专利名称：蝎子草多糖的制备方法及其产品和应用的制作方法
技术领域：
本发明属于制药领域，具体涉及蝎子草多糖的制备方法，还涉及该方法制备的蝎子多糖及其制剂，还涉及蝎子多糖在制备治疗糖尿病药物中的应用。
背景技术：
蝎子草suborbiculata C 7；伐彻)，别名红藿毛草、火麻草，为荨麻科蝎子草属一年生或多年生草本，生于海拔50-800m的林下或沟边阴处。分布于我国陕西、 甘肃、湖南、四川等地区，其资源丰富。蝎子草作为民间用药在我国由来已久，主要用来治疗风湿痹痛、外伤出血、溃疡、肢麻等。近年来研究发现蝎子草还具有延长凝血时间、抑制血小板聚集等作用，蝎子草提取物具有较好的抗炎、抗痛风、镇痛等作用。但关于蝎子草多糖的制备方法及其活性研究方面报道较少，蝎子草多糖未得到充分、有效的利用。因此，急需一种蝎子草多糖的制备方法，操作简单，质量可控，提取效率高。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的之一在于提供蝎子草多糖的制备方法，该制备方法操作简单，质量可控，提取效率高。为实现上述目的，技术方案为 蝎子草多糖的制备方法，包括以下步骤
a.预处理
将蝎子草粉碎，药粉加入回流提取装置，加入体积分数为60-95%的乙醇，回流提取，过滤，弃滤液，再加入体积分数为60-95%的乙醇，回流提取，过滤，收集滤渣，即得预处理蝎子草；
b.提取
将步骤a所得预处理蝎子草加水，在温度为60-9(TC条件下，提取，过滤，收集滤液，得第一次提取液；再向药渣中加水，在温度为60-90°C条件下，提取，过滤，收集滤液，得第二次提取液，合并两次滤液，得粗提液；
c.浓缩
将步骤b所得粗提液浓缩，然后进行离心，收集上清液，得浓缩液；
d.醇沉
将步骤c所得浓缩液中加入乙醇至乙醇体积分数为60-85%，抽滤，收集沉淀，将沉淀依次用石油醚、丙酮、无水乙醇洗涤，干燥，得蝎子草粗多糖；
e.纯化
将步骤d所得蝎子草粗多糖溶于水，加入去蛋白液，充分混合，静置，收集水相，向水相液体中加入活性炭，恒温振荡，离心，收集上清，于截留量为5000-20000Da的透析袋中透析，冷冻干燥，得蝎子草多糖；所述去蛋白液为氯仿和正丁醇混合物，氯仿与正丁醇的体积比为4:1。
进一步，所述步骤a为加入相当于蝎子草重量1-10倍的体积分数为70-95%的乙醇，回流提取，过滤，弃滤液，再加入相当于蝎子草重量1-10倍的体积分数为70-95%的乙醇，回流提取，过滤，弃滤液；
所述步骤b为加入相当于蝎子草重量5-30倍的水，在温度为80-90°C条件下，提取1_3 小时，再加入相当于蝎子草重量5-30倍的水，在温度为60-90°C条件下，提取1-3小时，过滤，收集滤液；
所述步骤c为浓缩至浓缩液相当于蝎子草重量的1-3倍；所述离心为在转速不低于 3000转/分钟、离心不少于10分钟；
所述步骤d为加入无水乙醇至乙醇体积分数为70-85% ；
所述步骤e为加入相当于蝎子草粗多糖重量10-40倍的水，再加入相当于水体积 1/6-1/4倍的去蛋白液，充分混合，在温度为4°C条件下静置过夜，收集水相，加入活性炭至活性炭质量分数为1%_10%，在温度为40°C条件下恒温振荡至少1小时，在转速不低于3000 转/分钟、离心不少于10分钟，收集上清，于截留量为8000-15000Da的透析袋中透析至少 48小时，冷冻干燥，得蝎子草多糖。进一步，所述步骤a为加入相当于蝎子草体积5倍的体积分数为95%的乙醇，回流提取1-3小时，过滤，弃滤液，再加入相当于蝎子草体积5倍的体积分数为95%的乙醇，回流提取1-3小时，过滤，弃滤液；
所述步骤b为加入相当于蝎子草重量20倍的水，在温度为85°C条件下，提取1. 5小时， 再向药渣中加入相当于蝎子草体积20倍的水，在温度为85°C条件下，提取1. 5小时，过滤， 收集滤液；
所述步骤c为浓缩至浓缩液相当于蝎子草重量的2倍，在转速为3000转/分钟、离心 30分钟；
所述步骤d为加入无水乙醇至乙醇终浓度体积分数为80% ；
所述步骤e为加入相当于蝎子草粗多糖重量30倍的水，再加入相当于水体积1/5倍的去蛋白液，充分混合，在温度为4°C条件下静置过夜，收集水相，加入活性炭至活性炭质量分数为1. 5%，在温度为40°C条件下恒温振荡1小时，在转速为3000转/分钟、离心10分钟， 收集上清，于截留量为8000-15000Da的透析袋中透析48小时，冷冻干燥，得蝎子草多糖。本发明的目的之二在于提供用上述方法制得的蝎子草多糖，其纯度高。为实现上述目的，技术方案为 利用所述的制备方法制备的蝎子草多糖。本发明的目的之三在于提供用蝎子草多糖制得的制剂，该制剂成本低，便于临床应用。为实现上述目的，技术方案为 含有所述蝎子草多糖的制剂。进一步，所述制剂为颗粒制剂。本发明的目的之四在于提供蝎子草多糖的应用，治疗效果确切，见效快。为实现上述目的，技术方案为
所述蝎子草多糖或制剂在制备治疗糖尿病药物中的应用。本发明有益效果在于本发明了公开了蝎子草多糖的制备方法，其操作简单，质量可控，提取效率高(提取效率最高为6.洲);提取物中蝎子草多糖含量高(提取物中蝎子草多糖含量最高为94. 8%)，制备的蝎子草多糖用于治疗糖尿病，具有很好的降血糖效果，特别是服用高剂量的蝎子草多糖，降血糖效果显著，血糖值下降约6. lmmol/L;制得的蝎子草多糖可以制成各种适用于临床治疗需要的制剂，例如颗粒制剂，使用方便，治疗效果佳，见效快。
具体实施例方式以下将结合实施例对本发明进行详细的描述。优选实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件。实施例1
蝎子草多糖的制备方法，具体步骤为
a.预处理
将蝎子草粉碎，细粉加入回流提取装置，加入相当于蝎子草重量5倍的体积分数为95% 的乙醇，回流提取2小时，过滤，弃滤液，再加入相当于蝎子草重量5倍的体积分数为95%的乙醇，回流提取2小时，过滤，弃滤液，即得预处理蝎子草；
b.提取
将步骤a所得预处理蝎子草加入相当于蝎子草重量20倍的水，在温度为85°C条件下， 提取时间为1.5小时，过滤，收集滤液，再向药渣中加入相当于蝎子草重量20倍的水，在温度为85°C，提取1. 5小时，过滤，收集滤液；合并两次滤液，得提取液；
c.浓缩
将步骤b所得提取液浓缩至浓缩液相当于蝎子草重量的2倍，然后进行在转速为3000 转/分钟、离心30分钟，收集上清液，得浓缩液；
d.醇沉
将步骤c所得浓缩液中加入无水乙醇至乙醇体积分数为85%，抽滤，收集沉淀，将沉淀依次用石油醚、丙酮、无水乙醇洗涤3次，干燥，得蝎子草粗多糖；
e.纯化
将步骤d所得蝎子草粗多糖加入相当于蝎子草粗多糖重量30倍的水，加入相当于水体积1/5倍的去蛋白液(氯仿与正丁醇体积比为4:1)，充分混合，固液分离，收集水相，向水相中加入活性炭至活性炭质量分数为1. 5%，40°C恒温振荡1小时，在转速为3000转/分钟、离心10分钟，收集上清，于截留量为5000Da的透析袋中透析48小时，冷冻干燥，得蝎子草多糖。本实施例蝎子草多糖的提取效率为6. 2%，提取物中蝎子草多糖的纯度为81. 3%。实施例2
蝎子草多糖的制备方法，具体步骤为
a.预处理
将蝎子草粉碎，细粉加入回流提取装置，加入相当于蝎子草重量10倍的体积分数为 90%的乙醇，回流提取1小时，过滤，弃滤液，再加入相当于蝎子草重量10倍的体积分数为 90%的乙醇，回流提取1小时，过滤，弃滤液，即得预处理蝎子草；
b.提取
将步骤a所得预处理蝎子草加入相当于蝎子草重量5倍的水，在温度为90°C条件下，提取时间为3小时，过滤，收集滤液，再向药渣中加入相当于预处理蝎子草重量30倍的水，在温度为90°C，提取1小时，过滤，收集滤液，合并两次滤液，得提取液；
c.浓缩
将步骤b所得提取液浓缩至浓缩液相当于蝎子草重量的3倍，然后进行在转速为4500 转/分钟、离心10分钟，收集上清液，得浓缩液；
d.醇沉
将步骤c所得浓缩液中加入无水乙醇至乙醇体积分数为80%，抽滤，收集沉淀，将沉淀依次用石油醚、丙酮、无水乙醇洗涤2次，干燥，得蝎子草粗多糖；
e.纯化
将步骤d所得蝎子草粗多糖加入相当于蝎子草粗多糖重量10倍的水，加入相当于水体积1/4倍的去蛋白液(氯仿与正丁醇体积比为4:1)，充分混合，固液分离，收集水相，向水相中加入活性炭至活性炭质量分数为10%，40°C恒温振荡1小时，在转速为4500转/分钟、离心25分钟，收集上清，于截留量为SOOODa的透析袋中透析56小时，冷冻干燥，得蝎子草多糖。本实施例蝎子草多糖的提取效率为5. 8%，提取物中蝎子草多糖的纯度为85. H实施例3
蝎子草多糖的制备方法，具体步骤为
a.预处理
将蝎子草粉碎，细粉加入回流提取装置，加入相当于蝎子草重量1倍的体积分数为85% 的乙醇，回流提取3小时，过滤，弃滤液，再加入相当于蝎子草重量1倍的体积分数为85%的乙醇，回流提取3小时，过滤，弃滤液，即得预处理蝎子草；
b.提取
将步骤a所得预处理蝎子草加入相当于蝎子草重量30倍的水，在温度为80°C条件下， 提取时间为1小时，过滤，收集滤液，再向药渣中加入相当于蝎子草重量5倍的水，在温度为 90°C，提取3小时，过滤，收集滤液；合并两次滤液，得提取液；
c.浓缩
将步骤b所得提取液浓缩至浓缩液相当于蝎子草重量的1倍，然后进行在转速为6000 转/分钟、离心15分钟，收集上清液，得浓缩液；
d.醇沉
将步骤c所得浓缩液中加入无水乙醇至乙醇体积分数为75%，抽滤，收集沉淀，将沉淀依次用石油醚、丙酮、无水乙醇洗涤5次，干燥，得蝎子草粗多糖；
e.纯化
将步骤d所得蝎子草粗多糖加入相当于蝎子草粗多糖重量40倍的水，加入相当于水体积1/6倍的去蛋白液(氯仿与正丁醇体积比为4:1)，充分混合，固液分离，收集水相，向水相中加入活性炭至活性炭质量分数为1%，40°C恒温振荡5小时，在转速为3000转/分钟、离心45分钟，收集上清，于截留量为IOOOODa的透析袋中透析48小时，冷冻干燥，得蝎子草多糖。本实施例蝎子草多糖的提取效率为5. 5%，提取物中蝎子草多糖的纯度为87. 0%。实施例4蝎子草多糖的制备方法，具体步骤为
a.预处理
将蝎子草粉碎，细粉加入回流提取装置，加入相当于蝎子草重量5倍的体积分数为70% 的乙醇，回流提取1小时，过滤，弃滤液，再加入相当于蝎子草重量5倍的体积分数为70%的乙醇，回流提取1小时，过滤，弃滤液，即得预处理蝎子草；
b.提取
将步骤a所得预处理蝎子草加入相当于蝎子草重量25倍的水，在温度为60°C条件下， 提取时间为1.5小时，过滤，收集滤液，再向药渣中加入相当于蝎子草重量25倍的水，在温度为60°C，提取1. 5小时，过滤，收集滤液；合并两次滤液，得提取液；
c.浓缩
将步骤b所得提取液浓缩至浓缩液相当于蝎子草重量的2倍，然后进行在转速为3000 转/分钟、离心30分钟，收集上清液，得浓缩液；
d.醇沉
将步骤c所得浓缩液中加入无水乙醇至乙醇体积分数为70%，抽滤，收集沉淀，将沉淀依次用石油醚、丙酮、无水乙醇洗涤3次，干燥，得蝎子草粗多糖；
e.纯化
将步骤d所得蝎子草粗多糖加入相当于蝎子草粗多糖重量20倍的水，加入相当于水体积1/5倍的去蛋白液(氯仿与正丁醇体积比为4:1)，充分混合，固液分离，收集水相，向水相中加入活性炭至活性炭质量分数为5%，40°C恒温振荡1小时，在转速为3000转/分钟、离心10分钟，收集上清，于截留量为15000Da的透析袋中透析48小时，冷冻干燥，得蝎子草多本实施例蝎子草多糖的提取效率为5. 1%，提取物中蝎子草多糖的纯度为90. m。实施例5
蝎子草多糖的制备方法，具体步骤为
a.预处理
将蝎子草粉碎，细粉加入回流提取装置，加入相当于蝎子草重量5倍的体积分数为60% 的乙醇，回流提取2小时，过滤，弃滤液，再加入相当于蝎子草重量5倍的体积分数为60%的乙醇，回流提取2小时，过滤，弃滤液，即得预处理蝎子草；
b.提取
将步骤a所得预处理蝎子草加入相当于蝎子草重量25倍的水，在温度为90°C条件下， 提取时间为1.5小时，过滤，收集滤液，再向药渣中加入相当于蝎子草重量25倍的水，在温度为90°C，提取1. 5小时，过滤，收集滤液；合并两次滤液，得提取液；
c.浓缩
将步骤b所得提取液浓缩至浓缩液相当于蝎子草重量的2倍，然后进行在转速为3000 转/分钟、离心30分钟，收集上清液，得浓缩液；
d.醇沉
将步骤c所得浓缩液中加入无水乙醇至乙醇体积分数为60%，抽滤，收集沉淀，将沉淀依次用石油醚、丙酮、无水乙醇洗涤3次，干燥，得蝎子草粗多糖；
e.纯化将步骤d所得蝎子草粗多糖加入相当于蝎子草粗多糖重量20倍的水，加入相当于水体积1/5倍的去蛋白液(氯仿与正丁醇体积比为4:1)，充分混合，固液分离，收集水相，向水相中加入活性炭至活性炭质量分数为5%，40°C恒温振荡1小时，在转速为3000转/分钟、离心10分钟，收集上清，于截留量为20000Da的透析袋中透析48小时，冷冻干燥，得蝎子草多糖。本实施例蝎子草多糖的提取效率为4. 6%，提取物中蝎子草多糖的纯度为94. 8%。实施例6
蝎子草多糖颗粒剂的制备
取实施例1制备的蝎子草多糖400份、淀粉400份、蔗糖粉150份、糊精50份和水50 份，混合均勻，过14目筛制成湿颗粒，在温度为80°C条件下干燥3-6小时，再过12目筛即得蝎子草多糖颗粒剂。以上颗粒制剂为本发明的最佳实施例，制备方法简单，服用方便。但不限于颗粒制剂，可以将治疗糖尿病的中药组合物或其提取物制成临床上治疗需要的制剂，在制剂中加入药剂学上可以接受的载体，制剂的制备方法为常规方法。例如，可以将蝎子草多糖制备成膏剂，或加入粘合剂制成丸剂或者压片制成片剂，也可以将黄连提取物与药剂学上可接受的载体制成冲剂、胶囊等。这些提取物合制剂与中药组合物具有相同的有效成分，其治疗效果相同。实施例7
以下对本发明制备的蝎子多糖治疗糖尿病的效果进行详细的描述。选取洁净小鼠100只，禁食12小时，随机选取80只小鼠，每只小鼠按250mg/kg 腹腔注射四氧嘧啶溶液，连续注射3天，3天后禁食12小时，测定小鼠血糖，以空腹血糖值 ^ 11. lmmol/L的小鼠确定为建模成功的糖尿病小鼠。从建模成功小鼠中随机选取30只小鼠，平均分成4组，分别为阴性对照组、阳性对照组、蝎子草多糖低剂量组和蝎子草多糖高剂量组，其中阳性对照组每天每只按200mg/kg灌喂盐酸二甲双胍，蝎子草多糖低剂量组每天每只按200mg/kg灌喂本发明制备的蝎子草多糖，蝎子草多糖高剂量组每天每只按 400mg/kg灌喂本发明制备的蝎子草多糖，阴性对照组每天每只按200mL/kg灌喂水，连续灌喂14天。剩余20只未注射四氧嘧啶的小鼠，注射生理盐水，连续注射3天，3天后随机选取10只小鼠作为正常对照组，每天每只按200mL/kg灌喂水，连续灌喂14天。测定处理后小鼠的空腹血糖值，结果如表1所示
表1蝎子草多糖治疗糖尿病的实验效果
权利要求
1.蝎子草多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤a.预处理将蝎子草粉碎，药粉加入回流提取装置，加入体积分数为60-95%的乙醇，回流提取，过滤，弃滤液，再加入体积分数为60-95%的乙醇，回流提取，过滤，收集滤渣，即得预处理蝎子草；b.提取将步骤a所得预处理蝎子草加水，在温度为60-9(TC条件下，提取，过滤，收集滤液，得第一次提取液；再向药渣中加水，在温度为60-90°C条件下，提取，过滤，收集滤液，得第二次提取液，合并两次滤液，得粗提液；c.浓缩将步骤b所得粗提液浓缩，然后进行离心，收集上清液，得浓缩液；d.醇沉将步骤c所得浓缩液中加入乙醇至乙醇体积分数为60-85%，抽滤，收集沉淀，将沉淀依次用石油醚、丙酮、无水乙醇洗涤，干燥，得蝎子草粗多糖；e.纯化将步骤d所得蝎子草粗多糖溶于水，加入去蛋白液，充分混合，静置，收集水相，向水相液体中加入活性炭，恒温振荡，离心，收集上清，于截留量为5000-20000Da的透析袋中透析，冷冻干燥，得蝎子草多糖；所述去蛋白液为氯仿和正丁醇混合物，氯仿与正丁醇的体积比为4:1。
2.根据权利要求1所述蝎子草多糖的制备方法，其特征在于所述步骤a为加入相当于蝎子草重量1-10倍的体积分数为70-95%的乙醇，回流提取，过滤，弃滤液，再加入相当于蝎子草重量1-10倍的体积分数为70-95%的乙醇，回流提取，过滤，弃滤液；所述步骤b为加入相当于蝎子草重量5-30倍的水，在温度为80-90°C条件下，提取1_3 小时，再加入相当于蝎子草重量5-30倍的水，在温度为60-90°C条件下，提取1-3小时，过滤，收集滤液；所述步骤c为浓缩至浓缩液相当于蝎子草重量的1-3倍；所述离心为在转速不低于 3000转/分钟、离心不少于10分钟；所述步骤d为加入无水乙醇至乙醇体积分数为70-85% ；所述步骤e为加入相当于蝎子草粗多糖重量10-40倍的水，再加入相当于水体积 1/6-1/4倍的去蛋白液，充分混合，在温度为4°C条件下静置过夜，收集水相，加入活性炭至活性炭质量分数为1%_10%，在温度为40°C条件下恒温振荡至少1小时，在转速不低于3000 转/分钟、离心不少于10分钟，收集上清，于截留量为8000-15000Da的透析袋中透析至少 48小时，冷冻干燥，得蝎子草多糖。
3.根据权利要求1所述蝎子草多糖的制备方法，其特征在于所述步骤a为加入相当于蝎子草体积5倍的体积分数为95%的乙醇，回流提取1-3小时，过滤，弃滤液，再加入相当于蝎子草体积5倍的体积分数为95%的乙醇，回流提取1-3小时，过滤，弃滤液；所述步骤b为加入相当于蝎子草重量20倍的水，在温度为85°C条件下，提取1. 5小时， 再向药渣中加入相当于蝎子草体积20倍的水，在温度为85°C条件下，提取1. 5小时，过滤，收集滤液；所述步骤c为浓缩至浓缩液相当于蝎子草重量的2倍，在转速为3000转/分钟、离心 30分钟；所述步骤d为加入无水乙醇至乙醇终浓度体积分数为80% ；所述步骤e为加入相当于蝎子草粗多糖重量30倍的水，再加入相当于水体积1/5倍的去蛋白液，充分混合，在温度为4°C条件下静置过夜，收集水相，加入活性炭至活性炭质量分数为1. 5%，在温度为40°C条件下恒温振荡1小时，在转速为3000转/分钟、离心10分钟， 收集上清，于截留量为8000-15000Da的透析袋中透析48小时，冷冻干燥，得蝎子草多糖。
4.利用权利要求1-3任一项所述的制备方法制得的蝎子草多糖。
5.含有权利要求4所述蝎子草多糖的制剂。
6.根据权利要求5所述制剂，其特征在于所述制剂为颗粒制剂。
7.权利要求4所述蝎子草多糖或权利要求5所述制剂在制备治疗糖尿病药物中的应
全文摘要
本发明公开了蝎子草多糖的制备方法，包括预处理、粗提取、浓缩、醇沉和纯化等步骤，该制备方法操作简单，产品质量可控，提取效率高；还公开了用该方法制得的蝎子草多糖及其制剂，本发明公开的蝎子草多糖及其制剂可以用于临床上治疗糖尿病，降血糖效果明显，副作用小，应用前景广泛。
文档编号A61P3/10GK102408493SQ201110458709
公开日2012年4月11日 申请日期2011年12月31日 优先权日2011年12月31日
发明者何江梅, 张晓林, 彭霞, 李翀, 李逐波, 陈章宝 申请人:西南大学