充分溶于0.09mol/L盐酸溶液中并滤去不溶物，配制成2.5%(w/w)壳聚糖溶液(PH值6.1)。在20°C往IOmL壳聚糖溶液中缓慢滴入20%(w/w)甘油磷酸钠溶液1.lmL，形成等渗溶液O85m0sm)；再加入Img的骨形态发生蛋白_2和Img的血管内皮生长因子进行混合；最后将IOmg壳聚糖微球缓慢加入到上述均勻溶液中，制成生物活性因子组合物，其PH值为7.1。在小鼠大腿肌袋内注射100μL该组合物，1个月后诱导异位新骨形成，新骨的平均鲜重为515.5mg；把新骨放在高温炉中600°C下煅烧他，随炉冷却后，取出称其灰分平均重量为8%ig。实施例7将壳聚糖充分溶于0.llmol/L盐酸溶液中并滤去不溶物，配制成2%(w/w)壳聚糖溶液(PH值5.6)。在25°C往IOmL壳聚糖溶液中缓慢滴入45%(w/w)甘油磷酸钠溶液0.55mL,形成等渗溶液O95m0sm)；再加入2mg的骨形态发生蛋白_2和2mg的转化生长因子进行混合；最后将80mg壳聚糖微球缓慢加入到上述均勻溶液中，制成生物活性因子组合物，其PH值为7.0。在大鼠颅骨缺损出注射20μL该组合物，8周时颅骨缺损处已修复，如图10所示。实施例8将壳聚糖充分溶于0.lmol/L盐酸溶液中并滤去不溶物，配制成1.0%(w/w)壳聚糖溶液(PH值5.3)。在20°C往IOmL壳聚糖溶液中缓慢滴入50%(w/w)甘油磷酸钠溶液0.5mL，形成等渗溶液(320m0sm)；再加入Img的骨形态发生蛋白-2进行混合；最后将50mg壳聚糖微球缓慢加入到上述均勻溶液中，制成生物活性因子组合物，其pH值为7.4。在小鼠大腿肌袋内注射100μL该组合物，1个月后诱导异位新骨形成，新骨的平均鲜重为362.7mg；把新骨放在高温炉中600°C下煅烧6h，随炉冷却后，取出称其灰分平均重量为69.4mg。实施例9将壳聚糖充分溶于0.lmol/L盐酸溶液中并滤去不溶物，配制成1.5%(w/w)壳聚糖溶液(PH值5.4)。在20°C往IOmL壳聚糖溶液中缓慢滴入30%(w/w)甘油磷酸钠溶液2mL，形成等渗溶液O90m0sm)；再加入0.Img的骨形态发生蛋白-2进行混合；最后将50mg壳聚糖微球缓慢加入到上述均勻溶液中，制成生物活性因子组合物，其pH值为6.9。在小鼠大腿肌袋内注射100μL该组合物，1个月后诱导异位新骨形成，新骨的平均鲜重为193.9mg；把新骨放在高温炉中600°C下煅烧6h，随炉冷却后，取出称其灰分平均重量为43mg。实施例10将壳聚糖充分溶于0.lmol/L盐酸溶液中并滤去不溶物，配制成1.5%(w/w)壳聚糖溶液化11值5.4)。在20°C往IOmL壳聚糖溶液中缓慢滴入30%(w/w)甘油磷酸钠溶液2.2mL，形成等渗溶液O90m0sm)；再加入20mg的骨形态发生蛋白_2和30mg的成骨蛋白进行混合；最后将50mg壳聚糖微球缓慢加入到上述均勻溶液中，制成生物活性因子组合物，其PH值为6.8。在小鼠大腿肌袋内注射50μL该组合物，1个月后诱导异位新骨形成，新骨的平均鲜重为827.3mg；把新骨放在高温炉中600°C下煅烧6h，随炉冷却后，取出称其灰分平均重量为84.7mg。实施例11将壳聚糖充分溶于0.lmol/L盐酸溶液中并滤去不溶物，配制成1.8%(w/w)壳聚糖溶液化11值5.5)。在20°C往IOmL壳聚糖溶液中缓慢滴入45%(w/w)甘油磷酸钠溶液0.5mL，形成等渗溶液(300m0sm)；再加入2mg的骨形态发生蛋白_2和3mg的血管内皮生长因子进行混合；最后将500mg壳聚糖微球缓慢加入到上述均勻溶液中，制成生物活性因子组合物，其PH值为7.2。在小鼠大腿肌袋内注射100μL该组合物，1个月后诱导异位新骨形成，新骨的平均鲜重为927mg;把新骨放在高温炉中600°C下煅烧6h，随炉冷却后，取出称其灰分平均重量为93.2mgo本发明提供了一种新型可注射的生物活性因子组合物，以等渗壳聚糖溶液和壳聚糖微球为生物活性因子的载体，可以以液体形式通过注射器注入所需部位，在体温和生理PH值条件下原位成型约2-15分钟形成凝胶，植入创伤小，临床应用方便。等渗壳聚糖溶液等渗点控制在280320m0sm，有利于生物活性因子的存活与缓释，降低对周围组织的不良刺激。且通过添加壳聚糖微球，缩短胶凝时间，提高凝胶强度，使本组合物的制备更为可控。且本发明的方法制备工艺简单、材料易得，并且无需外加交联剂，反应条件温和，能够维持生物活性因子的活性。本发明适用范围广，制作工艺可用于多种生物活性因子的携载和输送，能适应不同形状的骨缺损修复和重建。最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。权利要求1.一种可注射的生物活性因子组合物，其特征在于，包含生物活性因子、等渗壳聚糖溶液和悬浮在溶液中的壳聚糖微球，所述组合物经过温度依赖性胶凝形成水凝胶，所述胶凝温度为；3538°C。2.根据权利要求1所述的可注射的生物活性因子组合物，其特征在于，所述等渗壳聚糖溶液、生物活性因子、壳聚糖微球的体积质量比(mL/mg/mg)为10.015150。3.根据权利要求1所述的可注射的生物活性因子组合物，其特征在于，所述组合物的PH值为6.87.4。4.根据权利要求1所述的可注射的生物活性因子组合物，其特征在于，生物活性因子选自骨形态发生蛋白、转化生长因子、胰岛素样生长因子、血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、成骨蛋白中的一种或两种以上。5.根据权利要求4所述的可注射的生物活性因子，其特征在于，所述生物活性因子为BMP-2、BMP-7或其同其它生物活性因子的复合物。6.根据权利要求1所述的可注射的生物活性因子组合物，其特征在于，所述等渗壳聚糖溶液是指1.02.5%(w/v)的壳聚糖稀酸溶液与2050%(w/w)的甘油磷酸钠溶液的混合物，其中所述壳聚糖稀酸溶液与所述甘油磷酸钠溶液的体积比为10.020.3，所述壳聚糖稀酸溶液的pH值为5.36.1。7.根据权利要求1所述的生物活性因子组合物，其特征在于，所述的壳聚糖微球的平均粒径为300nm50μm。8.—种权利要求17任一项所述的可注射的生物活性因子组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法为先将生物活性因子加到壳聚糖稀酸溶液中，在430°C之间、持续搅拌下再向上述壳聚糖稀酸溶液中逐滴加入甘油磷酸钠溶液，形成均勻溶液；然后继续往其中加入壳聚糖微球，即得到生物活性因子组合物；或先在430°C之间、持续搅拌下向壳聚糖稀酸溶液中逐滴加入甘油磷酸钠溶液，形成等渗壳聚糖溶液；再将生物活性因子加到上述等渗溶液中；然后继续往其中加入壳聚糖微球，即得到生物活性因子组合物；或首先将壳聚糖微球分散于水中制成220%(w/v)的微球悬浮液，再往悬浮液中加入生物活性因子进行被动吸附负载30分钟6小时；其次在430°C之间、持续搅拌下向壳聚糖稀酸溶液中逐滴加入甘油磷酸钠溶液，形成等渗壳聚糖溶液；最后将负载生物活性因子的壳聚糖微球悬浮液加到等渗壳聚糖溶液中，即得到生物活性因子组合物。9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，还包括制备壳聚糖微球的步骤，可选自以下任何一种制备方法(1)将壳聚糖溶液滴加到NaOH溶液中或NaOH-甲醇混合溶液中凝聚，收集微球，用水充分洗涤或在水中反复透析，干燥后即得壳聚糖微球；(2)以硫酸、三聚磷酸钠、硫酸纳或柠檬酸钠为交联剂，通过与壳聚糖溶液的交联反应制得离子交联壳聚糖微球，然后再将离子交联壳聚糖微球分散于水中，加入浓度为0.15%(w/v)的氢氧化钠溶液，直至反应体系最终pH值大于7;收集微球，用水充分洗涤或在水中反复透析，干燥后即得壳聚糖微球；(3)将壳聚糖溶液通过喷雾干燥法先制得微球，再将微球用氢氧化钠溶液中和处理，收集微球用水充分洗涤或在水中反复透析，干燥后即得壳聚糖微球；(4)将壳聚糖原料通过机械或气流粉碎所制得的超细壳聚糖颗粒。10.根据权利要求17任一项所述的可注射的生物活性因子组合物的应用，其特征在于，用于制备治疗骨损伤的可注射药物。全文摘要本发明公开了一种可注射的生物活性因子组合物及其制备方法。生物活性因子组合物包括一种或一种以上具有生物活性的细胞生长因子，等渗壳聚糖溶液以及悬浮在溶液中的壳聚糖微球，经过温度依赖性胶凝以形成水凝胶。其制备方法包括壳聚糖等渗溶液制备、生物活性因子和壳聚糖微球的添加，以形成生物活性因子组合物。该生物活性因子组合物可采用注射方法应用于骨或软骨缺损处，在生理pH值和温度下原位形成水凝胶，并缓慢释放生物活性因子。文档编号A61P19/08GK102139096SQ20111006992公开日2011年8月3日申请日期2011年3月22日优先权日2011年3月22日发明者刘昌胜,王靖,钱秀珍申请人:华东理工大学