专利名称：大孔吸附树脂提取纯化山橿总黄酮的方法
技术领域：
本发明涉及医药领域，特别是一种大孔吸附树脂提取纯化山檀总黄酮的方法。
背景技术：
山檀Lindera reflexa Hemsl.系樟科Lauraceae山胡椒属植物，为灌木或小乔木。主要分布于河南(大别山、桐柏山和伏牛山南部)、江苏、安徽等地，而河南信阳地区分布最广泛，且产量丰富，是山檀的主要产地。山檀根或根皮入药，性温，味辛，具有行气止痛， 健脾消积，活血消肿等作用，且山檀在长期的临床应用中收到良好的效果。在河南省民间用于治疗慢性胃炎，胃溃疡已取得确切的临床疗效，而且有很长的历史。由于其良好的临床疗效和丰富的蕴藏资源，被收入《河南省地方药材标准》。虽然山檀在临床上有确切的治疗脾胃虚寒性胃炎、胃溃疡等作用，由于良好的临床疗效而备受人们关注，但有效部位不明确，缺乏系统的药理跟踪研究。本发明结合临床疗效，建立多个药理模型，以药理实验为导向，进行有效部位和有效成分的系统研究，阐明其疗效的物质基础，以便为山檀的进一步开发利用提供科学的依据。为了明确这一临床却有疗效的有效部位，建立能确切反映该药临床疗效的控制方法，控制有效部位的质量。由于山檀资源广泛，价格低廉，对抗炎、抗溃疡和镇痛的有效部位、活性成分进行深入研究，将其开发成治疗胃病的新药，既会创造显著的经济效益，也将产生良好的社会效益；更重要的是对胃病的治疗将起到很大的推动作用。研究表明，山檀主要活性成分有黄酮类(或称总黄酮)，生物碱类和挥发油类，以球松素为代表的总黄酮为主要有效活性成分，并具有很好的治疗胃溃疡及镇痛抗炎的功效，那么，如何将山檀总黄酮纯化提取出来是本领域技术人员一直在研究解决的问题，但至今未见有公开的报导。
发明内容
针对上述情况，克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种大孔吸附树脂提取纯化山檀总黄酮的方法，可有效解决从山檀中提取纯化总黄酮，以满足制备治疗胃溃疡及镇痛抗炎药物的问题。本发明解决的技术方案是，由以下步骤实现1、制备山檀提取物溶液将山檀粉碎成粉，然后加质量浓度为60-80%的乙醇(或称为60-80%乙醇，以下同)超声提取2-4次，每次提取40-90分钟，每次60-80%乙醇的加入量为山檀重量的10-14倍；合并提取液，减压回收乙醇至提取液无醇味，得浓缩液，浓缩液加水稀释成相当于每Iml含生药0.05mg(0.05mg/ml生药)的山檀提取物溶液，备用；2、大孔吸附树脂处理方法是，将大孔吸附树脂先用95%乙醇浸泡1 后，用95% 乙醇清洗至乙醇洗脱液与水混合不呈白色混浊，再用蒸馏水洗至无醇味，备用；3、湿法装柱取树脂柱子，按树脂柱子直径与柱高比1 7-9的比例，用步骤2处理过的大孔吸附树脂湿法装柱；4、上样纯化提取取步骤1制备的山檀提取物溶液上样，上样量为大孔吸附树脂重量的4-6倍，上样流速为1. Oml/min，上样完成后静置池，用大孔吸附树脂4_6倍重量的纯水冲洗除杂质，再用大孔吸附树脂4-6倍重量的70-90%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得山檀根有效部位的纯化山檀总黄酮。本发明方法简单，稳定可靠，所得提取物山檀总黄酮，有效用于制备治疗胃溃疡及镇痛抗炎药物，开拓了山檀药用价值，是药物上的创新。
具体实施例方式以下结合实施例对本发明的具体实施方式
作详细说明。实施例1本发明在具体实施中，是由以下步骤操作的1、制备山檀提取物溶液将山檀粉碎成粉，然后加质量浓度为70%的乙醇(或称为70%乙醇，以下同)超声提取3次，每次提取1小时，每次70%乙醇的加入量为山檀重量的12倍；合并三次的提取液，减压回收乙醇至提取液无醇味，得浓缩液，浓缩液加水稀释成相当于每Iml含生药0.05mg(0.05mg/ml生药)的山檀提取物溶液，备用；2、大孔吸附树脂处理方法是，将大孔吸附树脂先用95%乙醇浸泡1 后，用95% 乙醇清洗至乙醇洗脱液与水混合不呈白色混浊，再用蒸馏水洗至无醇味，备用；3、湿法装柱取树脂柱子，按树脂柱子直径与柱高比1 8的比例，用步骤2处理过的大孔吸附树脂湿法装柱；4、上样纯化提取取步骤1制备的山檀提取物溶液上样，上样量为大孔吸附树脂重量的4倍，上样流速为1. Oml/min，上样完成后静置池，用大孔吸附树脂4倍重量的纯水冲洗除杂质，再用大孔吸附树脂4倍重量的70%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得山檀根有效部位的纯化山檀总黄酮。实施例2本发明在具体实施中，还可由以下步骤实现1、制备山檀提取物溶液将山檀粉碎成粉，然后加质量浓度为80%的乙醇(或称为80%乙醇，以下同)超声提取2次，每次提取90分钟，每次80%乙醇的加入量为山檀重量的14倍；合并两次的提取液，减压回收乙醇至提取液无醇味，得浓缩液，浓缩液加水稀释成相当于每Iml含生药0. 05mg(0. 05mg/ml生药)的山檀提取物溶液，备用；2、大孔吸附树脂处理方法是，将大孔吸附树脂先用95%乙醇浸泡12h后，用95% 乙醇清洗至乙醇洗脱液与水混合不呈白色混浊，再用蒸馏水洗至无醇味，备用；3、湿法装柱取树脂柱子，按树脂柱子直径与柱高比1 9的比例，用步骤2处理过的大孔吸附树脂湿法装柱；4、上样纯化提取取步骤1制备的山檀提取物溶液上样，上样量为大孔吸附树脂重量的6倍，上样流速为1. Oml/min，上样完成后静置池，用大孔吸附树脂6倍重量的纯水冲洗除杂质，再用大孔吸附树脂6倍重量的90%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得山檀根有效部位的纯化山檀总黄酮。实施例3本发明在具体实施中，也可由以下步骤实现1、制备山檀提取物溶液将山檀粉碎成粉，然后加质量浓度为60%的乙醇(或称为60%乙醇，以下同)超声提取4次，前两次每次提取60分钟，每次乙醇加入量为山檀重量的12倍，后两次每次提取40分钟，每次乙醇的加入量为山檀重量的10倍；合并四次的提取液，减压回收乙醇至提取液无醇味，得浓缩液，浓缩液加水稀释成相当于每Iml含生药 0. 05mg(0. 05mg/ml生药)的山檀提取物溶液，备用；2、大孔吸附树脂处理方法是，将大孔吸附树脂先用95%乙醇浸泡12h后，用95% 乙醇清洗至乙醇洗脱液与水混合不呈白色混浊，再用蒸馏水洗至无醇味，备用；3、湿法装柱取树脂柱子，按树脂柱子直径与柱高比1 7的比例，用步骤2处理过的大孔吸附树脂湿法装柱；4、上样纯化提取取步骤1制备的山檀提取物溶液上样，上样量为大孔吸附树脂重量的5倍，上样流速为1. Oml/min，上样完成后静置池，用大孔吸附树脂5倍重量的纯水冲洗除杂质，再用大孔吸附树脂5倍重量的80%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得山檀根有效部位的纯化山檀总黄酮。上述方法经多次反复试验，均得到了相同和相近似的结果，表明方法稳定可靠，易操作，其提取物纯化的山檀总黄酮可有效用于制备治疗胃溃疡及镇痛抗炎药物，有关试验资料如下一、有关方法稳定可靠性的试验资料1.材料、试剂与仪器山檀药材QOlO年采自于河南省新县，经鉴定为樟科Lauraceae山胡椒属植物山檀Lindera reflexa Hemsl.的根)；球松素(由本实验室从山檀中分离得到，用HPLC法测定其纯度达到99. 05% )0甲醇为色谱纯(天津市四友精细化学品有限公司)；其他试剂为分析纯(天津市化学试剂三厂)；大孔吸附树脂HPD-450、HPD-600、DlOl (沧州宝恩吸附材料科技有限公司)，DM130、860021(山东鲁抗立科药物化学有限公司)，HP20(日本三菱化学株式会社)。高效液相色谱仪LC_20AT(日本岛津公司)，紫外检测器SPD-20A(日本岛津公司)，色谱工作站CBM-102 (日本岛津公司)，电子天平(BS2MS，北京赛多利斯仪器系统有限公司)。2.实验方法与结果2. 1对照品和样品溶液的制备对照品溶液的制备精密称取干燥的球松素标准品，甲醇溶解配制成适当浓度的对照品溶液；样品溶液的制备取山檀药材粗粉适量，分别加入12倍量70%乙醇超声提取三次，每次1. Oh,回收乙醇，静止24h备用。2. 2总黄酮检测方法分别取适量对照品溶液和样品溶液，在200nm-600nm波长范围扫描，对照品和样品最大吸收波长都在处，确定作为总黄酮紫外检测波长。2. 2. 1标准曲线及样品总黄酮检测取浓度0. 22mg/ml的对照品溶液，稀释配制成浓度2. 20 μ g/ml>4. 40 μ g/ml、 8. 80 μ g/ml,11. OO μ g/ml、13. 20 μ g/ml、17. 60 μ g/ml 的标准品溶液，分别连续 3 次测定吸光度，以对照品浓度为横坐标，平均吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，结果表明球松素浓度在2. 20 17. 60 μ g/mL之间线性关系良好，线性方程为Y = O. 081X+0. 008，r = 0. 9994。
取样品溶液，浓缩干燥，精密称取0. Ig干膏，甲醇溶解并定容至50ml，再精密吸取 0. Iml定容至10ml，于测定吸光度，按线性方程计算样品溶液中的总黄酮质量分数 (以球松素计)。2. 2. 2方法学考察通过精密度，稳定性，重复性的考察，表明该方法对总黄酮的含量测定稳定、可行。回收率考察精密称取适量的山檀药材样品6份，分别加入一定量的球松素标准品，按样品溶液制备方法制备，样品溶液总黄酮检测方法测定，计算平均回收率为99. 78%, RSD = 2. 94%，表明该方法回收率良好。结果见表1 :表1回收率考察试验结果
权利要求
1.一种大孔吸附树脂提取纯化山檀总黄酮的方法，其特征在于，由以下步骤实现(1)、制备山檀提取物溶液将山檀粉碎成粉，然后加质量浓度为60-80%的乙醇超声提取2-4次，每次提取40-90分钟，每次60-80%乙醇的加入量为山檀重量的10-14倍；合并提取液，减压回收乙醇至提取液无醇味，得浓缩液，浓缩液加水稀释成相当于每Iml含生药0. 05mg的山檀提取物溶液，备用；(2)、大孔吸附树脂处理方法是，将大孔吸附树脂先用95%乙醇浸泡1 后，用95%乙醇清洗至乙醇洗脱液与水混合不呈白色混浊，再用蒸馏水洗至无醇味，备用；(3)、湿法装柱取树脂柱子，按树脂柱子直径与柱高比1 7-9的比例，用步骤(2)处理过的大孔吸附树脂湿法装柱；G)、上样纯化提取取步骤(1)制备的山檀提取物溶液上样，上样量为大孔吸附树脂重量的4-6倍，上样流速为1. Oml/min,上样完成后静置池，用大孔吸附树脂4_6倍重量的纯水冲洗除杂质，再用大孔吸附树脂4-6倍重量的70-90%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得山檀根有效部位的纯化山檀总黄酮。
2.根据权利要求1所述的大孔吸附树脂提取纯化山檀总黄酮的方法，其特征在于，由以下步骤实现(1)、制备山檀提取物溶液将山檀粉碎成粉，然后加质量浓度为70%的乙醇超声提取 3次，每次提取1小时，每次70%乙醇的加入量为山檀重量的12倍；合并三次的提取液，减压回收乙醇至提取液无醇味，得浓缩液，浓缩液加水稀释成相当于每Iml含生药0. 05mg的山檀提取物溶液，备用；(2)、大孔吸附树脂处理方法是，将大孔吸附树脂先用95%乙醇浸泡1 后，用95%乙醇清洗至乙醇洗脱液与水混合不呈白色混浊，再用蒸馏水洗至无醇味，备用；(3)、湿法装柱取树脂柱子，按树脂柱子直径与柱高比1 8的比例，用步骤( 处理过的大孔吸附树脂湿法装柱；G)、上样纯化提取取步骤(1)制备的山檀提取物溶液上样，上样量为大孔吸附树脂重量的4倍，上样流速为1. Oml/min，上样完成后静置池，用大孔吸附树脂4倍重量的纯水冲洗除杂质，再用大孔吸附树脂4倍重量的70%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得山檀根有效部位的纯化山檀总黄酮。
全文摘要
本发明涉及大孔吸附树脂提取纯化山橿总黄酮的方法，可有效解决从山橿中提取纯化总黄酮，以满足制备治疗胃溃疡及镇痛抗炎药物的问题，方法是，将山橿粉碎成粉，然后加乙醇超声提取，减压回收乙醇至提取液无醇味，得浓缩液，浓缩液加水稀释成山橿提取物溶液；将大孔吸附树脂用乙醇浸泡后，用乙醇清洗，再用蒸馏水洗至无醇味，然后装柱；取山橿提取物溶液上样，上样完成后静置，用纯水冲洗除杂质，再用乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得山橿根有效部位的纯化山橿总黄酮，本发明方法简单，稳定可靠，所得提取物山橿总黄酮，有效用于制备治疗胃溃疡及镇痛抗炎药物，开拓了山橿药用价值，是药物上的创新。
文档编号A61P1/04GK102349945SQ20111031868
公开日2012年2月15日 申请日期2011年10月19日 优先权日2011年10月19日
发明者陈磊磊, 陈随清 申请人:河南中医学院