专利名称：一种马钱子总生物碱的提取方法
技术领域：
本发明涉及一种中药有效成分的提取方法，特别是涉及一种从中药马钱子中提取马钱子总生物碱的方法，属于药物技术领域。
背景技术：
马钱子又名番木鳖，始载于《本早纲目》，味苦，寒性，有大毒，归肝，脾经，功效为通络止痛，散结消肿。临床上用与风湿顽痹，麻木瘫痪，跌打损伤，痈疽肿痛，小儿麻痹后遗症， 类风湿性关节炎等疾病；但具有剧毒的特性严重影响其在临床上的应用，所谓“毒药猛剂善起沉疴”。马钱子的治疗量为O. 3-0. 6g，过量易出现中毒，如何合理安全使用马钱子，成为近年的研究热点之一。
研究表明，总生物碱是马钱子中最主要的有效部位，包括马钱子碱、士的宁、番木鳖次碱、马钱子新碱、番木鳖甙、依卡精等，其中马钱子中的主要生物碱成分中马钱子碱具有抗炎、镇痛作用，而其中士的宁是中枢神经兴奋剂，主要在临床上治疗面瘫，神经麻痹等， 同时其为主要的毒性成分，基本无抗炎、镇痛作用；文献报道小鼠灌服士的宁、马钱子碱、马钱子仁的LD50分别为3. 27mg/kg、233mg/kg和234. 5mg/kg ;小鼠腹腔注射上述药物的LD50 分别为1. 53mg/kg、69. 77mg/kg和76mg/kg，其口服中毒剂量成人为5 10mg，口服致死量为30mg。表明士的宁是马钱子中的主要毒性成分。有文献报道，分别用士的宁和马钱子碱给小鼠灌胃，两者的LD50分别为3. 27mg/kg和233mg/kg，由此可以得知士的宁的安全性很低，如果能除去马钱子总生物碱中的部分士的宁，则既能降低其毒性，又能保留其原有的抗炎镇痛的药理活性，提高临床用药的安全性。因此，现代研究中需要一种能降低士的宁含量的马钱子总碱的提取方法。发明内容
本发明的 目的在于提供一种安全、成本低、收率高、能降低士的宁含量的马钱子总生物碱的提取方法。
本发明是通过以下技术方案实现的
(I)取马钱子，粉碎成粗粉，备用；
(2)将马钱子粗粉加酸液提取，合并提取液，过滤，得马钱子提取液，调整pH值至2-10，滤过；
(3)滤液上大孔吸附树脂柱吸附，先以去离子水洗脱，弃去洗脱液，再用酸液洗脱， 弃去洗脱液,最后用乙醇/酸醇洗脱,收集乙醇/酸醇洗脱液；
(4)洗脱液减压浓缩，调节pH值至8-11，加入适量硅藻土，搅匀，蒸干，得固体物；
(5)固体物加有机溶剂提取，过滤，回收有机溶剂，减压干燥，粉碎，得药粉；
(6)药粉用甲醇处理，放冷至室温，过滤，滤液减压干燥，粉碎，即得马钱子总生物碱。
基于上述工艺过程，发明人又进行了进一步的研究，细化各步骤的参数，从而筛选出最优方案，具体内容如下
步骤(I)中的马钱子是指制马钱子；
步骤⑵中的酸液是指1^-5%的盐酸、O. 5%-2%的硫酸、盐酸乙醇溶液、硫酸乙醇溶液中的一种；
其中酸醇溶液优选50-80 % ETOH · O. 5-5% HCl, 50-80 % ETOH · O. 5-2% H2804。
提取方法为渗漉法，回流法、搅拌法中的一种，优选加热回流法。
酸液用量为5-12倍量，加热回流次数为1-3次，每次O. 5-2小时；
优选酸液酸液用量为10倍量，加热回流次数为2次，每次1. 5小时；
提取液上柱前可调节PH2-10，优选调节pH6_7。
步骤(3)中树脂可选用AB_8、D101、732阳离子交换树脂，优选DlOl。
洗脱速度为l_3BV/h ;优选2BV/h。
洗脱用去离子水用量为1-3倍柱体积；酸液用量为O. 5-2倍柱体积；乙醇用量为2-6倍柱体积；
洗脱用酸液为1-5%盐酸或1-5%硫酸；优选3%盐酸。
洗脱用乙醇浓度为50-95% ;优选50%乙醇
酸醇可用50-80% ETOH · 1-10% HCl, 50-80% ETOH · O. 5-5% H2S04。
步骤⑷中硅藻土的用量为1/20-1/5倍药材量；优选1/10倍药材量
步骤(5)中有机溶剂可选用氯仿、乙酸乙酯、丙酮等极性较小的有机溶剂，优选氯仿作为纯化溶剂。提取方式可选择搅拌、回流、超声等方法，优选回流提取。氯仿的用量为3-10倍量；加热回流1-3次，每次1-2小时；
步骤(6)中处理方法为搅拌、回流、超声，优选超声处理，甲醇的用量为1-5倍量。
由于马钱子药材中马钱子碱和士的宁含量的差异，通过以上方法制得的马钱子总生物碱含量彡50%，其中马钱子碱与士的宁的含量之比为1.8-2. 5 I。
优选马钱子总生物碱含量>50%，其中马钱子碱与士的宁的含量之比为2 I
本发明药物的活性成分可以加入药剂学上可接受的辅料按常规工艺制备成所需制剂。如可以制成常用的片剂(分散片、泡腾片、口腔崩解片、含片、咀嚼片、泡 腾片)、胶囊剂(硬胶囊、软胶囊剂)、颗粒剂、丸剂(滴丸剂)、散剂等固体制剂形式的口服药物，也可以制成糖浆、口服液等液体制剂形式的口服药物；还可以制成膏剂、凝胶剂、软膏剂、巴布剂、 贴膏剂、搽剂、洗剂、涂膜剂等外用制剂形式的外用药物。因此，该药物组合物中除有效成分外，还可以含有药学上可以接受的辅料。
这里所述的辅料，可以根据不同的制剂有所不同，如在片剂、胶囊剂、颗粒剂等固体制剂中常用的稀释剂、崩解剂、赋形剂、粘合剂、润滑剂、表面活性剂、填充剂等；在糖衆、 口服液等液体制剂形式中常用的表面活性剂、稀释剂、防腐剂、稳定剂、矫味剂、增稠剂、助流剂等；在凝胶剂、软膏剂等外用制剂形式中常用的药用油性基质、水性基质、防腐剂、抗氧剂、保湿剂、透皮吸收促进剂、表面活性剂等。
其常用辅料如淀粉、乳糖、糊精、糖粉、微晶纤维素、甘露醇、木糖醇、聚乙二醇、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙、改良淀粉、山梨醇、聚乙烯吡咯酮、重质碳酸镁、羧甲基纤维素钠、 羟丙甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲淀粉钠、羟丙基纤维素、聚维酮K30、白陶土、预胶化淀粉、硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、甜叶菊苷、甜菜碱、阿司帕坦、甘草甜素、糖精钠、枸橼酸、碳酸氢钠、碳酸钠、卡拉胶、琼脂、明胶、海藻酸钠、黄原胶、瓜耳豆胶、西黄耆胶、 阿拉伯胶、槐豆胶、刺梧桐胶、硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、聚丙烯酰胺、交联型聚丙烯酸钠、聚乙烯醇、卡波姆、山梨酸、山梨酸钾、羟苯乙酯、苯甲醇、尼泊金、硫柳汞、二甲基亚砜、氮酮、 三乙醇胺、氢氧化钠、甘油、丙二醇、BHT、BHA、十二烷基硫酸钠、吐温类、司盘类等。
马钱子为马钱科植物马钱(Strychnos nux-vomica L.)的干燥成熟种子经炮制所得制马钱子，具有通络止痛、消肿散结的功效，临床用于治疗风湿顽痹、麻木瘫痪、跌打损伤和痈疽肿痛等疾病。马钱子主要活性成分为总生物碱，其中生物碱成分中马钱子碱具有较好的抗炎镇痛的药理活性，是马钱子的主要有效成分，而另一含量较高的士的宁是强毒性成分，同时为无效成分，所以在提取过程中需要提高马钱子碱的含量，降低士的宁的含量。
马钱子总生物碱中马钱子碱、士的宁在水中溶解度小，但易溶于醇、氯仿等，提取时一般采用溶剂法。对不同种类不同浓度的酸水和不同浓度的酸乙醇溶液进行溶剂的筛选，选择出马钱子碱转移率和含量较高而士的宁转移率较低的溶剂，从而确定提取溶剂。然后再用优选出的溶剂，对渗漉法、回流法和搅拌法进行比较，确定合适的提取方法。在确定了提取溶剂和提取方法的基础上，为了全面考察影响提取效果的因素，对提取方法中影响提取效果的主要因素进行考察，对提取的条件进行优选，确定提取工艺的最佳条件。
实验例1:提取工艺技术条件的研究
1.1提取溶剂的考察
根据提取工艺的试验设计，对提取溶剂即不同种类不同浓度的酸水和不同浓度的酸性乙醇进行优选。试验中设计了分别以酸水和50^^80%的乙醇作为提取溶液， 以提取物中马钱子碱和士的宁的转移率为考察指标，对不同的提取溶剂进行考察。具体实验方法如下
取马钱子粗药3份，每份10g，分别加入8倍量的不同的提取溶剂，对药材进行回流提取，每次lh，提取2次，将提取液分别滤过，滤液于70°C减压浓缩。然后放入干燥器中，冷却，准确称重，并测定马钱子碱和士的宁的含量，结果见表I。
表I不同溶剂提取马钱子总生物碱的实验结果
权利要求
1.一种马钱子总生物碱的提取方法，其特征在于，步骤以下 (1)取马钱子，粉碎成粗粉，备用； (2)将马钱子粗粉加酸液提取，合并提取液，过滤，得马钱子提取液，调整pH值至2-10，滤过； (3)滤液上大孔吸附树脂柱吸附，先以去离子水洗脱，弃去洗脱液，再用酸液洗脱，弃去洗脱液，最后用乙醇或酸醇洗脱，收集乙醇或酸醇洗脱液； (4)洗脱液减压浓缩，调节pH值至8-11，加入硅藻土，搅匀，蒸干，得固体物； (5)固体物加有机溶剂提取，过滤，回收有机溶剂，减压干燥，粉碎，得药粉；有机溶剂为氯仿、乙酸乙酯、丙酮中的一种； (6)药粉用甲醇处理，放冷至室温，过滤，滤液减压干燥，粉碎，即得马钱子总生物碱。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(2)中的酸液是指1%_5%的盐酸、O. 5% -2%的硫酸、盐酸乙醇溶液、硫酸乙醇溶液中的一种。
3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(2)中酸液用量为5-12倍量，力口热回流次数为1-3次，每次O. 5-2小时。
4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(3)中乙醇或酸醇用量为5-6倍柱体积；乙醇浓度为50-95%。
5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(3)中洗脱速度为l-3BV/h。
6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(4)中硅藻土的用量为1/20-1/5倍药材量。
7.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(5)中氯仿的用量为3-10倍量；加热回流1-3次，每次1-2小时。
8.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(6)中甲醇的用量为1-5倍量。
9.根据权利要求1-8中任意一项所述的提取方法，其特征在于，制得的马钱子总生物碱含量≥50%，其中马钱子碱与士的宁的含量之比为1.8-2. 5 I。
10.根据权利要求1-8中任意一项所述的一种马钱子总生物碱的提取方法，其特征在于，将所制得的马钱子总生物碱加入适量辅料按常规工艺制成药剂学上可接受的制剂。
全文摘要
本发明公开了一种马钱子总生物碱的提取方法，属于药物的技术领域。该方法包括将马钱子粗粉经酸提、上柱、分离、纯化去除部分士的宁等步骤，制备得到的马钱子总生物碱含量在50％以上，其中马钱子碱和士的宁的含量比约为2∶1，能有效降低其毒性，提高临床用药的安全性。该提取方法可以高效率的从中药马钱子中分离出高纯度的马钱子总生物碱。
文档编号A61P29/00GK103027946SQ20111029473
公开日2013年4月10日 申请日期2011年9月30日 优先权日2011年9月30日
发明者张保献, 胡杰 申请人:北京因科瑞斯医药科技有限公司