补体成分3的C3d片段的抗体的制作方法

专利名称：补体成分3的C3d片段的抗体的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于调节补体旁路途径(CAP)、补体经典途径(CCP)、补体凝集素/甘露糖途径(CMP)或以上的组合的方法和材料，以及用于将诊断剂、预防剂和治疗剂靶向于体内组织局部区域的方法和材料，从而所述诊断剂、预防剂和治疗剂可以更直接地对预期的靶细胞或组织发挥作用，与以非靶向的系统性方式给予相同或相似试剂相比，具有降低的相关系统作用。因此，本发明的方法和材料可以实现增加的功效、较低的阈值有效剂量和/或较低的有效维持剂量、和/或在发生的频率或严重程度或两者中的降低的相关不良作用或副作用。本发明还涉及用于调节宿主体液免疫应答，特别是降低、抑制或防止宿主体液免疫应答(例如，自身免疫疾病患者中发生的对自身抗原的免疫应答)的方法和材料。
背景技术：
补体系统在许多自身免疫病病、炎性疾病和缺血性疾病的病理机制中发挥重要的作用。不适当的补体活化及其在宿主细胞上的沉积可导致补体介导的细胞和靶组织的溶解和/或损伤，以及由于产生强力的炎症介质而导致的组织破坏。补体系统的活性中关键之处在于来源于血清蛋白补体C3的加工后蛋白片段与补体活化的组织位点的共价连接。该特殊的性质是由于C3中存在硫酯键，当硫酯键在C3活化中被切割时，将C3转化为称为C3b的形式，然后C3b可利用酯或 酰胺键而与细胞和组织附着分子连接。一旦C3b共价连接后，其被快速加工为iC3b、C3dg和C3d形式，其中每个形式保留与靶组织位点的共价连接。该加工导致将组织“标记”为炎性损伤或其它补体相关过程在进行中的组织。补体可通过下述三个途径中的任一个被活化:经典途径、凝集素途径和旁路途径。经典途径是通过补体系统蛋白Clq与抗原-抗体复合物、穿透素或凋亡细胞的结合而被活化。穿透素包括C反应蛋白和血清淀粉样蛋白P组分。凝集素途径是通过微生物碳水化合物与甘露糖结合凝集素的结合或通过纤维胶原素与碳水化合物或乙酰化分子的结合而被启动。旁路途径是在具有中性电荷或正电荷性质并且不表达或不含有补体抑制剂的病原体的表面上活化的。其来自称为C3的“慢速运转(tickover)”的过程，该过程自然发生，涉及构象改变的C3与因子B的相互作用，并导致活化的C3b在病原体或其它表面上的固定。当某些抗体通过含IgA的免疫复合物阻断内源调节机制时，或当补体调节蛋白表达降低时，也可以启动旁路途径。此外，当通过经典或凝集素途径或通过慢速运转过程本身沉积在靶标上的C3b结合因子B时，通过称为“放大环”的机制启动旁路途径。参见MulIer-Eberhard(1988)Ann.Rev.Biochem.57:321。例如，Holers 和同事已证实，当初始补体活化之后炎性细胞被动员时，旁路途径在局部损伤位点处被放大。Girardi et al.，J.Clin.1nvest.2003, 112:1644。然后,通过旁路途径的显著的补体放大通过一定机制发生，该机制涉及固定补体、旁路途径成分的局部合成的受损细胞的额外产生，或更可能是由于携带预先形成的C3和备解素的浸润的炎性细胞显著增加该位点的特异性活化。当循环的因子B结合活化的C3b时，启动旁路途径放大。然后，该复合物被循环的因子D切割而产生酶学活性的C3转化酶复合物C3bBb。C3bBb切割其它C3产生的C3b，其驱动炎症并且还进一步放大活化过程，从而产生正向反馈环。因子H是旁路补体途径活化以及在慢速运转机制中与因子B竞争结合构象改变的C3和在放大环中与因子B竞争结合C3b的启动机制的关键调节剂(抑制剂)。C3b与因子H的结合还导致C3b被因子I降解为失活形式iC3b(也称为C3bi)，从而对补体活化施加进一步的检查。因子H调节以约500 μ g/ml的血浆浓度循环的流动相的补体，但是其与细胞的结合是由存在的带负电的表面以及固定的C3b、iC3b、C3dg或C3d所增强的调节现象。Jozsi et al., Histopathol.(2004)19:251-258。多种疾病的病因学和进展涉及补体活化、C3片段固定和补体介导的炎症。补体活化的下调已被证实在动物模型和离体研究的数种疾病的治疗中是有效的，包括，例如，系统性红斑狼疮和肾小球肾炎(Y.Wang et al.，Proc.Nat ’ I Acad.Sc1.USA(1996)93:8563-8568)、风湿性关节炎(Y.Wanget al.，Proc.Nat’ I Acad.Sc1.USA(1995)92:8955-8959)、体外循环和血液透析(C.S.Rinder, J.Clin.1nvest.(1995)96:1564-1572)、器官移植中的超急性排斥(T.J.Kroshus et al.，Transplantation (1995)60:1194-1202)> 心肌梗塞(J.W.Homeister et al., J.1mmunol.(1993) 150:1055-1064; H.F.Weisman et al.，Science (1990) 249:146-151)、缺血 / 再灌注损伤(E.A.Amsterdam et al., Am.J.Physiol.(1995) 268:H448_H457)、例如肾的抗体介导的同种异体移植物排斥(J.B.Colvin, J.Am.Soc.Nephrol.(2007) 18 (4): 1046-56)及成人呼吸窘迫综合征(R.Rabinovici et al., J.1mmunol.(1992) 149:1744-1750)。此外，其它炎性疾病状态和自身免疫/免疫复合物病也与补体活化紧密相关(B.P.Morgan.Eur.J.Clin.1nvest.(1994)24:219-228)，包括，但不限于热损伤、重度哮喘、过敏性休克、肠炎、荨麻疹、血管性水肿、血管炎、多发性硬化、重症肌无力、心肌炎、膜增生性肾小球肾炎、非典型溶血性尿毒症综合征 、修格兰氏综合征、肾和肺缺血/再灌注及其它器官特异性炎性病症。关于补体活化在局部组织C3活化和炎性损伤发生的所有疾病的发病机制和损伤中是否是必需的这一点，目前还不确定；但是，C3片段固定作为相关事件几乎被普遍发现。US2008/0267980和US2008/0221011中描述了使用补体受体2 (CR2)或其功能片段来将补体调节剂靶向于组织，所述组织展现出或表达CR2能结合的C3或C3片段，包括C3b、iC3b、C3d和C3dg，通过引用将上述申请的公开内容并入本文。这样的CR2分子及其功能片段可用于靶向作用，因为前两个N末端短同源重复结构域(SCR)包含iC3b和C3dg中含有的暴露的C3d的活性结合位点。通过引用将本文引用的所有出版物、专利、专利申请和公开的专利申请的公开内容整体并入本文。发明概述因为受到物理、化学或其它损害或损伤的组织和细胞上表达和展示C3片段，因此本发明人假设利用针对C3片段(例如C3d)的抗体可以实现补体调节。此外，通过将治疗剂或预防剂靶向于这些损害或损伤的位点，可以实现补体相关病症的更有效的治疗或预防。例如，通过将治疗剂或预防剂连接于能结合C3片段的靶向部分(例如针对C3d或C3dg的抗体)可实现所述靶向。利用这些手段，当系统性给予试剂时，在这些损伤的位点可以实现靶向治疗剂或预防剂的升高的局部浓度。因此，利用低于非靶向治疗所必需的浓度和/或频率的给药方案进行系统性给药时，可以在补体活化位点实现试剂的治疗水平。因为试剂被靶向于可以发挥最大效应的组织和细胞，可以实现所需的治疗或预防浓度和结果，同时伴随降低的系统性副作用。因此，本文提供利用能结合C3片段的靶向部分(S卩，C3d的抗体)来将治疗剂和/或预防剂靶向于损伤或损害位点处的组织和细胞的材料和方法。本发明人已发现，结合补体的C3d片段在体内局部补体活化的位点提供了补体旁路途径的最佳调节。因此，本发明人已鉴定出利用由有炎症的组织与补体C3片段C3dg和/或C3d的共价修饰所提供的独特的“标记(flag) ”或“靶标(target) ”的新方法和材料，从而提供可将治疗剂或诊断剂优先引导至有炎症的组织的区域的新方法和材料。因此，一方面，本文提供能特异性地结合补体蛋白C3d或C3dg的分离的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，本文公开的分离的抗体或其抗原结合片段能特异性地结合哺乳动物C3d或C3dg，例如，人C3d或C3dg。另一方面，本文提供分离的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段对C3d的结合亲和力为1.1nM或更佳(在Kd值中)。(本文所用的术语〃C3d/C3dg〃表示C3d和/或C3dg)。在一些实施方案中，本文所述的分离的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段对C3d的结合亲和力为0.5nM或更佳(在Kd值中)。在一些实施方案中，本文公开的分离的抗体或其抗原结合片段能以1.1nM或更佳的Kd(即，以较低的Kd值)结合人C3d或C3dg。在一些实施方案中，对人C3d/C3dg的Kd为0.5nM或更佳。另一方面，本文提供分离的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段，其中与结合补体蛋白C3、C3a、C3b、C3c或C3f相比，所述抗体或其抗原结合片段优先结合C3d、C3dg或iC3b。通常，本文所述的优先性是指对一个物种的C3d/C3dg超过对相同物种的C3、C3a、C3b、C3c或C3f蛋白的优先性，所述物种包括，例如，人、非人哺乳动物(例如，食蟹猴)、小鼠或大鼠。此外， 本文所述的优先性是指体外优先性、或体内优先性、或体外和体内优先性两者，其可通过很多公知的测量方法来确定，例如，标准亲和力测定技术或竞争性结合技术，其中的很多技术在本文中给出和/或进行描述。在一些实施方案中，本文所述的分离的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段在体外或体内不结合人或其它哺乳动物物种的补体蛋白C3、C3a、C3b、C3c或C3f。在一些实施方案中，本文提供了能结合人或其它哺乳动物物种的C3d或C3dg的分离的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段，其中结合的亲和力优于对来自相同物种的未切割的天然C3蛋白或其它C3片段C3a、C3b、C3c或C3f的对应亲和力至少 2 倍(例如，至少 2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、150、200、300、400或500或更多倍)。例如，在一些实施方案中，本文所述的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段能以0.5nM的Kd结合人C3d/C3dg，并且以至少大于2倍的Kd(例如，至少InM)结合未切割的人C3蛋白或其它人C3片段C3a、C3b、C3c或C3f中的至少一个亚群。在其它实施方案中，本文提供了能结合来自人或其它物种的C3d/C3dg多肽的分离的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段，其中当来自相同物种的未切割的天然C3或其它C3片段C3a、C3b、C3c 或 C3f 相对于 C3d/C3dg 摩尔过量(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、
35、40、45、50、60、70、80、90、100、150、200、300、400 或 500 倍摩尔过量)时，所述分离的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段与所述来自人或其它物种的C3d/C3dg多肽结合的Kd低于
1.1nM 或低于 0.5nM。在一些实施方案中，本文提供分离的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合沉积的C3片段。在一些实施方案中，与结合游离的或循环的或未沉积的C3或C3片段相比，本文所述的分离的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段优先结合沉积的C3片段。本文所述的沉积的C3片段包括，但不限于C3d、C3dg及iC3b。游离的或循环的或未沉积的C3包括，但不限于C3和(C3H20)。游离的或未沉积的C3片段包括，但不限于C3a、C3b、C3c和C3f。在一些实施方案中，本文提供了分离的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段，其能结合来自人或其它物种的沉积的C3片段(例如C3d或C3dg)，其中结合的亲和力优于对来自相同物种的游离的或未沉积的C3蛋白(例如，C3或(C3H20))或其它C3片段C3a、C3b、C3c或C3f的相应亲和力至少2倍(例如，至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、
15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、150、200、300、400 或 500 或更多倍)。在一些实施方案中，本文提供分离的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段能结合至少两个物种的C3d或C3dg蛋白(这样的抗体在本文中可称为物种交叉反应性抗体)。在一些实施方案中，所述物种的至少一种是哺乳动物。在一些实施方案中，本文所述的哺乳动物包括，但不限于人、食蟹猴、小鼠及大鼠。在一些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段能结合人和猕猴C3d或C3dg。在另一实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段能结合人和啮齿动物C3d或C3dg。在一些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段能结合人和小鼠C3d或C3dg。在一些实施方案中，本文提供分离的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片 段与补体受体2 (CR2)竞争结合C3d/C3dg。在一些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段，在1:1摩尔浓度比的情况下，在体外或体内将CR2与C3d/C3dg 的结合降低约 20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%,95%或100%(包括本数)，以及这些百分比之间的任何数值。在另一实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段在体外或体内将CR2与C3d/C3dg的结合降低约20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或 100% (包括本数)，以及这些百分比之间的任何数值。在一些实施方案中，本文所述的抗体或其抗原结合片段与CR2竞争结合C3d/C3dg导致降低的或受抑制的B细胞活化。在一些实施方案中，本文所述的竞争导致降低的、减少的或受抑制的宿主体液免疫应答。因此，本文还提供能减少、降低或抑制宿主B细胞活化的分离的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段。本文还提供能减少、降低或抑制宿主体液免疫应答的分离的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段。另一方面，本文提供分离的抗C3d抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段不增强补体活化。在一些实施方案中，用本文所述的抗体或其抗原结合片段处理的宿主具有的补体活性水平为用所述抗体或片段处理前的宿主的补体活性水平的约10%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或 100%(包括本数)，以及这些百分比之间的任何数值。在一些实施方案中，本文提供分离的抗C3d抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段不与因子H竞争结合C3、C3 (H2O)、C3b和C3dg。在一些实施方案中，本文提供分离的抗C3d抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段不活化C3或稳定化补体旁路途径(CAP)或补体经典途径(CCP) C3/C5转化酶。在一些实施方案中，本文所述的分离的抗C3d抗体或其抗原结合片段包括，但不限于单克隆抗体或抗体片段、双链抗体、嵌入式或嵌合抗体或抗体片段、人源化抗体或抗体片段、脱免疫化的人抗体或抗体片段、完全人抗体或抗体片段、双特异性抗体或抗体片段、单价抗体或抗体片段、单链抗体、Fv、Fd、Fab、Fab’及F(ab’)2。在一些实施方案中，本文所述的抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，本文所述的抗体是由杂交瘤细胞系3d-8b/2 (ATCC保藏号PTA-10999)产生的mAb3d8b。在一些实施方案中，本文所述的抗体是由杂交瘤细胞系3d-9a/25(ATCC保藏号PTA-10998)产生的mAb3d9a。在一些实施方案中，本文所述的抗体是由杂交瘤细胞系3d-29/5/2 (ATCC保藏号PTA-11000)产生的mAb3d29。在一些实施方案中，本文所述的抗体或其抗原结合片段包括，但不限于源自mAb3d8b、3d9a、3d29或本文所述的其它mAb的任何工程化或重组抗体或其抗原结合片段，本文所述的其它mAb可通过本领域公知的标准方法容易地筛选或产生，其中的很多方法在本文中进行讨论。通常，可以设计、筛选、产生和/或测试源自本文中的mAb所有这些抗体或片段，从而改变(但并非限制以下)其对C3d/C3dg蛋白的结合亲和力(affinity)、亲和力(avidity)或物种交叉活性，优先于C3或其它C3片段的选择性、或其表达模式和溶解性、稳定性、半衰期、对其它蛋白/靶标的交叉反应性或这些抗体或片段的其它固有活性或性质of，例如效应活性。另一方面，本文提供杂交瘤细胞，其选自:3d_8b/2(ATCC保藏号PTA-10999)、3d-9a/25 (ATCC 保藏号:PTA_10998)、3d_29/5/2 (ATCC 保藏号:PTA_11000)、3d_l 1/14 (ATCC保藏号:PTA-11011)、3d-31/A6/9(ATCC 保藏号=PTA-11027)、3d_3/28/4 (ATCC 保藏号:PTA-11025)、3d-15A9 (ATCC 保藏号:PTA_11012)、3d_10/14/l (ATCC 保藏号:PTA_11010)及3d-16/3/3 (ATCC 保藏号:PTA_11026)。另一方面，本文提供由上文列出的杂交瘤细胞产生的分离的抗体。另一方面，本文提供了人源化、灵长动物化或嵌入式抗体，其包含由上文列出的杂交瘤产生的任何抗体的一组6个CDR。另一方面，本文提供编码本文所述的抗体或其抗原结合片段的分离的核酸分子。另一方面，本文提供含有编码本文所述的抗体或其抗原结合片段的分离的核酸的核酸序列的载体。所述载体包括，但不限于质粒载体、粘粒载体、病毒载体、穿梭载体或本领域公知的用于在原核或真核细胞中表达的任何载体。另一方面，本文提供含有载体的细胞，所述载体含有编码本文所述的抗体或其抗原结合片段的分离的核酸的核酸序列。所述细胞包括，例如，原核细胞或真核细胞。另一方面，本文提供药物组合物，其包含本文所述的任何分离的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，本文提供药物组合物，其包含编码本文所述的抗体或其抗原结合片段的核酸。在一些实施方案中，本文提供包含载体的药物组合物，所述载体含有编码本文所述的抗体或其抗原结合片段的分离的核酸的核酸序列。在一些实施方案中，本文提供包含细胞的药物组合物，所述细胞含有本文所述的 载体。另一方面，本文提供药物组合物，其包含本文所述的任何分离的抗体或其抗原结合片段以及治疗上可接受的赋形剂。合适的赋形剂是本领域公知的，并且在本文中有描述。
本文所述的这类抗体可以用作补体活性的调节剂，特别是补体旁路途径(CAP)的调节剂，从而可以作为预防性或治疗性方案的一部分来调节、稳定化或降低补体活化。此夕卜，所述抗体可以用作靶向部分，用于将预防剂或治疗剂(例如补体抑制剂)靶向于局部补体活化的区域，从而调节、稳定化或降低补体活化。例如，所述抗体或补体活性的靶向调节剂可以用于控制或减轻炎性反应，包括局部的炎性反应或系统性炎性反应。补体系统的调节提供了补体活化相关的多种病理状态的治疗手段。本发明人已设想，将补体抑制剂靶向于补体活化和疾病的位点能促进所述补体抑制剂的有效性。本发明人设想这在一定程度上是正确的，因为靶向于补体活化位点允许补体抑制剂在更集中的区域发挥作用，在补体活化一个或多个位点实现治疗结果，允许较低的有效系统剂量，同时避免或降低不良的或不希望的系统性作用。本发明人发现，将预防剂或治疗剂靶向于补体C3d片段上存在的某些表位在将预防剂或治疗剂局域化方面具有意想不到的效果，从而预防剂或治疗剂能对补体活化位点的组织或细胞发挥最佳作用。因此，本发明人已分离出能结合补体C3d片段的抗体，并使用它们来靶向预防剂和治疗剂。因此，另一方面，本文提供构建体，其包含:(a) C3d结合部分，和(b)补体调节剂部分，其中(a)和(b)是连接的。在一些实施方案中，(a)位于(b)的氨基末端。在一些实施方案中，(b)位于(a)的氨基末端。在一些实施方案中，C3d结合部分包含本文所述的任何抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，补体调节剂部分是化合物、组合物或蛋白。另一方面，本文提供用于调节补体活化的构建体，包含:(a)C3d结合部分，其包含本文所述的所述抗C3d抗体或其抗原结合片段；和(b)补体调节剂部分，其是化合物、组合物或蛋白。在一些实 施方案中，本文公开的构建体调节补体旁路途径(CAP)中的补体活性。在一些实施方案中，本文公开的构建体是融合蛋白。在一些实施方案中，本文公开的构建体的所述C3d结合部分和所述补体调节剂部分是不利用连接子而直接连接的。在一些实施方案中，这两部分是通过化学键直接连接的。在其它实施方案中，这两部分是通过连接子连接的。连接子可以包括，但不限于肽。示例性的肽连接子是，但不限于，(GlySer)n,其中n=l至8 ; (GlyGlyGlySer)n,其中n=l至4 ;(GlyGlyGlyGlySer)n,其中 n=l 至 8 ;或(GlySerSerGly)n,其中 n=l 至 4。在一些实施方案中，所述补体调节剂部分包含补体抑制剂或其生物活性片段。在一些实施方案中，补体抑制剂选自:人膜补体蛋白(MCP)、人衰变加速因子(DAF)、小鼠DAF、小鼠补体受体I相关基因/蛋白y (Crry)、人CD59、小鼠CD59同种型A、小鼠CD59同种型B、人补体受体1(CR1)、人因子H及小鼠因子H、及以上的生物活性片段。本文所述的生物活性片段可以包括，但不限于，人MCP的SCR1-4 (SEQ ID NO:1的氨基酸35-285)、人MCP的SCR1-4加丝氨酸/苏氨酸富集结构域(SEQID NO:1的氨基酸35-326)、人MCP的胞外结构域(SEQ ID NO:1 的氨基酸 35-343)、人 DAF 的 SCR1-4 (SEQ ID NO: 2 的氨基酸 25-285)、人DAF的SCR1-4加O-糖基化丝氨酸/苏氨酸富集结构域(SEQ ID NO: 2的氨基酸25-353)、小鼠DAF的SCR1-4 (SEQ ID NO: 3的氨基酸35-286)、小鼠DAF的SCR1-4加O-糖基化丝氨酸/苏氨酸富集结构域(SEQ ID NO: 3的氨基酸35-362)、Crry的SCR1_5(SEQ ID NO: 7的氨基酸41-400)、Crry的胞外结构域(SEQ ID NO: 7的氨基酸41-405)、缺少GPI锚的人CD59胞外结构域(SEQ ID NO:4的氨基酸26-101)、缺少GPI锚的小鼠CD59同种型A胞外结构域(SEQ ID NO: 5的氨基酸24-95)、缺少GPI锚的小鼠CD59同种型B胞外结构域(SEQID NO: 6 的氨基酸 24-103)、人 CRl 的 SCR1-3 (SEQ ID NO: 8 的氨基酸 42-234)、人 CRl 的SCR1-4(SEQ ID NO: 8 的氨基酸42-295)、人CRl 的 SCR1-10 (SEQ ID NO: 8 的氨基酸42-684)、人CRl 的 SCR8-10(SEQ ID N0:8的氨基酸491-684)、人CR1的SCR8-11(SEQ ID NO:8 的氨基酸491-745)、人CRl 的 SCR15-17 (SEQ ID NO: 8 的氨基酸941-1134)、人CRl 的 SCR15-18 (SEQID N0:8的氨基酸941-1195)、人CR1的SCR22-28(SEQ ID NO:8 的氨基酸 1394-1842)、人因子 H 的 SCR1-4(SEQ ID NO: 9 的氨基酸 21-262)、人因子 H 的 SCR1-5 (SEQ ID NO: 9 的氨基酸 21-320)、人因子 H 的 SCR1-8(SEQ ID NO: 9 的氨基酸 21-507)、人因子 H 的 SCR1-18 (SEQID NO:9的氨基酸21-1104)、小鼠因子H的SCR1-4 (SEQ ID NO: 10的氨基酸19-264)、小鼠因子 H 的 SCR1-5(SEQ ID NO: 10 的氨基酸 19-322)、小鼠因子 H 的 SCR1-8 (SEQ IDNO: 10 的氨基酸19-507)及小鼠因子H的SCR1-18(SEQ ID NO: 10的氨基酸19-1109)。在一些实施方案中，所述补体调节剂部分包含补体活化剂或其生物活性片段。在一些实施方案中，补体活化剂选自:人IgGl、人IgGlFc结构域、人IgM、人IgM Fe结构域、小鼠IgG3、小鼠IgG3Fc结构域、小鼠IgMvjnIl IgM Fe结构域及眼镜蛇毒因子(CVF)。另一方面，本文提供编码本文所述的融合构建体的分离的核酸分子。另一方面，本文提供含有本文所述的融合构建体的核酸序列的载体。载体包括，但不限于质粒载体、粘粒载体、病毒载体、穿梭载体或本领域公知的用于原核或真核细胞中表达的任何载体。另一方面，本文提供含有载体的细胞，所述载体含有编码本文所述的融合构建体的分离的核酸的核酸序列。所述细胞包括，例如，原核细胞或真核细胞。另一方面，本文提供包含本文所述的融合构建体的药物组合物。在一些实施方案中，本文提供包含编码本文所述的融合构建体的核酸的药物组合物。在一些实施方案中，本文提供包含载体的药物组合物，所述载体含有本文所述的融合构建体的核酸序列。在一些实施方案中，本文提供包含细胞的药物组合物，所述细胞含有本文所述的载体。另一方面，本文提供药物组合物，其包含本文所述的融合构建体并还包含治疗上可接受的赋形剂。所述赋形剂包括本领域公知的任何赋形剂。另一方面，本文提供了: (a)编码本文所述的任何抗体、抗原结合片段或构建体的核酸；(b)包含所述核酸的载体(例如，表达载体)；和(C)包含所述载体或表达载体的细胞(例如，细菌、植物、真菌、昆虫或哺乳动物细胞)。另一方面，本文提供了产生本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或构建体的方法。所述方法包括在适于允许上述细胞表达抗体、片段或构建体的条件下，培养所述细胞。所述方法还可以包括从所述细胞或培养所述细胞的培养基纯化所述抗体、片段或构建体。如上文所述，本文还提供下述实验结果，其中本发明人发现，拮抗剂抗C3d抗体(阻止C3d和CR2相联的抗体)能降低哺乳动物中的抗体产生。在不被任何特定理论或作用机制束缚的情况下，本发明人认为，抑制宿主B细胞上C3d或C3dg和CR2之间的相互作用能降低B细胞活化和/或活性。因此，本文提供可用于抑制B细胞活化和/或活性的抗体(例如，抗C3d、 抗CR2或抗C3dg抗体)、抗体的抗原结合片段及构建体，以上所有均可用于降低体液免疫应答(例如，患自身免疫疾病的哺乳动物)等。例如，上述构建体含有抑制B细胞活化或活性的第一部分和能抑制补体活性的第二部分。第一部分可以是，例如，能结合CR2的天然配体(例如C3d，C3dg及iC3b)的抗体或其抗原结合片段。抗体或其抗原结合片段可以是本文所述的任何抗体。在一些实施方案中，第一部分包含能抑制CR2和C3d或C3dg之间的相互作用的拮抗剂抗CR2抗体(或其抗原结合片段)。在一些实施方案中，第二部分可以是，例如，本文所述的任何补体抑制多肽(包括变体和功能片段)。另一方面，本文提供降低个体中体液免疫应答的方法，包括给予所述个体本文公开的分离的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，本文公开的分离的抗体或其抗原结合片段降低所述个体中的B细胞刺激。在一些实施方案中，分离的抗体或其抗原结合片段通过与CR2竞争结合C3d来降低所述个体中的B细胞刺激。在一些实施方案中，个体是哺乳动物。在一些实施方案中，哺乳动物是人。另一方面，本文提供调节个体中补体活化的方法，所述方法包括给予所述个体有效量的本文公开的融合构建体。另一方面，本文提供减少或抑制个体中补体活化的方法，所述方法包括给予所述个体有效量的本文所述的融合构建体。另一方面，本文提供增加个体中补体活化的方法。所述方法包括给予所述个体有效量的本文公开的融合构建体。另一方面，本文提供同时降低个体中补体活化和体液免疫应答的方法。所述方法包括给予所述个体本文所述的融合构建体。另一方面，本文提供治疗患有或疑似患有疾病的个体或使个体免于发展出疾病的方法，其中所述疾病选自:由缺血-再灌注损伤造成的组织损伤、炎性病症、移植物排斥、妊娠相关疾病、药物不 良反应及自身免疫疾病或免疫复合物病，所述方法包括给予所述个体治疗有效量的本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述由缺血-再灌注损伤造成的组织损伤与选自以下的病症相关:心肌梗塞、动脉瘤、中风、出血性休克、挤压伤、多器官衰竭、低血容量性休克、肠缺血、脊髓损伤和外伤性脑损伤。在一些实施方案中，所述炎性病症选自:烧伤、内毒素血症、感染性休克、成人呼吸窘迫综合征、体外循环、血液透析、过敏性休克、哮喘、血管性水肿、克罗恩病、镰状细胞贫血、链球菌感染后肾小球肾炎、膜性肾炎及胰腺炎。在一些实施方案中，所述移植物排斥是超急性异种移植物排斥。在一些实施方案中，所述妊娠相关疾病选自:习惯性流产和先兆子痫。在一些实施方案中，所述药物不良反应选自:药物过敏和IL-2诱导的血管渗漏综合征。在其它实施方案中，所述自身免疫疾病或免疫复合物病选自:重症肌无力、阿尔茨海默病、多发性硬化、风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎、胰岛素依赖型糖尿病、急性播散性脑脊髓炎、爱迪生氏病、抗磷脂抗体综合征、自身免疫性肝炎、克罗恩病、古德帕斯丘综合征、格雷夫斯病、格林-巴利综合征、桥本氏病、特发性血小板减少性紫癜、天疱疮、修格兰氏综合征、高安氏动脉炎、自身免疫性肾小球肾炎、II型膜增生性肾小球肾炎、阵发性夜间血红蛋白尿、年龄相关性黄斑变性、糖尿病性黄斑病、葡萄膜炎、视网膜变性疾病、糖尿病性肾病、局灶性节段性肾小球硬化、ANCA相关性血管炎、溶血性尿毒症综合征及非典型溶血性尿毒症综合征。在一些实施方案中，所述自身免疫性肾小球肾炎选自:免疫球蛋白A肾病和I型膜增生性肾小球肾炎。一方面，本文提供治疗患有或疑似患有疾病的个体或使个体免于发展出疾病的方法，其中所述疾病选自:癌症、病毒感染、细菌感染、寄生虫感染及真菌感染，所述方法包括给予所述个体能有效增加所述个体中补体活化的量的本文所述的任何构建体(例如，本文所述的能活化补体的构建体)。在本文所述的任何方法的一些实施方案中，个体是哺乳动物。在本文所述的任何方法的一些实施方案中，个体是人。另一方面，本文提供将补体调节蛋白靶向于个体内的区域(例如组织和/或细胞)的方法，其中补体C3活化片段与所述区域共价连接。所述方法包括:(a)给予所述个体包含有效量的作为治疗剂的靶向补体调节蛋白的组合物。在一些实施方案中，个体是哺乳动物。在一些实施方案中，哺乳动物是人、非人灵长类动物(例如，食蟹猴)、小鼠或大鼠。在一些实施方案中，通过注射给予组合物。在一些实施方案中，注射是肠胃外、眼内、静脉内、皮下或肌肉内注射。祀向部分可以是,例如,单克隆抗体,其能特异性地结合选自C3d和C3dg的结合伴侣；或抗体片段，其保留与各自结合伴侣结合的能力。在一些实施方案中，单克隆抗体能结合选自C3d和/或C3dg的结合伴侣，但不结合C3、C3a、C3b、C3c或C3f (例如，从活化的血清通过免疫沉淀法测定)。在一些实施方案中，靶向部分包含融合蛋白，所述融合蛋白包含与人免疫球蛋白同种型Gl (IgGl)或G2(IgG2)的Fe-结构域融合的C3d结合Fv-结构域。在一些实施方案中，融合蛋白包含选自3d9a，3d29和3d8b的抗体的Fv-结构域，其与人免疫球蛋白同种型Gl (IgGl)或其它IgGs或IgG2/4嫁接体的Fe-结构域融合。在本文所述的任何实 施方案中，补体介导的炎症可以与由缺血-再灌注损伤造成的组织损伤、炎性病症、移植物排斥、妊娠相关疾病、药物不良反应及自身免疫疾病或免疫复合物病有关。在本文所述的任何实施方案中，由缺血-再灌注损伤造成的组织损伤可以与选自以下的病症相关:心肌梗塞、动脉瘤、中风、出血性休克、挤压伤、多器官衰竭、低血容量性休克、肠缺血、脊髓损伤和外伤性脑损伤。在本文所述的任何实施方案中，炎性病症可以选自烧伤、内毒素血症、感染性休克、成人呼吸窘迫综合征、体外循环、血液透析、过敏性休克、哮喘、血管性水肿、克罗恩病、镰状细胞贫血、链球菌感染后肾小球肾炎、膜性肾炎及胰腺炎。在本文所述的任何实施方案中，移植物排斥可以是超急性异种移植物排斥。在本文所述的任何实施方案中，妊娠相关疾病可以选自习惯性流产和先兆子痫。在本文所述的任何实施方案中，药物不良反应可以选自药物过敏和IL-2诱导的血管渗漏综合征。在本文所述的任何实施方案中，自身免疫疾病或免疫复合物病可以选自重症肌无力、阿尔茨海默病、多发性硬化、风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎、胰岛素依赖型糖尿病、急性播散性脑脊髓炎、爱迪生氏病、抗磷脂抗体综合征、自身免疫性肝炎、克罗恩病、古德帕斯丘综合征、格雷夫斯病、格林-巴利综合征、桥本氏病、特发性血小板减少性紫癜、天疱疮、修格兰氏综合征、高安氏动脉炎、自身免疫性肾小球肾炎、II型膜增生性肾小球肾炎、阵发性夜间血红蛋白尿、年龄相关性黄斑变性、糖尿病性黄斑病、葡萄膜炎、视网膜变性疾病、糖尿病性肾病、局灶性节段性肾小球硬化、ANCA相关性血管炎、溶血性尿毒症综合征及非典型溶血性尿毒症综合征。在本文所述的任何实施方案中，自身免疫性肾小球肾炎可以选自免疫球蛋白A肾病和I型膜增生性肾小球肾炎。另一方面，除非另外指出或在特定上下文中明确表示，本文提供了与本文所述的方法有关的本文所述的任何组合物的用途。本文所述的任何组合物还可以用于制备在本文所述的方法中使用的药物。另一方面，本文提供了制品或试剂盒，其含有药物组合物以及所述药物组合物在本文所述的方法中的使用说明，所述药物组合物包含有效量的任何靶向预防剂或治疗剂部分。因此，在一些实施方案中，制品包含药物组合物的使用说明，所述药物组合物包含有效量的融合蛋白，所述融合蛋白包含与预防或治疗部分连接的能结合选自C3d和C3dg的结合伴侣的单克隆抗体。药物组合物还可以包含一种或多种药学可接受的赋形剂，其经配制用于给予本文所述的个体。试剂盒还可以包含用于给药的装置，例如注射器、吸入器或可用于系统给药的其它装置。另一方面，本文提供了制品，其包含:包含标签的容器；和包含本文所述的任何抗体或抗原结合片段或构建体的组合物，其中所述标签表明所述组合物是用于给予患有、疑似患有或有风险发展为补体相关病症的人。制品可以包含一种或多种其它活性剂。另一方面，本文提供了治疗试剂盒，其包含:(i)本文所述的任何抗体或其抗原结合片段，和(ii)用于将抗体或抗原结合片段递送至人的装置；或(ii)本文所述的任何构建体，和(iv)用于将构建体递送至人的装置。所述装置可适于将构建体或抗体或其抗原结合片段皮下递送至人。所述装装置可适于将构建体或抗体或其抗原结合片段眼内递送至人。所述装置可适于将构建体或抗体或其抗原结合片段关节内递送至人。在一些实施方案中，装置可以是注射器，例如，双筒注射器。在一些实施方案中，装置可以是包含构建体或抗体或其抗原结合片段的经巩膜贴片或隐形眼镜。在一些实施方案中，装置适于将构建体或抗体或其抗原结合片段肺内递送递送至人。例如，装置可以是吸入器或喷雾器。

在一些实施方案中，试剂盒包括至少一种用于治疗人的补体相关病症的其它活性剂。另一方面，本文提供了预装注射器，其包含:(a)本文所述的任何抗体或其抗原结合片段或本文所述的任何构建体。构建体或抗体或其抗原结合片段可经配制用于眼内、玻璃体内或关节内给药。 在一些实施方案中，构建体或抗体或其抗原结合片段经配制用于肌肉内或皮下给药。在一些实施方案中，注射器包含构建体或抗体或其抗原结合片段的至少一个药学单位剂量形式。在一些实施方案中，注射器包含0.05mg至IOmg的构建体或抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，注射器包含约Img至IOOmg的构建体或抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，每个药学单位剂量形式的体积为0.02mL至ImL (包括本数)。在一些实施方案中，药学单位剂量形式的体积不大于0.05mL。活性预防或治疗部分优选是补体调节剂部分，并且当靶向部分在体内结合其结合伴侣时，活性预防或治疗部分优选能对周围的细胞和组织发挥局部作用。因为预防或治疗部分被靶向于补体被活化的局部组织，所述预防或治疗部分的一种或多种不利的系统性作用可以降低或去除。
2型补体受体(CR2)和补体成分C3d、C3dg和iC3b之间的相互作用对于正常免疫应答的启动是必需的。CR2与C3d复合时的两个N末端短同源重复(SCR1-2)结构域的晶体结构已被阐明。然而，关注于CR2和C3d的多个生物化学和生物物理学研究似乎与可获得的结构数据相冲突。例如，关注于CR2上的C3d结合位点的其它公开的诱变和异核NMR谱研究表明，CR2-C3d共晶结构复合物可以反映出溶液条件下复合物形成的不完全反射。关于C3d上的CR2结合位点，Isenman和同事进行的诱变研究提示结合过程中C3d上的电负性凹袋。该表面与复合物晶体结构中鉴定出的CR2-C3d界面是分开的。Isenman和同事的新出版物报道了 CR2与C3d的共晶结构，其符合在C3d的凹陷表面中CR2的结合。参见van denElsen et al.A Crystal Structure of the Complex Between HumanComplementReceptor2and Its Ligand C3d.Science332，608(2011)。本文所用的术语“抗体片段”、“抗原结合片段”或相似术语是指保留结合抗原(例如，补体成分C3dg、C3d或CR2)的能力的抗体片段，例如，单链抗体、单链Fv片段(scFv)、Fd片段、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段。scFv片段单多肽链，其包括scFv所来源于的抗体的重链可变区和轻链可变区。此外，能结合补体成分C3d或C3dg蛋白的双链抗体(Pol jak (1994) Structure〗(12): 1121-1123; Hudson et al.(1999) J.Tmmunol.Methods23(l-2): 177-189，通过引用将上述每篇文献的公开内容整体并入本文)、小抗体、三链抗体(Schoonooghe et al.(2009) BMC BiotechnolR: 70)及结构域抗体(也称为“重链免疫球蛋白”或胳马它抗体；Holt et al.(2003) TrendsBiotechnol21 (11): 484-490),(通过引用将上述每篇文献的公开内容整体并入本文)可以合并到本文所述的组合物中，以及及用于本文所述的方法。“多肽”、“肽”和“蛋白”在本文可交换使用，并表示任何氨基酸的肽键连接的链，无需考虑长度或翻译后修饰。如下文所述，本文所述的多肽可以是，例如，野生型蛋白、野生型蛋白的生物活性片段或野生型蛋白或片段的变体。根据本文，变体可含有氨基酸取代、缺失或插入。取代可以是保守型的或非保守型的。保守型取代通常包括以下各组的取代:甘氨酸和丙氨酸；缬氨酸、异亮氨酸和亮氨酸；天冬氨酸和谷氨酸；天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸和苏氨酸；赖氨酸、组氨酸和精氨酸；以及苯丙氨酸和酪氨酸。在本文所述的任何构建体的一些实施方案中，补体调节剂部分是补体调节多肽(例如，补体抑制多肽)J^^B，MCP、DAF、Crry、CRl、ra59或因子H。多肽可以是人多肽或非人物种的多肽。例如，补体调节多肽可以来自非人灵长类动物(例如，猩猩、黑猩猩、猕猴、大猩猩、狐猴或长臂猿)、马、牛、猪、绵羊、山羊、狗、猫或啮齿动物(例如，小鼠、兔、仓鼠、沙鼠、豚鼠或大鼠)。在一些实施方案中，与相应的野生型序列相比，变体补体调节多肽含有不多于60 (例如，不多于 59、58、57、56、55、54、53、52、51、50、49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或I)处氨基酸取代。氨基酸取代可以是保守型的、非保
守型的或两者的混合。在一些实施方案中，变体多肽可以含有一处或多处缺失或添加，或一处或多处缺失、添加及取代的组合。在一些实施方案中，在多肽的每100个氨基酸中，变体多肽含有不多于6(例如，不多于5、4、3、2或I)处氨基酸缺失、添加或取代。在补体调节多肽包含SCR的实施方案中，变体多肽在补体调节 多肽CR中不含有氨基酸取代、缺失或添加。
在一些实施方案中，变体补体调节多肽包含与相应的野生型氨基酸序列的同一性为至少 70%(例如，至少 71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99%)的氨基酸序列。例如，在一些实施方案中，含有hMCP的全部4个SCR的人MCP的变体功能片段包含与SEQ ID NO:1的氨基酸35至285的同一性为至少 70%(例如，至少 71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98 或 99%)的氨基酸序列。本文所述的补体调节多肽或变体多肽的功能片段比全长多肽短。变体多肽及野生型蛋白或变体的功能片段保留相应的野生型多肽的补体调节活性的至少50%(例如，至少 51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98 或 99% 或更高百分比)。例如，变体可溶性⑶59多肽(例如，与SEQ ID NO:4的氨基酸26至102 (可溶性人⑶59)具有90%或更高同一性的多肽)保留具有SEQ ID NO:4氨基酸26至102的相应野生型可溶性人CD59蛋白的补体调节活性(例如，抑制终末补体复合物形成的能力)的至少50%。在一些实施方案中，变体补体调节多肽或补体调节多肽的功能片段具有的能力高于相应的野生型蛋白调节补体活性的能力的100%。检测和/或定量补体活性的方法是本领域已知的并且在本文中有描述。本文所用的百分比(%)氨基酸序列同一性被定义为:在进行序列比对以及有必要的话引入空位而达到最大序列同一性百分比之后，候选序列中与参考序列中相同的氨基酸的百分比。可以以本领域技术人员已知的多种方式实现出于测定序列同一性百分比的比对，例如，利用可公开获得的计算机软件，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2或Megalign(DNASTAR)软件。可通过已知方法确定测量比对的合适参数,包括在所比较的序列全长实现最大比对所需的算法。除非另外定义，本文所用的所有技术和科学术语具有的含义与本申请相关领域普通技术人员所通常理解的含义相同。如果出现冲突，以本文为准，包括定义。下文描述了示例性的方法和材料，但与本文所述的方法和材料相似或等同的方法和材料也可用于本文公开的方法和组合物的实践或测试。通过引用将本文涉及的所有出版物、专利申请、专利及其它文献整体并入本文。根据以下的描述、实施例及权利要求，本文的其它特征和优势(例如，治疗或预防补体相关病症的方法)将更加清楚。保藏材料简要描述杂交瘤系3d_9a/25于2010年5月26日保藏，并已被指定为ATCC专利保藏号PTA-10998。杂交瘤系3d_8b/2于2010年5月26日保藏，并已被指定为ATCC专利保藏号PTA-10999。杂交瘤系3d-29/5/2于2010年5月26日保藏，并已被指定为ATCC专利保藏号PTA-11000。

杂交瘤系3d-10/14/l于2010年6月2日保藏，并已被指定为ATCC专利保藏号PTA-11010。
杂交瘤系3d-ll/14于2010年6月2日保藏，并已被指定为ATCC专利保藏号PTA-1101I。杂交瘤系3d_15A9于2010年6月2日保藏，并已被指定为ATCC专利保藏号PTA-11012。杂交瘤系3d-3/28/4于2010年6月9日保藏，并已被指定为ATCC专利保藏号PTA-11025。杂交瘤系3d-16/3/3于2010年6月9日保藏，并已被指定为ATCC专利保藏号PTA-11026。杂交瘤系3d_31/A6/9于2010年6月9日保藏，并已被指定为ATCC专利保藏号PTA-11027。附图简要描述

图1展示了在局部位点处的补体活化的生理条件下发生的C3的切割。在C3转化酶的存在下，C3被切割为C3a和C3b，后者与在该位点经历补体活化的细胞或组织共价连接。在因子I和辅因子的存在下，C3b被进一步快速切割为C3f和iC3b。在因子I和CRl的存在下，iC3b被进一步切割为C3c及C3dg，C3c被释放，C3dg保持与经历补体活化的细胞/组织连接。然后，C3dg通过蛋白酶的局部作用被转化为C3d，然而，这不会改变其受体结合或细胞/组织连接性质。总之，所述位点处补体活性的相对短期的标志物包括可溶性C3a和组织结合C3b的存在。中期标志物包括iC3b、C3c和C3f。然而，补体活化的最持久的标志物是C3dg和C3d，其保持与细胞/组织共价连接数天至数周。关于切割反应的描述，可参见 Janssen et al., Nature444:213 (2006)。图2展示了 C3的切割片段的分子量和结构。预期的是，针对C3dg产生的单克隆抗体可通过Western印迹或ELISA结合C3的α肽(115kD)、C3b的。肽(IlOkD)、iC3b的α ' I肽(67kD)或约35kD片段C3dg (或稍小的C3d片段)，但并非一定如此。本发明的优选单克隆抗体仅能结合后两个C3dg和C3d，或对于后两个具有优先性。图3展示了在Western印迹分析中，单克隆抗体3d8b、3d9a和3d29 (第I组)对人C3d的优先结合。通过比较,单克隆抗体3dll和3d31 (第2组)在Western印迹分析中结合C3d和其它C3片段。通过Western印迹分析,其它抗C3d抗体(第3组)不能清晰地识别片段。作为阳性对照，多克隆抗C3抗体识别所有条带。图4展示了单克隆抗体与C3调理素作用的酵母聚糖颗粒的结合，所述颗粒来自:使小鼠血清与酵母聚糖孵育，并仅利用内源性可用机制产生C3片段iC3b和C3dg/C3d。值得注意的是，仅第I组抗体识别结合于该靶标的C3片段。图5展示了仅第I组单克隆抗体对来自酵母聚糖活化的血浆的α’ I和C3dg条带的免疫沉淀，第2组或第3组抗体的成员未发生免疫沉淀。该结果表明，第I组抗体识别iC3b和C3dg上暴露的表位，但不识别C3或C3b的表位。图6的动力学数据显示了渐增抗体浓度下的克隆3d8b、3d9a和3d29对固定在Biacore芯片上的C3d的高亲和力结合。所示的线代表上样90、30和IOnM的抗体。数据符合简单1:1朗缪尔结合模型。各单克隆抗体的Kd包括在传感图中。图7展示了通过ELISA，抗C3d单克隆抗体对人CR2-MBP与人C3d的结合的影响。上方的线(菱形)展示了在缺少抗C3d单克隆抗体3d8b时的结合的一个实例，下方的线(方块)展示了在存在抗C3d单克隆抗体3d8b时的结合的一个实例。右侧的总结性直方图展示了在存在所示单克隆抗体的情况下，CR2和C3d的结合百分比。图8是单克隆抗体的性质的总结。注意到，第I组的单克隆抗体(3d8b、3d9a和3d29)共同具有功能效应。图9A和9B展示了在因子H缺陷型(fH+)小鼠注射0.5mg抗体之后，单克隆抗体3d8b、3d9a和3d29与组织结合的iC3b和C3dg C3片段的结合，而由3d31所示的其它抗C3d抗体却未发生结合(图9B)。注意到，在这些小鼠中，在未注射抗C3d单克隆抗体的情况下，不存在肾小球IgG。图9A是阳性对照，通过用抗C3片段抗体的染色显示了肾小球C3片段的存在，其主要是iC3b和C3d的形式。图10展示了针对C3d的单克隆抗体对补体活化的作用(AH50)以及第I组单克隆抗体未增强补体活化。测量了补充有10、20和40 μ g每种抗体的血清中的细胞溶解，并与单独的血清中的细胞溶解进行比较。Y轴显示了与单独血清中的溶解相比，具有抗体的血清中溶解的百分比改变。图11展示了用于评价抗C3d单克隆抗体在对模型补体依赖性抗原(即，绵羊红细胞)的体液免疫应答的效应的方案。图12展示了抗C3d单克隆抗体对体液免疫应答中的影响，其是通过第17天(上图)和第30天(下图)时抗原特异性IgGl的产生来进行评价。各单克隆抗体对抗原特异性免疫应答的影响的P值代表与单独SRBC相比的IgGl水平的差异，并且相比于其它测试抗体，显示出第I组单克隆抗体3d8b和3d29所产生的抑制。发明详细描述本文提供了能结合补体成分蛋白的分子等，所述分子例如抗体，例如抗C3dg抗体或抗C3d抗体。所述 分子可用于，例如，抑制B细胞的活性和/或活化。所述分子还可用于将补体调节剂靶向于补体活化的局部位点。因此，本文还提供包含靶向部分(例如，本文所述的抗C3d或抗C3dg抗体或其抗原结合片段)和活性预防、治疗或诊断部分的融合分子/构建体。在一些实施方案中，靶向部分包含能结合补体相关蛋白的分子(例如，能结合C3d和/或C3dg的抗体或其抗原结合片段)。治疗部分可以是，例如，补体调节多肽，例如，但不限于，DAF、CD59、Crr y、因子H、MCP或CR I。此外，本文提供利用一种或多种补体成分蛋白结合分子和/或融合分子来治疗或预防个体中病症的方法。例如，如本文所详细说明的，本文所述的抗C3d抗体或其抗原结合片段可用于抑制个体(例如，患有自身免疫疾病的人)中的体液免疫应答。还提供了，产生单克隆抗体的新方法，包括用人C3d免疫补体C3缺陷型小鼠，进行融合，以及利用基于血清的生长条件中含有的C3的最小暴露和用于支持杂交瘤生长的喂养细胞群体，进行初步筛选。在大量的体外和体内分析之后，发现一亚组mAb具有独特的性质，其总体上提供证据表明:这些mAb可用于鉴定补体活化的体内位点，并且借助于这种能力，可用于鉴定与这些位点直接相关的功能模块。下文详细说明了示例性的组合物(例如，药物组合物和制剂)和使用组合物的方法，但并非意图以任何方式限制本申请的范围。组合物本文所述的组合物含有能结合补体成分蛋白的分子。例如，这些分子包括小分子、核酸或核酸类似物、肽、肽模拟物或非核酸或肽的大分子。在一些实施方案中，这些分子是蛋白或蛋白片段。在一些实施方案中，这些分子是抗体或保留抗原结合活性的抗体片段。在一些实施方案中，这些分子是抗C3dg抗体、抗C3d抗体或任何上述的抗原结合片段。本文所用的术语“抗体”或“免疫球蛋白”是指蛋白的免疫球蛋白(Ig)超家族的蛋白(包括糖蛋白)。抗体或免疫球蛋白(Ig)分子四聚体，包含两条相同的轻链多肽和两条相同的重链多肽。两条重链通过二硫键连接在一起，每条重链与轻链通过二硫键连接。每个全长Ig分子含有至少两个具体靶标或抗原的结合位点。免疫系统产生数种不同类的Ig分子(同种型)，包括IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，每一类通过存在的特定种类的重链多肽进行区分:IgA中为a，IgD中为δ，IgE中为ε，IgG中为Y，IgM中为μ。IgG中至少发现5种不同的Y重链多肽(同种型)。相比之下，仅有两种轻链多肽同种型，被称为K和λ链。抗体同种型的不同特征由重链的恒定结构域的序列界定。IgG分子包含通过二硫键结合在一起的两条轻链(K或λ形式)和两条重链(Y形式)。K和λ形式的IgG轻链各含有称为可变区(还可被称为“'区”、“Vk区”或“VA区”)的相对可变的氨基酸序列的结构域和称为恒定区区)的相对保守的氨基酸序列的结构域。同样，每条IgG重链含有可变区(Vh区)和一个或多个保守区:完整的IgG重链含有3个恒定结构域(“CH1区”、“Ch2区”和“Ch3区”)和铰链区。在每个'区或Vh区中，高度可变区，也称为互补决定区(“⑶R”)，分布于相对保守的框架区(“FR”)之间。通常，轻链或重链多肽的可变区含有4个FR和3个CDR，它们沿着多肽按照以下顺序排列=NH2-FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-C00H。CDR和FR共同决定IgG结合位点的三维结构，并因此决定了 IgG分子能结合的具体靶蛋白或抗原。每个IgG分子是二聚体的，能结合两个抗原分子。木瓜蛋白酶对二聚体IgG的切割产生两个相同的抗原结合片段(“Fab”)和“Fe”片段或Fe结构域，之所以称为“Fe”片段或Fe结构域，是因为其易于结晶。本文所用的术语“抗体”还指通过本领域已知的和本文所述的任何多种方法产生的整体的或完整的抗体(例如，IgM、IgG、IgA、IgD或IgE)分子。术语“抗体”包括多克隆抗体、单克隆抗体、嵌入式或嵌合抗体、人源化抗体、脱免疫化的人抗体及完全人抗体。抗体可以在任何多种物种中制备或来源于任何多种物种，例如，哺乳动物，例如人、非人灵长类动物(例如，猴、狒狒或黑猩猩)、马、牛、猪、绵羊、山羊、狗、猫、兔、豚鼠、沙鼠、仓鼠、大鼠及小鼠。抗体可以是纯化的抗体或重组抗体。C3和C3片段的抗体本文所述的组合物可含有能结合C3或C3片段(例如iC3b、C3d和C3dg)的抗体或其抗原结合片段，例如，由本文所述的保藏于ATCC的杂交瘤细胞系产生的抗体。在一些实施方案中，相比于可商购抗人C3d抗体与C3d的结合，本文所述的抗体以更高的特异性和更宽的物种交叉反应性结合C3d。在一些实施方案中，可商购抗C3d抗体被指定为Quidel 目录号 A207和A250,及可从Quidel 公司购得(Quidel Corp., San Diego andSantaClara, CA)。能结合C3和结合切割片段C3b、iC3b和C3d的抗体是已知的。例如，参见美国专利第 6，572，856 号，Taylor; Tosic et al., J.1mmunological Methods, 120:241-249 (1989)
;Sokoloff et al., CancerImmunology and Immunotherapy, 49:551-562(2000);Mastel1set al., Molecular Immunology, 40:12 13-1221(2004);Dilillo et al., MolecularImmunology, 43:1010-1019 (2006) ; Campagne, US2009/0081211; Etemad-Gilbertson et al.,美国专利申请公布第 2009/0175875 号;Aguado etal.，J.Clin.1nvest.，76:1418-1426(1985)。通过引用将这些文件的公开内容全部并入本文。这些抗体及其功能片段可用于本发明的靶向部分，用于将治疗片段引导至经历活化的补体活性并因此表达C3或其片段的组织。然而，先前已知的C3、C3b和C3d的抗体不包括本文鉴定的抗体的全部特征。在一些实施方案中，本文提供了能结合人C3d蛋白中的表位的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，本文提供了能结合人C3dg蛋白中的表位的抗体或其抗原结合片段。例如，抗C3d或抗C3dg抗体能结合人补体成分C3d蛋白的抗原性肽片段内的表位或与人补体成分C3d蛋白的抗原性肽片段重叠的表位，或能结合人补体成分C3dg蛋白中的表位。在一些实施方案中，这些抗C3d或抗C3dg抗体是单克隆抗体或保持抗原结合活性的抗体片段。在一些实施方案中，这些单克隆抗体包括由以下细胞产生的抗体:杂交瘤细胞3d-8b/2 (ATCC 保藏号:PTA_10999)、3d_9a/25 (ATCC 保藏号:PTA_10998)、3d_29/5/2 (ATCC保藏号:PTA-11000)、3d-l 1/14 (ATCC 保藏号:PTA-11011), 3d-31/A6/9 (ATCC 保藏号:PTA-11027)、3d3/28/4 (ATCC 保藏号:PTA_11025)、3d_15A9 (ATCC 保藏号:PTA_11012)、3d-10/14/l (ATCC 保藏号:PTA_11010)及 3d_16/3/3 (ATCC 保藏号:PTA_11026)。在一些实施方案中，本文提供抗体或其抗原结合片段，其能结合抗体3d8b、3d9a、3d29、3dll、3d31、3d3、3dl5、3dl0及3dl6中任一个所识别的表位内的表位，或能结合与抗体3d8b、3d9a、3d29、3dll、3d31、3d3、3dl5、3dl0及3dl6中任一个所识别的表位重叠的表位。在一些实施方案中，能结合抗体3d8b、3d9a、3d29、3dll、3d31、3d3、3dl5、3dl0及3dl6中任一个所识别的表位内的表位，或能结合与抗体3d8b、3d9a、3d29、3dll、3d31、3d3、3dl5、3dl0及3dl6中任一个所识别的表位重叠的表位的这些抗体或其抗原结合片段不与抗体3d8b、3d9a、3d29、3dll、3d31、3d3、3dl5、3dl0及3dl6中的任一个竞争结合C3d或C3dg。在一些实施方案中，能结合抗体3d8b、3d9a、3d29、3dll、3d31、3d3、3dl5、3dl0及3dl6中任一个所识别的表位内的表位，或能结合与抗体3d8b、3d9a、3d29、3dll、3d31、3d3、3dl5、3dl0及3dl6中任一个所识别的表位重叠的表位的这些抗体或其抗原结合片段与包括3(1813、3(19&、3(129、3(111、3d31、3d3、3dl5、 3dl0及3dl6在内的抗体中的至少一个竞争结合C3d或C3dg。在一些实施方案中，能结合抗体3d8b、3d9a、3d29、3dll、3d31、3d3、3dl5、3dl0及3dl6中任一个所识别的表位内的表位，或能结合与抗体3d8b、3d9a、3d29、3dll、3d31、3d3、3dl5、3dl0及3dl6中任一个所识别的表位重叠的表位的这些抗体或其抗原结合片段抑制抗体3d8b、3d9a、3d29、3dll、3d31、3d3、3dl5、3dl0 及 3dl6 中的至少一个与 C3d 或 C3dg 的结合。本文所用的术语“表位”是指蛋白(例如，人补体成分C3d或C3dg蛋白)上被抗体结合的位点。“重叠表位”包括至少I个(例如，2、3、4、5或6)共同氨基酸残基。本文所用的术语“特异性结合”或“特异性地结合”是指两个分子形成在生理条件下相对稳定的复合物(例如，抗体和补体成分C3d或C3dg蛋白之间的复合物)。通常，当缔合常数(Ka)高于IO6M-1时，结合被认为是特异性的。因此，抗体能特异性地以至少(或大于)IO6 (例如，至少或大于 107、108、109、10lcl、10n、1012、1013、1014 或 IO15 或更高)M_1 的 Ka 结合C3d或C3dg蛋白。确定抗体是否与蛋白抗原结合和/或测定抗体对蛋白抗原的亲和力的方法是本领域已知的。例如，可以使用多种技术检测和/或定量抗体与蛋白抗原的结合，例如，但不限于，Western印迹,斑点印迹,表面等离子体共振法(例如，BIAcore system; PharmaciaBiosensor AB, Uppsala, Swedenand Piscataway, N.J.)或酶联免疫吸附测定(ELISA)。参见，例如，Harlow andLane (1988) “Antibodies:A Laboratory Manual，，Cold SpringHarborLaboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.;Benny K.C.Lo(2004) “AntibodyEngineering:Methods and Protocols, ”Humana Press (ISBN:1588290921) ;Borrebaek(1992) “Antibody Engineering, A Practical Guide, ^ff.H.Freeman andC0., NY; Borrebaek (1995) “Antibody Engineering,，，2ndEdition, Oxford UniversityPress, NY, Oxford;Johne et al.(1993)J.1mmunol.Meth.160:191-198;Jonssonet a 1.(I 993) Ann.BioI.C Iin.5 1:1 9-26;andJonssοn et a 1.(19 9 1)Biotechniquesll:620-627。也可参见，美国专利第 6，355，245 号。在一些实施方案中，本文提供的抗C3d或抗C3dg抗体或其抗原结合片段能交叉阻断能结合人补体成分C3d或C3dg蛋白内的表位或与人补体成分C3d或C3dg蛋白重叠的表位的另一抗体或结合伴侣的结合。在一些实施方案中，抗C3d或抗C3dg抗体或其抗原结合片段能交叉阻断能与人补体成分C3d或C3dg蛋白的肽片段内的表位或与人补体成分C3d或C3dg蛋白的肽片段重叠的表位结合的抗体的结合。本文所用的术语“交叉阻断抗体”是指这样的抗体或其保持抗原结合活性的抗体片段:与不存在交叉阻断抗体或其保持抗原结合活性的抗体片段的情况下，抗C3d或抗C3dg抗体或其保持抗原结合活性的抗体片段与补体成分C3d或C3dg蛋白上的表位的结合的量相比，所述交叉阻断抗体或其保持抗原结合活性的抗体片段能降低抗C3d或抗C3dg抗体或其保持抗原结合活性的抗体片段与所述表位结合的量。确定第一抗体或其抗体片段能否交叉阻断第二抗体或其抗体片段与表位的结合的合适的方法是本领域已知的。例如，通过比较在存在和不存在测试抗体的情况下3d-9a/25抗C3d单克隆抗体(由杂交瘤细胞系ATCC号PTA-11025产生)与C3d的结合，可以鉴定交叉阻断抗体。在这样的情况下，与不存在测试抗体的情况下3d-9a/25抗体的结合相比，在存在测试抗体的情况下3d-9a/25抗体的结合降低指示测试抗体是交叉 阻断抗体。鉴定具体抗体(例如，抗C3d或抗C3dg抗体)的结合表位的方法也是本领已知的。例如，抗C3d或抗C3dg抗体的结合表位可以通过测定该抗体与补体成分C3d或C3dg蛋白的数种(例如，3、4、5、6、7、8、9、10、15、20或30或更多)重叠肽片段的结合被鉴定出来。然后，将每个不同重叠肽结合到固相载体上的独特位置上，例如，多孔测试板的分别的孔。然后，通过使抗C3d或抗C3dg抗体在允许抗体与其表位结合的条件下与测试板中的每个肽接触一段时间来测试抗C3d或抗C3dg抗体。通过洗涤每个孔，去除未结合的抗C3d或抗C3dg抗体。然后，使能结合抗C3d或抗C3dg抗体(如果板的孔中存在的话)的可检测地标记的二抗与每个孔接触，以及通过洗涤步骤去除未结合的二抗。孔中可检测地标记的二抗是否产生的可检测的信号或产生的可检测的信号的量指示抗C3d或抗C3dg抗体结合与孔相联的某个肽片段。关于鉴定抗C5抗体结合表位的相似方法，可参见，例如，Harlow and Lane (同上)，Benny K.C.Lo (同上)及美国专利申请公布第20060153836号，通过引用将上述文献的公开内容整体并入本文。利用BIAcore层析技术，也可以鉴定抗体结合的具体表位(参见，例如，Pharmacia BIAtechnologyHandbook, “Epitope Mapping, ” Section6.3.2，(Mayl994);和 Johne et al.(1993)J.Tmmunol.Methodsl60:191-8)。在一些实施方案中，本文提供能以1.1父10_、或更佳的1(1)值特异性地结合人〇3(1的抗C3d或抗C3dg抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，Kd值为1.1X10_9M至3.6 X IO^10M0在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段以约Kd=L 06 X 10_9M的亲和力结合人C3d。在一些实施方案中，抗体是mAb3d29。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段以约KD=4.65X10,11的亲和力结合人C3d。在一些实施方案中，抗体是mAb3d8b。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段以约Kd=SJTXKTkiM的亲和力结合人C3d。在一些实施方案中，抗体是mAb3d9a。确定抗体亲和力的测定方法是标准且公知的技术。作为测定亲和力的示例性的方法，BIAcore分析被用于定量人源化抗体对人C5a的分别的亲和力。参见,例如，Karlssonand Larsson (2004)Methods Mol Biol248:389-415。简单而言，利用捕获技术，用 3-4 个浓度的人C5a(抗原)筛选每个人源化抗体。抗体被直接固定于CM5传感器芯片上的抗Fe (人)捕获，0.6nM至5.9nM的不同浓度的人C5a通过传感器芯片表面。在每个循环后，用20mM HC1、0.02%P20使表面再生，从而去除结合的抗体和抗原。利用Biacore BIA评价软件，使用1:1朗缪尔模型拟合(Rmax:全局拟合；R1:局部拟合)，评价数据。从拟合获得动力学信息，例如(ka:缔合速率常数)，(kd:解离速率常数)和KD(平衡解离常数)。这些技术和相似技术适用于其它抗体，例如结合C3d或C3dg的抗体。在一些实施方案中，本文提供与结合补体成分蛋白C3、C3a、C3b、C3c或C3f相比，能优先结合C3d或C3dg的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗体是3d8b、3d9a或3d29。在一些实施方案中，本文所述的抗C3d或抗C3dg抗体结合C3d或C3dg，而不结合补体成分蛋白C3、C3a、C3b、C3c或C3f中的任何一个。在一些实施方案中，本文提供结合C3d或C3dg的亲和力与结合补体成分蛋白C3、C3a、C3b、C3c或C3f的亲和力相似的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗体是3dll或3d31。在一些实施方案中，本文提供能较弱地结合C3d或C3dg、但不结合补体成分蛋白C3、C3a、C3b、C3c或C3f中任何一个的抗体或其抗原结合片段。在 一些实施方案中，抗体是3d3或3dl5。因此，在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合游离的C3d或C3dg (例如，hC3d或hC3dg)，结合的亲和力大于其对未切割的天然C3蛋白的相应的亲和力至少10(例如，至少 10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、225、250、275、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000 或 10000)倍。在一些实施方案中，本文提供与结合游离的或循环的或未沉积的C3片段相比，能优先结合沉积的或调理素作用的C3片段(例如，C3d或C3dg)的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段仅结合沉积的C3片段，而不结合游离的C3或C3片段。在其它实施方案中，本文包括能结合补体片段C3d并且能将组织结合C3片段与循环的C3(例如，C3，C3b或(C3H20))区分开的抗体。在一些实施方案中，抗体包括mAbs3d9a、3d29和3d8b。在一些实施方案中，本发明的抗体结合C3d的特异性高于可商购抗C3d抗体。在一些实施方案中，可商购抗C3d抗体被指定为Quidel目录号A207和A250，并且可购自Quidel 公司(Quidel Corp., San Diego and Santa Clara, CA)。当将3d9a、3d29和3d8b抗体中的每种静脉内注射入小鼠时，发现它们均能结合表现出炎症的肾组织切片，并且3d9a、3d29和3d8b抗体中的每种能结合已知能表达iC3b而不表达C3b的C3调理素作用的酵母聚糖。因此，这些抗体能将组织结合片段C3d与循环的天然C3和片段C3b区分开。在一些实施方案中，本文包括能结合来自多个物种(物种交叉反应性)的C3d或C3dg的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段能结合来自至少一个选自以下物种的C3d或C3dg:人、非人哺乳动物(例如，食蟹猴或猕猴、恒河猴、猿、狒狒、黑猩猩、猩猩或大猩猩)、啮齿动物(例如，小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、沙鼠或兔)、牛、绵羊、山羊、驴、猪、狗、猫、马及骆驼。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段能结合猕猴C3d或C3dg。在一些实施方案中，本文所述的抗体或其抗原结合片段能结合来自选自上文列表的至少两个物种的C3d或C3dg。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段能结合人和猕猴C3d或C3dg。在一些实施方案中，所述抗体是3d8b、3d9a、3d29、3dll、3d31、3d3、3dl5、3dl0 或 3dl6。在一些实施方案中，本文提供与CR2竞争结合C3d或C3dg的抗C3d或抗C3dg抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段将CR2蛋白结合人补体成分C3d或C3dg的能力降低大于50%(例如，大于55、60、65、70、75、80、85、90或95%或更高百分比)。在 一些实施方案中，所述抗体是mAb3dll、3d9a、3dl6、3d29、3d31或3d8b。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段将CR2-C3d结合降低至少60%。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段将CR2-C3d结合降低至少40%。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段显著抑制或阻断CR2结合C3d。在一些实施方案中，所述抗体是3d9a、3d29 或 3d8b。可用于分析抗体的免疫特异性结合和交叉反应性的免疫测定包括，但不限于，竞争性和非竞争性测定系统，其可利用多种技术，例如Western印迹、RIA、ELISA (酶联免疫吸附测定)、“夹心”免疫测定、免疫沉淀测定，免疫扩散测定、凝集测定、补体固定测定、免疫放射测定、荧光免疫测定及蛋白A免疫测定。这些测定是常规的和本领域公知的。也可以使用本领域已知的任何基于表面等离子体共振(SPR)的测定来分析抗体，用于表征抗体与C3d或C3dg的相互作用的动力学参数。本文所述的方法中可以使用可商购的任何SPR装置包括，但不限于，BIAcore装置(Biacore AB;Uppsala, Sweden)、IAsys 装置(Affinity Sensors;Franklin, Massachusetts) > IBIS 系统(WindsorScientific Limited;Berks, UK)、SPR-CELLIA 系统(Nippon Laser and ElectronicsLab;Hokkaido, Japan)以及 SPR Detector Spreeta(Texas Instruments;Dallas, Texas)。参见，例如，Mullett et al.(2000)Methods22:77-91;Dong et al.(2002)Reviews inMolBiotech82:303-323;Fivash et al.(1998)Curr Opin Biotechnol9:97-101;and Richet al.(2000)Curr Opin Biotechnolll:54-61。在一些实施方案中，本文提供不增强补体活化的抗C3d抗体或抗C3dg抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抗体是mAb3dll、3d9a、3dl6、3d29、3d31或3d8b。尽管本文不受某种特定理论或作用机制的限制，但本申请的发明人认为，本文公开的抗C3d或抗C3dg抗体或其抗原结合片段能与宿主B细胞的膜上的CR2竞争结合C3d或C3dg或抗原-C3d/C3dg免疫复合物，从而降低或抑制通过CR2的下游信号转导，其对于B细胞活化和抗体产生是重要的。本文所用的B细胞活化或活性是指下述任何方面:(a)B细胞或浆细胞的抗原特异性抗体产生或分泌；(b) B细胞或浆细胞的增殖；(C)B细胞的抗原加工；(d)B细胞对T细胞的抗原呈递；(e) B细胞细胞表面标志物的上调；和/或(f)B细胞分化(例如，抗原驱动的)为产抗体浆细胞。因此，在一些实施方案中，本文提供了能降低或抑制宿主体液免疫应答的抗C3d或抗C3dg抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段降低或抑制宿主抗体产生。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段将宿主免疫应答降低大于20%(例如，大于25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或95%或更高百分比)。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段将宿主免疫应答降低至少50%。在一些实施方案中，所述抗体是mAb3dll、3d9a、3dl6、3d29、3d31或3d8b。在一些实施方案中，所述抗体是3d9a、3d29或3d8b。确定抗体或其抗原结合片段是否哺乳动物中降低免疫应答(例如，自身免疫应答)的方法是本领域公知的(例如，混合淋巴细胞反应(MLR))并描述于，例如，美国专利第7，576，182号及Lemoliet al.1mmunological effects of omalizumab in chronic urticaria:a case report.JInvestig Allergol Clin Immunol.2010;20(3):252-4。在一些实施方案中，本文还提供的抗体或其抗原结合片段是小鼠单克隆抗体3d8b、3d9a、3d29、3dll、3d31、3d3、3dl5、3dl0 及 3dl6 的变体，并保持这些小鼠抗体的 C3d 结合能力。例如，本文提供的抗C3d或抗C3dg抗体或其抗原结合片段是多克隆抗体、单克隆抗体或抗体片段、双链抗体、嵌入式或嵌合抗体或抗体片段、人源化抗体或抗体片段、脱免疫化的人抗体或抗体片段、完全人抗体或抗体片段、双特异性抗体或抗体片段、单价抗体或抗体片段、单链抗体、Fv、Fab、Fab’及F(ab' )2。例如,本文提供3db8、3d9a、3d29等的嵌入式、人源化或单链形式。制备杂交瘤细胞系的方法包括:在数个月中(例如，2至4个月)，通过数次(例如，4至6次)皮下和/或腹膜内注射含有人C3d或C3dg蛋白(或其免疫原性片段)的免疫原性组合物来免疫Balb/c小鼠。在最后一次注射后2至4天，从免疫过的小鼠获取脾细胞，并在融合促进剂(优选聚乙二醇)的存在下，与骨髓瘤细胞系PAI的细胞融合。优选地，在含有约30%至约50%分子量约4000的聚乙二醇的溶液中，骨髓瘤细胞与3至20倍过量的来自免疫过的小鼠的脾细胞融合。融合后，如上文所述，在合适的培养基中扩增细胞，所述培养基定期间隔性 地补充选择培养基(例如HAT培养基)，从而防止正常骨髓瘤细胞的生长压倒所需的杂交瘤细胞。在一些实施方案中，抗体及其片段可以是“嵌合的”。嵌合抗体及其抗原结合片段包含2个或更多不同物种(例如，小鼠和人)的部分。将具有所需特异性的小鼠可变区剪接到人恒定结构域基因节段上，可以产生嵌合抗体(参见，例如，美国专利第4，816，567号)。按此方式，可以修饰非人抗体，使其更合适于人类临床应用(例如，治疗或预防人类个体中补体相关病症的方法)。本文的单克隆抗体包括非人(例如，小鼠)抗体的“人源化”形式。人源化或CDR嫁接的mAb特别可用作人的治疗剂，因为它们不会像小鼠抗体一样从循环中被快速清除，并且通常不会引起不良免疫反应。制备人源化抗体的方法是本领域公知的。例如，根据Winter及同事的方法(参见,例如，Jones et al.(1986)Nature321:522-525;Riechmann etal.(1988) Nature332:323-327;和 Verhoeyen et al.(1988) Science239:1534-1536)，通过将啮齿动物CDR或CDR序列替换为人抗体的对应序列，基本上可以进行人源化。也可参见，例如，Staelens et al.(2006)Mol Immunol43:1243-1257。在一些实施方案中，非人(例如，小鼠)抗体的人源化形式是人抗体(受体抗体)，其中受体抗体的高度可变(CDR)区残基被具有所需特异性、亲和力及结合能力的来自非人物种(供体抗体)(例如，小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物)的高度可变区残基替换。在某些情况下，人免疫球蛋白的框架区残基也被相应的非人残基(也称为“复原突变”)替换。此外，噬菌体展示文库可用于改变抗体序列中选定位置的氨基酸。人源化抗体的性质还受人框架选择的影响。此外，可以修饰人源化抗体和嵌入式抗体，使其包含在受体抗体或供体抗体中不存在的残基，从而进一步改进抗体性质，例如，亲和力或效应功能。本文还提供完全人抗体。术语“人抗体”包括具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区(如果存在)的抗体。人抗体可以包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。然而，术语“人抗体”不包括源自另一哺乳动物物种种系(例如，小鼠)的CDR序列被嫁接到人框架序列的抗体(即，人源化抗体)。完全人抗体或人抗体可以源自携带人抗体基因(携带可变(V)、多样性(D)、连接(J)及恒定(C)外显子)的转基因小鼠或源自人细胞。例如，现在已能产生这样的转基因动物(例如，小鼠)，其在免疫后，在缺少内源免疫球蛋白产生的情况下，能产生人抗体的完全形式。(参见,例如，Jakobovits et al.(1993)Proc.Natl.Acad.Sc1.USA90:2551;Jakobovits et al.(1993)Nature362:255-258;Bruggemannet al.(1993) Yearin Immunol.7:33;和 Duchosal et al.(1992) Nature355:258)。可以将转基因小鼠株工程化，使其含有来自未重排的人免疫球蛋白基因的基因序列。人序列可以编码人抗体的重链和轻链，并且会在小鼠中正确地发挥功能，所述小鼠经历重排从而提供与人中相似的多种抗体形式。可以用靶蛋白(例如，补体成分C3d或C3dg蛋白、补体成分C3d或C3dg蛋白的片段、或表达C3d或C3dg蛋白的细胞)免疫转基因小鼠，从而产生各种特异性抗体及其编码RNA。然后，可以将编码这些抗体的抗体链成分的核酸从动物克隆至展示载体。通常，分别克隆编码重链和轻链序列的核酸的群体，然后将分别的群体通过插入载体进行重组，使得任何给定的载体拷贝接受了重链和轻链的随机组合。载体被设计为能表达抗体链，因此抗体链能在含有载体的展示包装的外表面上进行组装和展示。例如，可以将抗体链表达为与来自曬菌体的外表面的曬菌体衣壳蛋白的融合蛋白。然后，可以筛选展不包装中结合祀标的抗体的展示。因此，在一些实施方案中，本文提供，例如,包含本文所述的小鼠单克隆抗体的一个或多个互补决定区(CDR)的人源化的、脱免疫化的或灵长动物化的抗体，其保留小鼠单克隆抗体对应物结合其抗原(例如，C3d或C3dg)的能力(例如，至少50、60、70、80、90或100%或甚至大于100%)。例如，本文提供了人源化抗体，其包含小鼠单克隆抗体3d8b、3d9a、3d29、3dll、3d31、3d3、3dl5、3dl0 或 3dl6 中任一个的一组 6 个 CDR(例如，重链 CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2及轻链CDR3)和人框架区(具有或不具有人恒定或Fe 区)。CDR和框架区的确切边界已根据不同方法进行了不同的定义，并且是抗体工程领域技术人员公知的。在一些实施方案中 ，轻链或重链可变结构域中CDR或框架区的位置可以通过 Kabat et al.[ (1991) “Sequences ofProteins of ImmunologicalInterest.，，NIH Publication N0.91-3242, U.S.Department of Health and HumanServices, Bethesda, MD]来定义。在这些情况下，CDR可被称为“Kabat CDR”(例如,“KabatLCDR2”或“KabatHCDRl ”)，框架区可被称为“Kabat框架区”，(例如，“Kabat LFRl ”或“KabatHFR3”)。在一些实施方案中，轻链或重链可变区的⑶R或框架区的位置可以通过Chothia et al.(1989) Nature342:877-883 来定 Si。因此，这些区分别可被称为 “ChothiaCDR” (例如，“Chothia LCDR2”或“ChothiaHCDR3”)或“Chothia 框架区”(例如，“ChothiaLFR1”或“Chothia LFR3”)。在一些实施方案中，轻链和重链可变区的⑶R或框架区的位置可以通过Kabat-Chothia组合定义来进行定义。在这些实施方案中，这些区分别可被称为“组合 Kabat-Chothia CDR”或“组合 Kabat-Chothia 框架区”。Thomaset al.[ (1996) MolImmunol33 (17/18): 1389-1401]举例证实了按照Kabat和Chothia定义来鉴定CDR和框架区边界。在一些实施方案中，轻链或重链可变结构域中CDR和/或框架区的位置可通过Honnegger and Pliickthun [ (2001) J Mol Bio1309:657-6701 来进行定义。此外，人抗体可以来自卩遼菌体展不文库(Hoogenboom et al.(1991) J.Mol.Biol.227:381 ;Marks et al.(1991) J.Mol.Biol.，222:581-597;和Vaughan et al.(1996)Nature Biotechl4:309 (1996))。利用合成人抗体V区的随机化组合可以产生合成曬菌体文库。通过在抗原上选择，可以制备V区的性质非常类似人的完全人抗体。参见，例如，美国专利第6，794，132号、第6，680，209号、第4，634，666号及Ostberg etal.(1983), Hybridoma2:361-367,通过引用将上述每篇文献的内容全部并入本文。为了产生人抗体，还可参见 Mendez et al.(1998) Nature Geneticsl5:146-156和 Green and Jakobovits (1998) J.Exp.Med.188:483-495,通过引用将其公开内容全部并入本文。人抗体还在下述文献中进行了讨论和描述，美国专利号:5，939，598 ;6，673，986 ；6，114，598 ;6，075，181 ;6，162，963 ;6，150，584 ;6，713，610 ；和 6，657，103，以及美国专利申请公布号:2003-0229905Al,2004-0010810Al, US2004-0093622A1, 2006-0040363A1,2005-0054055A1, 2005-0076395A1 及 2005-0287630A1。还可参见国际公布号 W094/02602，W096/34096及W098/24893及欧洲专利第EP0463151B1号。通过引用将上述每篇专利、申请和文献的内容全部并入本文。在其它方法中，包括GenPharm International, Inc.在内的其他方已利用“迷你基因座”法。在迷你基因座法中，通过并入来自Ig基因座的部分(各基因)模拟外源Ig基因座。因此，一个或多个VH基因、一个或多个DH基因、一个或多个JH基因、μ恒定区及第二恒定区(优选Y恒定区)形成用于插入动物的构建体。该方法描述于，例如，美国专利号:5，545，807 ;5，545，806 ;5，625，825 ;5，625，126 ;5，633，425 ;5，661，016 ;5，770，429 ；5，789，650 ；和 5，814，318 ;5，591，669 ;5，612，205 ;5，721，367 ;5，789，215 ;5，643，763 ；5，569，825 ;5，877，397 ;6，300，129 ;5，874，299 ;6，255，458 ；和 7，041，871，通过引用将上述文献的公开内容并入本文。还可参见，欧洲专利第0546073Β1号，国际专利公布号W092/03918,W092/22645,W092/22647,W092/22670, W093/12227, W094/00569, W094/25585,W096/14436, W097/13852及W098/24884，通过引用将上述每篇文献的内容全部并入本文。还可参见，Taylor et al.(1992)Nucleic Acids Res.20:6287;Chen et al.(1993)Int.Tmmunol.5:647;Tuaillon et al.(1993)Proc.Natl.Acad.Sc1.USA90:3720-4;Choiet al.(1993)Natu re Genetics4:117;Lonberg et al.(1994)Nature368:856-859;Tayloret al.(1994) InternationalImmunology6:579-591;Tuai I 1n et al.(1995)J.1mmunol.154:6453-65;Fishwild et al.(1996)Nature Biotechnology 14:845;和Tuaillon et al.(2000) Eur.J.1mmunol.10:2998-3005，通过引用将上述每篇文献的内容全部并入本文。在一些实施方案中，提供了脱免疫化的抗体或其抗原结合片段。脱免疫化的抗体或其抗原结合片段是经过修饰而使该抗体或其抗原结合片段对于给定物种(例如，对于人)无免疫原性或免疫原性较低的抗体。可以利用本领域技术人员已知的任何多种技术来修饰抗体或其抗原结合片段，从而实现脱免疫化(参见，例如，PCT公布号W004/108158和W000/34317)。例如，通过鉴定抗体或其抗原结合片段的氨基酸序列中可能的T细胞表位和/或B细胞表位，并例如利用重组技术从抗体或其抗原结合片段去除一个或多个可能的T细胞表位和/或B细胞表位，可以将抗体或其抗原结合片段脱免疫化。然后，可以任选地产生修饰的抗体或其抗原结合片段，并进行测试来鉴定保留一种或多种所需生物学活性(例如，结合亲和力)而具有降低的免疫原性的抗体或其抗原结合片段。利用本领域已知的技术，可以进行鉴定可能的T细胞表位和/或B细胞表位的方法，例如，计算方法(参见，例如，PCT公布号W002/069232)、体外或计算机模拟技术及生物学测定或物理学方法(例如，例如，测定肽与MHC分子的结合、测定肽:MHC复合物与来自接受抗体或其抗原结合片段的物种的T细胞受体的结合、利用具有接受抗体或其抗原结合片段的物种的MHC分子的转基因动物来测试蛋白或其肽部分或用来自接受抗体或其抗原结合片段的物种的免疫系统细胞重建的转基因动物进行测试等)。在各实施方案中，本文所述的脱免疫化的抗C3d或-C3dg抗体包括脱免疫化的抗原结合片段、Fab、Fv、SCFv、Fab’和F(ab’)2、单克隆抗体、鼠抗体、工程化抗体(例如，嵌合的、单链的、CDR嫁接的、人源化的、完全人抗体及人工选择的抗体)、合成抗体和半合成抗体。在一些实施方案中，本文还提供双特异性抗体。双特异性抗体是对至少两种不同抗原具有结合特异性的单克隆抗体，优选人抗体或人源化抗体。在这种情况下，结合特异性之一是对于C3d或C3dg，另一结合特异性是对于任何其它抗原。制备双特异性抗体的方法是本领域技术人员能够做到的。通常，双特异性抗体的重组产生是基于两个 免疫球蛋白重链/轻链对的共表达，其中两个重链/轻链对具有不同特异性(Milstein and Cuello (1983) Nature305:537-539)。具有所需结合特异性(抗体-抗原结合位点)的抗体可变结构域可以与免疫球蛋白恒定结构域序列融合。重链可变区的融合优选是与包括铰链的至少一部分、CH2及CH3区的免疫球蛋白重链恒定结构域。编码免疫球蛋白重链融合的DNA以及如果需要的话编码免疫球蛋白轻链的DNA被插入分别的表达载体，并共转染入合适的宿主生物。关于目前已知的产生双特异性抗体的示例性方法的其他细节，参见，例如，Sureshet al.(1986)Methods in Enzymologyl21:210;PCT公布号 W096/27011;Brennan et al.(1985)Science229:81;Shalaby et al., J ExpMed(1992) 175:217-225;Kostelny et al.(1992)J Immunol 148(5):1547-1553;HolIingeret al.(1993)Proc Natl Acad Sci USA90:6444-6448;Gruber et al.(1994)JImmunol 152:5368;和 Tutt et al.(1991) J Immunol 147:60。双特异性抗体还包括交联抗体或异偶联抗体。可以利用任何方便的交联方法制备异偶联抗体。合适的交联剂是本领域公知的，并且公开于美国专利第4，676，980号，以及多种交联技术中。
从重组细胞培养物直接制备和分离双特异性抗体片段的各种技术也已有描述。例如，已利用亮氨酸拉链产生双特异性抗体。参见，例如，Kostelny et al.(1992) JImmunoll48 (5): 1547-1553。来自Fos和Jun蛋白的亮氨酸拉链肽可以通过基因融合连接于两种不同抗体的Fab’部分。可以将抗体同二聚体在铰链区还原而形成单体，然而再氧化而形成抗体异二聚体。该方法还可用于产生抗体同二聚体。Hollinger et al.(1993)Proc NatlAcad Sci USA90:6444-6448描述的“双链抗体”技术提供了制备双特异性抗体片段的备选机制。所述片段包含通过连接子与轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)，所述连接子太短而不能允许同一链上两个结构域之间的配对。因此，一个片段的VH和VL结构域被迫与另一片段的互补VL和VH结构域配对，从而形成两个抗原结合位点。通过利用单链Fv(ScFv) 二聚体制备双特异性抗体片段的另一策略也已有报道。参见，例如，Gruber et al.(1994) J Immunol 152:5368。或者，抗体可以是“线性抗体”，例如，如 Zapataet al.(1995) Protein Eng.8 (10): 1057-1062所述。简言之，这些抗体包含一对串联Fd区段(Vh-Ch1-Vh-ChI),其形成一对抗原结合区。线性抗体可以是双特异性的或单特异性的。也考虑到大于二价的抗体(例如，三特异性抗体)，其描述于，例如，Tutt etal.(1991)J Immunol147:60。本文还包括变体forms of多特异性抗体，例如，Wu et al.(2007)NatBiotechnol25(ll):1290-1297中描述的双重可变结构域免疫球蛋白(DVD-1g)分子。DVD-1g分子被设计为，使得来自两个不同母体抗体的两个不同轻链可变结构域(VL)被直接串联连接或利用重组DNA技术通过短连接子连接，然后是轻链恒定结构域。相似地，重链包含串联连接的两个不同重链可变结构域(VH)，然后是恒定结构域CHl和Fe区。从两个母体抗体制备DVD-1g分子的方法还描述于，例如，PCT公布号W008/024188和W007/024715。本文还提供骆驼科或单峰骆驼抗体(例如，源于双峰骆驼、单峰骆驼或羊驼的抗体)。不同于来自大部分哺乳动物的典型的双链(片段)或四链(全抗体)抗体，所述抗体通常缺少轻链。参见美国专利第5，759，808号；Stijlemans et al.(2004) J BiolChem279:1256-1261;Du moulin et al.(2003)Nature424:783-788;和 Pleschberger etal.(2003)Bioconjugate Cheml4:440-448。骆驼科抗体和抗体片段的工程化文库是可商购的，例如，购自Ablynx(Ghent，Belgium)。正如非人来源的其它抗体一样，可以通过重组方式改变骆驼科抗体的氨基酸序列，从而获得更类似于人序列的序列，即，可以将纳米抗体“人源化”，从而进一步降低抗体的可能的免疫原性。在一些实施方案中，本文还提供抗体或其抗原结合片段，其是小鼠单克隆抗体3d8b、3d9a、3d29、3dll、3d31、3d3、3dl5、3dl0及3dl6的突变体，或它们的变体抗体，或它们的抗原结合片段，正如上文和本文所述。优选地，该突变抗体或其抗原结合片段保持母体小鼠mAb的C3d结合能力。这样的突变和制备这些突变体的方法是本领域的标准实践并且是公知的。在一些实施方案中，这样的突变引入至少一个氨基酸取代、缺失、插入或其它修饰。在一些实施方案中，本文所述的抗体或其抗原结合片段(例如，小鼠单克隆抗体3d8b、3d9a、3d29、3dll、3d31、3d3、3dl5、3dl0 或 3dl6)包含不多于 20 个(例如，不多于 19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或I个)氨基酸修饰(例如，氨基酸取代、缺失或添加)。在一些实施方案中，本文所述的抗体或其抗原结合片段在CDR中不含有氨基酸修饰。在一些实施方案中，本文所述的抗体或其抗原结合片段在重链的CDR3中不含有氨基酸修饰。蛋白中常见有20种氨基酸。基于那些氨基酸的侧链的化学性质，可将它们分为9类或9组。将一个氨基酸残基取代为同一类或组中的另一氨基酸在本文中称为“保守型”取代。经常可在蛋白中进行保守型氨基酸取代，而不会显著改变蛋白的构象或功能。将一个氨基酸残基取代为不同的类或组中的另一氨基酸在本文中称为“非保守型”取代。相比之下，非保守型氨基酸取代易于影响蛋白的构象和功能。表1:氨基酸分类的实例
小 / 脂肪族残基:|Gly、Ala、Val、Leu、Ile
环状亚氨基酸:
含轻基残基:Ser、Thr
酸性残基:Asp、Glu
Amide 残基:Asn、Gln
碱性残基:Lys、Arg
咪唑残基:Ws
芳香族残基:Phe、Tyr、Trp
含硫残基:Met、Cys在一些实施方案中，保守型氨基酸取代包括:将甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、异亮氨酸(I)、缬氨酸(V)及亮氨酸(L)中的任何一个取代为这些脂肪族氨基酸中的任何其它一个；将丝氨酸(S)取代为苏氨酸(T)，反之亦可；将天冬氨酸(D)取代为谷氨酸(E)，反之亦可；将谷氨酰胺(Q)取代为天冬酰胺(N)，反之亦可；将赖氨酸(K)取代为精氨酸(R)，反之亦可；将苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)和色氨酸(W)取代为这些芳香族氨基酸中的任何其它一个；以及将蛋氨酸(M)取代为半胱氨酸(C)，反之亦可。根据具体氨基酸的环境及其在蛋白的三维结构中的作用，其他取代也可以认为是保守型的。例如，甘氨酸(G)和丙氨酸(A)经常是可交换的，丙氨酸(A)和缬氨酸(V)也可以这样。相对疏水的蛋氨酸(M)经常可以与亮氨酸和异亮氨酸互换，并且某些情况下可与缬氨酸互换。赖氨酸(K)和精氨酸(R)经常在位置上可互换，其中氨基酸残基的`重要特征是其电荷，这两个氨基酸残基的PK差异不显著。在特定情况下，其它改变也可以认为是“保守型的”(参见，例如，BiraEMISTKY at pp.13-15，2nded.Lubert Stryer ed.(StanfordUniversity);Henikoff et al.，Proc.Nat’ I Acad.Sc1.USA (1992)89:10915-10919;Lei et al., J.Biol.Chem.(1995) 270(20):11882-11886)。在一些实施方案中，非保守型氨基酸取代包括:将甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、异亮氨酸(I)、缬氨酸(V)和亮氨酸(L)中的任一个取代为丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)、谷氨酰胺(Q)、天冬酰胺(N)、赖氨酸(K)、精氨酸(R)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)、蛋氨酸(M)、半胱氨酸(C)、组氨酸(H)及脯氨酸(P)中的任一个。在一些实施方案中，非保守型氨基酸取代包括:将丝氨酸(S)和苏氨酸(T)中的任一个取代为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、异亮氨酸(I)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)、天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)、谷氨酰胺(Q)、天冬酰胺(N)、赖氨酸(K)、精氨酸(R)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)、蛋氨酸(M)、半胱氨酸(C)、组氨酸(H)和脯氨酸(P)中的任一个。在一些实施方案中，非保守型氨基酸取代包括:将天冬氨酸(D)和谷氨酸(E)中的任一个取代为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、异亮氨酸(I)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酰胺(Q)、天冬酰胺(N)、赖氨酸⑷、精氨酸(R)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸⑴、色氨酸(W)、蛋氨酸(M)、半胱氨酸(C)、组氨酸(H)及脯氨酸(P)中的任一个。在在一些实施方案中，非保守型氨基酸取代包括:将谷氨酰胺(Q)和天冬酰胺(N)中的任一个取代为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、异亮氨酸(I)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)、赖氨酸(K)、精氨酸(R)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)、蛋氨酸(M)、半胱氨酸(C)、组氨酸
(H)及脯氨酸(P)中的任一个。在一些实施方案中，非保守型氨基酸取代包括:将赖氨酸(K)和精氨酸(R)中的任一个取代为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、异亮氨酸(I)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)、谷氨酰胺(Q)、天冬酰胺(N)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)、蛋氨酸(M)、半胱氨酸(C)、组氨酸(H)及脯氨酸(P)中的任一个。在一些实施方案中，非保守型氨基酸取代包括:将苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)及色氨酸(W)中的任一个取代为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、异亮氨酸⑴、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)、谷氨酰胺(Q)、天冬酰胺(N)、赖氨酸(K)、精氨酸(R)、蛋氨酸(M)、半胱氨酸(C)、组氨酸(H)及脯氨酸(P)中的任一个。在一些实施方案中，非保守型氨基酸取代包括:将蛋氨酸(M)和半胱氨酸(C)中的任一个取代为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、异亮氨酸(I)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)、谷氨酰胺(Q)、天冬酰胺(N)、赖氨酸(K)、精氨酸(R)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)、组氨酸⑶及脯氨酸⑵中的任一个。在一些实施方案中，非保守型氨基酸取代包括:将组氨酸(H)取代为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、异亮氨酸(I)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T) 、天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)、谷氨酰胺(Q)、天冬酰胺(N)、赖氨酸(K)、精氨酸(R)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)、蛋氨酸(M)、半胱氨酸(C)及脯氨酸(P)中的任一个。在一些实施方案中，非保守型氨基酸取代包括:将脯氨酸(P)取代为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、异亮氨酸(I)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)、谷氨酰胺(Q)、天冬酰胺(N)、赖氨酸(K)、精氨酸(R)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)、蛋氨酸(M)、半胱氨酸(C)及组氨酸⑶中的任一个。在一些实施方案中，本文所述的抗C3d或抗C3dg抗体包含改变的或突变的序列，与母体抗体相比，其能实现改变的稳定性或半衰期。This包括，例如，增加的稳定性或半衰期，用于体外或体内的较高的亲和力或较长的清除时间，或降低的稳定性或半衰期，用于较低的亲和力或较快的清除。在一些实施方案中，本文所述的抗C3d或抗C3dg抗体包含改变的重链恒定区，所述改变的重链恒定区相对于对应的未改变的恒定区，具有降低的(或没有)效应功能。也就是说，在一些实施方案中，本文所述的抗体包含改变的恒定区，所述改变的恒定区表现出对应的未改变的(天然)形式的恒定区的效应功能的约O至50%(例如，低于50、49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2 或 1%)。通过改变恒定或 Fe 区
的性质，可以调节涉及抗C3d或抗C3dg抗体的恒定区的效应功能。改变的效应功能包括，例如，下述活性中一种或多种的调节:抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、补体依赖性细胞毒性(CDC)、凋亡、与一种或多种Fe受体的结合及促炎性反应。调节是指与未改变形式的恒定区的活性相比，含有改变的恒定区的各个抗体所表现出的效应功能活性的增加、降低或消除。在具体实施方案中，调节包括活性被废除或完全缺失的情况。具有改变的FcR结合亲和力和/或ADCC活性和/或改变的CDC活性的改变的恒定区是与未改变形式的恒定区相比，具有增强的或减弱的FcR结合活性和/或ADCC活性和/或CDC活性的多肽。展示出与FcR的增加的结合的改变的恒定区以高于未改变的多肽的亲和力结合至少一种FcR。展示出与FcR的降低的结合的改变的恒定区以低于未改变形式的恒定区的亲和力结合至少一种FcR。展示出与FcR的降低的结合的这样的变体可以很少或几乎不结合FcR，例如，与天然序列免疫球蛋白恒定或Fe区与FcR的结合水平相比，展示出与 FcR 的结合的 O 至 50%(例如，低于 50、49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、
11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1%)。相似地，与未改变的恒定区相比，展示出受调节的ADCC和/或CDC活性的改变的恒定区可以展示出增加的或降低的ADCC和/或CDC活性。例如，在一些实施方案中，包含改变的恒定区的抗C3d或-C3dg抗体可以展示出未改变形式的恒定区的 ADCC 和 / 或 CDC 活性的约 O 至 50%(例如，低于 50、49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、3 5、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1%)。如本文所举证的，本文所述的包含改变的恒定区的并展示出降低的ADCC和/或CDC的抗C3d或-C3dg抗体可以展示出降低的ADCC和/或⑶C活性或无ADCC和/或⑶C活性。在一些实施方案中，与天然序列恒定区或未改变的恒定区相比，改变的恒定区具有至少一个氨基酸取代、插入、和/或缺失，例如，天然序列恒定区或母体多肽的恒定区中的约I至约100个氨基酸取代、插入和/或缺失。在一些实施方案中，本文的改变的恒定区与未改变的恒定区具有至少约70%的同源性(相似性)或同一性，在某些情况下与其具有至少约75%的同源性或同一性，在其它情况下与其具有至少约80%的同源性或同一性，在其它实施方案中，与其具有至少约85%、90%或95%的同源性或同一性。改变的恒定区还可以含有一个或多个氨基酸缺失或插入。此外，改变的恒定区可以含有能导致改变的翻译后修饰的一个或多个氨基酸取代、缺失或插入，所述改变的翻译后修饰包括，例如，改变的糖基化模式(例如，添加一种或多种糖成分，丢失一种或多种糖成分或相对于未改变的恒定区，一种或多种糖成分的组分改变)。利用变体恒定区、Fe区或重链区进行抗体工程化或制备，可以产生具有改变的效应功能或不具有效应功能的抗体；重组DNA技术和/或细胞培养和表达条件可以用于制备具有改变的功能和/或活性的抗体。例如，重组DNA技术可以用于在影响包括效应功能在内的抗体功能的区(例如，Fe或恒定区)中设计一个或多个氨基酸取代、缺失或插入。或者，通过控制抗体产生的细胞培养和表达条件，可以实现翻译后修饰(例如，糖基化模式)的改变。在抗体的Fe区中引入一个或多个取代、添加或缺失的合适的方法是本领域公知的，并包括，例如，标准DNA诱变技术,例如描述于Sambrook et al.(1989)“Molecular Cloning:ALaboratory Manual (分子克隆:实验手册)，第二版，” Cold Spring Harbor LaboratoryPress, Cold SpringHarbor, N.Y.;Harlow and Lane (1988),同上；Borrebaek(1992),同上;Johneet al.(1993)，同上;PCT 公布号 W006/53301;以及美国专利第 7，704，497 号。在一些实施方案中，本文所述的抗C3d或抗C3dg抗体表现出降低的效应功能或不表现出效应功能。在一些实施方案中，抗C3d或抗C3dg抗体包含杂合恒定区或其一部分，例如G2/G4杂合恒定区(参见，例如，Burton et al.(1992) AdvImmun51:1-18;Canfield et al.(1991)J Exp MedI73:1483-1491;and Mueller etal.(1997)Mol Immunol34(6):441-452)。参见上文。除了使用如上文所述的G2/G4构建体之外，通过在抗体的某些区的氨基酸序列中引入其它类型的改变，可以产生本文所述的具有降低的效应功能的抗C3d或抗C3dg抗体。这样的氨基酸序列改变包括但不限于，Ala-Ala突变，例如描述于PCT公布号W094/28027和 TO98/47531 JPXu et al.(2000) Cell Immuno1200:16-26 因此，在一些实施方案中，在恒定区中具有一个或多个突变(包括Ala-Ala突变)的抗C3d或抗C3dg抗体具有降低的效应功能或无效应功能。根据这些实施方案，抗体的恒定区可包含第234位的丙氨酸取代或第235位的丙氨酸突变。此外，改变的恒定区可以含有双重突变:第234位的丙氨酸突变和第235位的第二丙氨酸突变。在一些实施方案中，抗C3d或抗C3dg抗体包含IgG4框架，其中所述Ala-Ala突变描述的是:第234位从苯丙氨酸突变为丙氨酸和/或第235位从亮氨酸突变为丙氨酸。在一些实施方案中，抗C3d或抗C3dg抗体包含IgGl框架，其中所述Ala-Ala突变描述的是:第234位从亮氨酸突变为丙氨酸和/或第235位从亮氨酸突变为丙氨酸。可选地或另外地，抗C3d或抗C3dg抗体可以携带其它突变,包括CH2结构域中的点突变K322A (Hezareh et al.(2001) J Virol75:12161-12168)。在恒定区具有所述突变的抗体还可以是阻断或非阻断抗体。在引入重链恒定区后能导致降低的效应功能的其他取代描述于，例如，Shieldset al.(2001) J Biol Chem276 (9):6591_6604。特别可参见 Shieldset al.的表 1(“人 IgGl变体与人FcRn和Fe Y R的结合”)，通过引用将该文献的公开内容整体并入本文。通过筛选抗IgE抗体的文库(文库中的每个抗体区别在于重链恒定区中的一个或多个取代)对一系列Fe受体(包括FcRn, Fe y RI, Fe y RIIA, Fe y RIIB及Fe Y RIIIA)的结合，作者鉴定出多个能调节特异性Fc-Fc受体相互作用的取代。例如，变体IgG2a重链恒定区，其中CH2结构域含有D265A取代(重链氨基酸编号按照Kabat et al.(同上))，导致变体恒定区和IgGFe受体Fe Y RIIB、Fe Y RII1、Fe YRI及Fe Y RIV之间的相互作用完全丢失。Shields etal.(2001)，第6595页，表 I。也可参见，Baudino et al.(2008) J Immunoll81:6664-6669 (同上)。铰链区中的改变也影响效应功能。例如，铰链区的缺失可以降低对Fe受体的亲和力，并可以降低补体活化(Klein et al.(1981)Proc Natl AcadSci USA78:524-528)。本文因此还涉及在铰链区中具有改变的抗体。在一些实施方案中，抗C3d或抗C3dg抗体可以含有改变的恒定区，其表现出增强的或降低的补体依赖性细胞毒性(CDC)。通过在抗体的Fe区中引入一个或多个氨基酸取代、插入或缺失，可以实现调节的⑶C活性。参见，例如，美国专利第6，194,551号。可选地或另外地，可以在Fe区中引入半胱氨酸残基，从而允许在该区中形成链间二硫键。由此产生的同二聚抗体可以具有提高的或降低的内化能力和/或增加的或降低的补体介导的细胞杀伤。参见，例如，Caron et al.(1992) J Exp Medl76:1191-1195 和 Shopes (1992)Immunol 148:2918-2922 ;PCT 公布号TO99/51642和TO94/29351 ；Duncan and Winter (1988)Nature322:738-40 ;和美国专利第 5，648，260 号和第 5，624，821 号。调节抗体效应功能的另一可能手段包括糖基化的改变，其总结于，例如，Raju (2003) BioProcess Internationall (4):44_53。根据 Wright 和 Morrison,人 IgG寡糖的微观不均一性可影响生物学功能，例如CDC和ADCC、与各种Fe受体的结合及与Clq蛋白的结合。(1997)TIBTECH15:26-32。抗体的糖基化模式可根据生产细胞和细胞培养条件而不同(Raju，同上)。这些差异可导致效应功能和药代动力学的改变。参见，例如，Israel et al.(1996)Immunology89(4):573-578 ；Newkirk et al.(1996)ClinExp Immunoll06 (2): 59-264。效应功能的差异可以与IgG结合效应细胞上的Fe γ受体(FcyR)的能力有关。Shields et al.已证实，利用人效应细胞，在氨基酸序列中具有改变且具有提高的Fe Y R结合的IgG可表现出高达100%增强的ADCC。(2001) J BiolChem276 (9): 6591-6604。尽管这些改变包括结合界面处不存在的氨基酸的改变，但糖组分的性质以及结构模式也可以贡献于所观察到的差异。此外，IgG的寡糖组分中存在或不存在岩藻糖能提高结合和ADCC。参见，例如，Shields et al.(2002) J Biol Chem277 (30):26733-26740。缺少连接于Asn297的岩藻糖基化的碳水化合物的IgG表现出与Fe Y RI受体的正常受体结合。相比之下，与Fe Y RIIIA受体的结合提高50倍，并伴随增强的ADCC，特别是在较低的抗体浓度下。Shinkawa et al.证实,大鼠杂交瘤中产生的人IL-5受体的抗体表现出的ADCC比中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中的产生的抗体的ADCC高大于50%(Shinkawa et al.(2003) JBiol Chem278 (5):3466-73)。单糖组分和寡糖谱表明，大鼠杂交瘤产生的IgG具有的岩藻糖的含量低于CHO产生的蛋白。作者的结论是，IgGl中岩藻糖基化的缺乏在ADCC活性增强中起重要作用。Umana et al.采取了不同的方法,他们改变了 chCE7 (嵌合IgGl抗成神经细胞瘤抗体)的糖基化模式。(1999)Nat Biotechnoll7 (2): 176-180) 0他们利用四环素调节糖基转移酶(GnTIII)的活性，糖基转移酶(GnTIII)将已参与ADCC活性的寡糖平分。母体抗体的ADCC活性勉强高于背景水平。在不同四环素水平产生的chCE7的ADCC活性测定显示出对于chCE7的最大体外ADCC活性的GnTIII表达的最佳范围。该活性与恒定区相关的被平分的复合物寡糖的水平有关。新优化的变体展现出显著的ADCC活性。相似地，Wright和Morrison在糖基化缺陷的CHO细胞系制备抗体并证实,该细胞系中产生的抗体不能发生补体介导的细胞溶解。(1994)J ExpMedl80:1087-1096。因此，由于能影响效应功能的已知改变包括糖基化模式的改变或糖基化残基数量的改变，因此本文涉及这样的抗C3d或抗C3dg抗体，其中糖基化被改变，从而增强或降低效应功能，包括ADCC和CDC。改变的糖基化包括糖基化残基数量的减少或增加，以及糖基化残基的模式或位置的改变。

还存在其它改变抗体的效应功能的方法。例如，产抗体细胞可以是高度致突变的，从而产生在整个抗体分子中具有随机改变的多肽残基的抗体。参见，例如，PCT公布号W005/011735。高度致突变的宿主细胞包括DNA错配修复缺陷型细胞。按此方式产生的抗体可能抗原性较低和/或具有有利的药代动力学性质。此外，可以筛选这样的抗体的性质，例如增强的或降低的效应功能。可用于制备本文所述的抗体或其抗原结合片段的分子生物学技术的其他细节在下文描述。融合分子本文还提供含有融合分子的组合物，所述融合分子包含靶向部分和预防、治疗或诊断活性部分。在一些实施方案中，通过祀向部分(moiety)或部分(portion)与表面上的结合伴侣的特异性结合，本文所述的融合分子能将它们的预防、治疗或诊断活性部分(moiety)或部分(portion)特异性地递送至所述表面(例如，细胞表面、抗原表面等)。靶向部分优选能结合结合伴侣，结合伴侣是补体成分蛋白，优选选自C3dg、C3d及CR2。合适的祀向部分可以是小分子化合物、肽、蛋白或本领域已知的其它部分。合适的靶向部分包括能结合选自C3dg和C3d的结合伴侣的抗体，或保留结合各自结合伴侣的能力的所述抗体的片段。合适的靶向部分还包括本发明的抗体或保留结合各自结合伴侣的能力的本发明抗体的片段。所述革El向部分(moiety)或部分(portion)的实例在上文已讨论。在一些实施方案中，融合分子的目的是增加与受到伤害、受到损伤或由于物理、化学或其它损害或损伤而有炎症的组织的结合。通过将活性剂与靶向部分系联(tethering)、融合或以其他方式相联，可以实现靶向。在一些实施方案中，靶向部分能结合组织相关补体成分3(C3)或C3的一种或多种片段，包括，但不限于:C3b、iC3b、C3d和C3dg。在一些实施方案中，靶向部分包括，例如，针对C3、C3b、iC3b、C3d、C3dg或C3的其他片段的单克隆抗体、或保留结合各自结合伴侣的能力的这些单克隆抗体的片段。在一些实施方案中，靶向部分可以是针对iC3b、C3dg和C3d的单克隆抗体，如3d9a、3d29和3d8b抗体所示。也可以使用因子H的非补体调节片段，所述片段保留结合一种或多种C3片段的能力，包括C3b、iC3b和C3d或C3的其它组织相关片段。因子H的这些片段可能包括包含SCR结构域5-8和SCR结构域19-20的片段。 在一些实施方案中，本文所述的融合分子被设计为能协同增强个体(优选哺乳动物)内的两种或更多种效应。在一些实施方案中，祀向部分(moiety)或部分(portion)通过与其结合伴侣结合而具有稳定或调节一种靶标、活性、通路或机制的体外和/或体内活性，所述靶标、活性、通路或机制不同于同一融合分子中的预防、治疗或诊断活性部分(moiety)或部分(portion)所稳定或调节的祀标、活性、通路或机制。在一些实施方案中，革巴向部分(moiety)或部分(portion)可以与多个预防、治疗或诊断活性部分(moiety)或部分(portion)融合,每个预防、治疗或诊断活性部分(moiety)或部分(portion)可以具有稳定或调节不同靶标、活性、途径或机制的不同活性。在任何情况下，本文所述的融合分子的不同部分(moiety)或部分(portion)的多种功能可以实现该融合分子的协同或更佳的效果。预防、治疗或诊断活性部分在一些实施方案中，本文提供可与本文所述的融合分子中的靶向部分融合的预防、治疗或诊断活性部分。在一些实施方案中，预防、治疗或诊断活性部分被靶向于或提供到靶向部分所识别的结合伴侣的附近空间。在一些实施方案中，所述靶向部分是上文讨论的补体成分蛋白的结合分子。在一些实施方案中，所述靶向部分是针对C3d或C3dg的抗体。在一些实施方案中，所述预防、治疗或诊断活性部分是补体调节剂。尽管本文不在任何方面受特定理论或作用机制的限制，本发明人认为，通过靶向部分与补体成分蛋白(例如，C3d或C3dg)的结合，预防、治疗或诊断活性部分(优选补体调节剂)被提供到靶标的表面附近，由于活性部分本身及其调节的其它补体成分的局部浓度增加，活性部分能更有效地发挥功能。本文所用的术语“补体调节剂”是指能调节(例如，抑制或活化)补体活性的化合物、组合物或蛋白。补体调节剂可以是补体抑制剂或补体活化剂。本文所用的术语“补体抑制剂”是指能降低或去除补体活性的任何化合物、组合物或蛋白。补体活性降低可以是部分的(例如，活性降低10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%)或全部的。例如，在一些实施方案中，在标准体外红细胞溶解测定或体外CH50eq测定中，补体抑制剂能将补体活性抑制至少 10%(例如，至少 15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90 或95%或更高百分比)。参见,例如,“Experimental Immunochemistry (实验免疫化学)，第二版”，135-240, Springfield, IL, CC Thomas (1961)，135-139 页，或该测定的常规变形测定，例如鸡红细胞溶解方法，例如描述于Hillmen et al.(2004) NEngl J Med350 (6):552。CH50eq测定是测量血清中总体经典补体活性的方法。该测试是细胞溶解测定，利用抗体敏感化的红细胞作为经典补体途径的活化剂，并利用受试血清的不同稀释液来确定实现50%溶解所需的量(CH50)。例如，利用分光光度计可以测定血细胞溶解百分比。CH50eq测定提供终末补体复合物(TCC)形成的间接测量，因为TCC自身直接负责所测量的血细胞溶解。该测定是公知的，并且本领域技术人员经常使用。简言之，为了活化经典补体途径，未稀释的血清样品(例如，人血清样品)被添加到含有抗体敏感化的红细胞的微测定孔中，从而产生TCC。 然后，在微测定孔中稀释活化的血清，所述微测定孔包被有捕获试剂(例如，能结合TCC的一种或多种成分的抗体)。活化的样品中存在的TCC结合包被微测定孔表面的单克隆抗体。将孔洗涤，并向每个孔添加可检测地标记的并能识别结合的TCC的检测试剂。可检测的标记可以是，例如，荧光标签或酶学标签。测定结果表示为每毫升CH50单位当量(CH50U Eq/mL)。体外检测和/或测量补体活性的其他方法在实施例中描述并举例说明。补体抑制剂可以是可溶性或膜结合蛋白，例如，膜辅因子蛋白(MCP)、衰变加速因子(DAF/⑶55)、⑶59、小鼠补体受体I相关基因/蛋白y (Crry)、人补体受体I (CRl)或因子H、或补体途径的组分的特异性抗体，例如，依库丽单抗(以商品名Soliris 销售的抗C5抗体)、培克珠单抗(依库丽单抗的抗原结合片段)、抗因子B抗体(例如，ATCC保藏号PTA-6230产生的单克隆抗体1379)、抗备解素抗体、抗因子D抗体等(参见下文)。或者，补体抑制剂可以是小分子或线性肽或环状肽，例如，compstatin、N-乙酰天门冬氨酰谷氨酸(NAAGA)等。本文所用的术语“补体活化剂”是指能增加或活化补体活性的任何化合物、组合物或蛋白。补体活性的增加可以是部分的(例如，活性增加10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%)。补体活化剂可以是可溶性蛋白或膜结合蛋白，例如，人Ig同种型Gl (IgGl)、人Ig同种型M(IgM)、小鼠Ig同种型G3 (IgG3)及小鼠IgMFe,以及眼镜蛇毒因子(CVF)，以及上述的生物活性片段，例如Ig蛋白的Fe结构域，例如人IgGlFc结构域、人IgM Fe结构域、小鼠IgG3Fc结构域及小鼠IgM Fe结构域。补体活化剂还可以包括，例如，杂合CVF分子，其包含CVF部分和补体成分3 (C3)部分，例如描述于 Fritzinger et al., “Functional characterization of human C3/cobravenomfactor hybrid proteins for therapeutic complement depletion, ，，Develop.Comp.1mmunol.33 (I): 105-116 (2009)。那些杂合体包含C3的113或315个C末端残基被替换为相应的CVF序列的蛋白。已鉴定出多种能抑制补体的内源可溶性和膜结合蛋白。这些补体抑制剂蛋白包括，但不限于，膜辅因子蛋白(MCP)、衰变加速因子(DAF/CD55)、CD59、小鼠补体受体I相关基因/蛋白y (Crry)、人补体受体I (CRl)和因子H。本文所用的术语“膜辅因子蛋白”、“MCP”或“⑶46”是广泛分布的C3b/C4b结合细胞表面糖蛋白，其抑制宿主细胞的补体活化并作为因子I介导的C3b和C4b切割的辅因子，还包括所述糖蛋白的同源物。T.J.0glesby et al., J.Exp.Med.(1992) 175:1547-1551。MCP属于称为补体活化调节剂(“RCA”)的家族。家族成员共有一定的结构特征，包括不同数量的短同源重复(SCR)结构域，其长度通常为60-70个氨基酸。从氨基末端开始，MCP包含4个SCR、丝氨酸/苏氨酸/脯氨酸富集区、无明确功能的区域、跨膜疏水结构域、胞质锚和胞质尾部。应当理解，物种和株系变异存在于所公开的肽、多肽及蛋白，并且人MCP或其生物活性片段包括所有物种和株系变异。SEQ ID NO:1表不人MCP全长氨基酸序列(参见，例如，UniProtKB/Swiss-Prot登录号P15529)。氨基酸1-34对应于信号肽，氨基酸35-343对应于胞外结构域,氨基酸344-366对应于跨膜结构域，氨基酸367-392对应于胞质结构域。在胞外结构域中，氨基酸35-96对应于SCR1，氨基酸97-159对应于SCR2，氨基酸160-225对应于SCR3，氨基酸226-285对应于SCR4，氨基酸302-326对应于丝氨酸/苏氨酸富集结构域。应当理解，物种和株系变异存在于所公开的肽、多肽及蛋白，并且MCP或其生物活性片段包括所有物种和株系变异。本文所用的术语MCP的“生 物活性”片段是指缺少胞质结构域和跨膜结构域的任何可溶性片段，包括包含1、2、3或4个SCR结构域、基本由1、2、3或4个SCR结构域组成或由1、2、3或4个SCR结构域组成的片段，可具有或不具有丝氨酸/苏氨酸富集结构域，所述生物活性片段具有全长人MCP蛋白的补体抑制剂活性的一部分或全部。在一些实施方案中，补体抑制剂部分包括全长人MCP (SEQ ID NO:1的氨基酸35-392)、人MCP的胞外结构域(SEQ ID NO:1 的氨基酸 35-343)或人 MCP 的 SCR1_4(SEQ ID NO:1 的氨基酸 35-285)。衰变加速因子也被称为CD55(DAF/CD55) (SEQ ID N0:2和 SEQ IDN0:3)，是约 70千道尔顿(kDa)的膜结合糖蛋白，其能抑制宿主细胞的补体活化。与几种其它补体调节蛋白相似，DAF包含数个称为短同源重复(SCR)的约60个氨基酸的重复基序。本文所用的术语“衰变加速因子”、“DAF”或“⑶55”是70千道尔顿(“kDa”)的膜糖蛋白，其包含4个短同源重复(SCR)结构域，然后是C末端的重度O糖基化的丝氨酸/苏氨酸富集结构域，其能将分子从膜表面提升，然后是糖基磷脂酰肌醇(“GPI”)锚。DAF通过解离切割补体蛋白C3和放大补体级联所需的膜结合C3转化酶而能使细胞表面免于补体活化。DAF阻止组装或加速旁路补体途径和经典补体途径的C3转化酶和C5转化酶的衰变。SEQ ID NO: 2表不人DAF全长氨基酸序列(参见，例如，UniProtKB/Swiss-Prot登录号P08173) ；SEQ ID NO:3表示小鼠DAF全长氨基酸序列(参见，例如，UniProtKB/Swiss-Prot登录号Q61475)。在人DAF序列中，氨基酸1_34对应于信号肽，氨基酸35-353出现在成熟蛋白中，氨基酸354-381在翻译后从多肽移除。在成熟蛋白中，氨基酸35-96对应于SCRl，氨基酸96-160对应于SCR2，氨基酸161-222对应于SCR3，氨基酸223-285对应于SCR4，氨基酸287-353对应于O-糖基化的丝氨酸/苏氨酸富集结构域。GPI锚在第353位的丝氨酸处连接于人DAF。在小鼠DAF序列中，氨基酸1-34对应于信号肽，氨基酸35-362出现在成熟蛋白中，氨基酸363-390在翻译后从多肽移除。在成熟蛋白中，氨基酸35-96对应于SCRl，氨基酸97-160对应于SCR2，氨基酸161-222对应于SCR3，氨基酸223-286对应于SCR4，氨基酸288-362对应于O-糖基化丝氨酸/苏氨酸富集结构域。GPI锚在第362位的丝氨酸处连接于小鼠DAF。应当理解，物种和株系变异存在于所公开的肽，多肽及蛋白，并且DAF或其生物活性片段包括所有物种和株系变异。本文所用的术语DAF的“生物活性”片段是指缺少GPI锚和/或其连接于的氨基酸(即，Ser-353)的DAF的任何片段，包括包含1、2、3或4个SCR结构域、基本由1、2、3或4个SCR结构域组成或由1、2、3或4个SCR结构域组成的任何全长DAF蛋白的片段，可具有或不具有O-糖基化丝氨酸/苏氨酸富集结构域，所述生物活性片段具有全长DAF蛋白的补体抑制剂活性的一部分或全部。本文所用的术语“CD59”是128个氨基酸的膜结合糖蛋白，其能强力抑制补体的膜攻击复合物(MAC)。CD59通过在组装期间结合MAC的C8和/或C9成分而发挥作用，从而最终阻止并入在MAC的中心完全形成渗透溶解孔(osmolytic pore)所需的多个C9拷贝。⑶59是N-糖基化的和O-糖基化的。N-糖基化主要包括双触角结构或三触角结构，所述双触角结构或三触角结构具有和不具有乳糖胺和外臂岩藻糖残基，在某些位点存在可变的唾液酸化。与DAF类似，⑶59通过糖基磷脂酰肌醇(“GPI”)锚被锚定于细胞膜中，糖基磷脂酰肌醇(“GPI”)锚连接于氨基酸102处的天冬酰胺处。已制备出CD59的可溶性形式(SCD59)，但是它们通常具有较低的体外功能活性，特别是在存在血清的情况下，这提示未修饰的sCD59具有很小的治疗功效或无治疗功效。参见，例如，Meri et al., “Structuralcomposition and functional characterization ofsoluble CD59:heterogeneityof the oligosaccharide and glycophosphoinositol(GPI)anchor revealed byIaser-desorption mass spectrometric analysis, ^Biochem.J.:923-935(1996)。 SEQ ID NO:4表不人CD59全长氨基酸序列(参见，例如，UniProtKB/Swiss-Prot登录号P13987) ；SEQ ID NO: 5表示小鼠CD59全长序列同种型A(参见，例如，UniProtKB/Swiss-Prot登录号055186) ；SEQID NO:6表示小鼠CD59全长序列同种型B (参见，例如，UniProtKB/Swiss-Prot 登录号 P58019)。在人 CD59 序列中，SEQ ID NO: 4 的氨基酸 1_25 对应于前导肽、SEQ ID NO: 4的氨基酸26-102对应于成熟蛋白，SEQ ID NO: 4的氨基酸103-128在翻译后被移除。GPI锚在SEQ IDN0:4的第102位的天冬酰胺处连接于⑶59。在小鼠CD59序列同种型A中，SEQ ID NO:5的氨基酸1_23对应于前导肽，SEQ ID NO:5的氨基酸24-96对应于成熟蛋白，SEQ ID NO:5的氨基酸97-123在翻译后被移除。GPI锚在SEQ IDNO: 5的第96位的丝氨酸处连接于⑶59。在小鼠⑶59序列的同种型B中，SEQ ID NO:6的氨基酸1-23对应于前导肽，SEQ ID NO:6的氨基酸24-104对应于成熟蛋白，SEQ ID NO:6的氨基酸105-129在翻译后被移除。GPI锚在SEQ ID NO:6的第104位的天冬酰胺处连接于CD59。应当理解，物种和株系变异存在于所公开的肽，多肽及蛋白，并且CD59或其生物活性片段包括所有物种和株系变异。本文所用的术语人CD59的“生物活性”片段是指缺少GPI锚和/或其连接于的氨基酸(S卩，Asn-102)的任何人⑶59的片段，包括具有全长⑶59蛋白的补体抑制剂活性的一部分或全部的任何全长人CD59蛋白的片段；术语小鼠CD59的“生物活性”片段是指缺少GPI锚和/或其连接于的氨基酸(即，同种型A的Ser-96或同种型B的Asp-104)的任何小鼠CD59同种型A或同种型B的片段，包括具有全长CD59蛋白的补体抑制剂活性的一部分或全部的任何全长小鼠CD59蛋白同种型的片段。本文所用的术语“小鼠补体受体I相关基因/蛋白y”或“Crry”是能调节补体活化的膜结合小鼠糖蛋白，包括其同源物。Crry作为补体因子I的辅因子来调节补体活化，补体因子I是切割宿主组织上沉积的C3b和C4b的丝氨酸蛋白酶。Crry还作为衰变加速因子，防止C4b2a和C3bBb形成，C4b2a和C3bBb是补体级联的放大转化酶。SEQ ID NO:7表示小鼠Crry蛋白全长氨基酸序列。氨基酸1_40对应于前导肽，SEQ ID NO: 7的氨基 酸41-483对应于成熟蛋白，成熟蛋白包含对应于胞外结构域的SEQ IDNO: 7的氨基酸41-405，对应于跨膜结构域的SEQ ID NO: 7的氨基酸406-426，以及对应于胞质结构域的SEQ IDNO:7的氨基酸427-483。在胞外结构域中，SEQ ID N0:7的氨基酸83-143对应于SCRl，SEQ ID NO:7的氨基酸144-205对应于SCR2，SEQ ID NO:7的氨基酸206-276对应于SCR3，SEQ ID NO:7的氨基酸277-338对应于SCR4，SEQ ID N0:7的氨基酸339-400对应于SCR5。应当理解，物种和株系变异存在于所公开的肽，多肽及蛋白，并且小鼠Crry蛋白或其生物活性片段包括所有物种和株系变异。本文所用的术语小鼠Crry蛋白的“生物活性”片段是指缺少跨膜结构域和胞质结构域的小鼠Crry的任何可溶性片段，包括包含1、2、3、4或5个SCR结构域，基本由1、2、3、4或5个SCR结构域组成或由1、2、3、4或5个SCR结构域组成的片段，并且包括具有全长Crry蛋白的补体抑制剂活性的一部分或全部的全长小鼠Crry蛋白的任何片段。本文所用的术语“补体受体1”、“CR1”或“⑶35”是2039个氨基酸的人基因编码蛋白，预测分子量为220千道尔顿(“kDa”)，还包括该蛋白的同源物。该基因主要在红细胞、单核细胞、中性粒细胞及B细胞上表达，但也存在于某些T淋巴细胞，肥大细胞及肾小球足细胞上。CRl蛋白通常表达为100至1000个拷贝/细胞。CRl是加工和清除补体调理素作用的免疫复合物的主要系统。CRl负性调节补体级联，介导免疫粘附和吞噬作用，以及抑制经典补体途径和旁路补体途径。全长CRl蛋白包含42个氨基酸的信号肽、1930个氨基酸的胞外结构域、25个氨基酸的跨膜结构域及43个氨基酸的C末端胞质结构域。CRl的胞外结构域局域25个可能的N-糖基化信号序列，并包含30个短同源(“SCR”)结构域，也称为补体控制蛋白(CCP)重复或sushi结构域，每个的长度为60至70个氨基酸。SCR之间的序列同源性为60-99%。30个SCR结构域被进一步分为4个较长的区，称为长同源重复(“LHR”)，每个编码CRl蛋白的约45kDa的区段，称为LHR-A、LHR-B, LHR-C及LHR-D。前三个LHR每个包含7个SCR结构域，LHR-D包含9个SCR结构域。CRl蛋白的胞外结构域上的活性位点包括SCR1-4中对C3b具有较低亲和力的C4b结合位点(包含氨基酸42-295)、SCR8-11中对C4b具有较低亲和力的C3b结合位点(包含氨基酸490-745)、SCR15_18中对C4b具有较低亲和力的C3b结合位点(包含氨基酸940-1196)及SCR22-28中的Clq-结合位点(包含氨基酸1394-1842)。
SEQ ID NO:8表示人CRl全长氨基酸序列(参见，例如，UniProtKB/Swiss-Prot登录号P17927)。氨基酸1-41对应于信号肽，氨基酸42-2039对应于成熟蛋白，成熟蛋白包含对应于胞外结构域的氨基酸42-1971、对应于跨膜结构域的氨基酸1972-1996，以及对应于胞质结构域的氨基酸1997-2039。在胞外结构域中，氨基酸42-101对应于SCR1，102-163对应于SCR2，氨基酸164-234对应于SCR3，氨基酸236-295对应于SCR4，氨基酸295-355对应于SCR5，氨基酸356-418对应于SCR6，氨基酸419-489对应于SCR7，氨基酸491-551对应于SCR8，氨基酸552-613对应于SCR9，氨基酸614-684对应于SCR10，氨基酸686-745对应于SCRl I，氨基酸745-805对应于SCR12，氨基酸806-868对应于SCR13，氨基酸869-939对应于SCR14，氨基酸941-1001对应于SCR15，氨基酸1002-1063对应于SCR16，氨基酸1064-1134对应于SCR17，氨基酸1136-1195对应于SCR18，氨基酸1195-1255对应于SCR19，氨基酸1256-1318对应于SCR20，氨基酸1319-1389对应于SCR21，氨基酸1394-1454对应于SCR22，氨基酸1455-1516对应于SCR23，氨基酸1517-1587对应于SCR24，氨基酸1589-1648对应于SCR25，氨基酸1648-1708对应于SCR26，氨基酸1709-1771对应于SCR27，氨基酸1772-1842对应于SCR28，氨基酸1846-1906对应于SCR29，氨基酸1907-1967对应于SCR30。应当理解，物种和株系变异存在于所公开的肽、多肽及蛋白，并且CRl蛋白或其生物活性片段包括所有物种和株系变异。本文所用的术语CRl蛋白的“生物活性”片段是指缺少跨膜结构域和胞质结构域的CRl的任何可溶性片段，包括包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、
16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29 或 30 个 SCR 结构域，基本由 1、2、3、4、5、
6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30 个 SCR结构域组成或由 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个SCR结构域组成的片段，并且包括全长CRl蛋白的补体抑制剂活性的一部分或全部的全长CRl蛋白的任何片段。本文所用的术语“补体因子H”、“因子H”或“ΠΓ是补体因子H并包括其同源物，补体因子H是单多肽链血浆糖蛋 白。该蛋白由20个约60个氨基酸的保守短同源重复(SCR)结构域组成，所述短同源重复(SCR)结构域类似于串珠地以连续方式排列，每个结构域之间由2-6个氨基酸的短连接子序列隔开。因子H能结合C3b、加速旁路途径C3转化酶(C3bBb)的衰变，以及作为C3b活化中的蛋白水解的辅因子。在因子H存在的情况下，因子I的蛋白水解导致C3b的切割和失活。因子H具有至少3个不同的C3b结合结构域，其位于SCR1-4、SCR5-8及SCR19-20中。每个结构域结合C3b蛋白中不同的区:N末端位点结合天然C3b ；位于因子H中区的第二位点结合C3c片段，位于SCR19和20中的位点结合C3d区。此外，因子H还含有肝素的结合位点，其位于因子H的SCR7、SCR5-12及SCR20中，并与C3b结合位点的SCR重叠。结构和功能分析已证实，因子H的补体抑制剂活性的结构域位于前四个N末端SCR结构域中。SEQ ID NO: 9表示人因子H全长氨基酸序列(参见,例如,UniProtKB/Swiss-Prot登录号P08603) ；SEQ ID NO: 10表示小鼠因子H全长氨基酸序列(参见，例如，UniProtKB/Swiss-Prot登录号P06909)。在人因子H序列中，SEQ ID NO:9的氨基酸1_18对应于信号肽，SEQ ID N0:9的氨基酸19-1231对应于成熟蛋白。在该蛋白中，SEQ ID NO:9的氨基酸21-80对应于SCRl，SEQ ID NO:9的氨基酸85-141对应于SCR2，SEQ ID NO:9的氨基酸146-205 对应于 SCR3，SEQ ID NO:9 的氨基酸 210-262 对应于 SCR4，SEQ ID NO:9 的氨基酸267-320对应于SCR5。在小鼠因子H序列中，SEQ ID NO: 10的氨基酸1_18对应于信号肽，SEQID NO: 10的氨基酸19-1234对应于成熟蛋白。在该蛋白中，SEQ ID NO: 10的氨基酸19-82对应于SCR1，SEQ ID NO: 10的氨基酸83-143对应于SCR2，SEQ ID NO: 10的氨基酸144-207 对应于 SCR3，SEQ ID NO: 10 的氨基酸 208-264 对应于 SCR4，SEQ ID NO: 10 的氨基酸265-322对应于SCR5。应当理解，物种和株系变异存在于所公开的肽，多肽及蛋白，并且因子H或其生物活性片段包括所有物种和株系变异。本文所用的术语因子H的“生物活性”片段是指具有全长因子H蛋白的补体抑制剂活性的一部分或全部的因子H蛋白的任何部分，并且包括，但不限于，包含SCR1-4、SCR1_5、SCR1-8、SCR1-18、SCR19_20的因子H片段，或天然存在的因子H的任何同源物或其片段，在下文详细描述。在一些实施方案中，因子H的生物活性片段具有下述性质中的一种或多种:
(I)结合C反应蛋白(CRP)、⑵结合C3b、(3)结合肝素、(4)结合唾液酸、(5)结合内皮细胞表面、(6)结合细胞整合蛋白受体、(7)结合病原体、(8)C3b辅因子活性、(9)C3b衰变加速活性及(10)抑制旁路补体途径。在一些实施方案中，构建体的补体调节剂部分包含补体抑制剂或其生物活性片段。在一些实施方案中，补体抑制剂选自人MCP、人DAF、小鼠DAF、人CD59、小鼠CD59同种型A、小鼠⑶59同种型B、小鼠Crry蛋白、人CR1、人因子H或小鼠因子H，或以上的生物活性片段。在一些实施方案中，构建体的补体抑制剂部分包含全长人MCP (SEQID NO:1)。在一些实施方案中，构建体的补体抑制剂部分包含人MCP (SEQ ID NO:1)的生物活性片段。在一些实施方案中，人MCP的生物活性片段选自SCR1-4 (SEQ ID NO:1的氨基酸35-285)、SCR1_4加丝氨酸/苏氨酸富集结构域(SEQ ID NO:1的氨基酸35-326)及MCP的胞外结构域(SEQID NO:1 的氨基酸 35-343)。在一些实施方案中，构建体的补体抑制剂部分包含全长人DAF。在一些实施方案中，构建体的补体抑制剂部分包含人DAF(SEQ ID NO:2)的生物活性片段。在一些实施方案中，人DAF的生物活性片段选自SCR1-4(SEQ ID NO: 2的氨基酸25-285)和SCR1-4加O-糖基化丝氨酸/苏氨酸富集结构域(SEQ ID NO:2的氨基酸25-353)。在一些实施方案中，构建体的补体抑制剂部分包含全长小鼠DAF(SEQ ID N0:3)。在一些实施方案中，构建体的补体抑制剂部分包含小鼠DAF的生物活性片段。在一些实施方案中，小鼠DAF的生物活性片段选自SCR1-4 (SEQ ID NO: 3的氨基酸35-286)和SCR1-4加O-糖基化丝氨酸/苏氨酸富集结构域(SEQID NO:3的氨基酸35-362)。在一些实施方案中，构建体的补体抑制剂部分包含全长人⑶59 (SEQ ID N0:4)。在一些实施方案中，构建体的补体抑制剂部分包含人⑶59 (SEQ ID N0:4)的生物活性片段。在一些实施方案中，人⑶59的生物活性片段包含缺少GPI锚的人⑶59胞外结构域(SEQ IDNO:4的氨基酸26-101)。在一些实施方案中，构建体的补体抑制剂部分包含全长小鼠⑶59同种型A(SEQ ID N0:5)。在一些实施方案中，构建体的补体抑制剂部分包含小鼠⑶59同种型A(SEQ ID NO:5)的生物活性片段。在一些实施方案中，小鼠⑶59同种型A的生物活性片段包含缺少GPI锚的小鼠CD59同种型A胞外结构域(SEQ ID NO: 5的氨基酸24-95)。在一些实施方案中，构建体的补体抑制剂部分包含全长小鼠⑶59同种型B(SEQ ID N0:6)。在一些实施方案中，构建体的补体抑制剂部分包含小鼠⑶59同种型B (SEQ ID NO: 6)的生物活性片段。在一些实施方案中，小鼠CD59同种型B的生物活性片段包含缺少GPI锚的小鼠CD59同种型B胞外结构域(SEQ ID NO:6的氨基酸24-103)。在一些实施方案中，构建体的补体抑制剂部分包含全长小鼠Crry蛋白(SEQ IDN0:7)。在一些实施方案中，构建体的补体抑制剂部分包含小鼠Crry蛋白(SEQ ID NO:7)的生物活性片段。在一些实施方案中，小鼠Crry蛋白的生物活性片段选自SCR1-5 (SEQ IDNO: 7的氨基酸41-400)和小鼠Crry蛋白的胞外结构域(SEQ ID NO: 7的氨基酸41-405)。在一些实施方案中，构建体的补体抑制剂部分包含全长人CRl蛋白(SEQ IDN0:8)。在一些实施方案中，构建体的补体抑制剂部分包含人CRl蛋白(SEQ ID NO:8)的生物活性片段。在一些实施方案中，人CRl蛋白的生物活性片段选自SCR1-4(SEQ ID NO: 8的氨基酸 42-295)、SCR1-10 (SEQ ID N0:8 的氨基酸 42-684)、SCR8-11 (SEQ ID NO: 8 的氨基酸 490-745)、SCR15-18(SEQ ID NO: 8 的氨基酸 940-1196)及 SCR22-28 (SEQ ID NO: 8 的氨基酸 1394-1842)。在一些实施方案中，构建体的补体抑制剂部分包含全长人(SEQ IDNO:9)或小鼠(SEQ ID NO: 10)因子H。在一些实施方案中，构建体的补体抑制剂部分包含人(SEQ IDNO:9)或小鼠(SEQ ID NO: 10)因子H的生物活性片段。在一些实施方案中，人因子H(SEQ IDNO:9)的生物活性片段选自SCR1-4(SEQ ID NO:9的氨基酸21-262)、因子H的SCR1-5 (SEQIDNO:9的氨基酸21-320)、因子H的SCR1-8 (SEQ ID N0:9的氨基酸21-507)及因子H的SCR1-18(SEQ ID NO: 9的氨基酸21-1104)。在一些实施方案中，小鼠因子H(SEQ ID NO: 10)的生物活性片段选自SCR1-4(SEQ IDN0:10的氨基酸19-264)、因子H的SCR1-5(SEQ IDNO: 10的氨基酸19-322)、因子H的SCR1-8 (SEQ ID NO: 10的氨基酸19-507)及因子H的SCR1-18(SEQ ID NO: 10的氨基酸19-1109)。在一些实施方案中，人(SEQ ID NO:9)或小鼠(SEQ ID NO: 10)因子H的生物活性片段包含(并且在一些实施方案中，由以下组成或基本由以下组成)因子H的至少前4个N末端SCR结构域，包括例如，因子H的前5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或更多个N末端SCR结构域中的至少一项。在一些实施方案中，补体抑制剂部分是能结合补体成分的抗体(或其抗原结合片段)，所述补体成分例如选自 CUClq, Cls、C2、C2a、C3、C3a、C3b、C4、C4b、C5、C5a、C5b、C6、C7、C8及C9的补体成分。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段所结合的补体多肽可以是人多肽，例如，人 CUClq, Cls、C2、C2a、C3、C3a、C3b、C4、C4b、C5、C5a、C5b、C6、C7、C8、C9、因子B、因子D或备解素多肽。上述补体蛋白的氨基酸序列是本领域公知的，制备可用于制备一种或多种补体蛋白的特异性抗体(或其抗原结合片段)的蛋白或其片段的方法也是本领域公知的。合适的方法在本文中也有描述并举例说明。适于合并到本文所述的融合蛋白中并后续用于本文所述的任何方法的示例性的抗补体蛋白抗体也是本领域公知的。例如，能结合补体成分C5并抑制C5被切割为片段 C5a 和 C5b 的抗体包括，例如，依库丽单抗(Soliris(K) ;Alexion Pharmaceuticals, Inc., Cheshire, CT)和培克珠单抗(Alexion Pharmaceuticals, Inc., Cheshire, CT) 参见，例如，Kaplan (2002) Curr Opin Investig Drugs3 (7): 1017-23; Hill (2005) Clin AdvHematol 0ncol3(11):849-50;Rother et al .(2007)Nature Biotechnol25 (11):1256-1488;Whiss(2002)Curr Opin Investig Drugs3(6):870-7;Patel et al.(2005)DrugsToday(Bare)41(3):165-70;和 Thomas et al.(1996)Mol Immunol.33(17-18):1389-401。
在一些实施方案中，抗C5抗体能结合人补体成分C5蛋白的α链中的表位。能结合C5的α链的抗体描述于，例如，PCT申请公布号W02010/136311和美国专利第6，355，245号。在一些实施方案中，抗C5抗体能结合人补体成分C5蛋白的β链中的表位。能结合C5的β链的抗体描述于，例如，Moongkarndi et al.(1982)Tmmunobio1162:397;Moongkarndi et al.(1983)Tmmunobio1165:323 ;和 Mollnes etal.(1988)Scand J ImmunoI28:307-312。适合用于本文所述的融合蛋白的其他抗C5抗体及其抗原结合片段描述于，例如，PCT申请公布号W02010/015608，通过引用将该文献的公开内容整体并入本文。能结合C3b并例如抑制C3b转化酶的抗体也是本领域公知的。例如，PCT申请公布号W02010/136311，W02009/056631及W02008/154251，通过引用将每篇上述文献的公开内容整体并入本文。拮抗性抗C6抗体和抗C7抗体描述于，例如，Brauer et al.(1996)Transplantation虹588-594 和美国专利第 5，679，345 号。在一些实施方案中，补体抑制 剂部分是抗因子B抗体(例如，ATCC保藏号PTA-6230产生的单克隆抗体1379)。抗因子B抗体还描述于，例如，Ueda et al.(1987) JImmunol 138 (4): 1143-9; Tanhehco et al.(1999) Transplant Proc31 (5): 2168-71:美国专利申请公布号 20050260198 和 2008029911 ;和 PCT 公布号 W009/029669。在一些实施方案中，补体抑制剂部分是抗因子D抗体，例如，以下文献中描述的抗体:Pascual et al.(1990) J Tmmunol Methodsl27:263-269; Sahu et al.(1993)MolImmunol30(7):679-684:Pascual et al.(1993)Eur J TmmunoI23:1389-1392;Niemann etal.(1984) J Immunol 132 (2):809-815:美国专利第7，439，331号;或美国专利申请公布号20080118506。在一些实施方案中，补体抑制剂部分是抗备解素抗体。合适的抗备解素抗体也是本领域公知的，并包括，例如，美国专利申请公布号20110014614和PCT申请公布号W02009110918。在一些实施方案中，补体抑制剂部分是能特异性地结合人补体成分蛋白(例如，人C5、C6、C7、C8或C9)的抗体(或其抗原结合片段)。术语“特异性结合(binding) ”或“特异性地结合(binds)”是指两个分子形成生理条件下相对稳定的复合物(例如，抗体和C3b之间的复合物)。通常，当缔合常数(Ka)高于IO6M4时，结合被认为是特异性的。因此，抗体能以至少(或大于)IO6(例如，至少或大于107、IO8、IO9、1010、IOllUO12,1013、IO14或IO15或更高)M_i的Ka特异性地结合C5蛋白。能特异性地结合人补体成分C5蛋白的抗体实例描述于，例如，美国专利第号6，355，245和PCT申请公布号W02010/015608。确定抗体是否能结合蛋白抗原和/或抗体对于蛋白抗原的亲和力的方法是本领域已知的，并且在本文中也有描述。例如，利用多种技术可以检测和/或定量抗体与蛋白抗原的结合，例如，但不限于，Western印迹、斑点印迹、等离子体表面共振方法(例如，BIAcore 系统;Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway, N.J.)或酶联免疫吸附测定(ELISA) o 参见，例如，Harlow and Lane (1988) “Antibodies: A LaboratoryManual” Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.;BennyK.C.Lo (2004) “Antibody Engineering:Methods and Protocols, Humana Press(ISBN:1588290921);Borrebaek(1992) “Antibody Engineering, A Practical Guide, 1.H.Freemanand C0.，NY;Borrebaek(1995) “Antibody Engineering,，，2nd Edition, Oxford UniversityPress, NY, Oxford;Johne et al.(1993)J Immunol Meth.160:191-198; Tonsson etal.(1993) Ann Biol Clin51:19-26;和.Tonsson et al.(1991)Biotechniquesl1:620_627。也可参见，美国专利第6，355，245号。还已经鉴定出多种能活化补体的内源可溶性蛋白。这些补体活化剂包括，但不限于，各种免疫球蛋白(Ig)蛋白，包括人Ig同种型Gl (IgGl)、人Ig同种型M (IgM)、小鼠Ig同种型G3(IgG3)及小鼠IgM Fe、以及眼镜蛇毒因子(CVF)，以及以上的生物活性片段。Ig蛋白的补体活化活性已被定位在Fe结构域。因此，补体活化人和小鼠Ig蛋白的生物活性片段of包括Fe结构域,例如人IgGlFc结构域、人IgM Fe结构域、小鼠IgG3Fc结构域及小鼠IgM Fe结构域。本文所用的术语“眼镜蛇毒因子”、“CVF”和“C3b(眼镜蛇)”是眼镜蛇毒的非毒性补体活化组分。与天然存在的人C3b相似，CVF(SEQ ID NO: 11)与补体成分因子B和因子D形成复合物或转化酶。该CVFBbD转化酶能通过旁路补体途径活化多个物种中的C3。CVFBbD转化酶对因子H有抗性，因此不会通过因子I或CRl的活性被阻断，并能将C3几乎100%转化为C3片段，以及将C5几乎100%转化为C5片段。iC3b、C3a、C5b-9、C5a和因子B切割产物Bb的水平在CVF处理的血清中都非常高。从单眼纹眼镜蛇(孟加拉眼镜蛇)克隆CVF以及对其测序报道于Fritzinger, et al.，“Molecular cloning and derived primary structureof cobra venom factor,，，Proc.Nat，I Acad.Sc1.USA91 (26): 12775-779 (1994)；该序列保存于GenBank数据库中，登录号U09969。通过引用将Fritzinger, et al.的文献和以登录号U09969保存于GenBank的序列并入本为。术语“眼镜蛇毒因子”、“ CVF ”和“C3b(眼镜蛇)”还指包含CVF部分和补体成分3 (C3)部分的杂合CVF分子，例如，描述于 Fritzinger et al., “Functional characterization of human C3/cobra venomfactor hybrid proteins for therapeutic complement depletion,，，Develop.Comp.1mmunol.33(1): 105-116 (2009)，通过弓I用将该文献并入本文。那些杂合体包括C3的113或315个C末端残基 被相应的CVF序列替换的蛋白。两种杂合体形成表现出C3切割活性、但切割速率不同的稳定转化酶。两种转化酶都不能切割C5。两种转化酶表现出对因子H和I导致的失活的部分抗性，这允许它们耗尽人血清中的补体。在一些实施方案中，构建体的补体调节剂部分包含补体活化剂或其生物活性片段。在一些实施方案中，构建体的补体活化剂部分包含Ig蛋白或其生物活性片段。在一些实施方案中，Ig蛋白或其生物活性片段包含人IgGl、人IgGlFc结构域、人IgM、人IgM Fe结构域、小鼠IgG3、小鼠IgG3Fc结构域、小鼠IgM及小鼠IgM Fe结构域。在一些实施方案中，构建体的补体活化剂部分包含眼镜蛇毒因子(CVF)或其生物活性片段。在本文所述的任何实施方案中，包含C3d结合抗体或其生物活性片段和补体抑制剂部分的构建体还包括氨基酸连接子序列，所述补体抑制剂部分包含人CD59、小鼠CD59同种型A、小鼠⑶59同种型B、小鼠Crry蛋白、人因子H、小鼠因子H、人CRl、人MCP、人DAF或小鼠DAF或以上的生物活性片段，所述氨基酸连接子序列将抗C3d或抗C3dg部分和补体抑制剂部分(例如，人⑶59、小鼠⑶59同种型A、小鼠⑶59同种型B、小鼠Crry蛋白、人因子H、小鼠因子H、人CRl、人MCP、人DAF或小鼠DAF或以上的生物活性片段)连接起来。
在本文所述的任何实施方案中，包含C3d结合抗体或其生物活性片段和补体活化剂部分的构建体还包含氨基酸连接子序列，所述补体活化剂部分包含人IgGl、人IgM、小鼠IgG3、小鼠IgM及CVF或以上的生物活性片段，所述氨基酸连接子序列将抗C3d或抗C3dg部分和补体活化剂部分(例如，人IgGl、人IgM、小鼠IgG3、小鼠IgM及CVF或以上的生物活性片段)连接起来。在一些实施方案中，融合分子的靶向部分连接于(例如，直接或通过连接子)补体调节多肽(例如，补体抑制剂多肽)的氨基末端。在一些实施方案中，融合分子的靶向部分连接于(例如，直接或通过连接子)补体调节多肽(例如，补体抑制剂多肽)的羧基末端。例如，本文提供了示例性的构建体，其包含抗C3d抗体的单链scFv片段和补体抑制剂多肽(例如可溶性CD59、MCP或DAF)，其中补体抑制剂多肽(例如，the可溶性CD59多肽)的羧基末端连接于scFv的重链或轻链多肽部分的氨基末端，并任选地通过连接子(例如，(GGGGS)n或本文所述的任何其它连接子)进行连接。在一些实施方案中，本文所述的融合分子包含多个(例如，2、3、4、5、6或7或更多)补体调节剂，例如，多个补体抑制剂多肽。两个或更多个补体调节剂可以是相同的或不同的。例如，在一些实施方案中，本文所述的融合蛋白可以包含两个或更多个可溶性CD59部分(例如，可溶性人CD59部分)。在另一实例中，本文所述的融合蛋白可以含有两个或更多个补体抑制剂多肽部分，其中一个是可溶性人CD59，另一个是可溶性人MCP。因此，例如，本文所述的融合分子可以包含:(a)靶向部分(例如，抗C3d抗体、抗C3dg抗体或上述任何一个的抗原结合片段)；(b)第一补体抑制剂多肽(例如，可溶性形式的CD59，例如，人CD59);和(c)第二补体抑制剂多肽(例如，可溶性形式的DAF，例如，可溶性形式的人DAF)。例如，补体抑制剂多肽可以是本文所述的任意一种并其包括变体和生物活性片段。

在一些实施方案中，例如，所述靶向部分是抗体(或其抗原结合片段)，靶向部分的轻链包含至少一个补体调节剂(例如，补体抑制剂多肽)，重链包含至少一个补体调节齐U。两个或更多个补体调节剂(例如，补体抑制剂多肽)可以是相同的或不同的。例如，在一些实施方案中，融合蛋白包含靶向部分，靶向部分包含抗C3d(或抗C3dg)抗体的Fab片段，其中(i)Fab片段的轻链包含(在其C末端)补体抑制剂多肽，例如sDAF、sCD59或本文所述的任何补体抑制剂多肽，(ii)Fab片段的重链包含(在其C末端)与(i)中相同的或不同的补体抑制剂多肽。根据Fab的固有性质，可以预期到能发生两条链合适的配对。补体调节剂(例如，补体抑制剂)部分和Fab的轻链或重链可以直接或通过连接子序列(例如，本文所述的任何连接子序列)连接在一起。免疫调节剂本文还提供融合分子，其通过第一部分能抑制B细胞活化或活性，通过第二部分能抑制补体活性。构建体可用于治疗病症等，所述病症例如，但不限于，移植物排斥和自身免疫疾病(例如，本文所述的任何自身免疫疾病)。本文所用的能抑制B细胞活化或活性的化合物(例如，小分子或多肽，例如抗体)是能抑制以下任何方面的化合物:(a)由B细胞或浆细胞抗原特异性地产生或分泌抗体；(b) B细胞或浆细胞增殖；(C)B细胞进行的抗原加工；(d)B细胞对T细胞的抗原呈递；(e)上调B细胞的细胞表面标志物；和/或(f)B细胞(例如，抗原驱动地)分化位产抗体血浆细胞。例如，在一些实施方案中，所述化合物(在该情况下为构建体的第一部分)能抑制与B细胞增殖和/或B细胞分化为血浆细胞有关的一种或多种信号转导或共同信号转导事件的化合物。可用于本文所述的构建体的示例性的化合物包括，例如，能结合和抑制B细胞的B细胞受体的活性、表达或表面呈递的分子。例如，所述分子可以是抗体或其抗原结合片段，其能结合B细胞受体并(a)抑制其功能，例如，抑制B细胞受体和T细胞上的同源受体之间的相互作用，和/或(b)促进结合的B细胞受体的细胞内化。在一些实施方案中，所述化合物是能抑制共刺激分子结合对(例如，B细胞-T细胞共刺激分子结合对，例如CD40和CD40L)之间的相互作用的分子(例如，抗体或其抗原结合片段)。例如，第一部分可以是拮抗性抗CD40抗体、拮抗性抗CD40L抗体或以上任何的拮抗性抗原结合片段。可与本文所述的构建体结合使用的拮抗性抗CD40抗体是本领域公知的，并包括,例如，HCD122 [Luqman et al.(2008)Bloodll2 (3):711-720]。也可参见美国专利申请公布号20090304706和PCT申请公布号W007/129895中公开的拮抗性抗CD40抗体,通过引用将上述每篇文献的公开内容整体并入本文。合适的抗CD40L抗体描述于，例如，PCT申请公布号W006/030220和美国专利申请公布号20030180292，通过引用将上述文献的公开内容整体并入本文。能抑制B细胞活化或活性的其他示例性的分子包括，例如，CD19的拮抗剂，例 如，拮抗性抗CD19抗体或该抗体的拮抗性CD19结合片段。可用于本文所述的构建体的合适的拮抗性抗⑶19抗体包括,例如，MDX-1342 (Bristol-Myers Squibb)[Cardarelli et al.(2010)Cancer Tmmunol Immunother59 (2):257-2651。尽管不被任何特定理论或作用机制所束缚，本发明人认为，抑制C3d或C3dg和宿主B细胞上的CR2之间的相互作用能降低B细胞活化和/或活性，例如，通过降低B细胞对T细胞的抗原呈递，并因此进一步抑制后续T细胞活化。因此，在一些实施方案中，能抑制B细胞活化和/或活性的第一部分是，例如，具有下述性质的抗体或其抗原结合片段:(i)结合CR2的天然配体，例如C3d，C3dg及iC3b，和(ii)抑制CR2和至少一种其天然配体之间的相互作用。抗体或其抗原结合片段可以是本文所述的任何抗体。本文还提供包含第一部分的构建体，所述第一部分包含能抑制CR2和C3d或C3dg之间的相互作用拮抗性抗CR2抗体(或其抗原结合片段)。合适的抗CR2(⑶21)抗体是本领域公知的，并包括，例如，Rao etal.中的mAb 0KB7,0KB7是在人CR2的C3d结合位点或在人CR2的C3d结合位点附近进行结合的单克隆抗体。Cellular Immunologyl985; 93 (2): 549-555。例如，人 CR2 (NCBI 登录号ΝΡ_001006659)和小鼠CR2 (NCBI登录号NP_031784.1)的氨基酸序列是本领域公知的，制备和分离该蛋白的方法(例如，用于与抗体产生相关的免疫接种)也是本领域公知的。参见，例如，Moore et al.(1987) Proc Natl Acad Sci USA84:9194-9198; Prota et al.(2002)Proc Natl Acad Sci USA99:10641-10646;和 Weis et al.(1984)Proc Natl Acad SciUSA81:881-8850制备(例如，免疫哺乳动物和分离产生的抗体)和测试抗CD21抗体的方法也是本领域已知的，并且在本文中也有描述。本文所述的构建体中存在的能抑制补体活性的第二部分可以是，例如，本文所述的任何一个补体抑制剂多肽(包括变体和功能片段)。确定分子(例如，抗体或其抗原结合片段，例如抗CR2抗体或抗C3d抗体)是否能抑制两个蛋白(例如,CR2和CR2的天然配体，或CD40和CD40L)之间的相互作用的方法(例如，竞争性结合研究)是本领域公知的，并且在本文中也有描述。融合分子的连接子本文提供的本文所述的融合分子可以包括两个部分(moiety)或部分(portion),例如，祀向部分(moiety)或部分(portion)和预防、治疗或诊断活性部分(moiety)或部分(portion),其通过共价键直接融合在一起或通过连接子融合。连接子序列的实例是本领域已知的，并包括，例如，(Gly4Ser) > (Gly4Ser)2^ (Gly4Ser)3^ (Gly3Ser)4^ (SerGly4) >(SerGly4)2^ (SerGly4)3和(SerGly4)4。连接序列还可以包括补体因子的不同结构域之间存在的“天然”连接序列。例如，VSVFPLE或EYFNKYSS，可以使用人CR2的前两个N末端短同源重复结构域之间的连接序列。在一些实施方案中，使用人CR2的第四个和第五个N末端短同源重复结构域之间的连接序列(EEIF)。制备方法可以利用分子生物学和蛋白质化学领域已知的多种技术产生本文所述的融合蛋白。例如，可以将本文所述的融合蛋白的核酸编码插入表达载体中，所述表达载体含有转录和翻译调节序列，包括，例如，启动子序列、核糖体结合位点、转录起始和终止序列、翻译起始和终止序列、转录终止信号、聚腺苷酸化信号及增强子或激活序列。调节序列包括启动子和转录起始和终止序列。此外，可以包括多个复制系统，使得可以在两种不同生物体中维持表达载体，例如在哺乳动物或昆虫细胞中进行表达，在原核宿主中进行克隆和扩增。数种可能的载体系统可用于在哺乳动物细胞中从核酸表达融合蛋白。一类载体依赖于所需的基因序列整合入宿主细胞基因组。通过同时引入药物抗性基因，例如大肠杆菌 gpt(Mulligan and Berg (1981)Proc Natl Acad Sci USA78:2072)或 Tn5neo (Southernand Berg(1982)Mol Appl Genetl:327)，可以选择具有稳定整合的DNA的细胞。选择标记基因可以被连接于待表达的DNA基因序列或通过共转染被引入相同细胞(Wigler etal.(1979) Celll^ 77)。第二类载体利用能赋予染色体外质粒自我复制能力的DNA元件。这些载体可来源于动物病毒，例如牛乳头瘤病毒(Sarver et al.(1982) Proc Natl Acad SciUSA, 12:7147)、多瘤病毒(Deans et al.(1984)Proc Natl Acad Sci USA81:1292)或 SV40病毒(Lusky and Botchan (1981) Nature293:79)。可以以适于后续核酸表达的方式将表达载体引入细胞。引入方法很大程度取决于目的细胞类型，这在下文进行讨论。示例性的方法包括CaP04沉淀、脂质体融合、脂质体转染、电穿孔、病毒感染、 葡聚糖介导的转染、聚凝胺介导的转染、原生质体融合及直接微注射。适于表达融合蛋白的宿主细胞包括酵母、细菌、昆虫、植物以及上文所述的哺乳动物细胞。感兴趣的细胞是细菌(例如大肠杆菌)、真菌(例如酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)和毕赤巴斯德酵母(Pichia pastoris))、昆虫细胞(例如SF9)、哺乳动物细胞系(例如，人细胞系)、以及原代细胞系(例如，原代哺乳动物细胞)。在一些实施方案中，可以在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或合适的骨髓瘤细胞系(例如(NSO))中表达融合蛋白。合适的细胞系还包括，例如，BHK-21(幼年仓鼠肾)细胞、293 (人胚肾)细胞、HMEpC (人乳腺上皮细胞)、3T3(小鼠胚胎成纤维细胞)细胞。靶向部分和预防或治疗活性部分可以任选地直接彼此连接，或可以任选地通过连接子部分连接在一起。当靶向部分和活性部分直接连接在一起时，制备出杂合载体，其中利用已知的科学方法将编码靶向部分和活性部分的DNA本身直接彼此连接。当使用连接子部分时，制备出杂合载体，其中编码靶向部分的DNA连接于编码连接子部分的一端的DNA ;编码活性部分的DNA连接于连接子部分的另一端。以合适的方向进行这些连接的方法是已知的。可以按照串联或按照三路连接来进行这些连接。可以作为本发明的连接子序列的序列实例包括长度约2至约16个氨基酸的短肽。可用作本发明的连接子的肽序列是(Gly-Ser)n，其中 n=l 至 8 ; (GlyGlyGlySer)n,其中 n=l 至 4 ; (GlySerSerGly)n,其中 n=l 至 4。可用作本发明的连接子的序列的其它实例包括来自以下补体相关蛋白中一种或多种的一个或多个短保守区(SCR)结构域:因子H、补体受体1、补体受体2、因子B、DAF等。本领域技术人员应当理解，很多可以用于本发明的活性部分存在的性质为连同信号肽或前导肽的分泌蛋白和/或作为经历进一步细胞内或细胞外加工的前肽。在这些情况下，本发明的杂合载体可以包括一种或多种编码所述信号肽或前导肽的DNA序列和/或一种或多种编码所述前肽序列的DNA序列，这取决于是否需要所述分泌和/或加工。或者，本文的杂合载体可以包括编码不同信号肽或前导肽和/或前肽序列的DNA序列，所述序列被选择为能优化融合蛋白的表达和定位。在大部分情况下，可以省略信号肽，因为靶向部分能为活性部分靶向于个体体内的所需组织和细胞提供足够的信息。在一些实施方案中，可以从转基因动物(例如，转基因哺乳动物)表达及纯化本文所述的融合蛋白。例如，可以在转基因非人哺乳动物(例如，啮齿动物、绵羊或山羊)中产生本文所述的融合蛋白，并从乳中分离，例如描述于，Houdebine (2002) Curr Opin Biotechno!13 (6):625-629;vanKuik-Romeiin et al.(2000)Transgenic Res9(2):155-159;和Pollock et al.(1999) J Immunol Methods231 (1~2): 147-157。在哺乳动物乳产物中制备蛋白的其他方法描述于，例如，美国专利申请公布号200600105347和20040006776和美国专利第7，045，676号。通过以足以允许蛋白表达的条件及时间长度，培养用含有编码抗体的核酸的表达载体转化的宿主细胞而从细胞产生本文所述的融合蛋白。蛋白表达的条件会根据所选的表达载体和宿主细胞而不同，并且本领域技术人员通过常规实验能容易地确定。例如，大肠杆菌中表达的多肽可以从内含体再折叠(参见，例如，Hou et al.(1998)细胞因子1^:319-30)。细菌表达系统及其使用方法是本领域公知的(参见，Current Protocols inMolecular Biology, Wiley & Sons,和 Molecular Cloning—A Laboratory Manual -第三版，Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York(2001))。密码子的选择、合适的表达载体和合适的宿主细胞会根据多种因素而不同，并且可以按照需要容易地进行优化。本文所述的融合蛋白表达于哺乳动物细胞中或其他表达系统中，包括但不限于酵母、杆状病毒及体外表达系统(参见，例如，Kaszubska et al.(2000)Protein Expression andPurification18:213-220)。在表达后，可以分离融合蛋白。当涉及本文所述的任何蛋白(例如，本文所述的融合蛋白)时，术语“纯化的”或“分离的”是指多肽已被从天然伴随其的成分(例如，蛋白或其它天然存在的生物或有机分子，例如，表达该蛋白的原核细胞中的其他蛋白、脂质及核酸)分出或纯化。通常，当多肽以重量计占样品中总蛋白的至少60%(例如，至少65、70、75、80、85、90、92、95、97或99%)时，多肽是纯化的。可以以本领域技术人员已知的多种方式分离或纯化本文所述的融合蛋白，这取决于样品中存在的其它成分是什么。标准纯化方法包括电泳技术、分子技术、免疫学技术及层析技术，包括离子交换层析、疏水层析、亲和层析及反相HPLC层析。例如，利用标准抗融合蛋白抗体亲和柱，可以纯化融合蛋白。也可联合使用蛋白浓缩和超滤技术及渗滤技术。参见，例如，Scopes (1994) “Protein Pur ification,第三版，” Springer-Verlag, New YorkCity, New York。需要的纯化程度会根据所需用途而不同。在某些情况下，表达的多肽的纯化并不是必需的。测定纯化多肽的收率或纯度的方法是本领域已知的，并包括，例如，Bradford测定、UV光谱、缩二脲蛋白测定、Lowry蛋白测定、酰氨黑蛋白测定、高压液相色谱(HPLC)、质谱(MS)及凝胶电泳法(例如，利用蛋白染色，例如考马斯亮蓝或胶体银染色)。在一些实施方案中，可以利用本领域公知的化学方法，全部或部分地重头合成本文所述的融合蛋白。例如，可以通过固相技术合成组分氨基酸序列，从树脂上将其切割下来，并通过制备型高效液相色谱进行纯化，然后化学连接而形成所需多肽。可以通过氨基酸分析或测序确认合成肽的组成。表达和/或纯化后，可以利用体外或体内测定(例如本文所述的任何测定)，测试本文所述的融合蛋白的多种所需性质中的任何一种。例如，可以测试本文所述的融合蛋白的抑制C5转化酶的能力，例如描述于，Heinen et al.(2009)，同上。在一些实施方案中，可以从融合蛋白制备物去除内毒素。从蛋白样品去除内毒素的方法是本领域已知的。例如，可以利用多种可商购试剂从蛋白样品去除内毒素，包括，但不限于，ProteoSpin 内毒素去除试剂盒(Norgen Biotek Corporation)、Detoxi_Gel 内毒
素去除胶(Thermo Scientific; Pierce Protein Research Products)、M[raCLEAN 内毒素去除试剂盒(Mirus)或 Acrodi sc -Mustang E 膜(Pall Corporation)。检测和/或测定样品(纯化前和纯化后)中存在的内毒素的量的方法是本领域已知的，并且可利用商业试剂盒。例如，蛋白样品中内毒素的浓度的测定可以利用QCL-1000显色试剂盒(BioWhittaker),基于當变形细胞溶解物(LAL)的试剂盒,例如可从Associates
of Cape Cod Incorporated 获得的 Pyrote丨丨_ 、Pyi'0tell -T、PyiOchlOme 、
Chromo-LAL 及 CSE 试剂盒。表达和纯化后，可以修饰本文所述的融合蛋白。修饰可以是共价修饰或非共价修饰。可以通过以下将所述修饰引入融合蛋白，例如，使多肽的目标氨基酸残基与有机衍生试剂进行反应，所述有机衍生试剂能与所选的侧链或末端残基进行反应。可以利用多种标准中的任何一种选择适于修饰的位点，包括，例如，本文所述的融合蛋白的结构分析或氨基酸序列分析。在一些实施方案中，本文所述的融合蛋白可以与异源部分偶联。在一些实施方案中，当异源部分是多肽时，本文所述的融合蛋白和相应的异源部分可以以融合蛋白的方式连接。异源部分可以是，例如，异源多肽、治疗剂(例如，毒素或药物)或可检测的标记，例如，但不限于，放射性标记、酶学标签、荧光标签或发光标签。合适的异源多肽包括，例如，用于纯化抗体的抗原性标签(例如，FLAG、聚组氨酸、血凝素(HA)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)或麦芽糖结合蛋白(MBP))。异源多肽还包括可用作诊断或可检测标志物的多肽，例如，荧光素酶、绿色荧光蛋白(GFP)或氯霉素乙酰转移酶(CAT)。当异源部分是多肽时，该部分可被并入本文所述的融合蛋白中，从而得到融合蛋白。偶联物在一些实施方案中，通过将两个独立产生的多肽片段(例如，抗体(例如，抗C3d抗体的Fab片段)和补体调节多肽(例如，可溶性形式的CD59))连接起来而产生本文所述的融合分子。在一些实施方案中，可以利用任何多种已知的化学交联剂使两个蛋白(例如，本文所述的融合蛋白和异源部分，或融合蛋白的两个组成部分)化学交联。所述交联剂的实例是能通过包括“阻碍” 二硫键在内的连接将两个氨基酸残基连接在一起的交联齐U。在这些连接中，交联单元内的二硫键被保护(通过阻碍二硫键任一侧上的基团)免于例如还原型谷胱甘肽或二硫键还原酶的还原作用。一种合适的试剂4-琥珀酰亚胺基氧基羰基-α-甲基-a (2-硫代吡啶)甲苯(SMPT)利用一个蛋白上的末端赖氨酸和另一个蛋白上的末端半胱氨酸而在两个蛋白之间形成这样的连接。也可以使用通过每个蛋白上不同偶联部分进行交联的异双功能试剂。其它可用的交联剂包括，但不限于，能连接2个氨基的试剂(例如，Ν-5-叠氮基-2-硝基苄基氧基琥珀酰亚胺)、能连接2个巯基的试剂(例如，1，4-双-马来酰亚胺丁烷)、能连接I个氨基和I个巯基的试剂(例如，m-马来酰亚胺苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯)、能连接I个氨基和I个羧基的试剂(例如，4-[p-叠氮基水杨基氨基]丁胺)及能连接I个氨基和存在于精氨酸侧链的I个胍基的试剂(例如，P-叠氮基苯基乙二醒一水合物)。在一些实施方案中，本文所述的融合蛋白可以含有异源部分，所述异源部分与所述融合蛋白化学连接。例如，在一些实施方案中，可以将放射性标记直接偶联于融合蛋白的氨基酸主链(例如，利用标记的融合蛋白进行体内成像研究)。在一些实施方案中，例如，可以用能提高抗体在循环中(例如，在血液、血清或其它组织中)的稳定和/或驻留的部分修饰融合蛋白。例如，本文所述的融合蛋白是PEG 化的，其描述于，例如，Lee et al.(1999) Bioconjug ChemlO (6): 973-8: Kinstler etal.(2002)Advanced Dr·ug Deliveries Reviews54:477-485;and Roberts et al.(2002)Advanced Drug Delivery Reviews54:459-476 稳定部分可以将多肽的稳定性或驻留提高至少1.5(例如，至少2、5、10、15、20、25、30、40或50或更多)倍。在一些实施方案中，本文所述的融合蛋白可以是糖基化的。在一些实施方案中，可以对本文所述的融合蛋白进行酶学或化学处理，或从细胞产生本文所述的融合蛋白，使得抗体的糖基化降低或缺少糖基化。产生具有降低的糖基化的多肽的方法是本领域已知的，并描述于，例如，美国专利第6，933，368号；Wright et al.(1991) EMBOTlO(IO):2717-2723:和 Co et al.(1993)Mol ImmunoI迦:1361。治疗方法上文所述的构建体(例如，融合分子)和抗体(及其抗原结合片段)尤其可用于治疗或预防个体的多种补体相关病症的方法。可利用多种方法将组合物给予个体(例如，人类个体)，所述方法在一定程度上取决于给药途径。所述途径可以是，例如，静脉内注射或输注(IV)、皮下注射(SC)、腹膜内(IP)注射或肌肉内注射(IM)。可以通过例如局部输注、注射或借助于植入物实现给药。植入物可以是有孔材料、无孔材料或胶状材料，包括膜，例如硅橡胶膜或纤维。植入物可以被配置为能将组合物持续释放或周期性释放到个体。参见，例如，美国专利申请公布号20080241223 ;美国专利第5，501，856 号、第 4，863，457 号和第 3，710，795 号；EP488401 和 EP430539，通过引用将上述每篇文献的公开内容整体并入本文。可通过可植入装置将本文所述的抗体或融合蛋白递送至个体，所述可植入装置可基于例如扩散系统、可侵蚀系统或对流系统，例如，渗透泵、生物可降解的植入物、电扩散系统、电渗透系统、蒸汽压力泵、电解泵、起泡泵、压电泵、基于侵蚀的系统或机电系统。在一些实施方案中，通过局部给药将本文所述的抗体或融合蛋白以治疗方式递送至个体。本文所用的“局部给药”或“局部递送”是指不需要依赖于通过血管系统将组合物或试剂运输至其预期靶组织或位点的递送。例如，组合物可以通过组合物或试剂的注射或植入或通过含有组合物或试剂的装置的的注射或植入进行递送。在靶组织或位点附近局部给药后，组合物或试剂或其一种或多种成分可以扩散至预期的靶组织或位点。在一些实施方案中，本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白可被局部给予至关节(例如，连接关节)。例如，在补体相关病症是关节炎的实施方案中，补体抑制剂可被直接给予至关节(例如，进入关节间隙)或关节附近。可局部给予本文所述的融合蛋白的关节内关节的实例包括，例如，臀部、膝部、肘部、腕部、胸锁骨、颞下颌、腕骨、跗骨、踝部关节及易患关节炎状态的任何其它关节。还可以将本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白给予囊，例如，肩峰囊、肱二头肌桡骨囊、肘骨间囊、三角肌囊、髌下囊、坐骨囊及医学领域已知的任何其它囊。在一些实施方案中，可将本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白局部给予至眼。本文所用的术语“眼”是指眼相关的任何和所有解剖学组织和结构。眼具有由三个不同层组成的壁:外部巩膜、中间脉络膜层及内部视网膜。晶状体后方的腔填充了被称为玻璃体液的胶状液体。眼的后部是探测光的视网膜。角膜是光学透明的组织，其将图像传输至眼的后部。角膜包括药物渗透至眼中的一个途径。其它眼相关的解剖学组织结构包括泪液排出系统，其包括分泌系统、分配系统和排泄系统。分泌系统包括由眨眼和泪液蒸发导致的温度改变刺激的分泌腺和具有传出副交感神经供给并响应于物理或情绪刺激而分泌泪液的反射分泌腺。分配系统包括眼睑和张开的眼的眼睑边缘周围的泪河，其通过眨眼将泪液分布在眼表面上，从而降低干燥区域，防止其扩展。在一些实施方案中，将本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白给予至眼的后房。在一些实施方案中，将本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白进行玻璃体内给药。在一些实施方案中，将本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白进行经巩膜给药。在一些实施方案中，例如，在治疗或预防补体相关的肺部病症(例如COPD或哮喘)的实施方案中，可通过肺部将本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白给予个体。可以通过吸入实现肺部药物递送，并且本文的吸入给药可以是经口的和/或经鼻的。肺部递送的药学装置的实例包括计量吸入器、干粉吸入器(DPI)及喷雾器。例如，可通过干粉吸入器将本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白给予个体的肺。这些吸入器是无推进剂的装置，其能将可分散的和稳定的干粉制剂递送至肺。干粉吸入器是医学领域公知的，并包括，但不限于:TurboHaler (AstraZeneca ；London, England)、AIR
吸入器(Alkermes ; Cambridge, Massachusetts)、Rotahaler (GlaxoSmithKline ；London, England)和 Eclipse (Sanof1-Aventis ；Paris, France)。也可参见，例如，PCT公布号W004/026380，W004/024156及W001/78693。DPI装置已被用于多肽(例如胰岛素和生长激素)的肺部给 药。在一些实施方案中，可通过计量吸入器将本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白进行肺内给药。这些吸入器依赖于推进剂来将独立剂量的化合物递送至肺。通过计量吸入器给药的化合物的实例包括，例如，Astovent (Boehringer-1ngelheim ；Ridgefield,Connecticut) ^PF1vent(E) (GlaxoSmithKline)。也可参见，例如，美国专利第6，170，717号、第5，447，150号和第6，095，141号。在一些实施方案中，可通过喷雾器将本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白给予个体的肺。喷雾器利用压缩空气来将化合物作为液化气溶胶或雾进行递送。喷雾器可以是，例如，喷射喷雾器(例如，空气或液体喷射喷雾器)或超声喷雾器。其他装置和肺内给药方法描述于，例如，美国专利申请公布号20050271660和20090110679，通过引用将上述每篇文献的公开内容整体并入本文。在一些实施方案中，本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白以单位剂量形式存在，其可特别适于自体给药。本文的制剂产品可被容纳在容器内，通常，例如，小瓶、药盒、预装填注射器或一次性笔。也可以例如与本文的注射系统一起使用剂量装置，例如美国专利第6，302，855号中描述的剂量装置。本文的注射系统可以利用美国专利第5，308，341号中描述的递送笔。笔装置是本领域公知的，其最常用于胰岛素向糖尿病患者的自体递送。这类装置可包括至少一个注射针(例如，长度约5至8mm的31号针)，通常预装有一个或多个治疗单位剂量的治疗溶液，并可用于将溶液快速递送至个体，同时具有尽可能少的疼痛。一支药物递送笔包括瓶固定器，瓶固定器中可以容纳胰岛素或其它药物的瓶。瓶固定器是长型的大体上管状结构，其具有近端和远端。瓶固定器的远端包括安装装置，用于接合双头针套管。近端也包括安装装置，用于接合笔的主体，其包括驱动器和剂量设定装置。与现有技术的瓶固定器一起使用的容纳药物(例如，本文所述的融合蛋白的高浓度溶液)的一次性瓶包括具有可刺破的弹性隔膜的远端，弹性隔膜可被双头针套管的一端刺破。该瓶的近端包括止动器，其可滑动地置于与瓶的圆柱体壁的液密接合。通过将药物瓶插入瓶固定器来使用该药物递送笔。然后，将笔的主体连接于瓶固定器的近端。笔的主体包括剂量设定装置和驱动装置，剂量设定装置用于设定待通过笔递送的药物剂量，驱动装置用于将瓶的止动器向远侧推进对应于所选剂量的距离。笔的使用者将双头针套管安装到瓶固定器的远端，使得针套管的近点刺破瓶上的隔膜。然后，患者选择一个剂量，并操作笔，将止动器向远侧推进以递送选定的剂量。注射选定的剂量后，剂量选择装置返回至零。然后，患者移除并弃掉针套管，并将药物递送笔保持在方便的位置，用于以后需要的药物给药。在数次这样的药物给药后 ，瓶中的药物会耗尽。然后，患者将瓶固定器与笔的主体分离。然后，可以移除并弃掉空瓶。可以将新瓶插入瓶固定器，可以将瓶固定器和笔的主体再组装，并按照上文所述进行使用。因此，药物递送笔通常具有驱动机构，用于准确给药和易于使用。剂量机构(例如可旋转的按钮)允许使用者准确调整由笔从预装的药物瓶注射的药物的量。为了注射药物剂量，使用者将针插入皮肤下，并将按钮按下一次至能按下的最大距离。笔可以是完全机械的装置，或可以与电子电路组合来准确设定和/或指示被注射入使用者的药物剂量。参见，例如，美国专利第6，192,891号。在一些实施方案中，笔装置的针是一次性的，试剂盒包括一个或多个一次性替换针。适合于递送任何一种目前提供的本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白的笔装置还描述于，例如，美国专利第6，277, 099号、第6，200，296号和第6，146，361号，通过引用将上述每篇文献的公开内容整体并入本文。基于微型针的笔装置描述于，例如，美国专利第7，556，615号，通过引用将该文献的公开内容整体并入本文。还可参见，由Scandinavian Health Ltd 生产的精密笔注射器(PPI)装置，Molly 。本文还提供适于药物(例如本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白)的长期和/或自体给药的控释或缓释制剂。可以将各种制剂给予需要治疗的患者，其中药物是弹丸的形式或通过在一定时间中连续输注。在一些实施方案中，本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白的高浓度溶液被配制用于持续释放、缓慢释释、定时释放、受控释释或连续释放给药。在一些实施方案中，贮库制剂被用于将融合蛋白给予有需要的个体。在该方法中，本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白与一种或多种载体一起配制，所述载体提供在数小时或数天的时间段内逐渐释放活性剂。所述制剂通常是基于降解骨架，所述骨架在体内逐渐分散而释放活性剂。在一些实施方案中，通过肺内给药将本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白给予有需要的个体。例如，可通过喷雾器或吸入器将本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白 递送至患有补体相关肺部病症(例如哮喘或C0PD)的个体(例如，人)。本文所用的“个体”可以是任何哺乳动物。例如，个体可以是人、非人灵长类动物(例如，猩猩、大猩猩、猕猴、狒狒或黑猩猩)、马、牛、猪、绵羊、山羊、狗、猫、兔、豚鼠、沙鼠、仓鼠、大鼠或小鼠。在一些实施方案中，个体是幼体(例如，人类婴儿)。本文所用的“需要预防的”、“需要治疗的”或“有需要的”个体是指被合适的医学工作者(例如，对于人为医生、护士或护理师；对于非人哺乳动物为兽医)判断为能合理地受益于指定的治疗(例如，用包含本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白的组合物进行治疗)的个体。术语“预防”领域内普遍认知的，并且当涉及疾病状态时，是本领域公知的，包括与未接受本文所述的融合蛋白的个体相比，能降低个体医学疾病状态的症状的频率或延迟个体医学疾病状态的症状的发生的组合物给药。因此，补体相关病症(例如哮喘)的预防包括，例如，与未处理的对照群体相比，降低接受预防处理的患者群体中咳嗽、气喘或胸痛的程度或频率，和/或与未处理的对照群体相比，延迟处理的群体中咳嗽或气喘的发生，例如，降低或延迟能达到统计学显著的量和/或临床上有效的量。在一些实施方案中，本文提供将融合分子的部分(moiety)或部分(portion)特异性地靶向于体内预定区域或区室的方法，从而通过该融合分子的靶向部分(moiety)或部分(portion)和位于区域或区室中的靶分子之间的特异性相互作用，增加该区域或区室(而不是其它区域或区室)中该部分(moiety)或部分(portion)的局部浓度,或增加位于该区域或区室中的至少一种预定分子对该部分(moiety)或部分(portion)的可接近性。在一些实施方案中，本文提供将融合分子的活性或治疗部分(moiety)或部分(portion)特异性地靶向于补体活化的表面的方法，所述特异性地靶向是通过与该活性或治疗部分(moiety)或部分(portion)融合并能特异性地结合补体成分蛋白的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述补体成分蛋白是C3d或C3dg。在一些实施方案中，本文提供通过利用包含本申请所述的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或片段的融合分子的组合物，降低、抑制或阻止宿主体液免疫应答的方法。在一些实施方案中，本文提供通过利用包含本文所述的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或片段的融合分子的组合物，降低、抑制或阻止宿主B细胞活化的方法。在一些实施方案中，本文提供利用包含本申请所述的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或片段的融合分子的组合物，治疗、缓解或预防个体的疾病的方法，所述疾病的特征在于，与未发生所述疾病的正常宿主免疫应答相比，体液免疫应答上调。在一些实施方案中，本文提供利用包含本文所述的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或片段的融合分子的组合物，治疗、缓解或预防个体的疾病的方法，所述疾病的特征在于，与未发生所述疾病的正常B细胞活化水平相比，B细胞活化上调。在一些实施方案中，本文提供利用包含本文所述的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或片段的融合分子的组合物，治疗患有疾病的个体或使个体免于发展出疾病的方法，其中所述个体与未患所述疾病的个体中的正常免疫应答水平相比，具有上调的体液免疫应答。在一些实施方案中，本文提供利用包含本文所述的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或片段的融合分子的组合物，治疗患有疾病的个体或使个体免于发展出疾病的方法，其中所述个体与未患所述疾病的个体中的正常B细胞活化水平相比，具有上调的B细胞活化。在一些实施方案中，本文提供通过利用包含本文所述的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或片段的融合分子的组合物，调节补体活性的方法。在一些实施方案中，所述融合分子包含作为靶向部分的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段和作为活性或治疗部分的补体调节剂。在一些实施方案中，本文提供通过利用包含本文所述的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或片段的融合分子的组合物，增加或活化补体活性的方法。在一些实施方案中，所述融合分子包含作为靶向部分的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段和作为活性或治疗部分的补体活化剂或激动剂。

在一些实施方案中，本文提供提供通过利用包含本文所述的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或片段的融合分子的组合物，减少或抑制补体活性的方法。在一些实施方案中，所述融合分子包含作为靶向部分的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段和作为活性或治疗部分的补体抑制剂或拮抗剂。在一些实施方案中，本文提供通过利用包含本文所述的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或片段和补体调节剂的融合分子的组合物，治疗、缓解或预防个体疾病的方法，所述疾病的特征在于，与未发生所述疾病的正常补体活性相比，补体活性异常。在一些实施方案中，本文提供通过利用包含本文所述的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或片段和补体抑制剂或拮抗剂的融合分子的组合物，治疗、缓解或预防个体疾病的方法，所述疾病的特征在于，与未发生所述疾病的正常补体活性相比，补体活性增加。在一些实施方案中，本文提供通过利用包含本文所述的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或片段和补体活化剂或激动剂的融合分子的组合物，治疗、缓解或预防个体疾病的方法，所述疾病的特征在于，与未发生所述疾病的正常补体活性相比，补体活性降低。在一些实施方案中，本文提供利用包含本文所述的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或片段和补体调节剂的融合分子的组合物，治疗患有疾病的个体或使个体免于发展出疾病的方法，其中所述个体与未患所述疾病的个体中的正常补体活性相t匕，具有异常补体活性。在一些实施方案中，本文提供利用包含本文所述的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或片段和补体抑制剂或拮抗剂的融合分子的组合物，治疗患有疾病的个体或使个体免于发展出疾病的方法，其中所述个体与未患所述疾病的个体中的正常补体活性相比，具有增加的补体活性。在一些实施方案中，本文提供利用包含本文所述的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或片段和补体活化剂或激动剂的融合分子的组合物，治疗患有疾病的个体或使个体免于发展出疾病的方法，其中所述个体与未患所述疾病的个体中的正常补体活性相比，具有降低的补体活性。在一些实施方案中，本文提供利用包含本文所述的融合分子的组合物，协同增强补体活性调节和至少一种其它体内功能的方法，所述融合分子包含抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段及至少一种其他活性或功能部分(moiety)或部分(portion)。在一些实施方案中，所述融合分子包含作为靶向部分的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段和作为活性或治疗部分的补体抑制剂或拮抗剂，从而实现抑制补体活化和体液免疫应答的协同作用。在一些实施方案中，本文提供利用包含本文所述的融合分子的组合物，协同增强补体活性和体液免疫应答的抑制的方法，所述融合分子包含抗CR2抗体或其抗原结合片段及补体抑制剂或拮抗剂。在一些实施方案中，本文提供通过利用包含融合分子的组合物，治疗、缓解或预防个体疾病的方法，所述疾病的特征在于，与未发生所述疾病的正常补体活性和免疫应答相t匕，补体活性和体液免疫应答增加，所述融合分子包含抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段及补体抑制剂或拮抗剂。在其它实施方案中，在所述方法中，抗CR2抗体或其抗原结合片段与所述补体抑制剂或拮抗剂融合。在一些实施方案中，本文提供通过利用包含融合分子的组合物，治疗患有疾病的个体或使个体免于发展出疾病的方法，其中所述个体与未患所述疾病的个体中的正常补体活性和免疫应答相比，具有增加的补体活性和体液免疫应答，所述融合分子包含抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段及补体抑制剂或拮抗剂。在其它实施方案中，在所述方法中，抗CR2抗体或其抗原结合片段与所述补体抑制剂或拮抗剂融合。在一些实施方案中，本文提供通过利用本文所述的包含融合分子的组合物，协同增强至少两种调节剂功能的方法，所述融合分子包含抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段及至少两种活性或功能部分(moiety)或部分(portion)。在一些实施方案中,所述两种活性或功能部分(moiety)或部分(portion)分别与所述抗体或片段的重链和轻链融合。抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段的N末端和C末端可用于与活性或功能部分(moiety)或部分(portion)进行任一方向的融合。通常，抗体或其抗原结合片段的C末端用于融合，因为其可能不会干扰抗原结合活性。融合分子的一个实例是与CD59和DAF连接的抗C3d/C3dg抗体或Fab，⑶59和DAF中的每一个是在抗C3d/C3dg抗体或Fab的重链/轻链上。这样的融合蛋白会具有对补体活化的提高的抑制功能。适应症包括，例如，PNH患者。另一实例是与因子H(或等同物)和抗血管生成肽/蛋白(例如血管内皮抑制蛋白、血管抑制素及文献中报道的其它肽/蛋白)融合的抗C3d/C3dg抗体或Fab，其用于AMD患者。如上文所述，本文所述的抗体和生物 活性片段或包含作为靶向部分的所述抗体或片段的融合分子可用于治疗多种补体相关病症，例如，但不限于:风湿性关节炎(RA);狼疮肾炎；缺血-再灌注损伤；非典型溶血尿毒综合征(aHUS);典型或感染性溶血尿毒综合征(tHUS);致密沉积物病(DDD);阵发性夜间血红蛋白尿(PNH);多发性硬化(MS);黄斑变性(例如，年龄相关性黄斑变性(AMD));溶血、肝酶升高及血小板减少(HELLP)综合征；脓毒症；皮肌炎；糖尿病性视网膜病变；血栓性血小板减少性紫癜(TTP);自发性流产；微量免疫血管炎；大疱性表皮松解；习惯性流产；多发性硬化(MS)和外伤性脑损伤。参见，例如，Holers (2008) Immunological Reviews223:300-316 和 Holers and Thurman (2004)Molecular Immunology41:147-152。在一些实施方案中，补体介导的病症是补体介导的血管病症，例如，但不限于，心血管病症、心肌炎、脑血管病症、外周(例如，肌肉骨骼)血管病症、肾血管病症、肠系膜/肠血管病症、移植物和/或再植物的血管再生、血管炎、Henoch- Sch0_nlein紫癜肾炎、系统性红斑狼疮相关血管炎、风湿性关节炎相关血管炎、免疫复合物血管炎、高安氏病、毛细血管泄漏综合征、扩张型心肌病、糖尿病血管病变、胸腹联合大动脉动脉瘤、川崎氏病(动脉炎)、静脉气栓塞(VGE)及支架置入后再狭窄、粥样硬化斑块旋切术及经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)。参见，例如，美国专利申请公布号20070172483。在一些实施方案中，补体相关病症是重症肌无力、冷凝集素病(CAD)、阵发性冷血红蛋白尿(PCH)、皮肌炎、硬皮病、热自身免疫溶血性贫血、格雷夫斯病、桥本氏甲状腺炎、I型糖尿病、银屑病、天疱疮、自身免疫性溶血性贫血(AIHA)、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、古德帕斯丘氏综合征、抗磷脂综合征(APS)、恶性萎缩性丘疹病及恶性APS(CAPS)。在一些实施方案中，本文所述的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段或包含作为靶向部分的所述抗体或其片段的融合分子单独或与第二抗炎剂联合可用于治疗炎性病症，例如,但不限于，RA(同上)、炎性肠病、败血症(同上)、感染性休克、急性肺损伤、弥漫性血管内凝血(DIC)或克罗恩病。在一些实施方案中，第二抗炎剂可以选自NSAID、皮质类固醇、氨甲喋呤、羟基氯喹、抗TNF剂(例如依那西普和英夫利昔)、B细胞消耗剂(例如利妥昔单抗)、白介素-1拮抗剂或T细胞共刺激阻断剂(例如阿巴西普)。在一些实施方案中，补体相关病症是补体相关神经学病症，例如，但不限于，肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)、脑损伤、阿尔茨海默病及慢性炎性脱髓鞘性神经病。

补体相关病症还包括补体相关肺部病症，例如，但不限于，哮喘、支气管炎、慢性阻塞性肺病(C0PD)、间质性肺病、α-1抗胰蛋白酶缺乏症、肺气肿、支气管扩张、闭塞性细支气管炎、肺泡炎、结节病、肺纤维化及胶原蛋白血管病。在一些实施方案中，本文所述的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段可作为单一治疗给予个体。或者，如上文所述，抗体或其片段可作为与另一治疗的联合治疗给予个体，例如，用于补体相关病症或补体相关炎性反应的另一治疗。例如，联合治疗可包括给予个体(例如，人类患者)能为患有或有风险发展为败血症的个体提供治疗益处的一种或多种其它药剂(例如，抗凝剂、降压药或抗炎药(例如，类固醇))。在另一实例中，联合治疗可包括给予个体能为患有、有风险发展为或疑似患有补体相关肺部病症(例如COPD或哮喘)的个体提供治疗益处的一种或多种其它药剂(例如，抗IgE抗体、抗IL-4抗体、抗IL-5抗体或抗组胺抗体)。在一些实施方案中，抗C3d/C3dg抗体和一种或多种其它活性剂同时给药。在其它实施方案中，抗C3d/C3dg抗体在时间上首先给药，一种或多种其它活性剂在时间上随后给药。在一些实施方案中，一种或多种其它活性剂在时间上首先给药，抗C3d/C3dg抗体在时间上随后给药。
本文所述的抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段可替换或增强先前或目前给予的治疗。例如，用抗C3d/C3dg抗体或其抗原结合片段治疗时，一种或多种其它活性剂的给药可停止或减少，例如，以较低的水平给药。在一些实施方案中，可以保持先前治疗的给药。在一些实施方案中，保持先前治疗，直至抗C3d/C3dg抗体的水平达到足以提供治疗效果的水平。可以联合给予两种治疗。监测个体(例如，人类患者)中本文所述的补体相关病症(例如，败血症、重度烧伤、RA、狼疮肾炎、古德帕斯丘综合征或哮喘)的改善表示评价个体的疾病参数的改变，例如，给定病症中一种或多种症状的改善。补体相关病症的症状是医学领域公知的。在一些实施方案中，在给药后至少I小时(例如，至少2、4、6、8、12、24或48小时，或至少I天、2天、4天、10天、13天、20天或更多天，或至少I周、2周、4周、10周、13周、20周或更多周)进行评价。可以在下述时期中的一个或多个评价个体:开始治疗前，治疗过程中或已给予一个或多个治疗要素后。评价可以包括评价进一步治疗的需要，例如，评价治疗的剂量、给药频率或持续时间是否能当改变。评价还可包括评价是否需要增加或去掉所选的治疗方式，例如，增加或去掉本文所述的补体相关病症的任何治疗。药物组合物另一方面，本文提供了包含本文所述的任何构建体和/或融合蛋白的药物组合物。包含本文所述的任何构建体和/或融合蛋白的药物组合物通常被配制为无菌的基本等渗的药学溶液，并完全符合美国食品与药品管理局的所有药品生产质量管理规范(GMP)规定。在一些实施方案中，组合物无病原体。对于注射，药物组合物可以是液体溶液的形式，例如，在生理学相容的缓冲液中，例如汉克平衡盐溶液、磷酸盐缓冲盐溶液或林格氏液。此夕卜，本文提供的药物组合物可以是固体形式，并在即将使用前重新溶解或重悬。还考虑到冻干组合物。对于口服给药，药物组合物可采取例如通过常规手段、利用药学可接受的赋形剂制备的片剂或胶囊的形式，所述药学可接受的赋形剂例如粘合剂(例如，预胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；fillers(例如，乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如，硬脂 酸镁、滑石或二氧化硅)；崩解剂(例如，马铃薯淀粉或羧基乙酸淀粉钠)；或润湿剂(例如，月桂基硫酸钠)。用于口服给药的液体制剂可采用例如溶液、糖浆或悬液的形式，或可将它们提供为干燥产品，在使用前用水或其它合适的介质复原。可通过常规手段、利用药学可接受的添加剂来制备所述液体制剂，例如悬浮剂(例如，山梨醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂肪)；乳化剂(例如，卵磷脂或阿拉伯胶)；非水性介质(例如，杏仁油、油性酯、乙醇或分馏植物油)；和防腐剂(例如，甲基或丙基-P-羟基苯甲酸盐或山梨酸)。所述制剂还可以视情况含有缓冲盐、调味剂、着色剂和甜味剂。在一些实施方案中，按照常规方法将组合物配制为适于注射的药物组合物。在一些实施方案中，本文提供的药物组合物经配制用于静脉内、腹膜内或眼内注射。通常，用于注射的组合物是配制于无菌等渗水性缓冲液中的溶液。如果需要，组合物还可以包括增溶剂和用来减少注射位点的疼痛的局部麻醉剂(例如利诺卡因)。通常，各成分是分别提供或在单位剂量形式中混合在一起，例如，作为标明活性剂的量的密封容器(例如，安瓿或药袋)中的干燥冻干粉或无水浓缩物。当需要将组合物通过输注给药时，可以用含有无菌药用级水或盐水的输液瓶来使组合物分散。当组合物是通过注射给药时，可以提供装有无菌注射用水或盐水的安瓿，从而可以在给药前混合成分。药物组合物还可以包含其它成分，例如防腐剂、缓冲剂、张度剂、抗氧化剂和稳定齐 、非离子型润湿剂或澄清剂、增粘剂等。适合用于溶液的防腐剂包括聚季铵盐-1、苯扎氯铵、硫汞撒、氯丁醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯乙醇、EDTA 二钠、山梨酸、苄索氯铵等。通常(但非必需)，这些防腐剂的用量水平为以重量计0.001%至1.0%。合适的缓冲液包括硼酸、碳酸氢钠和碳酸氢钾、硼酸钠和硼酸钾、碳酸钠和碳酸钾、醋酸钠、磷酸氢钠等，其用量足以将PH维持在约pH6至pH8，优选约pH7至pH7.5。合适的张度剂包括葡聚糖40、葡聚糖70、葡萄糖、甘油、氯化钾、丙二醇、氯化钠等，使得注射用溶液的氯化钠当量为0.9±0.2%。合适的抗氧化剂和稳定剂包括亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、硫脲等。合适的润湿剂和澄清剂包括聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20、泊咯沙姆282和泰洛沙泊。合适的增粘剂包括葡聚糖40、葡聚糖70、凝胶、甘油、羟乙基纤维素、羟甲基丙基纤维素、羊毛脂、甲基纤维素、矿物脂、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素等。如上文所述，本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白可在水性药学溶液中被配制为相对高浓度。例如，本文所述的抗体或融合蛋白可在溶液中配制的浓度为约 10mg/mL 至 100mg/mL(例如，约 9mg/mL 至 90mg/mL ；约 9mg/mL 至 50mg/mL ；约 IOmg/mL 至 50mg/mL ；约 15mg/mL 至 50mg/mL ；约 15mg/mL 至 110mg/mT,；约 15mg/mL 至 IOOmg/mL ；约 20mg/mL 至 100mg/mL ；约 20mg/mL 至 80mg/mL ；约 25mg/mL 至 100mg/mL ；约 25mg/mL 至 85mg/mL ；约 20mg/mL 至 50mg/mL ；约 25mg/mL 至 50mg/mL ；约 30mg/mL 至 100mg/mL ；约 30mg/mL 至 50mg/mL ；约 40mg/mL 至 100mg/mL ；约 50mg/mL 至 100mg/mL ；或约 20mg/mL至50mg/mL)。在一些实施方案中，本文所述的融合蛋白可在水性溶液中配制的浓度为大于5mg/mL且小于50mg/mL。在水性溶液配制蛋白的方法是本领域已知的，并描述于，例如，美国专利第 7，390 ，786 号；McNally and Hastedt (2007), “Protein Formulation andDelivery,，，Second Edition, Drugs and the Pharmaceutical Sciences, Volumel75, CRCPress;and Banga(1995), “Therapeutic peptides and proteins: formulation, processing, and delivery systems, ”CRC Press。在一些实施方案中，水性溶液具有中性pH,例如，PH6.5至8 (例如，7至8，并包括7和8)。在一些实施方案中，水性溶液的pH为约6.6、6.7、
6.8,6.9、7、7.1,7.2,7.3,7.4,7.5,7.6,7.7,7.8、7.9 或 8.0。在一些实施方案中，水性溶液的 pH 大于(或等于)6(例如，大于或等于 6.1,6.2,6.3,6.4,6.5,6.6,6.7,6.8,6.9、7、7.1、
7.2,7.3,7.4,7.5,7.6,7.7,7.8 或 7.9)，但小于 pH8。在一些实施方案中，本文所述的治疗组合物(例如，本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白)可以与一种或多种用于治疗或预防个体中补体相关病症(例如，AP相关病症或CP相关病症)的其它活性剂配制在一起。治疗个体中补体相关病症的其他药剂会根据所治疗的具体病症而不同，可以包括，但不限于，降压药(例如，血管紧张素转化酶抑制剂)[用于治疗，例如，HELLP综合征]、抗凝剂、皮质类固醇(例如，强的松)或免疫抑制剂(例如，长春新碱或环孢霉素A)。抗凝剂的实例包括，例如，华法林(香豆素)、阿司匹林、肝素、苯茚二酮、磺达肝素、艾卓肝素及凝血酶抑制剂(例如，阿加曲班、来匹卢定、比伐卢定或达比加群)。本文所述的融合蛋白还可以与用于治疗补体相关病症的纤维蛋白溶解剂(例如，安克洛酶、ε-氨基己酸、抗纤维蛋白溶酶- 、环前列腺素及去纤苷)一起配制。在一些实施方案中，融合蛋白可以与降脂剂一起配制，所述降脂剂例如羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂。在一些实施方案中，融合蛋白可以与抗CD20试剂一起配制或一起使用，所述抗0)20试剂例如利妥昔单抗(Rituxan ；Biogen Idee, Cambridge, MA)。在一些实施方
案中，例如，为了治疗RA,融合蛋白可以与英夫利昔('Renricade ; Centocor, Inc.)和氨甲喋呤(Rheumatrex 、Trexall. )中的一种或两种一起配制。在一些实施方案中，本文所述的融合蛋白可以与非甾体类抗炎性药物(NSAID) —起配制。可获得多种不同的NSAID，其中一些非处方药包括布洛芬(Advil 、Motrin 、Nuprin )和萘普生(Alleve )，
许多其它处方药包括美洛昔康(Mobic )、依托度酸.(Lodine )、萘丁美酮(Relafen )、苏灵大(Clinoril )、tolement in (Tolectin )、胆碱水杨酸镁.(Trilasate )、双氯芬酸(Cataflam 、Voltaren 、Arthrotec )、Diflusinal (Dolobid. )、却甲新(Indocin )、酪洛芬(Orudis' 、Oruvail. )>奥沙普秦(Daypro )及吡罗昔康
iFeldene1 )。/E—些实施方案中，融合蛋白可以经配制与降压药、抗癫痫药(例如，硫酸
镁)或抗血栓形成药一起使用。降压药包括，例如，拉贝洛尔、肼苯哒嗪、硝苯地平、钙通道拮抗剂、硝酸甘油或硝普酸钠。(参见，例如，Mihu et al.(2007)J Gastrointestin LiverDisie (4):419-424)。抗血栓形成药包括，例如，肝素、抗凝血酶、环前列腺素或低剂量阿司匹林。在一些实施方案中，本文所述的治疗组合物(例如，本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白)可以与至少一种用于治疗肺部病症的其它活性剂一起配制用于给药(例如，肺内给药)。所述至少一种活性剂可以是，例如，抗IgE抗体(例如，奥马珠单抗)、抗IL-4抗体或抗IL-5抗体、抗IgE抑制剂(例如，孟鲁司特钠)、拟交感神经药(例如，沙丁胺醇)、抗生素(例如，妥布霉素)、脱氧核糖核酸酶(例如，阿法链道酶)、抗胆碱能药药物(例如，异丙托溴铵)、皮质类固醇(例如，地塞米松)、β -肾上腺素能受体激动剂、白三烯抑制剂(例如，齐留通)、5_脂肪氧合酶抑制剂、PDE抑制剂、⑶23拮抗剂、IL-13拮抗剂、细胞因子释放抑制剂、组胺Hl受体拮抗剂、抗组胺药、抗炎剂(例如，色甘酸钠)或组胺释放抑制剂。在一些实施方案中，本文所述的治疗组合物(例如，本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白)可以与一种或多种用于治疗眼的补体相关病症的其它治疗剂一起配制用于给药。所述其它治疗剂可以是，例如，贝伐单抗或贝伐单抗的Fab片段或兰尼单抗(可购自 Roche Pharmaceuticals, Inc.)、哌加他尼钠(MuCOgen : Pfizer, Inc.)。这样的试剂盒还可以任选地包括将融合蛋白给予个体的说明书。在一些实施方案中，本文所述的治疗组合物(例如，本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白)可以被配制为与静脉内Y球蛋白治疗(IVIG)、血浆除去法、血浆置换或血楽:交换一起 给予个体。在一些实施方案中,本文所述的治疗组合物(例如，本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白)可以被配制为在肾移植之前、过程中或之后使用。当本文所述的治疗组合物(例如，本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白)与第二活性剂联合使用时，所述药剂可分别配制或配制在一起。例如，可以在即将给药前混合分别的药物组合物并一起给药，或可以分别给药，例如，在相同或不同时间(参见下文)。如上文所述，可以将药物组合物配制为使其包括治疗有效量的本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白。在一些实施方案中，组合物可被配制包括亚治疗量的融合蛋白和亚治疗量的一种或多种其它活性剂，使得总体成分对于治疗或预防个体中补体相关病症(例如，旁路补体途径相关补体病症或经典补体途径相关病症)具有治疗效果。确定药剂(例如，治疗融合蛋白、抗体或其抗原结合片段)的治疗有效剂量的方法是本领域已知的，并在本文进行所述。给药方法药物组合物可以适于本文所述的多种给药模式，包括，例如，系统给药或局部给药。药物组合物可以为可注射溶液的形式或适于口服给药的形式。本文所述的药物组合物可以被包装在单单位剂量或多剂量形式中。在一些实施方案中，药物组合物适于通过本文所述的任何给药途径给予个体、脊椎动物、哺乳动物或人，包括口服给药或静脉内注射。本文所述的组合物可通过任何途径给予个体，包括，但不限于，静脉内(例如，输液泵)、腹膜内、眼内、动·脉内、肺内、经口、吸入、囊内、肌肉内、气管内、皮下、鞘内、经皮、经胸膜、外用局部、吸入(例如，喷雾)、粘膜(例如，经鼻粘膜)、皮下、胃肠、关节内、脑池内、心室内、直肠(即，通过栓剂)、阴道(即，通过阴道药栓)、颅内、尿道内、肝内及肿瘤内。在一些实施方案中、组合物为系统给药(例如，通过静脉内注射)。在一些实施方案中，组合物为局部给药(例如，通过动脉内或眼内注射)。在一些实施方案中，组合物为血管内给药，例如静脉内或动脉内。在一些实施方案中(例如，用于治疗肾病)，组合物被直接给予动脉内(例如，肾动脉)。在一些实施方案中，组合物为皮下给药。在一些实施方案中，组合物被直接给予眼或眼组织。在一些实施方案中，组合物被外用局部给予眼，例如，在滴眼剂中。在一些实施方案中，通过注射将组合物给予眼(眼内注射)或眼相关组织。组合物的给药可通过，例如，眼内注射、眼周注射、视网膜下注射、玻璃体内注射、经中隔注射、巩膜下注射、脉络膜内注射、前房注射、结膜下的注射、Tenon囊下注射、眼球后注射、球周注射或后部近巩膜递送。这些方法是本领域已知的。例如，关于示例性的视网膜药物递送的眼周途径的描述，参见Raghava et al.(2004), Expert Opin.DrugDeliv.1(1):99-114.可以将组合物给予，例如，玻璃体、房水、巩膜、结膜、巩膜和结膜之间的区域、视网膜脉络膜组织、黄斑或个体的眼内或眼附近的其它区域。还可以将组合物以植入物的形式给予个体。优选的植入物是生物相容的和/或生物可降解的持续释放制剂，其在一段时间逐渐释放化合物。用于药物递送的眼植入物是本领域公知的。参见，例如，旧5，501，856、5，476，511及6，331，313。还可以利用离子电渗法将组合物给予个体，包括，但不限于，US4, 454，151和US2003/0181531和2004/0058313中描述的电泳法。剂量
能治疗或预防个体中补体相关病症的本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白的合适剂量可取决于多种因素，包括，例如，待治疗个体的年龄、性别及体重和使用的具体抑制剂化合物。例如，治疗患有RA的个体所需的一种融合物蛋白的剂量可以不同于治疗相同个体所需的另一种融合物蛋白的剂量。影响给予个体的剂量的其它因素包括，例如，补体介导的病症的类型或严重程度。例如，患有RA的个体可以需要的本文所述的融合蛋白的给药剂量可以不同于患有AMD的个体。其它因素可包括，例如，同时或之前侵及个体的其它医学病症、个体的总体健康、个体的遗传背景、饮食、给药时间、排泄速率、药物联合及给予个体的任何其他其它治疗。还应当理解，任何具体个体的特定剂量和治疗方案还取决于治疗医师(例如，医生或护士)的判断。可以按照固定剂量或以千克每毫克(mg/kg)的剂量给予本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白。在一些实施方案中，剂量还可选择为能降低或避免产生针对组合物中一种或多种活性融合蛋白的抗体或其它宿主免疫应答。尽管不在任何方面进行限制，抗体(例如本文所述 的融合蛋白)的示例性的剂量包括，例如，l-1000mg/kg、1-1OOmg/kg、0.5_50mg/kg、0.l-100mg/kg、0.5_25mg/kg、l_20mg/kg 及 l-10mg/kg、l-100mg/kg、
0.5_50mg/kg、0.l-100mg/kg、0.5_25mg/kg、l_20mg/kg、0.lOOmg/kg tolmg/kg 及 1-lOmg/kgo本文所述的融合蛋白的示例性的剂量包括，但不限于，0.lmg/kg、0.5mg/kg、l.0mg/kg、
2.0mg/kg、4mg/kg 及 8mg/kg、0.lmg/kg、0.5mg/kg、l.0mg/kg、2.0mg/kg、4mg/kg、8mg/kg 及20mg/kgo在一些实施方案中，给予个体的组合物的量为每次给药约10 μ g至约500mg,包括例如以下中的任何一种:每次给药约10 μ g至约50 μ g、约50 μ g至约100 μ g、约100 μ g至约 200 μ g、约 200 μ g 至约 300 μ g、约 300 μ g 至约 500 μ g、约 500 μ g 至约 lmg、约 Img 至约10mg、约 IOmg 至约 50mg、约 50mg 至约 100mg、约 IOOmg 至约 200mg、约 200mg 至约 300mg、约300mg 至约 400mg 或约 400mg 至约 500mg。药物组合物可包含治疗有效量本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白。本领域技术人员在一定程度上基于所给予的抗体、片段或融合蛋白的效果或(如果使用多种药剂)所述化合物(例如，抗体、片段或融合蛋白)和一种或多种其它活性剂的联合效果，能容易地确定有效量。本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白的治疗有效量还可以根据各种因素而不同，例如个体的疾病状态、年龄、性别和体重，及主要药剂(以及一种或多种其它活性剂)在个体中引起所需反应的能力，例如，改善至少一种疾病状态参数，例如，改善补体介导的病症的至少一种症状。例如，治疗有效量的本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白能抑制(减轻病症的严重程度或消除病症的发生)和/或预防具体病症和/或本领域已知的或本文所述的具体病症的任何一种症状。治疗有效量还指治疗有益效果大大超过组合物的任何毒性作用或不良反应的量。还可以在例如I期剂量递增研究中评价本文所述的任何融合蛋白的合适的人用剂量。参见，例如，van Gurp et al.(2008) Am J Transp lantat ion8 (8): 1711-1718; Hanouska et al.(2007) Clin Cancer Resl3 (2, parti): 523-531;和 Hetherington et al.(2006)Antimicrobial Agents and Chemotherapy50(10):3499-3500。本文所用的术语“治疗有效量”或“治疗有效剂量”或相似术语意图表示能引起所需生物学或医学反应(例如，补体相关病症的一种或多种症状的改善)的药剂的量。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物含有治疗有效量的本文所述的至少一种所述抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白。在一些实施方案中，组合物含有本文所述的任何抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白和一种或多种(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10或11或更多)其它治疗剂，使得组合物作为整体是治疗有效的。例如，组合物可以含有本文所述的融合蛋白和免疫抑制剂，其中所述融合蛋白和免疫抑制剂中每种的浓度能使得当联合使用时对治疗或预防个体中补体相关病症(例如，补体相关炎性病症，例如COPD、哮喘、败血症或RA)是治疗有效的。通过已知的细胞培养或实验动物(例如，本文所述的任何补体介导的病症的动物模型)中药学方法可确定所述组合物的毒性和治疗功效。这些方法可用于，例如，测定LD50 (致群体的50%死亡的剂量)和ED5tl (对群体的50%治疗有效的剂量)。毒性和治疗效果的剂量比是治疗指数，可以表示为比值LD5(i/ED5(i。表现出该治疗指数的本文所述的融合蛋白是优选的。虽然可以使用表现出毒性副作用的组合物，但应当尽可能地设计递送系统，将这些化合物靶向于受累组织的部位并最小化对正常细胞的可能损伤，从而降低副作用。从细胞培养测定和动物研究中获得的数据可用于建立人类中使用的剂量范围。本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或融合蛋白的剂量通常处于包括ED5tl同时伴有很小的毒性或不伴有毒性的融合蛋白循环浓度范围内。根据所用的剂型和所用的给药途径，剂量可以在该范围内变化。对于本文所述的融合蛋白，可以从细胞培养测定首选估计治疗有效剂量。可以在动物模型中建立剂量而达到包括细胞培中测定的IC5tl( S卩，实现半最大症状抑制的抗体浓度)的循环血浆浓度范围。这些信息可用于更准确地确定人类中可用的剂量。可以例如通过高效液相色谱测量血浆中的水平。在一些实施方案中，例如，当需要局部给药(例如，给予眼或关节)时，细胞培养或动物造模可用于确定在局部位点达到治疗有效浓度所需的剂量。在一些实施方案中，本方法可以与补体相关病症的其它治疗一起进行。例如，可以在血浆除去、IVIG治疗或血浆交换的同时、之前或之后给予个体组合物。参见，例如，Appelet al.(2005) J Am S oc Nephroll^ 1392-1404。在一些实施方案中，可以在肾移植的同时、之前或之后给予个体组合物。包含本文所述的抗体、抗体的抗原结合片段或构建体(例如，融合分子)的组合物可以以单次每日剂量进行给药，或总的每日剂量可以分为每天2、3或4次进行给药。组合物给药的频率还可以少于每日给药，例如，每周6次、每周5次、每周4次、每周3次、每周2次、每周I次、每2周I次、每3周I次、每月I次、每2月I次、每3月I次或每6月I次。组合物还可以在持续释放制剂中给予组合物，例如在能在一段时间中逐渐释放组合物的植入物中,这允许较低的组合物给药频率,例如每月I次、每2-6月I次、每年I次或甚至单次给药。持续释放装置(例如小丸、纳米颗粒、微米颗粒、纳米球、微米球等)可以通过注射给药或手术植入机体的不同位置。基因治疗通过体内表达融合蛋白也可以递送分子，这通常被称为“基因治疗”。例如，可以用编码融合蛋白的多核苷酸(DNA或RNA)将细胞离体工程化，然后，将工程化的细胞提供给待用融合蛋白治疗的个体。这些方法是本领域公知的。例如，通过本领域已知的方法，利用含有编码本文的融合蛋白的RNA的逆转录病毒颗粒，可以将细胞工程化。利用基因治疗局部递送本文的融合蛋白可以将治疗剂提供至局部目标区域。
基因递送方法是本领域已知的。这些方法包括，但不限于，I)直接DNA转移，参见，例如，Wolff et al.(1990) Science247:1465-1468 ;2)脂质体介导的 DNA 转移，参见，例如，Caplen et al.(1995)Nature Med.3:39-46;Crystal(1995)Nature Med.1:15-17;Gao andHuang(1991)Biochem.Biophys.Res.Comm.179:280-285 ；3)逆转录病毒介导的 DNA 转移，参见，例如，Kay et al.(1993) Science262:117-119; Anderson (1992) Science256:808-813 ；和4) DNA病毒介导的DNA转移。这些DNA病毒包括腺病毒(优选基于Ad2或Ad5的载体)、疱疹病毒(优选基于单纯疱疹病毒的载体)及细小病毒(优选基于"缺陷型"或非自主型细小病毒的载体，更优选基于腺相关病毒的载体，最优选基于AAV-2的载体)。参见,例如，Ali et al.(1994) Gene Therapyl: 367-384;美国专利第 4，797，368 号，通过引用将其并入本文，和美国专利第5，139，941美国专利第。可以衍生出上文提及的逆转录病毒质粒载体的逆转录病毒包括，但不限于，Moloney小鼠白血病病毒、脾坏死病毒、逆转录病毒,例如劳斯肉瘤病毒、哈维肉瘤病毒、鸡白血病病毒、长臂猿白血病病毒、人免疫缺陷病毒、腺病毒、骨髓增生性肉瘤病毒及乳腺肿瘤病毒。在一些实施方案中，逆转录病毒质粒载体来源于Moloney小鼠白血病病毒。腺病毒的优势在于其具有宽的宿主范围，能感染静止期或终末分化的细胞(例如神经元或肝细胞)，并基本表现为非致瘤性。参见，例如，Ali et al.(1994)，同上，p.367。腺病毒不表现出整合入宿主基因组。由于它们存在于染色体外，插入诱变的风险大大降低。Ali et al.(1994)，同上，P.373。腺相关病毒表现出与基于腺病毒的载体相似的优势。然而，AAV表现出人染色体19上的位点特异性整合(Ali et al.(1994)，同上，p.377)。基因治疗载体可以包括一种或多种启动子。在一些实施方案中，载体具有能驱动多种细胞类型中的表达的启动子。在一些实施方案中，载体具有能驱动特定细胞类型中的表达的启动子(例如视网膜的细胞或肾的细胞)。可以使用的合适的启动子包括，但不限于，逆转录病毒 LTR、SV4 0 启动子和描述于 Miller et al.(1989) Biotechniques7 (9):980-990中的人巨细胞病毒(CMV)启动子，或任何其它启动子(例如，细胞启动子，例如真核细胞启动子，包括，但不限于，组蛋白、pol III及β-肌动蛋白启动子)。可以使用的其它病毒启动子包括，但不限于，腺病毒启动子、胸苷激酶(TK)启动子及Β19细小病毒启动子。根据本文的教导，选择合适的启动子对于本领域技术人员是显而易见的。编码融合蛋白的核酸序列优选受合适的启动子的控制。可以使用的合适的启动子包括，但不限于，腺病毒启动子，例如腺病毒主要晚期启动子；或异源启动子，例如巨细胞病毒(CMV)启动子；呼吸道合胞病毒(RSV)启动子；诱导型启动子，例如MMT启动子，金属硫蛋白启动子；热休克启动子；白蛋白启动子；ΑροΑ1启动子；人球蛋白启动子；病毒胸昔激酶启动子，例如单纯疱疹胸苷激酶启动子；逆转录病毒LTR(包括上文所述的修饰的逆转录病毒LTR) 肌动蛋白启动子；和人生长激素启动子。逆转录病毒质粒载体可用于转导包装细胞系，而形成生产细胞系。可以被转染的包装细胞的实例描述于Miller (1990) Human Gene Therapyl: 5_14。可以通过本领域已知的任何手段，用载体转导包装细胞。所述手段包括，但不限于，电穿孔、利用脂质体及CaP04沉淀。在一个可选方案中，可以将逆转录病毒质粒载体可以封装在脂质体中或连接于脂质，然后给予宿主。生产细胞系产生感染的逆转录病毒载体颗粒，所述颗粒包含编码多肽的核酸序列。然后，可以使用逆转录病毒载体颗粒在体外或体内转导真核细胞。转导的真核细胞能表达编码多肽的核酸序列。可以被转导的真核细胞包括，但不限于，胚胎干细胞、胚胎癌细胞以及造血干细胞、肝细胞、成纤维细胞、成肌细胞、角质细胞、内皮细胞及支气管上皮细胞。在一些实施方案中，通过使体液与包含分子的组合物在允许分子发挥功能来抑制补体活化的条件下离体接触，抑制补体活化。合适的体液包括可被回输到个体的体液，例如血液、血浆或淋巴液。亲和吸附自身输血法大体描述于Nilsson et al.(1988)Blood58(l):38-44;Christie et al.(1993) Transfusion33:234-242;Richter etal.(1997) ASAIO J.43(1): 53-59; Suzuki et al.(1994) Autoimmunity 19:105-112;美国专利第 5，733，254 号;Richter et al.(1993)Metabol.Clin.Exp.42:888-894;和 Wallukatet al.(1996) Int’I J.Card.54:1910195。因此，本文包括治疗个体中一种或多种本文所述的疾病方法，其包括在允许分子发挥功能来抑制补体活化的条件下用包含分子的组合物体外处理所述个体的血液(即，体外或离体)，以及将血液回输到个体。单位剂量,制品及试剂盒还提供了组合物的单位剂量形式，每个剂量含有约0.0lmg至约50mg的分子，包括例如约0.1mg至约50mg、约Img至约50mg、约5mg至约40mg、约IOmg至约20mg或约15mg的分子。在一些实施方案中，分子组合物的单位剂量形式包含约0.0lmg-0.lmg、0.lmg-0.2mg、
0.2mg_0.25mg、0.25mg_0.3mg、0.3mg_0.35mg、0.35mg_0.4mg、0.4mg_0.5mg、0.5mg_l.0mg、
1.0mg-1Omg、10mg-20mg、20mg-50mg、50mg-80mg、80mg-100mg、IOOmg-150mg、150mg_200mg、200mg_250mg、250mg-300mg、300mg-400mg 或 400mg-500mg 分子 在一些实施方案中，单位剂量形式包含约0.25mg分子。术语〃单位剂量形式〃是指适于作为个体的单位剂量的物理上分开的单元，每个单元含有按计算能产生所需治疗效果的预定量的活性物质，以及合适的药学载体、稀释剂或赋形剂。这些单位剂量形式可以保存在单个或多个单位剂量的合适的包装中，并且还可以灭菌和密封。还提供了在合适的包装中包含本文所述的组合物的制品。适于本文所述的组合物(例如，眼科用组合物)的包装是本领域已知的，并包括，例如，小瓶(例如密封小瓶)、容器、安瓿、瓶、罐、软包装(例如，密封的聚酯薄膜袋或塑料袋)等。这些制品可以进一步灭菌和/或密封。本文还提供包含本文所述组合物(或单位剂量形式和/或制品)的试剂盒，并且还可以包含利用组合物的方法的说明书，例如本文所述的用途。本文所述的试剂盒还可以包括从商业和使用者角度需要的其它材料，包括其它缓冲液、稀释剂、过滤器、针、注射器及实施本文所述的任何方法的说明书。本文的组合物和制剂可用于治疗与补体活化有关、优选涉及补体旁路途径的疾病状态，补体旁路途径基本不受终末补体抑制剂[例如，C3活化之后的补体途径步骤的抑制剂]。
实施例

抗C3d 抗体:
利用pGEX表达系统在大肠杆菌中产生重组人C3d，如Hannan, J.P.，et al.(2005)J.Mol.Biol.346, 845-858中所述。简言之，具有氨苄青霉素抗性的克隆被用于起始过夜培养，培养物被扩增到IL并生长在37° C下，直至达到A6tltl=0.3。用0.3mM异丙基-β -D-硫代半乳糖苷在30° C下过夜诱导培养物，然后通过离心收获。将收获的细菌沉淀在谷胱甘肽-S-转移酶柱缓冲液(50mM Tris-HCl, pH8.0,250mM NaCl, ImM EDTA)中重悬，并通过超声裂解。通过离心使裂解物澄清，然后施加到GStrap柱(GE Biosciences)。通过用50单位的凝血酶在4° C下过夜消化，从柱切割下C3d，随后通过尺寸排阻色谱进行纯化。通过SDS-PAGE监测C3d的纯度。用在弗氏完全佐剂中乳化的60 μ g重组C3d免疫C3+小鼠。两个月后，小鼠接受配制于弗氏不完全佐剂中的80yg C3d的加强注射。按照两个月的间隔，小鼠又接受两次配制于PBS中的IOOyg C3d的免疫。然后，处死小鼠，制备脾细胞的单细胞悬液。脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞系融合。融合的细胞在含有10%胎牛血清的次黄嘌呤氨基蝶呤胸苷(HAT) -DMEM培养基中生长7天。然后，将细胞改换到不含胎牛血清的HAT培养基中，每周更换2次培养基。通过腹腔灌洗从C3+小鼠获得腹腔巨噬细胞，并将其用作培养的饲养细胞。使用无血清培养基和来自C3+小鼠饲养细胞，从而避免杂交瘤暴露于同源C3d。利用抗C3d ELISA方法，筛选得到的克隆的抗C3d抗体。简言之，使100 μ I/孔的5 μ g/ml重组C3d与聚氯乙烯96孔板(Falcon)的孔结合。使杂交瘤的多克隆上清在板上孵育,利用针对小鼠IgG、小鼠IgGl、小鼠IgG2a及小鼠IgG2b的二抗检测抗C3d反应性。通过在无血清培养基中有限稀释，对表现出针对C3d的反应性的孔进行进一步克隆，再次筛选得到的克隆针对重组C3d的反应性。扩增具有抗C3d反应性的杂交瘤的细胞培养物。利用含血清的和无血清的培养基制剂测试每个克隆，使用对每个克隆产生较好的生长特性的制剂。然后，利用蛋白G柱(GE Biosciences)从上清纯化抗体。简言之，使上清通过柱。用20mM磷酸钠(pH7)洗漆柱。然后，用0.1M甘氨酸 -HCl (pH2.7)洗脱结合的抗体was then eluted。洗脱物在IMTris-HCl (pH9)中中和，缓冲液更换为PBS。抗C3D抗体的结合亲和力测试了纯化的抗体结合数个形式的C3d的能力。按照上文所述测试纯化的抗体与重组人C3d的直接结合。在另一方法中，多克隆兔抗人C3d抗体被用于将重组人C3d捕获到ELISA板,然后测试杂交瘤与捕获的C3d的结合。还使可商购的人C3d(ComplementTechnology, Inc.)结合于ELISA板,并用作祀标。在另一 ELISA类型的测定中，使抗体结合于板，并利用生物素化的如上文所述产生的重组人C3d以及生物素化的His标记的C3d另一构建体，检测对C3d的反应性。为了测试这些抗体对其它物种的C3d的反应性，制备鼠和猕猴重组C3d。利用下述方法测试纯化的抗体结合鼠和猕猴C3d的能力，其中C3d直接结合于ELISA板或用兔抗人C3d抗体捕获C3d。3d8b、3d9a、3d29、3dll及3d31的物种交叉活性显示于图8。通过BIAcore分析进一步测试了抗C3d/C3dg抗体对C3d的结合亲和力。如图6所示，使10、30及90nM的游离抗体浮动通过结合的C3d,分别记录它们的结合。mAb3d8b以Kd=4.65 X I(T10M 结合 C3d。mAb3d9a 以 KD=3.67 X I(T10M 结合 C3d。mAb3d29 以 KD=1.06 X KT9M结合C3d。结合区别的测试C3d和完整C3的Western印迹分析通过SDS-PAGE 使 I μ g未还原的纯化完整 C3 (Complement Technology, Inc.)或重组C3d分开，并转至硝酸纤维素膜。用纯化的抗C3d抗体孵育膜，洗涤，然后用HRP偶联抗小鼠IgG进行孵育。抗体表现出4个反应性模式:1)它们与完整C3较弱地反应，与C3d(克隆3d8b、3d9a及3d29)非常强地反应；2)它们与完整C3和C3d(克隆3dll和3d31)都发生强反应；或3-4)它们不结合蛋白(克隆3dl0和3dl6)或它们与C3d(克隆3d3和3dl5)弱反应。酵母聚糖颗粒上的C3片段为了测试抗体是否结合生理条件下产生的表面结合的C3片段，在含有5mM MgCl2和IOmM EGTA的反应中，使酵母聚糖颗粒与10%小鼠血清在37° C下孵育30分钟。洗涤酵母聚糖颗粒，然后将其与I μ g纯化的抗体在4° C下孵育I小时。洗涤颗粒，使其与FITC偶联抗小鼠IgG抗体孵育，洗涤，并通过流式细胞术进行分析。将颗粒的荧光与阴性对照(无一抗)和阳性对照(商业小鼠C3多克隆抗体)进行比较，评价抗体与颗粒的结合。与调理素作用的酵母聚糖颗粒结合的克隆为3d8b、3d9a及3d29(图4)。组织切片上的C3片段因子H缺陷型小鼠(fH+小鼠)已知在肾小球中具有重度C3b/iC3b/C3d沉积物(Paixao-Cavalcante, D.，S.Hanson，M.Bottoj H.T.Cook, and M.C.Pickering.2009.FactorH facilitates the clearance of GBM bound iC3b by controlling C3activation influid phase.Mol Immunol46:1942-1950)。为了测试纯化的抗C3d抗体结合C3片段的组织沉积物的能力，用丙酮固定来自fH+小鼠的肾的5 μ m切片，并与约5ng纯化抗体孵育。洗涤组织切片，然后与FITC偶联抗小鼠IgG抗体孵育。利用荧光显微镜观察切片，并观察肾小球以检测与肾小球毛细血管袢结合的IgG。克隆3d8b、3d9a及3d29以与C3片段沉积模式相同的模式显不出与肾小球结合的IgG。体内靶向C3片段-组织结合片段和循环C3/C3b之间的区分为了测试纯化的抗C3d抗体是否能体内靶向于组织结合C3d片段，将抗体注射入fH+小鼠。选择fH+小鼠是因为它们在肾小球中具有分散的C3b/iC3b/C3d沉积物，循环中的C3中的大部分是切割的C3b的形式。将0.5mg纯化抗体通过尾静脉注射入小鼠。作为对照，用0.5mg嵌合蛋白注射另一小鼠，所述嵌合蛋白由连接于小鼠IgGlFc区的人CR2iC3b/C3d结合区组成(CR2-Fc)。24小时后，处死小鼠，获得肾。切出肾的5 μ m切片，用丙酮固定，并与FITC偶联抗小鼠IgG抗体孵育。利用荧光显微镜观察切片，并观察肾小球以检测与肾小球毛细血管袢结合的IgG。克隆3d8b、3d9a及3d29以与C3片段沉积模式(图9A-B)和在CR2-Fc中观察到的沉积模式相同的模式显示出与肾小球结合的IgG。与CR2竞争结合C3d为了确定纯化的抗体是否与CR2竞争结合C3d，用100 μ L重组C3d包被聚氯乙烯板，重组C3d的浓度为5 μ g/ml，配制于1/3PBS。在1/3PBS-吐温20 (0.01%)中将板洗涤3次，然后在室温下、以100 μ L/孔、用PBS/1%BSA封闭I小时。按照上述再将板洗涤3次。将纯化的抗C3d抗体的 连续稀释液(浓度为1.8-15 μ g/ml)添加到重组麦芽糖结合蛋白(MBP) -CR2SCR1-2 (10 μ g/ml，配制于 PBS)。将该抗 C3d+MBP-CR2SCR1_2 的溶液添加到板，并在室温下孵育I小时。在1/3PBS-吐温20(0.01%)中将板洗涤3次。然后，添加100 μ L/孔的HRP偶联抗MBP mAb (New England Biolabs)，用箔包裹板，避光保存I小时。然后，在1/3PBS-吐温20(0.01%)中将板洗涤3次，然后向每个孔添加100 μ L ABTS (通过将22mg连氮基-双(3-乙基苯并噻唑磺酸)二铵盐溶解于IOOml的50mM柠檬酸钠(pH4.0)来制备)+1/100035%过氧化氢。将板避光孵育10-20分钟，然后在405nm下读数。图7展示了抗C3dmAb克隆3d8b、3d31、3d9a、3dll及3d29以不同程度与CR2竞争结合C3d的示例性数据。对CR2和结合C3d的作用为了分析CR2和因子H与C3d的结合,用50 μ L浓度为5 μ g/ml (配制于50mM碳酸氢钠缓冲液，PH8.8)的野生型或突变C3d、在4° C下将Costar IIA/RIA板包被过夜。然后，用100 μ L/孔的PBS-吐温20 (0.01%)将板洗涤3次。用100 μ L/孔的PBS/1%BSA、在室温下将板封闭I小时，按照上述洗涤3次。利用10 μ g/ml的储备液(配制于PBS)，制备MBP-CR2SCR1-2的连续稀释液。将抗C3d或因子H(野生型或因子H的SCR19-20或其它片段)的单克隆抗体添加到MBP-CR2SCR1-2溶液。将该MBP-CR2SCR1-2溶液添加到板，并在室温下孵育I小时。制备辣 根过氧化物酶偶联抗MBP单克隆抗体(1/1000稀释，配制于PBS)(New England Biolabs:HRP偶联抗MBP单克隆抗体，产品编号E8038L或E8038S)的储备液。用PBS-吐温20 (0.01%)将板洗涤3次。然后，添加50 μ L/孔的HRP偶联抗MBP mAb,用箔包裹板，避光保存I小时。然后，用PBS-吐温20 (0.01%)将板洗涤3次，然后向每个孔添加50 μ L的ABTS+1/100035%过氧化氢(即将显色前添加H2O2)。将板避光孵育10-20分钟，然后在405nm下读数。对CRl和CR3结合iC3b/C3dg的作用为了分析抗C3d单克隆抗体对CRl功能的影响，利用标准方法将新鲜的绵羊红细胞(SRBC)与纯化的C3b偶联。然后将细胞与表达CRl的人多形核细胞孵育。利用抗CRl单克隆抗体，例如抗 CD35mAb3Ell (Edberg et al., Quantitative analyses of the bindingof soluble complement-fixing antibody/dsDNA immune complexes to CRlon human redblood cells.J Immunol (1987) 139:3739-3747)，测定CRl依赖性结合和玫瑰花结形成的抑制和确认。通过将包被C3b的红细胞与抗C3d单克隆抗体预先孵育60分钟，评价对包被C3片段的细胞与多形核细胞的结合的抑制。为了测定CR3依赖性结合，用预先确定的亚凝集量的兔抗SRBCIgM，在37° C下、在明胶巴比妥缓冲液(GVB) (Advanced Research Technologies)中将新鲜的绵羊红细胞(SRBC)致敏30分钟。洗涤两次后，通过将IgM敏感化SRBC与C6缺陷型人血清在GVB++中的1:2等体积稀释液孵育(120分钟，37° C下)，制备C3b调理素作用的SRBC。将细胞洗涤两次，将细胞团在GVB中重悬。在该处理后，大部分与红细胞结合的C3为iC3b或C3d降解产物(CR2配体)的形式。然后，将U937细胞添加至50 μ L C3片段调理素作用的SRBC (2 X IO6细胞)，将混合物轻微离心，并在室温下静置90分钟。然后，用相差显微镜观察细胞，测定附着于红细胞的U937细胞的数量。每个样品评价至少100个红细胞,并计算每个红细胞结合的U937细胞的平均数。对进行的每个实验，进行三次平行测定。为了增加CR3水平，在收获前，在50ng/ml PMA的存在下将U937细胞培养3天。用单独的包被了 IgM的SRBC或直接与C6缺陷型人血清孵育的SRBC进行孵育的细胞被用作对照。抗C3d单克隆抗体的功能研究对CAP (的非稳定化)的作用为了验证抗体不会稳定化CAP C3转化酶和放大表面上的补体活化，利用AH50测定。为了进行该测定，将5ml的兔全血在GVB-Mg++-EGTA中洗涤，并在20ml的体积中重悬。然后，将50 μ I红细胞添加至15 μ I人血清。添加纯化的抗体(0-150 μ g/反应)，用将GVB-Mg++-EGTA体积调整为150 μ I。将混合物在37° C下孵育30分钟，并定时振动管。作为阴性对照，将IOmM EDTA添加至反应。作为阳性对照(完全溶解)，将100 μ I的水添加至红细胞。将混合物在37° C下孵育30分钟，并定时振动管。为了终止反应，向管添加1.2ml冷PBS。然后将管在IOOOg下离心5分钟，将上清转移到新管中。读取415nm下的0.D.，相对于阴性和阳性对照值，测定每个样品的溶解百分比。I个克隆(3dl6)显示出的溶解高于单独的血清(图10)。克隆3d8b、3d9a及3d29未显示出在增加的抗体浓度下增加的溶解。作为用于进一步证实本文所述的mAb是否结合与CR2结合中相同或重叠的C3d或C3dg上的表位的示例性实验，利用标准方法，在C3d上的CR2结合位点中引入突变。测试这些C3d突变体与CR2和本文所述的mAb的结合。如果能发现任何仅结合CR2、而不结合本文所述的抗C3d/C3dg抗体中任一个(或相反的情况)的突变体，则能证实突变的氨基酸残基对于与所述抗体结合、而不与CR2结合(或相反的情况)是非常重要的，以及CR2和所述抗体结合不同的表位。相似地，这些突变体在抗C3d/C3dg抗体中的不同结合性质有助于确定这些抗体的不同结合表·位或与C3d结合的关键氨基酸残基。可以通过很多本领域公知的标准方法测试C3d突变体和CR2或抗C3d/C3dg抗体之间的结合。一个示例性的ELISA测定如本文所述。纯化C3d突变蛋白之后，用野生型或突变体C3d、以5 μ g/ml的浓度(配制于50mM碳酸氢钠缓冲液(ρΗ8.8))包被ELISA板。然后，用100 μ L/孔的PBS-吐温20 (0.01%)将板洗涤3次。然后用100 μ L/孔的PBS/1%BSA在室温下将板封闭I小时，并按照上述洗涤3次。利用10 μ g/ml (配制于PBS)的储备液，制备抗C3d单克隆抗体的连续稀释液。将单克隆抗体添加至板，并在室温下孵育I小时。制备辣根过氧化物酶偶联抗小鼠IgG抗体的储备液。用PBS-吐温20 (0.01%)将板洗涤3次。然后，添加50 μ L/孔的HRP偶联抗小鼠抗体，用箔包裹板，避光保存I小时。然后，用PBS-吐温20 (0.01%)将板洗涤3次，然后向每个孔添加50 μ L的ABTS+1/100035%过氧化氢(即将显色前添加H2O2)。将板避光孵育10-20分钟，然后在405nm下读数。对抗原免疫应答的作用为了评价抗C3d单克隆抗体对宿主体液免疫应答的作用(基于C3d在增强B细胞应答中的作用的假设)，将模型补体依赖性抗原绵羊红细胞(SRBC)用于诱导宿主免疫应答。在一个示例性的实验中，如图11所示，注射抗C3d单克隆抗体后I天，用作为外来抗原的SRBC免疫小鼠。在免疫后17和30天，收集血液样品，并分析抗原特异性IgGl浓度。如图12所示，SRBC诱导宿主体液免疫应答，导致SRBC特异性IgGl浓度增加。第I组的mAb3d8b和3d29通过其对CR2_C3d结合的抑制活性，能显著降低宿主IgGl产生，而第3组的C3d抗体3dl0不能降低IgGl产生，这可能是由于其不能抑制CR2-C3d相互作用(图12，图7及图8)。有趣的是，与CR2竞争结合重组C3d(图7)的第2组C3d抗体3dll不降低小鼠中SRBC特异性IgGl产生(图12)。然而，这与其缺少结合调理素作用的酵母聚糖颗粒上的天然C3d或iC3b片段的能力(图4)是相符的，这可以提示:在补体活化生理环境下，3dll至少不是强的C3d结合伴侣。抗C3d单克隆抗体与补体调节部分的融合蛋白的制备和测试产生本文所述的各种抗C3d单克隆抗体的杂交瘤细胞系已保藏于美国模式培养物保藏所(American Type Culture Collection),具体如下:(1)杂交瘤细胞系 3d_9a/25,于2010年5月26日保藏并被指定为ATCC专利保藏号PTA-10998 ;(2)杂交瘤细胞系3d-8b/2，于2010年5月26日保藏并被指定为ATCC专利保藏号PTA-10999 ； (3)杂交瘤细胞系3d-29/5/2，于2010年5月26日保藏并被指定为ATCC专利保藏号PTA-11000 ；
(4)杂交瘤细胞系3d-10/14/l，于2010年6月2日保藏并被指定为ATCC专利保藏号PTA-11010 ； (5)杂交瘤细胞系3d-l 1/14，于2010年6月2日保藏并被指定为ATCC专利保藏号PTA-11011 ；(6)杂交瘤细胞系3d-15A9，于2010年6月2日保藏并被指定为ATCC专利保藏号PTA-11012 ; (7)杂交瘤细胞系3d-3/28/4，于2010年6月9日保藏并被指定为ATCC专利保藏号PTA-11025 ; (8)杂交瘤细胞系3d-16/3/3，于2010年6月9日保藏并被指定为ATCC专利保藏号PTA-11026 ;和(9)杂交瘤细胞系3d_31/A6/9，于2010年6月9日保藏并被指定为ATCC专利保藏号PTA-11027。利用标准方法可容易地确定那些杂交瘤细胞系所产生的单克隆抗体的完整核苷酸和氨基酸序列，例如，聚合酶链式反应(PCR)和自动化测序。抗C3d单克隆抗体转变为单链可变片段(scFv)本文的单链Fv优选包含通过能防止解离的柔性肽连接子连接的Vh和\结构域。scFv通常保留母体抗体的特异性，并以单价形式结合目标抗原。将抗体转变为scFv是公知的方法(参见，Nat.Biotechnol.23:1126 (2005) ; Biomol Eng.24:201 (2007) ; J ImmunolMethods.，168:149(1994) ;Arch Virol.148:497 (2003))。可通过重头基因合成、重叠延伸聚合酶链式反应(PCR)或单个 重链可变基因区段(Vh)和轻链可变基因区段的依次连接来构建ScFv。将单个Vh和\基因依次克隆入含有合成连接子序列(例如，(Gly4Ser)3)的载体中也是可行的。顺序可以为Vh-连接子或' -连接子-VH。补体调节剂与C3d特异性scFv的连接可以将按照上段产生的ScFv连接于补体调节剂蛋白，例如因子HSCR1_5(SEQ IDN0:5)。一系列连接子可用于鉴定scFv和补体调节剂蛋白之间的最佳距离，从没有连接子至40个或更多个氨基酸的连接子,所选的连接子序列可以为，例如，(GlyGlyGlyGlySer)n其中n=0-8。可通过重头基因合成、重叠PCR、依次克隆或连接来构建与补体调节剂连接的ScFv0最终构建体的N末端部分可以是补体调节剂或scFv。抗C3dscFv-FH对旁路途径的体外抑制通过重组DNA克隆和基因表达方法制备含有抗C3dscFV和人或鼠!7H的前5个SCR结构域的人或小鼠融合蛋白，所述融合蛋白不具有连接子(抗C3dFv-FH)或具有连接子(抗C3dFv-L-FH)。一个抗C3dFv-ra融合蛋白中所用的的序列提供在SEQ ID N0:5(人)或SEQ ID N0:8(鼠)。应当注意到，因为抗C3d抗体与人C3d和小鼠C3d能交叉反应，相同抗体片段可用于体外测定和人和小鼠的体内测定。当用于人细胞或人时，融合分子的因子H组分优选为人源的。当用于鼠细胞或小鼠时，融合分子的因子H组分优选为鼠源的。还制备了含有[抗C3dFv]和两个串联连接的ra部分(每个含有ra的前5个SCR结构域)的小鼠抗C3dFv-FH融合蛋白(指定为抗C3dFv-FHFH)。抗C3dFv部分和第一 !7H部分通过连接子序列连接。基本按照 Quigg et al.，J.1mmunol.1998，160(9):4553-60 所述进行旁路途径的活化的体外测定。因子H(fH)或抗C3d抗体在实验中被用作对照。具体而言，配制于IOml0.15M NaCl的50mg酵母聚糖珠通过沸煮60分钟被活化，并将其在PBS中洗涤2次。在每个反应混合物添加:1) IOmMEGTA和5mM MgCl2 (终浓度)；2) I X IO7珠；3) IOmM EDTA (阴性对照I)或热失活的血清(阴性对照2)或渐增浓度的抗C3dFab-Hl融合蛋白或对照蛋白之一 ；4) 10 μ I血清；和5)PBS，将总体积补足为100 μ I。将混合物在37° C下孵育20分钟，通过添加IOmM EDTA (终浓度)来终止反应。用冷PBSB (含1%BSA的PBS)将珠洗涤2次，并将珠与FTIC偶联山羊抗C3抗体在冰上孵育I小时。然后，在PBSB中将样品洗涤2次，用1%多聚甲醛重悬，并利用流式细胞术分析。 将具有和不具有连接子的抗C3dFab_FH和抗C3dFab_FHFH对补体活化的抑制与以下进行比较:单独的FH、FH-FH、单独的抗C3dFab和单独的抗C3d抗体。相对于每个部分的独立功能测定抗C3dFab-FH和抗C3dFab_FHFH蛋白的作用。抗C3dFab_FH对肠缺血和再灌注损伤的治疗设计该实验是用于表明小鼠模型中肠缺血和再灌注损伤的治疗效果。肠缺血再灌注损伤关于示例性的方法的详细描述，参见，例如，Huang et al.“A noveltargeted inhibitor of the alternative pathway of complement and itstherapeutic application in ischemia/reperfusion injury.The Journal ofImmunology(2008)，181:11:8068-76，通过引用将其内容整体并入本文。简言之，通过腹腔注射10mg/kg氯胺酮和6mg/kg甲苯噻嗪来麻醉3只8周龄、重20_25g的成年雄性小鼠。在整个实验中，动物自主呼吸并利用加热垫维持体温。进行中线剖腹手术，小心地移动肠，暴露肠系膜上动脉。用微型手术钳(Fine Instruments, USA)夹住肠系膜上动脉。通过小肠变白来确认缺血。假处理的小鼠接受剖腹手术，但不夹住肠系膜上动脉。缺血30分钟后，移除动脉夹，允许肠系膜血管再灌注。用6.0ethicon缝线缝合动物，并允许其再灌注2小时。然后，再灌注后30分钟，通过静脉注射给予0.1mg或0.05mg抗C3dFab_FH或对照(PBS)，以及在共2小时再灌注之后的90分钟，处死动物。组织学分析用于组织学染色的组织样品取自肠，将组织样品在4° C下、10%福尔马林中过夜固定并随后进行石蜡加工，或冷冻于液氮中用于免疫荧光分析。用苏木精和伊红将来自每只动物的肠切片染色，并按照之前的文献所述对粘膜损伤和绒毛高度进行评分。参见，例如，Rehrig et al.Complement Inhibitor, Complement Receptorl-Related Gene/Proteiny-1g Attenuates Intestinal Damage After the Onset of Mesenteric Ischemia/Reperfusion Injury in Mice.J Immunol (2001) 167:5921-5927。简言之，正常绒毛指定为O分；末端变形的绒毛指定为I分；缺少杯状细胞并含有Gugenheims空隙的绒毛指定为2分；具有上皮细胞斑状破坏的绒毛指定为3分；绒毛暴露，而完整固有层和上皮细胞脱落被指定为4分；固有层渗出的绒毛指定为5分；最后，显示出血的绒毛或剥脱的绒毛指定为6分。所有组织学评价都是按照盲法进行的。

抗C3dFab_FH的作用是相对于对照动物测定的，预期对照动物会具有超过待给予的抗C3dFab-FH的量的正常的循环内源因子H水平。肾缺血再灌注小鼠抗C3dFab_FH对的治疗设计该实施例是用于表明抗C3dFab_FH对肾缺血再灌注的作用。诱导缺血性剂型肾衰竭(ARF)的方法关于示例性的方法的详细描述，参见，例如，Thurman et al.Lack of aFunctional Alternative Complement Pathway Ameliorates Ischemic Acute RenalFailure in Mice.J Immunol (2003) 170:1517-1523，通过引用将其内容整体并入本文。简言之，通过腹腔内注射300 μ 12，2，2-三溴乙醇(Sigma-Aldrich)来麻醉重20_25g的小鼠。麻醉小鼠后，将它们置于加热垫上，用于在手术中保持体温。然后进行剖腹手术，找到肾蒂并通过钝性分离将其分离。将肾蒂用手术夹(Miltex Instrument Company, Inc.)夹住，及通过肉眼观察肾来确认血流闭塞。将夹子保持原位24分钟，然后松开。选择这样的缺血时间是为了获得具有最低程度的血管血栓形成的可逆性缺血性ARF模型，以及避免动物死亡。观察肾约I分钟，已确保血液再流动。再灌注15分钟后，小鼠通过腹腔内方式接受
0.25mg小鼠抗C3dFab_FH。用4-0丝线(United States Surgical)缝合筋膜和皮肤。用
0.5ml生理盐水对小鼠进行容量复苏，并保持在29° C保温箱中以保持体温。再灌注24小时后，麻醉小鼠，通过心脏穿刺获得血液。进行剖腹手术，获得肾。所有动物研究都符合标准人道主义实验规范。血清尿素氮测量利用Beckman自动分子仪(Beckman),测定每只小鼠的血清尿素氮。利用血清尿素氮测定来衡量抗C3dFa b-FH对肾功能的作用。肾形态学从小鼠中取出肾后，将矢状切片固定于4%多聚甲醛中。包埋在石蜡中后，切成4ym切片，用过碘酸雪夫染色。由肾病理学家按照盲法评价切片。评价皮质和外髓部的外缘的上皮坏死、刷状缘丢失、管状扩张和管型形成。每个切片至少评估10个视场(400X)，测定表现出这些发现的小管的百分比。基于受累的小管的百分比，按照如下为肾切片评分:O:无；I:<10% ；2:11-25% ；3:26-45% ；4:46-75% ；5:>75%。抗 C3dFab_FH 的作用是相对于对照动物测定的。免疫荧光对于免疫荧光，将肾的矢状切片速冻在OCT化合物中(Sakura Finetek)。在低温恒温器中切成4μπι切片并保存在-70° C。随后，用丙酮固定切片，并与FITC偶联抗小鼠C3抗体(Cappel)孵育。与抗体在室温下杂交I小时后，用苏木精(VectorLaboratories, Inc.)将切片复染。抗C3dFab_ra对沉积到假处理小鼠的肾中的C3水平的作用是相对于未处理对照小鼠测定的。抗C3dFab_FH对年龄相关性黄斑变性的治疗关于示例性的方法的详细描述，参见，例如，Rohrer et al.Eliminatingcomplement factor D reduces photoreceptor susceptibility to light-1nduceddamage.1nvestigative Ophthalmology & Visual Science (2007) 48 (11): 5282-9，通过引用将其内容整体并入本文。简言之，持续光暴露的白化大鼠被用作年龄相关性黄斑变性的动物模型(干性AMD)。在麻醉的条件下，每隔一天对5至8只动物眼内注射抗C3dFab-FH融合蛋白(I μ 14.3mg/ml储备液)，第一次注射在开始持续光暴露的前一天进行(第_1天、第I天、第3天、第5天、第7天)。一只眼作为实验，另一只眼作为注射PBS的对照眼。在第8天，用视网膜电图(ERG)测试动物，随后无痛处死用于组织学和PCR分析。将用抗C3dFab-FH注射的眼中光受体的数量与PBS对照眼进行比较。使用3个参数测定抗C3dFab-Hl的作用:功能活性(ERG潜能，即，光受体和视网膜色素上皮细胞(RPE)反应)、组织学和炎症测定(例如，通过RT-PCR测定基因表达和通过免疫组化测定蛋白表达)。抗C3d_鼠!7H减小CNV体积关于示例性的方法的详细描述，参见，例如，Rohrer et al.“A targetedinhibitor of the alternative complement pathway reduces angiogenesis in amouse model of age-related macular degeneration.，，Invest Ophthalmol Vis Sc1.(2009) 50:3056 - 3064，通过引用将其内容整体并入本文。简言之，为了产生CNV，用甲苯噻嗪和氯胺酮(分别为20和80mg/kg)麻醉3月龄小鼠，用一滴盐酸去氧肾上腺素(2.5%)和硫酸阿托品(1%)使瞳孔扩大。利用手持盖玻片作为隐形眼镜，使用氩激光光凝术(532nm，光斑尺寸50μπι，持续时间0.05s,250mff)在每个眼中视神经周围产生4个激光光斑。激光光斑处形成的泡指示布鲁赫膜的破裂。Nozaki et al., Proc.Natl.Acad.Sc1.(2006)103:2328-33。使用4个参数测定抗C3dFab_FH的作用:功能活性(ERG潜能，即，光受体和RPE反应)、组织学，血管完整性(荧光素注射后的脉络膜血管铺片(flatmount))和炎症测定(例如，通过RT-PCR测定基因表达和通过免疫组化测定蛋白表达)。为了评价CNV损伤，在用同工凝集素B (其结合内皮细胞表面上的末端β -D-半乳糖残基并选择性地标记小鼠血管)染色的RPE/脉络膜的血管铺片制备物中测定CNV尺寸。利用共聚焦显微镜从2 μ m切片获得的荧光测量结果被用于尺寸测定。简言之，对于所有实验，利用相同激光强度设定获 得通过CNV损伤的图像的光切图像。对于每个切片，测定总体荧光，并相对于深度绘图。对于视网膜电图，利用甲苯噻嗪(20mg/kg体重)和氯胺酮(80mg/kg体重)麻醉动物。用一滴盐酸去氧肾上腺素(2.5%)和托吡卡胺(1%)使瞳孔扩大。通过保持在37° C的直流电加热板稳定体温。使用的ERG设定在之前Rohrer et al.，J.Neurosc1.，1999，19 (20): 8919-30 已有描述，并且是根据 Lyubarsky and Pugh Lyubarskyet al.，J.Neurosc1.，1996，16:563-571建立起来的。利用中性密度滤光片控制刺激光强度。刺激模式使动物暗适应过夜，记录ERG。分析响应于渐增光强度的单闪刺激的视杆细胞(Rod)。单闪反应以15秒至2分钟(分别从最低强度至最高)的刺激间间隔(ISI)，至少3次闪光的平均值。不同ISI确保给定强度下ERG幅度在第一次闪光和最后一次闪光之间是相同的。数据分析对于所有ERG记录，从基线至波谷测量a波幅度；从a波波谷或基线至b波波峰测量b波幅度，从开始刺激至a波波谷或b波波峰测量隐含期。
在一个实验中，在激光烧伤后30分钟、激光烧伤后48小时或激光烧伤后6小时，静脉内给予小鼠抗C3dFabra(250yg)来处理小鼠。激光烧伤后6天后，评价视网膜功能，然后处死小鼠用于组织学分析。抗C3dFab-Hl对小鼠中a波和b波视网膜反应的作用是相对于对照测定的。评价抗C3dFab-FH和对照中同工凝集素B染色的损伤的定量。在另一实验中，在激光烧伤后即刻、烧伤后48小时或烧伤后96小时，眼内给予1口8小鼠抗03(^&13-!^。第6天时，获取眼，用于组织学分析。通过同工凝集素B染色使损伤可视化。向眼直接递送抗C3dFab-FH对损伤尺寸的作用是相对于对照测定的。小鼠抗C3dFab_FH延迟小鼠异位心脏移植模型中抗体介导的排斥的发生关于示例性的方法的详细描述，参见，例如，Atkinson et al."TargetedComplement Inhibitors Protect against Posttransplant Cardiac Ischemia andReperfusion Injury and Reveal an Important Role for the Alternative Pathway ofComplement Activation.〃J Tmmunol (2010) 185:7007-7013,通过引用将其内容整体并入本文。简言之，在该实验中，将心脏从C3H供体小鼠异位移植到Balb/c受体小鼠。该品系组合促进TH2免疫表型，其促进急性血管排斥并且特征在于抗移植物抗体产生和补体活化片段的移植物沉积。受体小鼠接受以下处理:1)静脉注射PBS ;2)再灌注后30分钟，静脉注射单次
0.25mg剂量的小鼠抗C3dFab-FH ;及3)再灌注后30分钟开始，然后每三天一次，静脉注射多次剂量的0.25mg小鼠抗C3dFab-HL再灌注后24小时，获取心脏用于分析。通过组织学分析和C3、嗜中性粒细胞浸润及炎性细胞因子的测定，与对照动物相比评价小鼠抗C3dFab-FH对缺血和再灌注损伤的作用。还通过用小鼠抗C3dFab-Hl处理的小鼠的存活时间与对照的比较评价小鼠抗C3dFab-FH对急性血管排斥的作用。人抗C3dFab_FH抑制旁路补体途径人抗C3dFab_FH(也指定为抗C3dFH)及人抗C3dFab_FHFH(也指定为抗C3dFH2)中存在的FH组分的蛋白序列提供于SEQ ID N0:9。鼠抗C3cFH和鼠抗C3dFH2中存在的 的蛋白序列显示于SEQ ID NO: 10。 通过亲和层析，从转染的293细胞的上清纯化人抗C3cFH和人抗C3dFH2，在层析中使用HB5-琼脂糖，其含有与CNBr活化的琼脂糖连接的抗FH抗体(AmershamBiosciences)。使粗制抗C3dFH或抗C3dFH2上清通过基质，用PBS洗涤，用0.1M甘氨酸-HCl(pH3.0)洗脱。通过添加IM Tris-Cl (pH9.0)立即中和洗脱的组分，然后利用centricon柱(Millipore)交换到PBS中。将300ng非还原的纯化抗C3dFH和抗C3dFH2在SDS-PAGE解析，并通过考马斯亮蓝染色显影。按照下述评价人抗C3cFH和人抗C3dFH2对酵母聚糖颗粒上的旁路途径特异性C3b沉积的作用。简言之，将酵母聚糖颗粒在含有5mM Mg2+UOmM EGTA、10%人血清及渐增浓度的抗C3dFH和抗C3dFH2的PBS中与FITC偶联山羊抗人C3抗体在室温下孵育30分钟。将酵母聚糖沉淀和洗涤，然后进行FACS分析。可以测量内源FH水平，以及将目标的作用与非目标内源FH的作用进行比较。按照下述 评价人抗C3cFH和人抗C3dFH2对旁路途径介导的红细胞溶解的作用。简言之，将兔红细胞(I X IO8)与配制于IX GVB++(Boston BioProducts)和17%人血清中的不同浓度的抗C3dFH或抗C3dFH2在37° C下孵育30分钟。添加1/10体积的冷PBS终止反应，然后离心来沉淀未溶解的红细胞。通过测量0D415nm来定量血细胞溶解。可以测量内源FH水平，以及将目标ra的作用与非目标内源ra的作用进行比较。抗C3d_mura抑制旁路补体途径该实施例利用来自经典途径缺陷型小鼠的血清显示了小鼠抗C3d-mura对旁路补体途径的抑制。使用了 ELISA测定，其中板上有胶原蛋白-抗胶原蛋白抗体的免疫复合物。在存在来自野生型或C4_/C4_小鼠的血清的情况下，利用抗C3b抗体测定C3沉积/活化。不同量的全长小鼠FHOyg/lOy I)、小鼠CR2的前4个SCR结构域Oyg/lOy I)及抗C3d-muFH(2 μ g/10 μ I)被添加至血清。为了进一步证实观察到的抗C3dFH对C3b沉积的抑制是由于抑制旁路途径，还在缺少经典途径(C47C4-小鼠)的情况下研究了抗C3cFH对C3b沉积的作用。钙抑制凝集素补体途径。 序列SEQ ID NO:1 [人膜辅因子蛋白(MCP)的氨基酸序列]:MEPPGRRECPFPSWRFPGLLLAAMVLLLYSFSDACEEPPTFEAMELIGKPKPYYEIGERVDYKCKKGYFYIPPLATHTICDRNHTWLPVSDDACYRETCPYIRDPLNGQAVPANGTYEFGYQMHFICNEGYYLIGEEILYCELKGSVAIWSGKPPICEKVLCTPPPKIKNGKHTFSEVEVFEYLDAVTYSCDPAPGPDPFSLIGESTIYCGDNSVWSRAAPECKWKCRFPWENGKQISGFGKKFYYKATVMFECDKGFYLDGSDTIVCDSNSTWDPPVPKCLKVLPPSSTKPPALSHSVSTSSTTKSPASSASGPRPTYKPPVSNYPGYPKPEEGILDSLDVWVIAVIVIAIVVGVAVICVVPYRYLQRRKKKGTYLTDETHREVKFTSLSEQ ID NO:2[人衰变加速因子(DAF/CD55)的氨基酸序列]:MTVARPSVPAALPLLGELPRLLLLVLLCLPAVWGDCGLPPDVPNAQPALEGRTSFPEDTVITYKCEESFVKIPGEKDSVICLKGSQWSDIEEFCNRSCEVPTRLNSASLKQPYITQNYFPVGTVVEYECRPGYRREPSLSPKLTCLQNLKWSTAVEFCKKKSCPNPGEIRNGQIDVPGGILFGATISFSCNTGYKLFGSTSSFCLISGSSVQWSDPLPECREIYCPAPPQIDNGIIQGERDHYGYRQSVTYACNKGFTMIGEHSIYCTVNNDEGEWSGPPPECRGKSLTSKVPPTVQKPTTVNVPTTEVSPTSQKTTTKTTTPNAQATRSTPVSRTTKHFHETTPNKGSGTTSGTTRLLSGHTCFTLTGLLGTLVTMGLLTSEQ ID NO:3[小鼠衰变加速因子(DAF/CD55)的氨基酸序列]:MIRGRAPRTRPSPPPPLLPLLSLSLLLLSPTVRGDCGPPPDIPNARPILGRHSKFAEQSKVAYSCNNGFKQVPDKSNIVVCLENGQWSSHETFCEKSCVAPERLSFASLKKEYLNMNFFPVGTIVEYECRPGFRKQPPLPGKATCLEDLVWSPVAQFCKKKSCPNPKDLDNGHINIPTGILFGSEINFSCNPGYRLVGVSSTFCSVTGNTVDWDDEFPVCTEIHCPEPPKINNGIMRGESDSYTYSQVVTYSCDKGFILVGNASIYCTVSKSDVGQWSSPPPRCIEKSKVPTKKPTINVPSTGTPSTPQKPTTESVPNP⑶QPTPQKPSTVKVSATQHVPVTKTTVRHPIRTSTDKGEPNTGGDRYIYGHTCLITLTVLHVMLSLIGYLTSEQ ID N0:4[人 CD59 蛋白的氨基酸序列]:MGIQGGSVLFGLLLVLAVFCHSGHSLQCYNCPNPTADCKTAVNCSSDFDACLITKAGLQVYNKCWKFEHCNFNDVTTRLRENELTYYCCKKDLCNFNEQLENGGTSLSEKTVLLLVTPFLAAAffSLHPSEQ ID 勵:5[小鼠0)59八蛋白的氨基酸序列]:MRAQRGLILLLLLLAVFCSTAVSLTCYHCFQPVVSSCNMNSTCSPDQDSCLYAVAGMQVYQRCWKQSDCHGEIIMDQLEETKLKFRCCQFNLCNKSDGSLGKTPLLGTSVLVAILNLCFLSHL
SEQ ID N0:6[小鼠 CD59B 蛋白的氨基酸序列]:MRAQRGLILLLLLLAVFCSTAVSLKCYNCFQFVSSCKINTTCSPNLDSCLYAVAGRQVYQQCWKLSDCNSNYIMSRLDVAGIQSKCCQWGLCNKNLDGLEEPNNAETSSLRKTALLGTSVLVAILKFCFSEQ ID NO:7[小鼠补体受体I相关基因/蛋白y (Crry)的氨基酸序列]=MEVSSRSSEPLDPVWLLVAFGRGGVKLEVLLLFLLPFTLGELRGGLGKHGHTVHREPAVNRLCADSKRWSGLPVSAQRPFPMGHCPAPSQLPSAKPINLTDESMFPIGTYLLYECLPGYIKRQFSITCKQDSTWTSAEDKCIRKQCKTPSDPENGLVHVHTGIQFGSRINYTCNQGYRLIGSSSAVCVITDQSVDWDTEAPICEWIPCEIPPGIPNGDFFSSTREDFHYGMVVTYRCNTDARGKALFNLVGEPSLYCTSNDGEIGVWSGPPPQCIELNKCTPPPYVENAVMLSENRSLFSLRDIVEFRCHPGFIMKGASSVHCQSLNKWEPELPSCFKGVICRLPQEMSGFQKGLGMKKEYYYGENVTLECEDGYTLEGSSQSQCQSDGSWNPLLAKCVSRSISGLIVGIFIGIIVFILVIIVFIWMILKYKKRNTTDEKYKEVGIHLNYKEDSCVRLQSLLTSQENSSTTSPARNSLTQEVSSEQ ID NO:8 [人补体受体 I (CRl)的氨基酸序列]:MGASSPRSPEPVGPPAPGLPFCCGGSLLAVVVLLALPVAWGQCNAPEWLPFARPTNLTDEFEFPIGTYLNYECRPGYSGRPFSIICLKNSVffTGAKDRCRRKSCRNPPDPVNGMVHVIKGIQFGSQIKYSCTKGYRLIGSSSATCIISGDTVIWDNETPICDRIPCGLPPTITNGDFISTNRENFHYGSVVTYRCNPGSGGRKVFELVGEPSIYCTSNDDQVGIWSGPAPQCIIPNKCTPPNVENGILVSDNRSLFSLNEVVEFRCQPGFVMKGPRRVKCQALNKWEPELPSCSRVCQPPPDVLHAERTQRDKDNFSPGQEVFYSCEPGYDLRGAASMRCTPQGDWSPAAPTCEVKSCDDFMGQLLNGRVLFPVNLQLGAKVDFVCDEGFQLKGSSASYCVLAGMESLWNSSVPVCEQIFCPSPPVIPNGRHTGKPLEVFPFGKAVNYTCDPHPDRGTSFDLIGESTIRCTSDPQGNGVWSSPAPRCGILGHCQAPDHFLFAKLKTQTNASDFPIGTSLKYECRPEYYGRPFSITCLDNLVWSSPKDVCKRKSCKTPPDPVNGMVHVITDIQVGSRINYSCTTGHRLIGHSSAECILSGNAAHWSTKPPICQRIPCGLPPTIANGDFISTNRENFHYGSVVTYRCNPGSGGRKVFELVGEPSIYCTSNDDQVGIWSGPAPQCIIPNKCTPPNVENGILVSDNRSLFSLNEVVEFRCQPGFVMKGPRRVKCQALNKWEPELPSCSRVCQPPPDVLHAERTQRDKDNFSPGQEVFYSCEPGYDLRGAASMRCTPQGDWSPAAPTCEVKSCDDFMGQLLNGRVLFPVNLQLGAKVDFVCDEGFQLKGSSASYCVLAGMESLWNSSVPVCEQIFCPSPPVIPNGRHTGKPLEVFPFGKAVNYTCDPHPDRGTSFDLIGESTIRCTSDPQGNGVWSSPAPRCGILGHCQAPDHFLFAKLKTQTNASDFPIGTSLKYECRPEYYGRPFSITCLDNLVWSSPKDVCKRKSCKTPPDPVNGMVHVITDIQVGSRINYSCTTGHRLIGHSSAECILSGNTAHWSTKPPICQRIPCGLPPTIANGDFISTNRENFHYGSVVTYRCNLGSRGRKVFELVGEPSIYCTSNDDQVGIWSGPAPQCIIPNKCTPPNVENGILVSDNRSLFSLNEVVEFRCQPGFVMKGPRRVKCQALNKWEPELPSCSRVCQPPPEILHGEHTPSHQDNFSPGQEVFYSCEPGYDLRGAASLHCTPQGDWSPEAPRCAVKSCDDFLGQLPHGRVLFPLNLQLGAKVSFVCDEGFRLKGSSVSHCVLVGMRSLWNNSVPVCEHIFCPNPPAILNGRHTGTPS⑶IPYGKEISYTCDPHPDRGMTFNLIGESTIRCTSDPHGNGVWSSPAPRCELSVRAGHCKTPEQFPFASPTIPINDFEFPVGTSLNYECRPGYFGKMFSISCLENLVWSSVEDNCRRKSCGPPPEPFNGMVHINTDTQFGSTVNYSCNEGFRLIGSPSTTCLVSGNNVTWDKKAPICEIISCEPPPTISNGDFYSNNRTSFHNGTVVTYQCHTGPDGEQLFELVGERSIYCTSKDDQVGVWSSPPPRCISTNKCTAPEVENAIRVPGNRSFFSLTEIIRFRCQPGFVMVGSHTVQCQTNGRWGPKLPHCSRVCQPPPEILHGEHTLSHQDNFSPGQEVFYSCEPSYDLRGAASLHCTPQGDWSPEAPRCTVKSCDDFLGQLPHGRVLLPLNLQLGAKVSFVCDEGFRLKGRSASHCVLAGMKALWNSSVPVCEQIFCPNPPAILNGRHTGTPFGDIPYGKEISYACDTHPDRGMTFNLIGESSIRCTSDPQGNGVWSSPAPRCELSVPAACPHPPKIQNGHYIGGHVSLYLPGMTISYTCDPGYLLVGK GFIFCTDQGIWSQLDHYCKEVNCSFPLFMNGISKELEMKKVYHYGDYVTLKCEDGYTLEGSPWSQCQADDRWDPPLAKCTSRAHDALIVGTLSGTIFFILLIIFLSWIILKHRKGNNAHENPKEVAIHLHSQGGSSVHPRTLQTNEENSRVLP
SEQ ID NO:9[人因子 H 的氨基酸序列]:MRLLAKIICLMLWAICVAEDCNELPPRRNTEILTGSWSDQTYPEGTQAIYKCRPGYRSLGNVMVCRKGEWVALNPLRKCQKRPCGHP⑶TPFGTFTLTGGNVFEYGVKAVYTCNEGYQLLGEINYRECDTDGWTNDIPICEVVKCLPVTAPENGKIVSSAMEPDREYHFGQAVRFVCNSGYKIE⑶L.EMHCSDDGFWSKEKPKCVEISCKSPDVINGSPISQKIIYKENERFQYKCNMGYEYSERGDAVCTESGWRPLPSCEEKSCDNPYIPNGDYSPLRIKHRTCDEITYQCRNGFYPATRGNTAKCTSTGWIPAPRCTLKPCDYPDIKHGGLYHENMRRPYFPVAVGKYYSYYCDEHFETPSGSYWDHIHCTQDGWSPAVPCLRKCYFPYLENGYNQNYGRKFVQGKSIDVACHPGYALPKAQTTVTCMENGWSPTPRCIRVKTCSKSSIDIENGFISESQYTYALKEKAKYQCKLGYVTADGETSGSITCGKDGWSAQPTCIKSCDIPVFMNARTKNDFTWFKLNDTLDYECHDGYESNTGSTTGSIVCGYNGWSDLPICYERECELPKIDVHLVPDRKKDQYKVGEVLKFSCKPGFTIVGPNSVQCYHFGLSPDLPICKEQVQSCGPPPELLNGNVKEKTKEEYGHSEVVEYYCNPRFLMKGPNKIQCVDGEWTTLPVCIVEESTCGDIPELEHGWAQLSSPPYYYGDSVEFNCSESFTMIGHRSITCIHGVWTQLPQCVAIDKLKKCKSSNLIILEEHLKNKKEFDHNSNIRYRCRGKEGWIHTVCINGRWDPEVNCSMAQIQLCPPPPQIPNSHNMTTTLNYRDGEKVSVLCQENYLIQEGEEITCKDGRWQSIPLCVEKIPCSQPPQIEHGTINSSRSSQESYAHGTKLSYTCEGGFRISEENETTCYMGKWSSPPQCEGLPCKSPPEISHGVVAHMSDSYQYGEEVTYKCFEGFGIDGPAIAKCLGEKWSHPPSCIKTDCLSLPSFENAIPMGEKKDVYKAGEQVTYTCATYYKMDGASNVTCINSRWTGRPTCRDTSCVNPPTVQNAYIVSRQMSKYPSGERVRYQCRSPYEMFGDEEVMCLNGNWTEPPQCKDSTGKCGPPPPIDNGDITSFPLSVYAPASSVEYQCQNLYQLEGNKRITCRNGQWSEPPKCLHPCVISREIMENYNIALRWTAKQKLYSRTGESVEFVCKRGYRLSSRSHTLRTTCWDGKLEYPTCAKRSEQ ID NO: 10[小鼠因子 H 的氨基酸序列]:MRLSARIIWLILWTVCAAEDCKGPPPRENSEILSGSffSEQLYPEGTQATYKCRPGYRTLGTIVKVCKNGKWVASNPSRICRKKPCGHP⑶TPFGSFRLAVGSQFEFGAKWYTCDDGYQLLGEIDYRECGADGWINDIPLCEWKCLPVTELENGRIVSGAAETDQEYYFGQWRFECNSGFKIEGHKEIHCSENGLWSNEKPRCVEILCTPPRVENGDGINVKPVYKENERYHYKCKHGYVPKERGDAVCTGSGffSSQPFCEEKRCSPPYILNGIYTPHRIIHRSDDEIRYECNYGFYPVTGSTVSKCTPTGWIPVPRCTLKPCEFPQFKYGRLYYEESLRPNFPVSIGNKYSYKCDNGFSPPSGYSWDYLRCTAQGWEPEVPCVRKCVFHYVENGDSAYWEKVYVQGQSLKVQCYNGYSLQNGQDTMTCTENGWSPPPKCIRIKTCSASDIHIDNGFLSESSSIYALNRETSYRCKQGYVTNTGEISGSITCLQNGWSPQPSCIKSCDMPVFENSITKNTRTWFKLNDKLDYECLVGFENEYKHTKGSITCTYYGWSDTPSCYERECSVPTLDRKLWSPRKEKYRV⑶LLEFSCHSGHRVGPDSVQCYHFGWSPGFPTCKGQVASCAPPLEILNGEINGAKKVEYSHGEVVKYDCKPRFLLKGPNKIQCVDGNWTTLPVCIEEERTCGDIPELEHGSAKCSVPPYHHGDSVEFICEENFTMIGHGSVSCISGKWTQLP KCVATDQLEKCRVLKSTGIEAIKPKLTEFTHNSTMDYKCRDKQEYERSICINGKWDPEPNCTSKTSCPPPPQIPNTQVIETTVKYLDGEKLSVLCQDNYLTQDSEEMVCKDGRWQSLPRCIEKIPCSQPPTIEHGSINLPRSSEERRDSIESSSHEHGTTFSYVCDDGFRIPEENRITCYMGKWSTPPRCVGLPCGPPPSIPLGTVSLELESYQHGEEVTYHCSTGFGIDGPAFIICEGGKWSDPPKCIKTDCDVLPTVKNAIIRGKSKKSYRTGEQVTFRCQSPYQMNGSDTVTCVNSRWIGQPVCKDNSCVDPPHVPNATIVTRTKNKYLHGDRVRYECNKPLELFGQVEVMCENGIWTEKPKCRDSTGKCGPPPPIDNGDITSLSLPVYEPLSSVEYQCQKYYLLKGKKTITCTNGKWSEPPTCLHACVIPENIMESHNIILKWRHTEKIYSHSGEDIEFGCKYGYYKARDSPPFRTKCINGTINYPTCVSEQ ID NO: 11 [来自孟加拉眼镜蛇的CVF的氨基酸序列]:MERMALYLVAALLIGFPGSSHGALYTLITPAVLRTDTEEQILVEAHGDSTPKQLDIFVHDFPRKQKTLFQTRVDMNPAGGMLVTPTIEIPAKEVSTDSRQNQYVVVQVTGPQVRLEKVVLLSYQSSFLFIQTDKGIYTPGSPVLYRVFSMDHNTSKMNKTVIVEFQTPEGILVSSNSVDLNFFWPYNLPDLVSLGTWRIVAKYEHSPENYTAYFDVRKYVLPSFEVRLQPSEKFFYIDGNENFHVSITARYLYGEEVEGVAFVLFGVKIDDAKKSIPDSLTRIPIID⑶GKATLKRDTFRSRFPNLNELVGHTLYASVTVMTESGSDMVVTEQSGIHIVASPYQIHFTKTPKYFKPGMPYELTVYVTNPDGSPAAHVPVVSEAFHSMGTTLSDGTAKLILNIPLNAQSLPITVRTNHGDLPRERQATKSMTAIAYQTQGGSGNYLHVAITSTEIKP⑶NLPVNFNVKGNANSLKQIKYFTYLILNKGKIFKVGRQPRRDGQNLVTMNLHITPDLIPSFRFVAYYQVGNNEIVADSVWVDVKDTCMGTLWK⑶NLIQMPGAAMKIKLE⑶PGARVGLVAVDKAVYVLNDKYKISQAKIWDTIEKSDFGCTAGSGQNNLGVFEDAGLALTTSTNLNTKQRSAAKCPQPANRRRRSSVLLLDSNASKAAEFQDQDLRKCCEDVMHENPMGYTCEKRAKYIQE⑶ACKAAFLECCRYIKGVRDENQRESELFLARDDNEDGFIADSDIISRSDFPKSWLWLTKDLTEEPNSQGISSKTMSFYLRDSITTWVVLAVSFTPTKGICVAEPYEIRVMKVFFIDLQMPYSVVKNEQVEIRAILHNYVNEDIYVRVELLYNPAFCSASTKGQRYRQQFPIKALSSRAVPFVIVPLEQGLHDVEIKASVQEALWSDGVRKKLKVVPEGVQKSIVTIVKLDPRAKGVGGTQLEVIKARKLDDRVPDTEIETKIIIQ⑶PVAQIIENSIDGSKLNHLIITPSGCGEQNMIRMAAPVIATYYLDTTEQWETLGINRRTEAVNQIVTGYAQQMVYKKADHSYAAFTNRASSSWLTAYVVKVFAMAAKMVAGISHEIICGGVRWLILNRQQPDGAFKENAPVLSGTMQGGIQGAEEEVYLTAFILVALLESKTICNDYVNSLDSSIKKATNYLLKKYEKLQRPYTTALTAYALAAADQLNDDRVLMAASTGRDHWEEYNAHTHNIEGTSYALLALLKMKKFDQTGPIVRWLTDQNFYGETYGQTQATVMAFQALAEYEIQMPTHKDLNLDITIELPDREVPIRYRINYENALLARTVETKLNQDITVTAS⑶GKATMTILTFYNAQLQEKANVCNKFHLNVSVENIHLNAMGAKGALMLKICTRYLGEVDSTMTIIDISMLTGFLPDAEDLTRLSKGVDRYISRYEVDNNMAQKVAVIIYLNKVSHSEDECLHFKILKHFEVGFIQPGSVKVYSYYNLDEKCTKFYHPDKGTGLLNKICIGNVCRCAGETCSSLNHQERIDVPLQIEKACETNVDYVYKTKLLRIEEQDGNDIYVMDVLEVIKQGTDENPRAKTHQYISQRKCQEALNLKVNDDYLIWGSRSDLLPTKDKISYIITKNTWIERWPHEDECQEEEFQKLCDDFAQFSYTLTEFGCPT在上文的说明书和实施例中，结合本发明的具体实施方案描述了本发明。然而，对于本领域技术人员显而易见的是，可以在不脱离本发明的较宽范围的情况下进行各种改动和变化。

通过引用将本文引用的所有出版文献特意地并入本文，用于教导它们所记载的内容。
权利要求
1.特异性地结合哺乳动物补体成分C3d蛋白的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段选自: a.分离的抗C3d抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段对C3d的结合亲和力为1.1nM或更佳； b.分离的抗C3d抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合C3d或C3dg的亲和力优于结合补体蛋白C3、C3a、C3b、C3c或C3f的亲和力； c.分离的抗C3d抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合沉积的C3片段； d.分离的抗C3d抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合至少两个物种的C3d蛋白； e.分离的抗C3d抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与补体受体2(CR2)竞争结合C3d; f.分离的抗C3d抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段不增强补体活化；和 g.分离的抗C3d抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段降低宿主体液免疫应答。
2.如权利要求1(a)所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述Kd为0.5nM或更佳。
3.如权利要求1(b)所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段不结合补体蛋白C3、C3a、C3b、C3c或C3f。
4.如权利要求1(c)所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合沉积的C3d或C3dg的亲和力高于结合循环的完整C3、C3b或(C3H20)的亲和力。
5.如权利要求1所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述哺乳动物是人。
6.如权利要求1所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述哺乳动物是选自猩猩、黑猩猩、猕猴、大猩猩、狐猴或长臂猿的非人灵长类动物。
7.如权利要求1(f)所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段降低补体活化。
8.如权利要求1-7中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段选自:单克隆抗体或抗体片段、双链抗体、嵌入式或嵌合抗体或抗体片段、人源化抗体或抗体片段、脱免疫化的人抗体或抗体片段、完全人抗体或抗体片段、双特异性抗体或抗体片段、单价抗体或抗体片段、单链抗体、Fv、Fd、Fab、Fab’及F (ab' )2。
9.如权利要求8所述的分离的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
10.如权利要求9所述的抗体，其中所述抗体选自:i)由杂交瘤细胞系3d-8b/2(ATCC保藏号PTA-10999)产生的3db8，ii)由杂交瘤细胞系3d_9a/25 (ATCC保藏号PTA-10998)产生的3d9a及iii)由杂交瘤细胞系3d-29/5/2 (ATCC保藏号PTA-11000)产生的3d29。
11.杂交瘤细胞，选自:3d-8b/2(ATCC保藏号 PTA-10999)、3d-9a/25(ATCC 保藏号:PTA-10998)、3d-29/5/2(ATCC 保藏号:PTA-11000)、3d_ll/14(ATCC 保藏号:PTA-11011)、3d-31/A6/9(ATCC 保藏号:PTA-11027)、3d_3/28/4 (ATCC 保藏号:PTA-11025)、3d-15A9 (ATCC 保藏号:PTA_11012)、3d_10/14/l (ATCC 保藏号:ΡΤΑ_11010)及3d-16/3/3 (ATCC 保藏号:PTA_11026)。
12.由权利要求11所述的杂交瘤产生的分离的抗体。
13.分离的核酸分子，包含编码权利要求1-10和12中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列。
14.表达载体，包含权利要求13所述的分离的核酸分子。
15.细胞，包含权利要求14所述的表达载体。
16.产生抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括在适于允许权利要求15所述的细胞表达抗体或抗原结合片段的条件下，培养权利要求15所述的细胞。
17.如权利要求16所述的方法，还包括从所述细胞或培养所述细胞的培养基分离所述抗体或其抗原结合片段。
18.通过权利要求17所述的方法产生的分离的抗体或其抗原结合片段。
19.药物组合物，包含权利要求1-10、12或18中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段和药学可接受的赋形剂。
20.构建体，包含: a.C3d结合部分；和 b.补体调节剂部分， 其中(a)和(b)是连接的。
21.如权利要求20所述的构建体，其中所述C3d结合部分包含权利要求1-10，12或18中任一项所述的抗C3d抗体或其抗原结合片段。
22.如权利要求20或21所述的构建体，其中所述补体调节剂部分是化合物、组合物或蛋白。
23.如权利要求20-22中任一项所述的构建体，其中所述构建体调节补体旁路途径(CAP)中的补体活性。
24.如权利要求20-22中任一项所述的构建体，其中所述构建体是融合蛋白。
25.如权利要求20-22中任一项所述的构建体，其中所述C3d结合部分和所述补体调节剂部分是不利用连接子而直接连接的。
26.如权利要求20-22中任一项所述的构建体，其中所述C3d结合部分和所述补体调节剂部分是通过连接子连接的。
27.如权利要求26所述构建体，其中所述连接子是肽。
28.如权利要求27所述构建体，其中所述肽选自:(GlySer)n,其中n=l至8;(GlyGlyGlySer)n,其中 n=l 至 4 ; (GlyGlyGlyGlySer)n,其中 n=l 至 8 ;和(GlySerSerGly)n,其中n=l至4。
29.如权利要求20-22中任一项所述的构建体，其中所述补体调节剂部分包含补体抑制剂或其生物活性片段。
30.如权利要求29所述构建体，其中所述补体抑制剂或其生物活性片段选自:人膜补体蛋白(MCP)、人衰变加速因子(DAF)、人⑶59、人补体受体I (CRl)、人因子H、Crry及任何上述的生物活性片段或变体。
31.如权利要求29所述构建体，其中所述补体抑制剂选自:人膜补体蛋白(MCP)(SEQID ΝΟ:1)、人衰变加速因子(DAF) (SEQ ID NO:2)、小鼠DAF(SEQ ID NO:3)、小鼠补体受体I相关基因 / 蛋白 y (Crry) (SEQ ID NO: 7)、人 CD59 (SEQ ID N0:4)、小鼠 CD59 同种型 A(SEQID NO: 5)、小鼠 CD59 同种型 B (SEQ ID NO:6)、人补体受体 I (CRl) (SEQ ID N0:8)、人因子H (SEQ ID NO:9)及小鼠因子H(SEQ ID NO: 10)及以上的生物活性片段。
32.如权利要求31所述构建体，其中所述生物活性片段选自:人MCP的SCR1-4(SEQIDNO:1的氨基酸35-285)、人MCP的SCR1-4加丝氨酸/苏氨酸富集结构域(SEQ ID ΝΟ:1的氨基酸35-326)、人MCP的胞外结构域(SEQ ID NO:1的氨基酸35-343)、人DAF的SCR1-4 (SEQID NO: 2的氨基酸25-285)、人DAF的SCR1-4加O-糖基化丝氨酸/苏氨酸富集结构域(SEQID NO:2 的氨基酸 25-353)、小鼠 DAF 的 SCR1-4(SEQ ID NO:3 的氨基酸 35-286)、小鼠 DAF的SCR1-4加O-糖基化丝氨酸/苏氨酸富集结构域(SEQ ID NO: 3的氨基酸35-362) Xrry的SCR1-5(SEQ ID NO:7的氨基酸41-400)、Crry的胞外结构域(SEQ ID NO:7的氨基酸41-405)、缺少GPI锚的人CD59胞外结构域(SEQ ID NO:4的氨基酸26-101)、缺少GPI锚的小鼠CD59同种型A胞外结构域(SEQ ID NO: 5的氨基酸24-95)、缺少GPI锚的小鼠CD59同种型B胞外结构域(SEQ ID NO: 6的氨基酸24-103)、人CRl的SCR1-3 (SEQ ID NO: 8的氨基酸 42-234)、人 CRl 的 SCR1_4(SEQ ID NO: 8 的氨基酸 42-295)、人 CRl 的 SCR1-10 (SEQID NO:8 的氨基酸 42-684)、人 CRl 的 SCR8-10(SEQ ID NO: 8 的氨基酸 491-684)、人 CRl的 SCR8-11(SEQ ID NO: 8 的氨基酸 491-745)、人 CRl 的 SCR15-17 (SEQ ID NO: 8 的氨基酸941-1134)、人 CRl 的 SCR15-18 (SEQ ID NO: 8 的氨基酸 941-1195)、人 CRl 的 SCR22-28 (SEQID NO:8的氨基酸1394-1842)、人因子H的SCR1-4 (SEQ ID NO:9的氨基酸21-262)、人因子H的SCR1-5 (SEQ ID NO: 9的氨基酸21-320)、人因子H的SCR1-8 (SEQ ID NO: 9的氨基酸21-507)，人因子 H 的 SCR1-18(SEQ ID NO: 9 的氨基酸 21-1104)、小鼠因子 H 的 SCR1_4(SEQID NO: 10的氨基酸19-264)、小鼠因子H的SCR1-5 (SEQ ID NO: 10的氨基酸19-322)、小鼠因子 H 的 SCR1-8(SEQ ID NO: 10 的氨基酸 19-507)及小鼠因子 H 的 SCR1-18 (SEQ ID NO: 10的氨基酸19-1109)。
33.如权利要求20-28中任一项所述的构建体，其中所述补体调节剂部分包含补体活化剂或其生物活性片段。
34.如权利要求33所述的构建体，其中所述补体活化剂或其生物活性片段选自:人IgGl、人IgGlFc结构域、人IgM、人IgM Fe结构域、小鼠IgG3、小鼠IgG3Fc结构域、小鼠IgM、小鼠IgM Fe结构域及眼镜蛇毒因子(CVF)。
35.分离的核酸分子，包含编码权利要求24所述的构建体的核苷酸序列。
36.表达载体,包含权利要求35所述的分离的核酸分子。
37.细胞，包含权利要求36所述的表达载体。
38.产生构建体的方法,所述方法包括在适于允许权利要求37所述的细胞表达构建体的条件下，培养权利要求37所述的细胞。
39.如权利要求38所述的方法，还包括从所述细胞或培养所述细胞的培养基分离所述构建体。
40.通过权利要求39所述的方法产生的构建体。
41.药物组合物，包含权利要求20-34或40中任一项所述的构建体和药学可接受的赋形剂。
42.降低哺乳动物中体液免疫应答的方法，包括给予所述哺乳动物有效降低哺乳动物中的体液免疫应答的量的权利要求1-10、15或18中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段。
43.降低哺乳动物中体液免疫应答的方法，包括给予所述哺乳动物有效降低哺乳动物中的体液免疫应答的量的权利要求1-10、15或18中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段或权利要求20-34或40中任一项所述的构建体。
44.如权利要求42或43所述的方法，其中所述哺乳动物患有自身免疫疾病，或已接受移植物或可能会接受移植物。
45.调节哺乳动物中补体活化的方法,包括给予所述个体有效调节哺乳动物中补体活化的量的权利要求20-34或40中任一项所述的构建体。
46.降低哺乳动物中补体活化的方法，包括给予所述哺乳动物有效降低所述哺乳动物中补体活化的量的权利要求20-32中任一项所述的构建体。
47.增加哺乳动物中补体活化的方法，包括给予所述哺乳动物有效增加所述哺乳动物中补体活化的量的权利要求33或34所述的构建体。
48.同时降低哺乳动物中补体活化和体液免疫应答的方法，包括给予所述哺乳动物有效降低所述哺乳动物中补体活化和体液免疫应答的量的权利要求20-32中任一项所述的构建体。
49.治疗患有或疑似患有疾病的哺乳动物或使个体免于发展出疾病的方法，其中所述疾病选自:由缺血-再灌注损伤造成的组织损伤、炎性病症、移植物排斥、妊娠相关疾病、药物不良反应及自身免疫疾病或免疫复合物病，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的权利要求1-10，12或18中任 一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段或权利要求20-32中任一项所述的构建体。
50.如权利要求49所述的方法，其中所述由缺血-再灌注损伤造成的组织损伤与选自以下的病症相关:心肌梗塞、动脉瘤、中风、出血性休克、挤压伤、多器官衰竭、低血容量性休克、肠缺血、脊髓损伤和外伤性脑损伤。
51.如权利要求49所述的方法，其中所述炎性病症选自:烧伤、内毒素血症、感染性休克、成人呼吸窘迫综合征、体外循环、血液透析、过敏性休克、哮喘、血管性水肿、克罗恩病、镰状细胞贫血、链球菌感染后肾小球肾炎、膜性肾炎和胰腺炎。
52.如权利要求49所述的方法，其中所述移植物排斥是超急性异种移植物排斥。
53.如权利要求49所述的方法，其中所述妊娠相关疾病选自:HELLP综合征(溶血性贫血，肝酶升高和血小板减少)、习惯性流产和先兆子痫。
54.如权利要求49所述的方法，其中所述药物不良反应选自:药物过敏和IL-2诱导的血管渗漏综合征。
55.如权利要求49所述的方法，其中所述自身免疫疾病或免疫复合物病选自:重症肌无力、阿尔茨海默病、多发性硬化、风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎、胰岛素依赖型糖尿病、急性播散性脑脊髓炎、爱迪生氏病、抗磷脂抗体综合征、自身免疫性肝炎、克罗恩病、古德帕斯丘综合征、格雷夫斯病、格林-巴利综合征、桥本氏病、特发性血小板减少性紫癜、天疱疮、修格兰氏综合征、高安氏动脉炎、自身免疫性肾小球肾炎、II型膜增生性肾小球肾炎、阵发性夜间血红蛋白尿、年龄相关性黄斑变性、糖尿病性黄斑病、葡萄膜炎、视网膜变性疾病、糖尿病性肾病、局灶性节段性肾小球硬化、ANCA相关性血管炎、溶血性尿毒症综合征和非典型溶血性尿毒症综合征。
56.如权利要求55所述的方法，其中所述自身免疫性肾小球肾炎选自:免疫球蛋白A肾病和I型膜增生性肾小球肾炎。
57.治疗患有或疑似患有疾病的哺乳动物或使个体免于发展出疾病的方法，其中所述疾病选自:癌症、病毒感染、细菌感染、寄生虫感染及真菌感染，所述方法包括给予所述哺乳动物有效增加所述哺乳动物中补体活化的量的权利要求33或34所述的构建体。
58.如权利要求43至57中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物是人。
59.制品，包含: (a)包含标签的容器；和 (b)组合物，其包含权利要求1至10、12或18中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或权利要求20至32中任一项所述的构建体，其中所述标签表明所述组合物是用于给予患有、疑似患有或有风险发展为补体相关病症的人。
60.如权利要求59所述的制品， 还包含一种或多种其它活性剂。
61.治疗试剂盒，包含: (i)权利要求1-10、12或18中任一项所述的抗体或抗原结合片段，和 ( )用于将所述抗体或抗原结合片段递送给人的装置；或 (iii)权利要求20至32中任一项所述的构建体，和 (iv)用于将所述构建体递送给人的装置。
62.如权利要求61所述的治疗试剂盒，其中所述装置适于将所述构建体或抗体或其抗原结合片段皮下递送给人。
63.如权利要求61所述的治疗试剂盒，其中所述装置适于将所述构建体或抗体或其抗原结合片段眼内递送给人。
64.如权利要求61所述的治疗试剂盒，其中所述装置适于将所述构建体或抗体或其抗原结合片段关节内递送给人。
65.如权利要求61至64中任一项所述的治疗试剂盒，其中所述装置是注射器。
66.如权利要求65所述的治疗试剂盒，其中所述注射器是双筒注射器。
67.如权利要求61所述的治疗试剂盒，其中所述装置是包含所述构建体或抗体或其抗原结合片段的经巩膜贴片或隐形眼镜。
68.如权利要求61所述的治疗试剂盒，其中所述装置适于将所述构建体或抗体或其抗原结合片段肺内递送给人。
69.如权利要求68所述的治疗试剂盒，其中所述装置是吸入器或喷雾器。
70.如权利要求61至69中任一项所述的治疗试剂盒，还包含至少一种用于治疗人的补体相关病症的其它活性剂。
71.预装注射器，包含:(a)权利要求1至10、12或18中任一项所述的抗体或其抗原结合片段；或(b)权利要求20至32中任一项所述的构建体。
72.如权利要求71所述的预装注射器，其中所述构建体或抗体或其抗原结合片段被配制为用于眼内、玻璃体内或关节内给药。
73.如权利要求71所述的预装注射器，其中所述构建体或抗体或其抗原结合片段被配制为用于肌肉内或皮下给药。
74.如权利要求71所述的预装注射器，其中所述注射器包含所述构建体或抗体或其抗原结合片段的至少一个药学单位剂量形式。
75.如权利要求71至74中任一项所述的预装注射器，其中所述注射器包含0.05mg至IOmg的所述构建体或抗体或其抗原结合片段。
76.如权利要求71至74中任一项所述的预装注射器，其中所述注射器包含约Img至IOOmg的所述构建体或抗体或其抗原结合片段。
77.如权利要求74所述的预装注射器，其中每个药学单位剂量形式的体积为0.02mL至ImL,包括本数。
78.如权利要求74或76所述的预装注射器，其中所述药学单位剂量形式的体积不大于0.05mLo
79.构建体，包含:(a)抑制B细胞的活性和活化之一或两者的第一部分；和(b)包含补体抑制分子的第二部分，其中(a)和(b)是连接的。
80.如权利要求79所 述的构建体，其中所述第一部分是结合CR2的天然配体的抗体或其抗原结合片段并抑制CR2和CR2的天然配体之间的相互作用。
81.如权利要求80所述的构建体，其中所述CR2的天然配体是C3d或C3dg。
82.如权利要求79所述的构建体，其中所述第一部分是结合CR2的抗体或其抗原结合片段并抑制CR2和其至少一个天然配体之间的相互作用。
83.如权利要求79至82中任一项所述的构建体，其中所述补体抑制分子是多肽。
84.如权利要求83所述的构建体，其中所述补体抑制分子包含可溶性人DAF、可溶性人MCP、可溶性人⑶59、人因子H、可溶性人CR1、可溶性Crry或上述任一项的生物活性片段。
85.药物组合物，包含权利要求79至84中任一项所述的构建体和药学可接受的赋形剂。
全文摘要
本发明涉及用于调节补体旁路途径(CAP)、补体经典途径(CCP)、补体凝集素/甘露糖途径(CMP)或以上的组合的方法和材料，以及用于将诊断剂、预防剂和治疗剂靶向于体内组织局部区域的方法和材料，从而所述诊断剂、预防剂和治疗剂可以更直接地对预期的靶细胞或组织发挥作用，同时与以非靶向的系统性方式给予相同或相似试剂相比，具有降低的相关系统作用。因此，本发明的方法和材料可以实现增加的功效、较低的阈值有效剂量和/或较低的有效维持剂量、和/或在发生的频率或严重程度或两者中的降低的相关不良作用或副作用。本发明还涉及用于调节宿主体液免疫应答，特别是降低、抑制或防止宿主体液免疫应答的方法和材料。
文档编号A61K39/395GK103249432SQ201180038923
公开日2013年8月14日 申请日期2011年6月22日 优先权日2010年6月22日
发明者V·迈克尔·霍勒斯, 乔舒亚·M·瑟曼, 路德米拉·库里克 申请人:科罗拉多大学董事会,法人团体