一种脂肪干细胞活性成分及含有该活性成分的美容制剂的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种脂肪干细胞活性成分及含有该活性成分的美容制剂，所述活性成分由脂肪干细胞分泌，脂肪干细胞来源于脂肪组织。利用本发明脂肪干细胞活性成分开发成具有细胞生物学活性功能的美容制剂，作用于人体后，可活化机体干细胞，修复或替代受损、病变或衰老细胞，具有调节机体细胞代谢功能，增强机体免疫力，延缓衰老等功效。
【专利说明】
一种脂肪干细胞活性成分及含有该活性成分的美容制剂
技术领域
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种脂肪干细胞活性成分，该脂肪干细胞活 性成分的获取方法，以及该脂肪干细胞活性成分在美容方面的应用。
【背景技术】
[0002] 干细胞（Stem Cel 1)是一类具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞群体， 是形成人体各种组织和器官的"祖细胞"。根据其发育阶段可分为胚胎干细胞和成体干细 胞；根据分化潜能大小又可以分为全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。
[0003] 干细胞可以产生和分泌大量的生物活性因子，这些干细胞生物活性因子可有效调 控机体细胞信号传导、活化人体干细胞，进而生理性修复或替代机体损伤、病变及衰老细 胞。例如干细胞可以产生干细胞生长因子、神经生长因子、基质细胞源性生长因子、血管内 皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子、巨核细胞集落刺激因子、 表皮生长因子、肿瘤坏死因子、干扰素等因子，这些细胞因子具有促进细胞增殖、分化、抗凋 亡等功能；干细胞还可以产生天然免疫蛋白，例如IgG、IgA、IgM、IgD、IgE等,可以抵御或修 复自身和外界因素对机体细胞造成的损伤。
[0004] 脂肪干细胞来源于脂肪组织，是一种处于静止状态的，未分化的成体干细胞，它具 有保持长期自我更新的能力，且在一定条件下，能诱导分化成为特定的组织。
[0005] 利用干细胞分泌产生的生物活性因子激活机体干细胞，进而通过自身干细胞生理 性修复或替代机体损伤、病变及衰老的细胞，在疾病防治与保健美容领域具有广阔的应用 前景。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种脂肪干细胞活性成分，以及该脂肪干细胞活性成分的获 取方法。
[0007] 提供一种含有该活性成分的美容制剂，是本发明的另一发明目的。
[0008] -种脂肪干细胞活性成分，所述活性成分由脂肪干细胞分泌，存在于脂肪组织中。
[0009] 上述脂肪干细胞活性成分的获取方法是：将脂肪组织在D-Hank' s液中漂洗三次， 尽量去除结缔组织及血管内皮，将其剪成1 mm *1 mm *1 mm大小的组织块。将剪碎的组织块 置于高糖DMEM培养基中，加入0.075%的（型胶原酶，置于37°C，5% C02培养箱中培养24h。 将消化后的液体吸出，移至离心管中，2200r/min离心6min，弃上层液体，D-Hank' s液重悬 细胞，离心，重复两次。
[0010] 本发明同时也提供了上述获得的脂肪干细胞活性成分的培养方法，包括： 1)将离心后弃掉漂浮的脂肪细胞及脂滴，用含20%胎牛血清的高糖DMEM培养液重悬细 胞，置于6孔培养板中，调整细胞密度为每孔105,放入37°C，5%0)2培养箱中培养，24h开始 贴壁，每2d换液一次。
[0011] 2)当细胞达到80%融合时，用2%的胰蛋白酶消化、传代，将传代的细胞移入新的培 养瓶中。
[0012] 3)重复以上培养、扩增过程，培养过程中可根据需要调整最佳的细胞数量； 收集上述的脂肪干细胞上清，2200r/min离心6min弃去上层悬浮细胞。将收集到的上 清移入50ml离心管中，使用低温高速机控制温度，离心收集脂肪干细胞上清中的脂肪干细 胞活性物质，离心速度8000r/min，离心时间20min。弃去离心后50ml离心管中的液体，用 D-Hank' s液重悬离心管底部的沉淀物，将含有脂肪干细胞活性物质的D-Hank' s液移入EP 管中并在-20°C保存。
[0013] 本发明可以利用上述脂肪干细胞活性成分进一步制成针剂、涂剂、霜剂和粉剂等 美容制剂，应用脂肪干细胞的活性因子修复人体皮肤损伤，对各种损伤皆有一定的疗效，在 医学、保健、美容领域有极佳的应用前景，同时也避免了直接应用干细胞可能导致的致癌问 题。
[0014] 本发明进一步提供了一种应用上述脂肪干细胞活性成分制备的霜剂化妆品，所述 霜剂化妆品由以下重量份数的组分为原料：羊毛醇3~5g、白蜂蜡l~3g、鲸蜡5~10g、硼砂 0. 3~0. 5g、去离子水20~50ml、脂肪干细胞活性成分10~15g、培养基20~55g、成纤维细胞生 长因子0. 02~0. 08g、表皮细胞生长因子0. 05~0. 08g、S0D3~5g，按照霜类化妆品常规生产方 法制备得到。
[0015] 本发明制备得到的霜剂化妆品具有以下积极效果：1.对皮肤细胞具有良好的促 进作用，可以加快细胞新陈代谢，具有祛皱祛斑祛斑美白等功效，并能够保持皮肤弹性，恢 复皮肤自然青春。2.在祛皱、祛斑方面产生效果十分迅速，与其他祛皱祛斑产品相比优势明 显。3.脂肪干细胞在体外稳定增殖且衰亡率低，同时它具有取材容易、少量组织即可获取大 量干细胞的优势。
【附图说明】 图1是应用本发明化妆品在祛斑前后效果对比图。 图2是应用本发明化妆品祛皱前后效果对比图。
【具体实施方式】
[0016] 以下通过具体实施例对本发明进一步的举例描述，但下述实施例并不构成对本发 明的任何限制。在不背离本发明技术解决方案的前提下，对本发明所作的本领域普通技术 人员容易实现的任何改动或改变，都将落入本发明的权利要求范围之内。
[0017] 实施例1 :脂肪干细胞的分离 将脂肪组织在D-Hank' S液中漂洗三次，尽量去除结缔组织及血管内皮，将其剪成1 mm *1 mm *1 mm大小的组织块。将剪碎的组织块置于高糖DMEM培养基中，加入0? 075%的型胶 原酶，置于37°C，5% C02培养箱中培养24h。将消化后的液体吸出，移至离心管中，2200r/min 离心6min，弃上层液体，用D-Hank' s液重悬细胞，离心，重复两次。
[0018] 实施例2 :脂肪干细胞的培养 1.将离心后弃掉漂浮的脂肪细胞及脂滴，用含20%胎牛血清的高糖DMEM培养液重悬 细胞，置于6孔培养板中，调整细胞密度为每孔105,放入37°C，5%0)2培养箱中培养，24h开 始贴壁，每2d换液一次。
[0019] 2.当细胞达到80%融合时，用2%的胰蛋白酶消化、传代，将传代的细胞移入新的 培养瓶中。
[0020] 3.多次重复此培养、扩增过程可获得大量脂肪干细胞。
[0021] 实施例3 :脂肪干细胞活性物质的获取 1.收集脂肪干细胞上清，2200r/min离心6min弃去上层悬浮细胞。
[0022] 2.将收集到的上清移入50ml离心管中，使用低温高速机控制温度，离心收集脂肪 干细胞上清中的脂肪干细胞活性物质，离心速度8000r/min，离心时间20min。
[0023] 3.弃去离心后50ml离心管中的液体，用D-Hank' s液重悬离心管底部的沉淀物， 将含有脂肪干细胞活性物质的D-Hank' s液移入EP管中并在-20°C保存。
[0024] 实施例4 :霜类化妆品的制备 称取羊毛醇4g、白蜂蜡2g、鲸蜡7g、硼砂0. 5g、去离子水40ml、脂肪干细胞活性成分 14g、培养基38g、成纤维细胞生长因子0. 07g、表皮细胞生长因子0. 08g、S0D5g，按照霜类化 妆品常规生产方法制备得到。
[0025] 用实施例3-4制备的美容制剂进行祛斑实验，同时观察对皮肤的刺激性、过敏性 及不良反应。
[0026] 涂抹本发明制剂时，受试者先用温水冲洗患部，用擦手纸吸干水分，在温度 23土 1°C，相对湿度55±5%的恒温恒湿条件下保持患部不与其他部位接触15min。每日早 晚各2次，每3日对产品效果进行一次评价，综合评分分三个等级，分别为效果不明显（0- 3分)，效果一般（4一6分)，效果显著（7 -10分)。半个月后对总体效果进行分数评价。
[0027] 使用本发明制剂后效果见祛斑图。从图中可以看出，使用添加脂肪干细胞活性物 质化妆品前后皮肤显著变化，使用后斑点明显范围缩小，颜色变淡，效果为9分。未发现本 制剂对皮肤有刺激性。
[0028] 用实施例3-4制备的美容制剂进行祛皱实验，同时观察对皮肤的刺激性、过敏性 及不良反应。
[0029] 涂抹本发明制剂时，受试者先用温水冲洗患部，用擦手纸吸干水分，在温度 23土 1°C，相对湿度55±5%的恒温恒湿条件下保持患部不与其他部位接触15min。每日早 晚各2次，每3日对产品效果进行一次评价，综合评分分三个等级，分别为效果不明显（0- 3分)，效果一般（4一6分)，效果显著（7 -10分)。半个月后对总体效果进行分数评价。
[0030] 使用本发明制剂后效果见祛皱图。从图中可以看出，使用添加脂肪干细胞活性物 质化妆品前后皮肤显著变化，使用后皱纹明显消失，效果为9分。未发现本制剂对皮肤有刺 激性。
【主权项】
2. 将剪碎的组织块置于高糖DMEM培养基中，加入0. 075%的型胶原酶，置于37°C，5% C〇2培养箱中培养24h。3. 将消化后的液体吸出，移至离心管中，2200r/min离心6min，弃上层液体，D-Hank' s 液重悬细胞，离心，重复两次。4. 权利要求2获得脂肪干细胞活性成分的培养方法，包括： (1) 将离心后弃掉漂浮的脂肪细胞及脂滴，用含20%胎牛血清的高糖DMEM培养液重悬 细胞，置于6孔培养板中，调整细胞密度为每孔10 5,放入37°C，5%0)2培养箱中培养，24h开 始贴壁，每2d换液一次； (2) 当细胞达到80%融合时，用2%的胰蛋白酶消化、传代，将传代的细胞移入新的培养 瓶中； (3) 重复以上培养、扩增过程，培养过程中可根据需要调整最佳的细胞数量。5. -种包含有权利要求1脂肪干细胞活性成分的霜剂化妆品，由以下重量份数的 组分为原料制备得到：羊毛醇3-5g、白蜂蜡l-3g、鲸蜡5-10g、硼砂0. 3-0. 5g、去离子水 20-50ml、脂肪干细胞活性成分10-15g、培养基20-55g、成纤维细胞生长因子0. 02-0. 08g、 表皮细胞生长因子〇· 05-0. 08g、SOD3-5g。
【文档编号】A61Q19/02GK105820997SQ201510002689
【公开日】2016年8月3日
【申请日】2015年1月6日
【发明人】陈礼明, 王璐
【申请人】陈礼明