专利名称：与人血管生成素-2特异性结合的药物融合体的制作方法
技术领域：
本发明属于基因工程领域，涉及一类与人血管生成素-2结合的特异性药物融合体及其应用。主要涉及通过基因工程手段将具有活性的、能与人血管生成素-2结合的多肽片段(幻 通过连接链与由(X)n镜像氨基酸序列组成的多肽片段(X’)n连接在一起，在连接链处有聚合物、脂肪酸和糖修饰任一种修饰。所形成的药物融合体包含2段反向重复的多肽片段序列(X)n与(X’)n。本发明还涵盖了该多肽及其修饰产物在治疗伴随血管异常增生的疾病应用。
背景技术：
很多疾病与血管异常生成相关，如老年性黄斑病变、肿瘤及炎性疾病等。目前的研究进展表明，在血管发生进程中，有很多信号系统参与，其中Tie-2受体酪氨酸激酶信号通路研究的较为充分，血管生成素是Tie-2受体的特异性配体。目前已发现4中血管生成素，分别命名为血管生成素-I、血管生成素_2、血管生成素-3及血管生成素-4。体内和体外试验研究表明，血管生成素-2在上述病理发生进程中与Tie-2受体结合，有益于血管可塑性状态，在这些病理进程中血管生成素-2的表达被显著上调。相反，正常组织的血管生成素-2表达十分有限。因此通过阻断血管生成素-2与Tie-2受体结合是治疗肿瘤、老年性黄斑病变及炎症的有效方法。研究发现一类小肽可显著抑制血管生成素的活性(CN 200910159451. 9，在此引入作为参考)，但这类小肽分子量较小(约1000-2000道尔顿)，很容易在人体内被肾清除，无法在体内发挥其有效活性。因此本发明的目的是提供一种体内长效的血管生成素-2特异性结合药物融合体。
发明内容
针对上述不足，本发明提供了下述构型的化合物
权利要求
1.具有下式的与人血管生成素-2特异性结合的药物融合体
2.根据权利要求I所述的药物融合体，其结构特征在于所述药物融合体中包含2段反向重复的多肽序列(互为镜像的(幻 与(X’)n)，所述的2段重复序列((幻 与(X’)n)通过连接链Y连接在一起；在连接链的部位有聚合物、脂肪酸或糖其中任一种修饰；X与Y间和X’与Y间不存在或有1-20个氨基酸残基间隔。
3.根据权利要求I和权利要求2所述，η是4。
4.根据权利要求I和权利要求2所述，η是3。
5.根据权利要求I和权利要求2所述，η是2。
6.根据权利要求I和权利要求2所述，η是I。
7.根据权利要求1-6所述，药物融合体中连接链Y包含一个可发生化学修饰的氨基酸位点。
8.根据权利要求1-6所述，药物融合体中X选自 Ca)在SEQ ID No: I给出的序列； (b)Ca)的氨基酸序列中，具有在一个或多个位置的氨基酸被丝氨酸替换； (C) Ca)的氨基酸序列中，具有在一个或多个位置的氨基酸被甘氨酸替换； Cd) Ca)的氨基酸序列中，具有在一个或多个位置的氨基酸被丙氨酸替换； Ce)氨基酸组成中有>80%与(a)的氨基酸序列相同的氨基酸序列。
9.根据权利要求1-7项所述的药物融合体中，连接链Y长度为3-20个氨基酸，所述连接链包括但不限于SEQ NO 2给出的氨基酸序列。
10.根据权利要求7所述修饰，可发生化学修饰的氨基酸位点为赖氨酸。
11.任一项在前权利要求所述，药物融合体的化学修饰，包括但不限于脂肪酸修饰、聚乙二醇修饰、包含乙氧基重复结构的嵌段共聚物修饰、糖修饰任一种。
12.根据权利要求11所述修饰，是通过Z末端的化学反应基团和连接链Y上游离的半胱氨酸反应进行修饰，制备药物融合体。
13.根据权利要求11所述修饰制备的药物融合体中Z为脂肪酸，所述脂肪酸的碳链长度为5-30个。
14.根据权利要求11所述修饰制备的药物融合体中Z为聚乙二醇，所述聚乙二醇的分子量范围为5000-40000道尔顿之间。
15.根据权利要求11所述修饰制备的药物融合体中Z为包含乙氧基重复结构的嵌段共聚物，所述的包含乙氧基重复结构的嵌段共聚物的分子量范围为5000-40000道尔顿之间。
16.根据权力要求14所述的药物融合体，聚乙二醇包括线性的聚乙二醇和分枝型聚乙二醇。
17.—种编码权利要求1-10任一项的多肽的核苷酸序列。
18.—种包含权利要求17的表达载体的宿主细胞。
19.权利要求18的宿主细胞为真核细胞。
20.权利要求18的宿主细胞为原核细胞。
21.任一项在前权利要求所述的药物融合体在治疗伴随血管异常增生的疾病应用。
22.权利要求21所述的疾病，包括老年性黄斑病变、肿瘤、炎性疾病、子宫内膜异位症。
全文摘要
本发明公开了一类与人血管生成素-2特异性结合的药物融合体，还公开了该类药物融合体的制备方法及利用该药物融合体治疗老年性黄斑病变、肿瘤、炎性疾病、子宫内膜异位症的方法。
文档编号A61K38/18GK102949732SQ201110404479
公开日2013年3月6日 申请日期2011年12月8日 优先权日2011年9月16日
发明者于鹏展 申请人:西藏海思科药业集团股份有限公司