特异性结合坏死细胞的突破性平台技术的制作方法

特异性结合坏死细胞的突破性平台技术的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种包括结合坏死细胞的靶向分子的系统；该系统作为药物的用途；该系统在诊断上的应用；在治疗涉及坏死性细胞死亡的疾病中应用的系统，包含该系统的剂量；使用所述系统确定样品内所述组合物的定位的方法；和，使用所述系统用于治疗涉及坏死性细胞死亡的癌症和/或疾病的方法。特别是，本发明涉及靶向坏死细胞的组合物。
【专利说明】
特异性结合坏死细胞的突破性平台技术
技术领域
[0001] 本发明设及一种包含用于结合坏死细胞的祀向分子的系统;该系统作为药物的用 途;该系统在诊断上的应用;在治疗设及坏死性细胞死亡的疾病中应用的该系统，包含该系 统的剂量;使用所述系统确定样品内所述组合物的定位的方法;和，使用所述系统用于治疗 设及坏死性细胞死亡的癌症和/或疾病的方法。特别是，本发明设及祀向坏死细胞的组合 物。
[0002] 发明背景
[0003] 现有技术中设及祀向坏死细胞的系统和方法不是最佳的和/或适用的：
[0004] a.坏死性对比调亡性细胞死亡
[0005] 坏死的祀向是特异的和独特的，因为坏死只出现在细胞死亡的病理情况下，所述 病理情况归因于不充足的血液供应并因此氧气缺乏、创伤或者归因于直接的细胞毒性剂或 其它如放射性治疗或光动力疗法的癌症治疗。调亡性细胞死亡与之相反，其在组织更新过 程中连续发生。因此相比于坏死性细胞死亡，调亡性细胞死亡是不适用于祀向特征为坏死 的疾病，所述坏死是例如在肿瘤(快速生长的肿瘤自发性进展坏死核）、创伤、梗塞、骨关节 炎、糖尿病、动脉粥样硬化斑块、烧伤、某些细菌感染等的情况下发现的。
[0006] b.抗体对比小分子
[0007]我们的化合物是小分子、青色素基染料(cyanine based dyes)，其深深的渗入到 坏死组织中。抗体已经被用于祀向坏死(肿瘤坏死祀向），但是具有抗体太大而不能渗入到 坏死组织中的缺点。
[000引C.其它化学试剂对比青色素染料
[0009] 还有其它化学试剂(例如PDT-试剂），其已知用于标记坏死细胞(例如金丝桃素，细 菌叶绿素衍生物，Gadop虹in-2A和bis-DTPA-NI)。运些试剂具有特殊的性质，运使得它们不 太适用于上述疾病的成像和治疗，运些试剂是（1.)难W化学制备，运些试剂是（2.)光敏性 的（在暴露在光的情况下，该化合物将产生氧自由基并改变它们的性质），（3.)从体内清除 需要更长的时间（长达数天)和(4.)运类化合物相对比较大，运使得它们更难W渗入到坏死 组织中。青色素染料是易于化学制造的，是光稳定性的，是快速从体内清除的（3至24小时） W及深深地和容易地渗入到坏死组织中。
[0010] 在【背景技术】中更多的细节可W从W前提交的申请PCT/化2013/050067和PCT/ 化2013/050064中获得。
[0011] 下列文件可W被考虑：
[0012] Ma化uri Dasari等人，Organic Letters，2010，12(15)，3300-3303,叙述了通过结 合胞外DNA而在体内检测坏死组织的成像剂。
[0013] 本发明不设及DNA的结合。DNA结合分子通常被认为是不适合用于人类，因为运种 分子是致突变/致癌高几率的。
[0014] Bryan A Smith#A>URL：http://etd.nd.edu/ETD-db/theses/available/etd-04132012-14111 l/unrestricted/SmithBry 曰 n042012D p壯，叙述了 在体内细胞死亡的成 像，使用巧光合成配位复合物。在一个方面，该文件叙述了与青色素染料偶联的一些调亡性 革己向分子。
[0015]在运些复合物中的青色素被仅用作巧光报告剂(fluorescent reporter)。
[0016] Epstein A L等人，Cancer Research, 1988,48(20) ,5842-5848设及一种用于检测 在人类癌症中坏死病灶的方法。其依赖于使用与作为报告剂的染料偶联的作为祀向部分的 抗体。
[0017] 就不利影响的方面而言，抗体的生产、储存和使用是非常困难，昂贵和高风险的。 [001 引 Vera D等人，核医学和生物学（Nuclear Medicine and Biology) ,2005年，32， 687-693,设及一种用于在体内测量受体生物化学的巧光探针。
[0019] 化giris E E等人，癌症研究和治疗技术（Technology in Cancer Research and Treatment) ,2006,5(4) ,301-309,设及一种用于术前MR成像和术中肿瘤边缘界定的多模式 造影剂。
[0020] Lia T等人，生物有机化学和药物化学杂志（Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters) ,2010年，20,7124-7126,设及一种用于前列腺癌的低分子量的近红外 探针。
[0021] Vera D等人，化giris E E等人和Lia T等人都叙述了使用青色素作为偶联各种祀 向部分的报告分子。
[0022] US 2012/088262 A1设及青色素化合物，缀合物和它们的使用方法。具体而言，所 述文件叙述了胺反应性的青色素。
[0023] 应当注意的是，所有的蛋白质包含胺。胺反应性分子将结合在亲和性上不具有很 大差异的任意蛋白质。在生物样品中，如血液和组织，存在着大量的胞外蛋白。因此不能实 现对样品中例如死细胞的选择性。在体内，强共价结合到蛋白质将仅导致从体内非常缓慢 的清除，运增加了不利影响的几率。
[0024] Fang F等人，光谱化学学报.A部：分子和生物分子光谱学（Spectrochimica Acta.F*a;rt A:molecular and biomolecular spectrosocopy) ,2006年，64(3) ,698-702,设 及使用光散射技术用近红外青色素染料测定核酸。青色素对于DM和RNA的亲和性是相同 的。
[0025] 如先前所确定的，DNA结合剂在人类中的应用受限。
[00%] Hong Zheng等人，分析生物化学（Analytical BiochemistiT) ,2003年，318,86- 90,设及一种使用长波吸收青色素探针的染料结合测定法并且描述了染料SHMC与各种蛋白 质的相互作用。
[0027]只有分析性应用是相同的。
[00巧]Vo化ova K D等人，生物化学和生物物理化学杂志（Journal of Biochemical and Bio地ysical Chemisty)，2007年，70，727-733设及用于淀粉样蛋白结构的巧光探针，和特 别是能够结合淀粉样蛋白-削太聚集体的青色素。
[0029] 结合起因于染料与淀粉样蛋白-β聚集体(而不是个别淀粉样蛋白-β肤)特征之间 的相互作用。淀粉样蛋白-β聚集体是在细胞外的。
[0030] US 2005/014216设及使用能够结合胞内蛋白的若丹明类(rhodamines)和鬼笔环 肤(phalloidin)作为用于肝毒性的探针。
[0031] 化化iao Gong等人，PLoS One,2012,7(3)，e：M003，XP055093071，设及用SNAP-Tag 的哺乳动物细胞和异种移植肿瘤的近红外巧光成像。
[0032] 该文件仅描述了（在通过SNAP-Tag的情况下）点击化学（click chemis化y)的应 用。
[0033] 本发明的一个目的是克服现有技术中组合物的一个或多个缺点，并且提供替代当 前组合物而用于诊断和治疗设及坏死性细胞死亡的癌症和其它疾病，并且不损害功能和优 点。
[0034] 发明简介
[0035] 本发明设及根据权利要求1所述的一种包括结合坏死细胞的祀向分子，和一种或 多种试剂，载体和在体内的非反应性分子的系统。
[0036] 本系统包括至少两个实体，所述实体例如通过化学键而连接，每个实体在系统中 起到不同功能。应当注意的是，可W存在一个W上的试剂，和一个W上的载体，和一个W上 的非反应性分子。因此例如组合疗法对本发明的系统是可行的。
[0037] 本发明的祀向分子是非常有选择性的和非常特异的结合坏死细胞。作为结果，本 系统非常低浓度c.q.数量可W被用于提供其有益效果。应当注意的是，相比于坏死特异性 探针，细胞调亡的特异性探针也将祀向健康组织，因为细胞调亡参与正常组织更新。
[0038] 本发明人在早期的研究中已经发现，祀向分子特异性非共价结合细胞内蛋白质， 如(仅当细胞的细胞膜完整性丧失时，即在坏死细胞的情况下，可供给祀向分子的）肌动蛋 白。就最佳的祀点而言，坏死细胞优选是在坏死的早期阶段，例如细胞已经死亡小于几天， 优选小于半天，如几个小时，如2个小时，如刚刚死亡的细胞。负责本发明中祀向分子的有效 祀向性和/或安全性的特征，是它们为细胞膜不可渗透的，即，它们不能（显著的）穿透健康 细胞的细胞膜;它们是非激活的；它们能够非共价地结合到细胞内蛋白（它们的祀向分子）； 和，它们没有能力/不显著的结合DNA(或RNA)。
[0039] 假使该系统包括试剂，该试剂可W设及成像化合物，例如用于在成像技术中，治疗 性化合物，W对坏死细胞或有此治疗需求的身体的一部分(包括坏死细胞)提供治疗作用， 如癌症，和释放因子，其用于释放进一步化合物，如作为刺激物。
[0040] 假使该系统包括载体，该载体功能作为传输实体至坏死细胞，或如上述的身体一 部分的传输介质。因此少量的实体可W被祀向和输送到身体中所期待的位置。载体可W输 送本试剂，它可W输送试剂的相关物，不同的实体，W及它们的组合。
[0041 ]假使该系统包括在体内的非反应性分子，它旨在使该分子与配对物相互作用。相 互作用可W(进一步)设及经由激活剂的一个或多个激活作用，由催化剂支持，基于相互作 用产生药物，并基于相互作用释放药物。应当注意的是，从功能点的角度，分子和配对物可 W互换。
[0042] 本系统设及无毒的小分子，其具有结合坏死细胞和组织的能力。运些分子不与DNA 相互作用，即运些分子不是诱变剂。通常的，本系统具有广泛的生物分布，穿透血-脑屏障， 不结合到细胞表面蛋白并且是足够稳定的。
[0043] 在称为QiemoTraee?的一个实例中，在癌症治疗期间的关键时间被保全。 ChemoTrace?即时提供所给予的化学治疗药物效力的相关数据。本发明系统的一个优点 是，在化疗开始之后的24-36小时之内提供该治疗是或否为有效的信息。OiemoTrace?的 使用将防止病人经受没有临床益处的过度治疗，运被认为是在癌症治疗中的一个重要改 进。ChemoTrace?的使用将导致成本节约。
[0044] 应当注意到，不幸的是对化疗的（正)反应率被限制为20-35%。此外，由于人体的 局限，治疗周期的数量通常被限制为最多4次。换而言之，在开始周期之前，从开始就确定合 适的治疗方法是至关重要的。通过在治疗的早期阶段的识别，如果治疗被认为是有效的，治 疗本身可W进行下去，并且如果治疗被认为是无效的，可W被跳过。在非有效的治疗的情况 下，第二种治疗可W类似地启动。运种方法可W被重复额外数量的次数。一旦治疗被认为是 有效的，化疗的周期可W启动。应当注意的是，该识别可W被重复用于每个和任何化疗。
[0045] OiemoTrace?防止过度治疗，节省了用于防止细胞毒性药物副作用的药物。
[0046] 使用本系统没有必要培养收集的肿瘤细胞，例如为了进行测试，运可能需要相对 较长的时间，例如一周。该坏死细胞在它们的天然环境中被标记，运例如减少了人为错误的 风险。
[0047] ChemoTrace?可W被用于测量细胞毒性药物在体内对所有实体瘤的效力，运使 得它是对于临床的理想系统。运个系统的一个优点是在体内设及实际特性，而在体外可能 从实际特性引入偏差。
[004引 ChemoTrace?提供在上述方面的实时数据，而不需要进行穿刺来收集肿瘤细胞。 在运方面应当注意的是通过穿刺仅仅获得肿瘤的一个样品。所获得的样品不一定是肿瘤的 真实再现。还应当注意的是肿瘤是形态学上的非均质的。甚至进一步的，肿瘤可能随着时间 而在形态特征上进展。其后果是，穿刺的样品至多给出了肿瘤特征的指示。本发明给出了实 时和高度可靠的特征。
[0049] ChemoTrace?提供W上几点的可靠结论，如通过直接测量，而现有技术只能提供 特征的指示。
[0050] 在一个方面，本发明设及一种装置，其测量由放射性治疗引起的对肿瘤细胞和健 康组织的影响，该装置被称为Actinotrace?。
[0051] 在一个方面，本发明设及一种装置，其是为了预防目的而检测在人体内死亡细胞 的全身扫描，该装置被称为NC-Scan?。
[0052] 在一个方面，本发明设及用于通过祀向肿瘤中的坏死细胞而治疗癌症的递送平 台，该平台被成为Ilurnieore?。
[0053] 在一个方面，本发明设及一种递送活性和再生化合物至由缺血事件所引起的坏死 区域的平台，缺血事件如屯、肌梗死或中风，肝、肾或其它器官缺血，创伤，关节炎或烧伤，该 平台被称为Regenext?。
[0054] 在一个方面，本发明设及一种对乳房摄影扫描仪的非核子的可替代物，其称为 Mammolight?c
[0055] 在一个方面，本发明设及一种用于在实体瘤中祀向递送(化)疗药物的装置，该装 置被称为Chemoclick?。
[0056] 在一个方面，本发明设及一种祀向热疗法(溫热疗法），其被称为Hyperthermys?。
[0057] 除了癌症之外，目前的疾病设及例如屯、脏和大脑的梗死组织，骨关节炎，神经系统 疾病如阿尔茨海默氏病。
[0058] 本发明还设及该组合物作为药物的应用；该系统在诊断方法中的应用，该系统在 用于设及坏死性细胞死亡的疾病治疗中的应用，该组合物在用于在体内和/或体外检测和/ 或祀向坏死细胞中的应用；设及包括所述系统的剂量;设及使用所述组合物确定样品内组 合物的定位的方法;和，设及使用所述组合物用于治疗设及坏死性细胞死亡的癌症和/或疾 病的方法。
[0059] 本发明的祀向分子已经被发现非常有选择性的结合死亡(坏死)细胞。
[0060] 如先前所述，本发明人已经发现坏死细胞和/或坏死通常是有吸引力的祀点。运样 设及坏死细胞区域的观测通常是存在于癌症(肿瘤）中，例如由于不充分的血液供应和因此 缺乏氧气，并且在(或导致)设及坏死性细胞死亡的疾病中。应当注意到坏死细胞区域典型 地不会在健康组织内发现。设及坏死性细胞死亡的疾病的实例包括脑梗塞或缺血性损伤 (即屯、肌梗死，中风，肾，肝等），创伤(如脑，肌肉，骨)感染或炎症（即感染性休克，类风湿性 关节炎，骨坏死），退行性疾病（即阿尔茨海默病，帕金森氏痴呆症），斑块(动脉粥样硬化，淀 粉样蛋白）烧伤，福射诱导的坏死和糖尿病。
[0061] 至于癌症，一旦肿瘤已经被识别，进一步的坏死性细胞死亡可W在部分肿瘤上被 有意诱导(例如通过局部福照，光动力或局部热疗法和/或聚焦的超声波），w提供所述组合 物的一个较大祀点。此外，本组合物被用于治疗目的，坏死细胞的数量将随着治疗的不断进 展而增加从而导致因时间作用而剂量扩增。
[0062] 对细胞死亡分类的一个有益讨论可W在Kroemer等人，细胞死亡和差异（Cell Death and Differentiation) ,2005年，12,1463中发现。在本申请中，坏死细胞被认为是已 经失去细胞膜完整性的细胞。本领域技术人员能够确定细胞膜是否完全，即完整性，如通过 使用巧光染料，如使用商业化的胺反应性染料。本发明的组合物对于死亡细胞的选择性，可 W在体外试验中被证明，运将在下面的实施例中显示，所述死亡细胞即已经失去细胞膜完 整性的细胞。重要的是注意结合于死亡细胞的胺活性染料仅在体外是有用的。在体内，它们 会与例如血液中蛋白质或其它化合物的胺反应，并且将不能够用于祀向坏死细胞。
[0063] 术语选择性表明祀向化合物对坏死细胞比健康细胞具有更高的亲和力（因此祀向 分子可W祀向坏死细胞）。运些可W根据所附的每个实施例在体外分析中，或者如通过流式 细胞仪而确定；在运两种方法中，可W使用共染色法，例如使用商业的活死细胞染色试剂 盒。简而言之，在本发明中选择性结合表示对于包含坏死和健康细胞的给定的细胞群体，结 合坏死细胞的祀向分子的数量要比结合健康细胞的祀向分子的数量至少高一个数量级，一 般为几个数量级，并且优选为6个或更多个数量级，如9个数量级。
[0064] 未活化的青色素是对如胺和硫醇非反应性的青色素。未活化的青色素不能通过共 价键连接到呈现在细胞内的分子上的胺、硫醇或其它活性官能团而显著的（反应不是热力 学有利的）结合死细胞(其分子的官能团）。也就是说，在本发明上下文中的选择性结合坏死 细胞是不通过共价键，而是经由青色素核屯、结构通过非共价键结合，并且不是通过活性基 团所连接的侧链而结合。术语活化的青色素是本领域技术人员所公知的，并且包括例如醋 类，N-径基班巧酷亚胺醋，马来酷亚胺，酷基氯，SDS醋类等激活的簇酸。未活化的青色素包 括如包含簇酸功能的青色素，即簇酸没有被激活。
[0065] 应当注意的是活化的青色素可W在组合物的形成中使用，例如对于连接成像的 和/或治疗的化合物至青色素的目的；然而在该组合物中，所述青色素是未活化的，并且通 过青色素核屯、结构仍将结合坏死细胞。
[0066] 本描述的优点详述在整个说明书中。
[0067] 发明详述
[0068] 应当注意的是给出的实施例和实施方案不被认为是限制性的。本发明的范围是由 权利要求所限定的。
[0069] 在第一个方面中，本发明设及包含结合坏死细胞的祀向分子的系统，该祀向分子 选自青色素或任意其它巧光染料，包括若丹明类，其特异性的非共价结合于细胞内的蛋白 质。用于结合的蛋白质可W设及纤维蛋白，如40kDa的蛋白质，lOOkDa的蛋白质，如微管蛋 白，如α-微管蛋白，β-微管蛋白，丫-微管蛋白，δ-微管蛋白和ε-微管蛋白，肌动蛋白，如G-肌 动蛋白，和F-肌动蛋白，纤维状结构蛋白质，如角蛋白，如中性、碱性或酸性角蛋白，如角蛋 白1-角蛋白20，金属酶类，如締醇化酶，和裂解酶，CDC37，优选是微管蛋白，最优选是肌动蛋 白，它们的异构体，它们的复合体，和它们的分解产物。只有当细胞膜完整性丧失时，即在坏 死细胞的情况下，运些蛋白质才可用于祀向分子。例如联合使用如下所述的干冰死细胞测 定法与巧光显微镜，可W确定结合坏死细胞的选择性。优选的，相比于活细胞，对于坏死细 胞至少有2倍高的亲和力，优选至少10倍，最优选至少1000倍，如至少1000000倍。类似的，相 比于对DNA的亲和力，祀向分子对一种或多种上述蛋白质的亲和力是至少2倍高，优选至少 10倍高，最优选至少1000倍高，如至少1000000倍高，如该祀向分子不和/或不能与DNA结合， 即该祀向分子不显著的结合DNA或RNA。
[0070] 在一个实例中，该祀向分子是根据图II，Π 和III的非反应性青色素染料，其中η是 整数，如ne [2，10]，优选ne [4,引，链L具有不超过η-1个双键，优选rV2个双键，
[0071] 其中亚族II和ΙΠ 可W分别包括由曲线C表示的一个和两个芳香环体系(A、B)，
[0072] 其中A、B优选各自独立的选自苯和糞，
[0073] 其中其它基团Rs、R6、R?和Rs可W存在，Rs、R6、R?和Rs是优选各自独立选自Η和烷基， 如甲基、乙基、和丙基、优选甲基，
[0074] 其中芳香环体系可W包括另外的官能团Ri、R2和/或取代基，Ri、R2是优选各自独立 选自H、横酸基、和横酷胺，
[0075] 其中交替单键和双键的链L可W被一个或多个部分的和完全的饱和的环结构（如 环戊締和环己締 W及它们的组合，如一个或更多个环己締环）中断，其中所述饱和环结构还 可W包括官能团R9,其选自H、AA和BB，其中Rio选自H、S0 抽、Cl、-N-C = 0-(CH2)q-Y3(q=l- 6)、- (C肥）r-Y4 (r = 1 -6)、& 和Y4各自独立的是Η、C00H、SO抽和 CN，
[0076] 其中氮原子(N)还可W包括功能性N侦蜡基团R3、R4,其中R3、R4优选各自独立的选 自-(C出)mY，其中Y各自独立地选自具有1-4个碳原子的簇酸、横酸醋基、CN、C^C、和C = C，W 及它们的盐，
[0077] 其中，所述N侧基基团包含m个碳原子，如m e [ 1，10 ]，优选m e [ 2，8 ]，更优选m e [ 3， 7]，最优选111 = 4、5、和6，
[007引甚至更优选至少一个m = 4、5、和6;优选一个m = 6,而另一个m优选是4、5或6，
[0079] 其中所述N侧基基团包含一个或多个在末端上与N相对的官能团，如具有1-4个碳 原子的簇酸，横酸基，和它们的盐，如钢盐和钟盐，最优选在末端上的官能团包括一个或多 个双C-C键，优选是其簇酸盐，和/或
[0080] 其中所述祀向分子是中性的或带负电荷的。
[0081] 特别是在测试中上述青色素已经被发现是非常合适的，例如在选择性方面。
[0082] 有利的是，在如DNA和RNA的其它细胞成分存在下，具有负电荷的本发明的青色素 已经被发现优先结合细胞内蛋白质。也就是说，具有负电荷的本发明的青色素通常没有显 示出显著地结合DNA或RNA。
[0083] 祀向分子优选选自：册4、册5、册6、册7、ICG、CW 800、ZW800、L4、L7、Lll、CY3、CY3b、 CY3.5、CY5、CY5.5、CY7、Dy 676、Dy 681、Dy 731、Dy 751 和Dy 776;而且，最优选选自朋4， HQ5，CW800和ZW800。运些化合物在图2中显示。一些运些化合物具有例如非常好的巧光特 性。运是相当出乎意料的，因化合物本身可能具有良好的巧光特性，但是其在结合到另一个 分子时可能发生变化，所述另一个分子如所存在的蛋白质。
[0084] 在一个实例中，试剂是(下列(a)、（b)和(C)中的一种或多种）：（a)成像化合物选自 下组:发光化合物、放射性示踪剂、MRI造影剂或分光剂、RFA(射频消融)剂、PET剂、SPECT剂、 超声微泡或造影剂、光声纳米微粒或造影剂、CT造影剂、拉曼剂或它们的组合。换而言之，一 种适宜的成像化合物可W被用于本系统;令人惊奇的是广泛的运类成像化合物可W用于本 系统。因此大范围成像技术已经变得可应用。运类成像技术已经被发现是非常敏感的，即， 可W检测少量的坏死细胞，非常准确，即包括坏死细胞的非常小的位置可W被识别，非常可 靠，并且非常确信，例如关于结论。该试剂还可W是治疗性化合物。作为上述治疗性化合物 可W被带到坏死细胞，使用少量的治疗性化合物，而且还提供其在预期位置一种相对高的 数量，所述预期位置即坏死细胞。治疗性化合物(或其一种或多种)可W选自下组:化疗剂、 光动力学化合物、升溫化合物(包括光热剂）、免疫调节剂、蛋白质和多肤、核酸(RNA-或DNA- 基）、药物（如抗体），和/或它们的组合。因此许多疗法和它们的组合可W进行。该试剂也可 W是用于刺激组织再生的一个或多个释放因子，如生长因子和干细胞。组织和细胞的运样 的修复和/或再生是可能的。
[0085] 在一个实例中，载体选自下组:脂质体、树状聚合物、可生物降解的颗粒、胶束、纳 米微粒、声解离性颗粒、pH解离性颗粒、光解离性颗粒、热解离性颗粒、馨合部分W及它们的 组合。取决于本发明的系统，如存在其它组分的情况下，可W选择适宜的载体。同样的，可W 选择载体的组合。例如馨合部分可W被用于传输In、F、Ga、Gd和Tc。
[0086] 可W考虑的载体是用作提高药物的递送和效力的机制的物质。载体可W用于控释 W降低药物的代谢、在体内延长药物的作用、和降低药物的毒性。本载体还用于提高药物递 送到祀点位置效力，如药理作用的祀点。
[0087] 在一个实例中，在体内的非反应性分子，其可W被称作点击A，是能够与配对物相 互作用的，所述配对物可W被称作点击B。该非反应性分子优选是一种或多种第一点击化学 组分，第二点击化学组分（互补于第一点击化学组分），和自标记蛋白质标签的组分，如 Snap-化g。优选的，点击化学组分"点击"而不需要如铜（I)的催化剂。
[0088] 在第二个方面，本发明设及用作药物的本发明的系统。如上所述的本系统可W包 括治疗性化合物。该系统可W因此充当药物。优选使用本药物用于治疗贯穿于本申请中所 确定的疾病、病症等。
[0089] 在第Ξ个方面，本发明设及本发明的系统在诊断方法中的用途，如MRI、SPECT、RFA (射频消融）、PET、CT、拉曼光谱、超声、光学和光电声。因为本系统具有用于成像的优越特 性，优选经由一个或多个上述方法进行诊断。
[0090] 在第四个方面，本发明设及本发明的系统用于治疗设及坏死性细胞死亡的疾病， 包括梗塞或缺血性损伤(如屯、肌梗死、中风和肾），创伤(如在脑、肌肉、骨中的），感染或炎症 (如感染性休克、类风湿性关节炎、和骨坏死），退行性疾病(如阿尔茨海默病、帕金森氏痴呆 症），斑块(如动脉粥样硬化、和淀粉样蛋白），和糖尿病。本系统可W用于治疗疾病的额外实 例包括在整个说明书中。
[0091] 在第五个方面，本发明设及一种用于检测和/或治疗癌症和/或设及坏死性细胞死 亡的疾病的剂量，其包含有效量的本发明的系统。
[0092] 在一个实例中，该剂量包含0.1-1000纳摩尔系统/kg体重的量，优选0.5-500纳摩 尔系统/kg体重，更优选1-250纳摩尔系统/kg体重，甚至更优选2-100纳摩尔系统/kg体重， 如5-50纳摩尔系统/kg体重;其可W设及如0.01-1毫克的剂量。该剂量优选在1-50毫升生理 溶液中提供。优选提供包括一些(1 -50)剂量的试剂盒。
[0093] 在第六个方面，本发明设及一种用于在样品中确定定位的方法，所述样品包含含 有坏死细胞的细胞群体，包括：
[0094] (a)提供根据本发明的系统；
[00%] (b)使用至少第一适宜的成像技术，在样品上进行一个或多个测量，提供一个值或 多个值，和；
[0096] (C)分析所述测量的一个值或多个值W确定定位，任选的通过与一组参考值进行 比较。至少一些上述技术是非常适合于运个方面的。该方法可W在体内和体外进行。
[0097] 在第屯个方面，本发明设及用于治疗癌症和/或设及坏死的疾病的方法，包括：
[0098] (a)给予本发明的组合物，其中所述组合物包含一种或多种治疗性化合物
[0099] (b)在癌症和/或坏死性细胞死亡中确定该组合物的定位
[0100] (C)激活从载体中至少所述治疗性化合物的释放和/或激活该治疗性化合物。治疗 可W在体内进行。
[0101] 本发明通过实施例和附图而进一步被详述，实施例和附图本质是示例性和解释性 的，并且不限制本发明的范围。对于本领域技术人员是清楚的，许多显而易见的或非显而易 见的变体可W被设想落入到保护范围内，该保护范围是由本权利要求书限定的。
【附图说明】
[0102] 图1显示本青色素的Ξ个主要亚族的通用结构。青色素是属于聚甲烘类的合成染 料家族的非系统名称。参照图1中的中央碳链;η是整数，如ne[2，10]，优选ne[4,引。链L具 有不超过n-1个双键，优选n/2个双键。亚族II和ΙΠ 可W分别包括一个和两个由曲线C表示 的芳香环体系(A、B)dA、B是优选各自独立的选自苯和糞。可W存在基团Rs、R6、R7和Rs。化、R6、 R?和R8是优选各自独立选自Η和烷基，如甲基、乙基、和丙基，优选甲基。芳香环体系可W包括 额外的官能团Ri、R2和/或取代基。Ri、R2是优选各自独立选自H，横酸基，和横酷胺。交替单键 和双键的链L可W被一个或多个部分的和完全饱和的环结构中断，如环戊締和环己締 W及 它们的组合，如一个或更多个环己締环。饱和环结构还可W包括官能团化，化选自H、AA和BB。 Rio选自H、SO抽、C1、-N-C = 0-(C肥、-Y3(q = 1 -6)、-(C肥）r-Y4(r = 1 -6)。Y3和Y4各自独立的是 H、C00H、S0抽和CN中的一个。氮原子(N)还可W包括功能性N侦陛基团化、R4dR3、R4优选各自独 立的选自-(C出UdY各自独立地选自具有1-4个碳原子的簇酸、横酸醋基、CN、C^C、和C = C， W及它们的盐。N侧基基团包含m个碳原子，如me [1，10]，优选me [2,引，更优选me [3,7]， 最优选m = 4、5、和6，甚至更优选至少一个m=4、5、和6，优选一个m=6，而另一个m优选是4、5 或6"N侧基基团包含一个或多个在末端上与N相对的官能团，如具有1-4个碳原子的簇酸，横 酸基，和它们的盐，如钢盐和钟盐。最优选在末端上的官能团包括一个或多个双C-C键。
[0103] 术语青色素是指其核屯、结构是亚族1、11或III的任意化合物。在如切3、Cy 5、切 7等青色素名称中的整数是指在链L中碳原子的数目。在示例性的实施方案中，青色素属于 运些家庭中的一个。
[0104] 图2显示了若丹明类的通用结构;R1至R12可W是氨或官能团，适宜官能团的实例 包括横酸基团、簇酸基、横酷胺、醇类、胺类、醋类、酸类、硫醇类、硫代醋类W及它们的组合。 术语若丹明类是指其核屯、结构是在图2中所示的任意化合物。
[0105] 图3(a)-(j)给出了在整个申请中提及的化合物的结构。其中所示的平衡离子可W 是例如H+、化+或r。
[0106] 图4-5给出了本祀向分子的优选实施例。
[0107] 图6-11显示实验的结果;运些结果详述如下。
[010引图12显示NP-CW800的示意图。
[0109] 图 13 显示DTPA-C0-NH-PEG-N出的结构。
[0110] 图 14 显示 DTPA-C0-NH-PEG-HQ4 的结构。
[0111] 图15显示点击A-HQ4-DTPA的两种变体的结构。
[0112] 图16显示点击A-ZW800-DTPA的结构。
[0113] 图17显示点击A-ZW800-N0TA的两种变体的结构。
[0114] 图18显示点击经A-ZW800 (在锭基处)改性的-ΝΟΤΑ的结构。
[0115] 图19a显示ZW800-连接体-ΝΟΤΑ和点击A的结构
[0116] 图19b显示册4-连接体-ΝΟΤΑ和点击A的结构
[0117] 参考图 6-11:
[0118] 测量技术
[0119] 在本次调查中，应用了一些现有的和/或内部开发的技术：
[0120]
[0121] ??童百科：]"巧光是由已经吸收光或特定波长的其它电磁福射的物质发射的光。 在大多数情况下，所发射的光具有更长的波长，因此比所吸收的福射具有较低能量。"
[0122] 用巧光测量，所W也是体内巧光，很难被量化。在活的生物或细胞组织中所测量的 强度是-除了巧光化合物本身的固有亮度和其浓度-也依赖该化合物的物理性质，即与它周 围蛋白质的结合比和与它们相互作用的类型和贯穿组织的该物质的分布。
[0123] 最后，测量的灵敏度和特异性是非常强烈的依赖于实验方案的。
[0124] 干冰死细胞分析
[0125] 在乙醇中的固态二氧化碳(-80°C)被用于冻结具有活细胞培养基（和可能还有其 它组分）的24孔板的孔中屯、。已经通过使用具有针脚的冷却块而优化该步骤，所述冷却块被 保持至24孔板的底部一定时间（大多约15秒）。其结果是冷冻和随之发生被仍然存活的细胞 包围的孔中屯、的细胞死亡，从而能进行死细胞和活细胞之间的比较研究。
[0126] 含有能区分活细胞和死细胞的化合物的介质被施加到培养孔中。溫育后，洗涂细 胞层并且成像。
[0127] 冷冻损伤小鼠模型
[0128] -个3mm直径的小金属圆柱体在液氮中预冷并且施加到麻醉小鼠头的顶骨区20或 60秒。在一定时间之后在尾静脉注射染料-定浓度）。注射3-24小时之后，小鼠可W被成 像。
[0129] 本发明用于坏死细胞（即细胞膜失去完整性的细胞）的组合物的选择性在体外试 验中被证明，如将在下面的实施例中显示。
[0。0] 基质胶
[0131] 基质胶是由特定的小鼠肉瘤细胞分泌的一种凝胶状蛋白混合物。在本发明中，基 质胶被用作死细胞的内源性基质，其被植入到小鼠皮肤下。如果运些细胞也被标记，可W确 认染料和构建体被分布在全身，所W也分布在血流之外。
[0132] MS0T
[0133] ^谱光声断层成像技术是一种用于在小动物中生物化学标记物的全身成像技 术。光的吸收导致可W产生声波的一个小的热膨胀。运些可W被检测并且转换在一个Ξ维 图像中。
[0134] 概念验证
[0135] 图6
[0136] 在用细胞毒性剂星抱素处理或未处理的粘附（4T1)细胞和非粘附(JU服AT)细胞上 使用册5的流式细胞仪数据。探针仅染色星抱素处理的细胞，其已经失去膜的完整性。
[0137] 图7
[0138] 共焦显微镜:a:藤黄酸（一种坏死诱导剂）处理的细胞和b:活细胞。C-D:使用鬼笔 环肤的F-肌动蛋白的共染色与标示结合肌动蛋白的册5的朋5来共定位。（C:藤黄酸处理的 细胞和d:星抱素处理的细胞）。
[0139] 图8
[0140] 为了显示HQ5在体内结合坏死细胞的容量，在注射HQ5之前诱导脑的局部冷冻损 伤。此外，有或没有坏死细胞的基质胶被进行皮下移植。HQ5特异性的积聚在冷冻部位和具 有坏死细胞的基质胶中，而不是积聚在无坏死细胞的基质胶中。
[0141] 图9
[0142] 为了显示朋5体内结合坏死细胞的容量W更好的生理模式相比于冷冻损伤。含有 放射性In-111的册4-DTPA被注射到具有坏死核屯、的患瘤小鼠中。A.在探针注射后24小时 观察到肿瘤特异性册4巧光，持续至少72小时。B.在探针注射后24小时检测到一个特定的放 射性SPECT信号，持续至少72小时。C.观察到巧光信号和放射性信号与坏死核屯、在体外共定 位。
[0143] 图10
[0144] 为了研究使用青色素染料递送化GA纳米微粒到坏死区域的可能性，有或没有 CW800包被的PLGA纳米微粒被注射到脑部具有冷冻损伤的动物中。低浓度(稀释2倍或更多） 的CW800包被的化GA纳米微粒选择性积聚在坏死区域中，而没有包被的对照组化GA纳米微 粒没有选择性积聚在坏死区域中。
[0145] 图11
[0146] 光动力疗法是公知的能够导致坏死。在该动物左侧的4T1肿瘤的光动力治疗后6小 时，注射CW800包被的PLGA纳米微粒。在右侧的第二个肿瘤未作治疗。CW800包被的PLGA纳米 微粒仅积聚在所治疗肿瘤的位点。
[0147] 本发明的示例性系统 [014引实施例1-参考图12
[0149] PLGA纳米微粒的制备。使用0/W乳液和溶剂蒸发-提取法制备具有包埋近红外巧光 标记的PLGA纳米微粒。简而言之，在3血DCM中的90mg PLGA含有近红外(NIR)700皿(680R从 LI-C0R)(3mg)被逐滴加入到25mL含2%(w/v)PVA的蒸馈水中，并且使用超声波仪乳化90秒 (化anson，sonof i er 250)。脂类（DSPE-阳G(2000)胺（8mg)和mPEG 2000阳（8mg))的组合溶 解在DCM中，并且加入到小瓶中。经由氮气流除去DCM。随后，该乳液被迅速加入到含有脂类 的小瓶中，并且使用超声波仪将溶液均质30秒。在4°C下溶剂蒸发过夜之后，经由在eoooog 下超速离屯、30分钟收集所述PLGA纳米微粒，用蒸馈水洗涂Ξ次，并且冻干。
[0150] 共辆CW800-NHS至化GA纳米微粒。CW800-NHS共辆到含DS阳-PEG(2000)-胺的化GA 纳米微粒制剂上。随后，微粒(50mg)溶解在0.5mL的碳酸缓冲液(pH 8.5)中，并且该激活的 CW800-NHS(lmg)在室溫下1小时期间内加入到颗粒中。通过离屯、（lOOOOg，在10分钟内）除去 未结合的CW800-NHS并且用PBS洗涂化GA纳米微粒-CW800四次。通过Odyss巧扫描确定在微 粒表面的CW800的数量(表1)。
[0151] 动态光散射和Z电位。在所有纳米微粒上的动态光散射(DLS)测量是在一个ALV光 散射仪器上进行的，该光散射仪器配备有ALV5000/60X0多头相关器和在532nm的波长下操 作的化xius化IM-532 150mW DPSS激光器。折射率与包围圆柱形散射池的过滤的顺式糞烧 浴相匹配，并且使用化ake F3-K恒溫器控制溫度在21.5±0.3°C。对于各样品的自相关函 数，g2(T)，W90°检测角记录10次。对于每个测量的扩散系数，D，使用2阶累积而测量，并且 假定粒子是球形的而计算出相应的粒径(参见表1)。在Malvern ZetaSizer 2000(英国）上 测定所有纳米微粒的Z电位。
[0152]
[0153] 实施例2-参考图13
[0154] DTPA-PEG-N 肥的合成
[0155] 在C1-时tCl树脂上合成含有PEG胺连接的DTPA(4,7，10-S氧杂-1,13-十Ξ烧二 胺，在式(DTPA-PEG-NH2)中表示为阳G-N此）。因此，在含6当量DIEA的DCM存在下，通过在室 溫下3当量Fmoc-PEG胺反应过夜，Fmoc-PEG胺被并入到C1-时tCl树脂（CTC树脂）上。通过 Fmoc定量而测定最终负荷:所得的值是约0.8毫摩尔/克。用赃晚-DMF( 1:5) (1 X 1分钟，2 X 10分钟）除去Fmoc基。接着，使用DIPCDU2当量）和H0化（2当量）使DTPA-(四-叔下基醋）- C00H(2当量)在DMF中过夜偶联。在偶联过夜之后，巧Ξ酬测试呈阴性，随后，在两个步骤中 实施DTPA-(四-叔下基醋)-C0-NH-PEG-CTC-树脂裂解和脱保护。用含1%立氣乙酸(TFA)的 DCM处理DTPA-(四-叔下基醋)-C0-NH-PEG-CTC-树脂10次，每次1分钟。使用真空除去过量的 DCM，并且使用95%TFA，2.5%S异丙基硅烷(TIS)和2.5%的水除去侧链保护基团。除去了尸八 后，在化气流中用冷的MT邸沉淀DTPA-C0-NH-PEG-NH2。在水中溶解DTPA-C0-NH-PEG-NH2并 且冻干^获得最终产品。通过册1"保留时间（*1〇是2.28分钟）进行分析，所期望的0了口八- C0-NH-PEG-NH2产率为85.0 %，纯度为90.6 %。册LC-MS，m/z计算值：对于C2地37化Oil为 523.25，实测值：524.5.28[M+1 ]+和MALDI-T0F实测值524.2[M+1 ]+546.3[M+Na]。
[0156] 实施例3-参考图14
[0157] DTPA-C0-NH-PEG-N肥-册4 的合成。
[015引将溶解于50化二甲基亚讽(DMS0)的册4-NHS(8.3xl0-4毫摩尔，1毫克）添加到溶解 于含有扣L DIEA的200μΙ DMS0中的DTPA-C0-NH-PEG-N肥(2.8 X 10-3毫摩尔，2毫克），并且在 室溫下揽拌过夜。随后，通过RP-册LC纯化该复合的DTPA-C0-NH-PEG-HQ4。通过HPLC(tR 5.34)进行分析，所期望的00*曰斗66-朋5的产率为50.5%，纯度为98%边化(：-15，111八计算 值:对于 C6 抽 90N80i7S2 为 1331.59，实测值：1332.0[]?+1]+和]^101-1'0。实测值1331.9[]\1+1] + 1353.9[M+Na]〇
[0159] 根据本发明的系统的进一步实例显示在附图15-19中。
[0160] 图 15a 和 15b-点击 A-HQ4-DTPA 的变体
[0161] 点击A = 2-氯基苯并嚷挫
[0162] 载体=二亚乙基Ξ胺五乙酸(DTPA)
[0163] 图 16-点击 A-ZW800-DTPA
[0164] 点击A = 2-氯基苯并嚷挫
[01化]载体=二亚乙基Ξ胺五乙酸(DTPA)
[0166] 图 17a 和 17b-点击 A-ZW800-N0TA 的变体
[0167] 点击A = 2-氯基苯并嚷挫
[016引载体=2,2,2-(1，4,7-^氮杂环壬烧-1，4,7-^基)-^乙酸(備了八）
[0169] 图18-点击A-ZW800-改性的(在锭基处)-N0TA
[0170] 点击A = 2-氯基苯并嚷挫
[0171] 载体=2,2,2-(1，4,7-^氮杂环壬烧-1，4,7-^基)-^乙酸(備了八）
[0172] 应当注意的是，虽然在实施例16-18中R = S03^即该青色素是化合物ZW800)，R也可 W是另一个部分，如例如H、烷基等，如果所得到的青色素落入到一个或多个权利要求的范 围之内。
[0173] 图 19a-ZW800-连接体-ΝΟΤΑ和点击A
[0174] 点击A = 2-氯基苯并嚷挫
[01巧]载体=2,2,2-(1，4,7-^氮杂环壬烧-1，4,7-^基)-^乙酸(備了八）
[0176] 图19b-HQ4-连接体-ΝΟΤΑ和点击A
[0177] 点击A = 2-氯基苯并嚷挫
[017引载体=2,2,2-(1，4,7-^氮杂环壬烧-1，4,7-^基)-^乙酸(備了八）
[0179] 作为权利要求15-18中系统的替代，其中所述载体和点击A(在体内能够与配对物 相互作用的非反应性分子)设置在青色素的不同的第一和第二官能团上，使用双功能连接 物可W连接载体和点击A(在体内能够与配对物相互作用的非反应性分子)至青色素的单一 官能团上，如在图19中显示的通过赖氨酸。在图19a中，点击A和ΝΟΤΑ通过ZW800的簇酸基而 连接。经由一个侧臂，类似的策略可W应用于通过侧臂而连接，该侧臂即锭基团中的氮。
[0180] 本领域技术人员将认识到祀向分子和：（a)试剂，（b)载体和/或（C)在体内能够与 配对物相互作用的非反应性分子的其它组合是可能的，例如点击A-HQ4-N0TA，点击A-HQ5- N0TA/DTPA，点击A-CW800-N0TA/DTPA，点击A-ZW800-N0TA/DTPA等。ΝΟΤΑ和DTPA是适用于传 递试剂(如金属离子)的馨合配体的实例。
[0181] 名词解释
[0182] 4Τ1-细胞源自鼠类的乳腺癌细胞。
[0183] 4T1-1UC2相同的细胞，但遗传修饰W具有巧光素酶-2,伴随光的照射而可W转换 巧光素（luc)的酶。所W在给予巧光素之后，可W检测到运些细胞。
[0184] BSA胎牛血清白蛋白，来自牛血清的水溶性蛋白质，其除了用于研究物质结合至 蛋白质，还用于所有类型的生物应用中。
[01化]CR0合同研究组织
[0186] FACS巧光激活的细胞分选，一种可W测量单个细胞流动的巧光的技术。
[0187] FCS胎牛血清，来自提及的来源的血清，与作为包含细胞内容物的BSA裂解物A流 体应用相适应的，所述细胞已经被分解并且细胞的完整性和组织全部失去。
[0188] MALDI-T0F基质辅助激光解吸/电离飞行时间是确定化学实体分子量的一种化学 分析技术。MALDI是一种"软"电离技术，而TOF是一种特别适用于大(重)分子的检测技术。
[0189] MRI磁共振成像，利用核磁共振原则的一种医学成像技术。
[0190] MTS-测定法一种热量测定法，其测量细胞的活力。所述信号越高，细胞的活力越 大。
[0191] MS0T多光谱光声断层成像技术，参见第3.2.段。
[0192] NIRF近红外巧光
[0193] NMR核磁共振，一种物理现象，其中具有特殊性质的（即是磁性的，具有自旋的）原 子可W吸收和重新发射具有特定波长的原子福射。
[0194] PDT光动力疗法是一种使用无毒的光敏性化合物的光治疗形式，所述光敏性化合 物被选择性地暴露于光，于是它们变得对祀向的恶性细胞和其它病变细胞有毒。
[01巧]阳T正电子发射断层扫描
[0196] PKPD药代动力学和药效学，研究物质在生物体内如何表现的(生物利用度、分布、 代谢），W及它如何与生物祀点相互作用(结合、停留时间）
[0197] SDS-PAGE十二烷基硫酸钢聚丙締酷胺凝胶电泳是一种分离蛋白质混合物为单独 蛋白质(或具有较少组分的混合物)的技术
[0198] SPECT单光子发射计算机断层显像是一种使用丫（gamma)射线的成像技术。它能 够提供真实的3D信息。此信息通常呈现为贯穿患者的截面切片，但可W根据需要而自由的 重建或操纵。[维基百科]
[0199] TIMEL末端脱氧核巧酸转移酶加 TP缺口末端标记是一种通过标记核酸的末端而 检测DNA片段的方法[维基百科]。它被用作坏死组织的标记工具。
【主权项】
1. 一种包括结合坏死细胞的靶向分子的系统，该靶向分子是细胞膜非通透的、未活化 的、能够非共价地结合到细胞内蛋白质并且不显著结合DNA的青色素， 其中该系统还包括一种或多种： (a) 选自成像化合物、治疗性化合物、和释放因子的试剂； (b) 有效用于传递试剂的载体;和 (c) 在体内能够与配对物相互作用的非反应性分子。2. 根据权利要求1的系统，其中所述靶向分子是根据图1中1、11和III的非反应性青色 素染料，其中η是整数，如n e [ 2，10 ]，优选n e [ 4，8 ]，链L具有不超过n-1个双键，优选n/2个 双键， 其中亚族II和III可以分别包括由曲线C表示的一个和两个芳香环体系(A、B)， 其中A、B优选各自独立的选自苯和萘， 其中可以存在其它基团Rs、R6、R?和Rs、Rs、R6、R?和Rs是优选各自独立选自Η和烷基，如甲 基、乙基、和丙基，优选甲基， 其中芳香环体系可以包括另外的官能团Ri、R2和/或取代基，Ri、R2是优选各自独立选自 H、磺酸基、和磺酰胺， 其中交替单键和双键的链L可以被一个或多个部分的和完全的饱和的环结构中断，如 环戊烯和环己烯以及它们的组合，如一个或更多个环己烯环，其中所述饱和环结构还可以 包括官能团 R9,其选自 H、AA 和 BB，其中R1()选自!1、303!1、(：1、，-0 = 0-(〇12)(1-￥3(9=1-6)，-(CH2) r-Y4 (r = 1 -6)，Y3 和Y4各自独立的是Η、COOH、S03H和CN， 其中氮原子(N)还可以包括功能性N侧基基团R3、R4，其中R3、R4优选各自独立的选自-(CH 2)mY，其中Y各自独立地选自具有1-4个碳原子的羧酸，磺酸酯基、CN、C=C、和C = C，以及 它们的盐， 其中，所述N侧基基团包含m个碳原子，如me [1，10]，优选me [2,8]，更优选me [3,7]， 最优选m=4、5、和6， 甚至更优选至少一个m=4、5、和6;优选一个m=6,而另一个m优选是4、5或6， 其中所述N侧基基团包含一个或多个在末端上与N相对的官能团，如具有1-4个碳原子 的羧酸，磺酸基，和它们的盐，如钠盐和钾盐，最优选在末端上的官能团包括一个或多个双 C-C键，优选是其羧酸盐，和/或 其中所述靶向分子是中性的或带负电荷的。3. 根据权利要求1和/或2的系统，其中所述靶向分子选自：HQ4、HQ5、HQ6、HQ7、ICG、CW 800、ZW800、L4、L7、Lll、CY3、CY3b、CY3.5、CY5、CY5.5、CY7、Dy 676、Dy 681、Dy 731、Dy 751 和Dy 776;并且、优选选自 HQ4、HQ5、CW800和ZW800。4. 根据一个或多个前述权利要求的系统，其中所述试剂是： (a)选自下组的成像化合物:发光化合物、放射性示踪剂、MRI造影剂或分光剂、PET剂、 RFA(射频消融）剂、SPECT剂、超声微泡或造影剂、光声纳米微粒或造影剂、CT造影剂、拉曼 剂，和它们的组合;和/或(b)选自下组的治疗性化合物:化疗剂、光动力学化合物、升温化合 物(包括光热剂）、免疫调节剂、蛋白质和多肽、核酸(RNA-或DNA-基）、药物(如抗体），和它们 的组合;和/或(c)用于刺激组织再生的释放因子，如生长因子和干细胞。5. 根据一个或多个前述权利要求的系统，其中所述载体选自下组：脂质体、树状聚合 物、可生物降解的颗粒、胶束、纳米微粒、声解离性颗粒、pH解离性颗粒、光解离性颗粒、热解 离性颗粒、螯合部分以及它们的组合。6. 根据一个或多个前述权利要求的系统，其中在体内能与配对物相互作用的非反应性 分子选自：第一点击化学组分，互补于第一点击化学组分的第二点击化学组分，和自标记蛋 白质标签的组分，如Snap-Tag。7. 用作药物的一个或多个前述权利要求的系统。8. -个或多个权利要求1-6的系统在诊断方法中的应用，所述诊断方法例如MRI、 SPECT、PET、RFA(射频消融）、CT、拉曼光谱、超声、光学和光电声。9. 用于治疗涉及坏死性细胞死亡的疾病的一个或多个权利要求1-6的系统，所述疾病 包括梗塞或缺血性损伤，如心肌梗死、中风、和肾，创伤，如在脑、肌肉、骨中的，感染或炎症， 如感染性休克、类风湿性关节炎，和骨坏死，退行性疾病，如阿尔茨海默病、帕金森氏痴呆 症，斑块，如动脉粥样硬化，和淀粉样蛋白，和糖尿病。10. 用于检测和/或治疗癌症和/或涉及坏死性细胞死亡的疾病的剂量，所述剂量包含 有效量的一个或多个权利要求1 -6的系统。11. 根据权利要求10的剂量，包含0.1-1000纳摩尔系统/kg体重的量和/或在1-50毫升 生理溶液中提供。12. -种用于在样品中确定定位的方法，所述样品包含含有坏死细胞的细胞群体，包 括： (a) 提供一个或多个权利要求1-6的系统； (b) 使用至少第一适宜的成像技术，在样品上进行一个或多个测量，提供一个或多个 值，和； (c) 分析所述测量的一个值或多个值以确定定位，任选的通过与一组参考值进行比较。13. -种用于治疗癌症和/或涉及坏死性细胞死亡的疾病的方法，包括： (a) 给予一个或多个权利要求1-6的系统，其中所述组合物包含一种或多种治疗性化合 物 (b) 在癌症和/或坏死组织中确定组合物的定位 (c) 激活从载体中至少所述治疗性化合物的释放和/或激活所述治疗性化合物。
【文档编号】A61K49/00GK106029108SQ201480020279
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2014年2月6日
【发明人】M·马灵, C·W·G·M·洛维克, E·R·范比克, X·邦文
【申请人】Hq医药(荷兰)有限责任公司