专利名称：一种具有抗菌药理活性的三七提取物及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发 明属于中药材有效成分提取、制剂和应用技术领域，具体涉及一种从中药三七中提取具有抗菌药理活性的三七提取物及其制备方法与应用。
背景技术：
三七为五力口科(A raliaceae)植物三七Panaxnotoginseng(Burk.)F. H. Chen 的干燥根及根茎，其药用价值日益被世人所认同，应用越来越广泛。随着现代生物提取技术的开发和应用，三七的利用方式悄然发生着变化。由传统方式为全药应用、到磨粉应用、再到有效成分提取浓缩应用，可以说发生了本质上的变化。现有技术中三七有效成分的提取，多采用水提或醇提方式，然后进行大孔树脂吸附，再用稍高浓度(一般为80%左右)的乙醇将醇溶性成分从大孔树脂中洗脱出来，浓缩后即得到通常的三七总皂苷。2010版《中国药典》颁布了“三七总皂苷”的标准，公开了三七总皂苷的制备方法。但是，现有技术没有把80%乙醇洗脱后残留在大孔树脂柱上的部分提取物加以收集和利用，造成了三七资源的浪费。因此，开发三七及其有效成分的综合利用技术具有广阔的应用前景和巨大的经济潜力。
发明内容
本发明克服现有技术的不足，第一目的在于提供一种具有抗菌药理活性的三七提取物，第二目的在于提供一种制备该三七提取物的方法，第三目的在于提供该三七提取物在药物制备上的应用，第四目的在于提供该三七提取物的药用制剂。本发明的第一目的是这样实现的具有抗菌药理活性的三七提取物，富含脂溶性成份，包含(重量比)22，23_ 二氢豆甾醇3 6%、豆甾醇2 4%、大香叶烯DO. 5 1.0%、 匙叶桉油烯醇3 5%、喇叭烯和双环大香叶烯1. 0 2. 5%。所述的三七提取物还含有(重量比)挥发性蓝桉醇1 3%、δ-杜松醇0.2 1. 0%、喇叭茶醇0. 2 1. 0%、绿花醇1 3%、异匙叶桉油烯醇0. 5 1. 5%、Tau_杜松醇 0. 5 1. 5%、α -古芸烯2% 4%。所述的三七提取物还含有(重量比)十六烷酸甲酯0.05 0.2%、十六烷酸 0. 1 0.5%、十六烷酸甘油酯1.0 2.5%、十六烷酸乙酯0.5 1.0%、十八碳二烯酸甲酯0. 1 0. 3%、十八碳二烯酸和十八碳烯酸1. 0 2. 5%、十八碳二烯酸乙酯和十八碳烯酸乙酯0. 1 0.5%、十八碳二烯酸甘油酯和3-甲氧基-5-甲基-2-(3，7，11-三甲基-2， 6，10-十二碳三烯基)苯酚1.5 3.5%、4_甲氧基-6-戊基-5，6-二氢-2-吡喃酮0. 1 0. 5%。本发明第二个目的是这样实现的所述三七提取物的制备方法包括下列步骤，Α、将三七干燥根洗净干燥，然后粉碎成830-380 μ m的粗粉；B、将粗粉加5 10倍重量的70%乙醇回流提取3次，每次1. 5小时，合并醇提液后回收乙醇，所得浓缩液经大孔吸附树脂柱吸附静置1 3小时后，用水对大孔吸附树脂柱洗脱，至流出水不出现紫环反应，然后用80 %乙醇继续洗脱，得到三七总皂苷醇提液，浓缩后得到常规三七提取物。C、用85% 9 5%高浓度乙醇再次对B步骤洗脱过的大孔吸附树脂洗脱2小时，收集洗脱液并回收乙醇后得到土黄色粘稠状液体，即为本发明所述的三七提取物。上述制备方法中，所述的高浓度乙醇浓度为90% ；所述的大孔吸附树脂为DlOl型大孔吸附树脂、AB-8型大孔吸附树脂、LX68型大孔吸附树脂或DM130型大孔吸附树脂。本发明第三个目的是这样实现的本发明所述的具有抗菌药理活性三七提取物在制备抗乙型链球菌和/或绿脓杆菌和/或金黄色葡萄球菌药物上的应用。本发明的第四目的是这样实现的以含有所述的具有抗菌药理活性三七提取物的药用制剂，含有治疗有效量的所述三七提取物和医药上可接受的辅料，制成任意适用的剂型。以本发明所述制备方法制取的具有抗菌药理活性三七提取物的药用制剂，含有治疗有效量的所述三七提取物和医药上可接受的辅料，制成任意适用的剂型。本发明三七提取物中含有植物留醇类的豆留醇和22，23_ 二氢豆留醇，植物萜类的大香叶烯和双环大香叶烯，挥发性醇类的匙叶桉油烯醇、蓝桉醇、绿花醇、S -杜松醇、异匙叶桉油烯醇和Tau-杜松醇，在组合作用下，使得该三七提取物具有更强的抗菌药理活性。尤其对乙型链球菌、绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌的繁殖抑制效果良好。本发明三七提取物可用于制备对抗上述病菌的各种剂型的药物。本发明三七提取物是从常规三七提取过程中丢弃的“废物”中经过优化方法，深度提纯后获得的，突破了传统的三七有效成分提取和利用的思维模式，变废为宝，大大提高了三七资源的利用率，同时为人类的健康提供一种安全的药物资源。
图1为本发明三七提取物的制备工艺流程框图；图2为用于抗菌的三七提取物成份分析气相色谱图；图3为所含22，23-二氢豆甾醇质谱图；图4为所含豆甾醇质谱图；图5为所含匙叶桉油烯醇质谱图；图6为所含蓝桉醇质谱图；图7为所含绿花醇质谱图；图8为所含大香叶烯D的质谱图。
具体实施例方式下面结合附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换，均落入本发明的保护范围。实施例1本发明所述的具有抗菌药理活性的三七提取物，富含脂溶性成份，其包含(重量比)22，23-二氢豆甾醇3.5%、豆甾醇2.2%、大香叶烯DO. 56 %、匙叶桉油烯醇3. 21 %、 喇叭烯和双环大香叶烯1. 21%、蓝桉醇1. 3%, δ -杜松醇0. 25%、喇叭茶醇0. 23%、绿花醇1.25%、异匙叶桉油烯醇0.59%、Tau-杜松醇0.66%、α -古芸烯2. 65%、十六烷酸甲酯0. 07%、十六烷酸0. 15%、十六烷酸甘油酯1. 3%、十六烷酸乙酯0. 53%、十八碳二烯酸甲酯0. 12%、十八碳二烯酸和十八碳烯酸1.2%、十八碳二烯酸乙酯和十八碳烯酸乙酯 0. 18%、十八碳二烯酸甘油酯和3-甲氧基-5-甲基-2-(3，7，11-三甲基_2，6，10-十二碳三烯基)苯酚1.8%,4-甲氧基-6-戊基-5，6-二氢-2-吡喃酮0. 17%。实施例2本发明所述的具有抗菌药理活性的三七提取物，富含脂溶性成份，其包含(重量比)22，23- 二氢豆甾醇5. 47%、豆甾醇3. 58%、大香叶烯DO. 91%、匙叶桉油烯醇3. 94%, 喇叭烯和双环大香叶烯2. 35 %、蓝桉醇2. 65%、δ -杜松醇0. 83%、喇叭茶醇0. 48%、绿花醇2. 83%、异匙叶桉油烯醇1.35%、Tau-杜松醇1.21%、α -古芸烯2. 75%、十六烷酸甲酯0. 15%、十六烷酸0. 41%、十六烷酸甘油酯2. 12%、十六烷酸乙酯0. 76%、十八碳二烯酸甲酯0. 25%、十八碳二烯酸和十八碳烯酸2. 32%、十八碳二烯酸乙酯和十八碳烯酸乙酯 0. 42%、十八碳二烯酸甘油酯和3-甲氧基-5-甲基-2-(3，7，11-三甲基-2,6,10-十二碳三烯基)苯酚3. 15%,4-甲氧基-6-戊基-5，6-二氢-2-吡喃酮0.44%。实施例3本发明所述的具有抗菌药理活性的三七提取物，富含脂溶性成份，其包含(重量比)22，23- 二氢豆甾醇4. 75%、豆甾醇2. 50%、大香叶烯DO. 82%、匙叶桉油烯醇3. 67%, 喇叭烯和双环大香叶烯2. 08%、蓝桉醇1. 58%, δ -杜松醇0. 64%、喇叭茶醇0. 43%、绿花醇1.89%、异匙叶桉油烯醇0.80%、Tau-杜松醇0.79%、α -古芸烯2. 15%、十六烷酸甲酯0. 13%、十六烷酸0. 27%、十六烷酸甘油酯1. 24%、十六烷酸乙酯0. 72%、十八碳二烯酸甲酯0. 19%、十八碳二烯酸和十八碳烯酸1. 34%、十八碳二烯酸乙酯和十八碳烯酸乙酯 0. 30%、十八碳二烯酸甘油酯和3-甲氧基-5-甲基-2-(3，7，11-三甲基_2，6，10-十二碳三烯基)苯酚2.51%、4_甲氧基-6-戊基-5，6-二氢-2-吡喃酮0. 22%。实施例4本发明所述的具有抗菌药理活性的三七提取物，富含脂溶性成份，其包含(重量比)22，23- 二氢豆甾醇4. 15%、豆甾醇3. 17%、大香叶烯DO. 65%、匙叶桉油烯醇4. 65%, 喇叭烯和双环大香叶烯2. 3%、蓝桉醇2. 22%, δ -杜松醇0. 45%、喇叭茶醇0. 91%、绿花醇2. 25%、异匙叶桉油烯醇1.05%、Tau-杜松醇1.36%、α -古芸烯2. 45%、十六烷酸甲酯0. 11%、十六烷酸0. 48%、十六烷酸甘油酯2. 35%、十六烷酸乙酯0. 85%、十八碳二烯酸甲酯0. 21%、十八碳二烯酸和十八碳烯酸2. 36%、十八碳二烯酸乙酯和十八碳烯酸乙酯 0. 45%、十八碳二烯酸甘油酯和3-甲氧基-5-甲基-2-(3，7，11-三甲基-2,6,10-十二碳三烯基)苯酚3. 31%,4-甲氧基-6-戊基-5，6-二氢-2-吡喃酮0. 38%。实施例5称取干燥IOKg三七粉碎成830 μ m的粗粉，将粗粉加5倍重量的70 %乙醇回流提取3次，每次1. 5小时，合并醇提液后回收乙醇，所得浓缩液经、LX68型大孔吸附树脂柱吸附静置1小时后，用水对大孔吸附树脂柱洗脱，至流出水不出现紫环反应，然后用80%乙醇继续洗脱，得到三七总皂苷醇提液，浓缩后得到常规三七提取物。用85%高浓度乙醇再次洗脱大孔吸附树脂2小时，收集洗脱液并回收乙醇后得到土黄色粘稠状液体，为本发明所述的三七提取物0. 28Kg。实施例6
称取干燥IOKg三七粉碎成380 μ m的粗粉，将粗粉加10倍重量的70%乙醇回流提取2次，每次1. 5小时，合并醇提液后回收乙醇，所得浓缩液经DlOl型大孔吸附树脂柱吸附静置2小时后，用水对AB-8型大孔吸附树脂柱洗脱，至流出水不出现紫环反应，然后用80% 乙醇继续洗脱，得到三七总皂苷醇提液，浓缩后得到常规三七提取物。用95%高 浓度乙醇再次洗脱大孔吸附树脂2小时，收集洗脱液并回收乙醇后得到土黄色粘稠状液体，为本发明所述的三七提取物0. 298Kg。实施例7称取干燥IOKg三七粉碎成500 μ m的粗粉，将粗粉加6倍重量的70 %乙醇回流提取3次，每次1. 5小时，合并醇提液后回收乙醇，所得浓缩液经DM130型大孔吸附树脂柱吸附静置3小时后，用水对大孔吸附树脂柱洗脱，至流出水不出现紫环反应，然后用80%乙醇继续洗脱，得到三七总皂苷醇提液，浓缩后得到常规三七提取物。用90%高浓度乙醇再次洗脱大孔吸附树脂2小时，收集洗脱液并回收乙醇后得到土黄色粘稠状液体，为本发明所述的三七提取物0. 305Kg。实施例8 称取干燥IOKg三七粉碎成600 μ m的粗粉，将粗粉加8倍重量的70 %乙醇回流提取3次，每次1. 5小时，合并醇提液后回收乙醇，所得浓缩液经DlOl型大孔吸附树脂柱吸附静置3小时后，用水对大孔吸附树脂柱洗脱，至流出水不出现紫环反应，然后用80%乙醇继续洗脱，得到三七总皂苷醇提液，浓缩后得到常规三七提取物。用90%高浓度乙醇再次洗脱大孔吸附树脂2小时，收集洗脱液并回收乙醇后得到土黄色粘稠状液体为本发明所述的三七提取物0. 31Kg。试验1 对具有抗菌活性的三七提取物成份的分析鉴定药物材料采用85%乙醇提取的具有抗菌活性的三七提取物(由云南省云科药业有限公司提供)。气相色谱条件仪器为美国Agilent Technologies公司HP5890，HP-5石英毛细管柱(30mmX0. 32mmX0. 25 μ m)；柱温 80 280°C，程序升温 5°C/min ；柱流量为 1. 5ml/min ； 进样口温度250°C ；氢火焰检测器温度250°C ；进样量Ι.ΟμΙ ；分流比50 1 ；载气为高纯氮气。气相色谱-质谱条件HP6890GC/5973MS气相色谱-质谱联用仪(美国Agilent Technologies 公司生产)。GC 条件HP-5MS 石英毛细管柱(30mmX0. 25mmX0. 25 μ m)；柱温 100 260°C，程序升温5°C /min ；柱流量为1. 0ml/min ；进样口温度250°C ；柱前压IOOkPa ；进样量0. 30 μ 1 ； 分流比10 1;载气为高纯氮气。MS条件电离方式EI ；电子能量70 ；传输线温度250°C ；离子源温度230°C ；四级杆温度150°C ；质量范围35 500 ；采用Wiley7n. 1标准谱库计算机检索定性。试验结果用气相色谱法对用于抗菌的三七提取物进行鉴定，鉴定结果显示该提取物包含25 种以上脂溶性成份(见表1)，总含量约占全三七脂溶部分的28. 38% (重量比)，其主要成分为22，23-豆留醇4. 65% (重量比，下同)、豆留醇2. 49%、匙叶桉油烯醇3. 26%、蓝桉醇1. 50%、绿花醇1. 75%, α -古芸烯2. 67%、大香叶烯DO. 78%。表1具有抗菌活性的三七提取物(85%乙醇提取)成份鉴定结果及含量表
权利要求
1.一种具有抗菌药理活性的三七提取物，富含脂溶性成份，其特征是包含(重量比)22，23- 二氢豆甾醇3 6%、豆甾醇2 4%、大香叶烯DO. 5 1. O%、匙叶桉油烯醇 3 5%、喇叭烯和双环大香叶烯1. O 2. 5%。
2.按照权利要求1所述的三七提取物，其特征是还含有(重量比)挥发性蓝桉醇1 3%, δ-杜松醇0.2 1.0%、喇叭茶醇0.2 1.0%、绿花醇1 3%、异匙叶桉油烯醇 0.5 1. 5%、Tau-杜松醇0. 5 1.5%、α -古芸烯2% 4%。
3.按照权利要求1或2所述的三七提取物，其特征是还含有(重量比)十六烷酸甲酯 0. 05 0. 2%、十六烷酸0. 1 0. 5%、十六烷酸甘油酯1. 0 2. 5%、十六烷酸乙酯0. 5 1.0%、十八碳二烯酸甲酯0. 1 0.3%、十八碳二烯酸和十八碳烯酸1.0 2.5%、十八碳二烯酸乙酯和十八碳烯酸乙酯0. 1 0. 5%、十八碳二烯酸甘油酯和3-甲氧基-5-甲基-2- (3，7，11-三甲基-2，6，10-十二碳三烯基)苯酚1. 5 3. 5%、4_甲氧基-6-戊基-5， 6- 二氢-2-吡喃酮0. 1 0. 5 %。
4.一种制备权利要求1、2或3所述的具有抗菌药理活性的三七提取物的方法，其特征是所述三七提取物的制备方法包括下列步骤，Α、将三七干燥根洗净干燥，然后粉碎成830-380 μ m的粗粉；B、将粗粉加5 10倍重量的70%乙醇回流提取3次，每次1. 5小时，合并醇提液后回收乙醇，所得浓缩液经大孔吸附树脂柱吸附静置1 3小时后，用水对大孔吸附树脂柱洗脱， 至流出水不出现紫环反应，然后用80%乙醇继续洗脱，得到三七总皂苷醇提液，浓缩后得到常规三七提取物。C、用85% 95%高浓度乙醇再次对B步骤洗脱过的大孔吸附树脂洗脱2小时，收集洗脱液并回收乙醇后得到土黄色粘稠状液体，即为本发明所述的三七提取物。
5.如权利要求4所述的具有抗菌药理活性三七提取物的制备方法，其特征是所述的高浓度乙醇浓度为90%。
6.如权利要求4所述的具有抗菌药理活性三七提取物的制备方法，其特征是所述的大孔吸附树脂为DlOl型大孔吸附树脂、AB-8型大孔吸附树脂、LX68型大孔吸附树脂或 DMl30型大孔吸附树脂。
7.—种权利要求1、2或3所述的具有抗菌药理活性三七提取物的应用，其特征是在制备抗乙型链球菌和/或绿脓杆菌和/或金黄色葡萄球菌药物上的应用。
8.一种含有权利要求1、2或3所述的具有抗菌药理活性三七提取物的药用制剂，其特征是含有治疗有效量的所述三七提取物和医药上可接受的辅料，制成任意适用的剂型。
9.一种以权利要求4、5或6所述方法制取的具有抗菌药理活性三七提取物的药用制齐U，其特征是含有治疗有效量的所述三七提取物和医药上可接受的辅料，制成任意适用的剂型。
全文摘要
本发明公开了一种具有抗菌药理活性的三七提取物及其制备方法与应用。该三七提取物富含脂溶性成份，并包含(重量比)22，23-二氢豆甾醇3～6％、豆甾醇2～4％、大香叶烯D0.5～1.0％、匙叶桉油烯醇3～5％、喇叭烯和双环大香叶烯1.0～2.5％等有效成分。所述的制备方法是在进行常规三七总皂苷提取后，将其采用的大孔吸附树脂柱用85～95％的高浓度乙醇再次洗脱，收集洗脱液、浓缩后得到的土黄色粘稠状的三七提取物。所述三七提取物对乙型链球菌、绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌的繁殖有明显的抑制作用，可用于制备抗乙型链球菌和/或绿脓杆菌和/或金黄色葡萄球菌的药物。所述的含有治疗有效量的所述三七提取物和医药上可接受的辅料，制成任意适用的剂型。本发明扩大了三七有效成分的提取率和利用效果，也为人类提供一种安全的药物资源。
文档编号A61P31/04GK102178713SQ20111009202
公开日2011年9月14日 申请日期2011年4月13日 优先权日2011年4月13日
发明者张要武, 杨如萍, 杨金华, 甘献文, 陈彤 申请人:云南云科药业有限公司