专利名称：免疫原性肽以及包含该肽的用于预防或治疗hpv相关疾病的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及免疫原性肽以及包含该肽的用于预防或治疗HPV相关疾病的组合物，更详细地说，涉及诱导生成HLA-A*2402类型子宫颈癌患者特异性的细胞毒性T淋巴细胞的HPV类型16E7表位、以及包含该肽的用于预防或治疗HPV相关疾病的组合物。
背景技术：
子宫颈癌在女性中发生的恶性肿瘤中发病率高居第二位，全世界每年有35万名以上的患者死于子宫颈癌，并且其数量继续增加(Pisani P等，Int J Cancer2002; 97 (I):72-81.)。已知子宫颈癌主要由人乳头瘤病毒(human papillomavirus:HPV)引起，已证明了超过100多种的HPV中40多种在女性生殖器中起到作用(de Villiers EM等，Virology2004; 324:17-27)。多种类型的HPV中，特别是HPV类型16和HPV类型18在子宫颈癌患者中发现最多，可以预测到其与肿瘤发生有重要关系，已知，其中的HPV类型16在子宫颈癌患者中的感染率最高(Munoz N 等，N Engl J Med2003;348 (6):518_27)。已证明，当HPV感染正常细胞时，病毒癌基因插入宿主细胞(host cell)基因，表达多种病毒蛋白质，其中E6和E7是强力的癌蛋白，其抑制作为肿瘤抑制因子的p53和RB的作用，并促进向癌细胞转变以及持续生长(zur Hausen H.Nat Rev Cancer 2002; 2 (5):342-50)。已知，E7抑制肿瘤抑制因子即RB的功能，促进S期基因即细胞周期蛋白A和细胞周期蛋白 E 的活性(zur Hausen H 等，Nat Rev Cancer 2002; 2 (5):342-50;Phelps WC等，Cell 1988;53 (4):539_47)，并且，通过抑制细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂即CIPl(p21)和KIPl (p27)的功能等的作用，妨碍感染细胞的细胞凋亡，诱导向肿瘤转变(FunkJO 等，Genes Devl997;11 (16):2090-100;Zerfass-Thome K 等，0ncogenel996;13 (11):2323-30)。这样的病毒癌蛋白由于在正常细胞中未发现，因此在以各种类型癌为对象的免疫治疗中，成为非常有 力的靶(target)，并且逐渐成为为了生成能够治疗子宫颈癌的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte:CTL)而要查名HPV表位这样的研究的主要对象。至今为止，对于为了治疗子宫颈癌而开发出诱导生成HPV类型16特异性的细胞毒性T淋巴细胞的特定的E7表位的研究而言，虽然有以在人类的人白细胞抗原(humanleukocyte antigen:HLA)等位基因(allele)中占大部分的HLA_A*0201类型患者为中心进行研究而证明的结果(Kast WM等，J Immunoll994;152:3904-12)，但是几乎没有在作为人类的另一个主要人类白细胞抗原等位基因的HLA-A*2402类型患者中证明的研究内容,这就是实情。因此，在本发明中，通过流式细胞测定法(flow cytometry)和细胞毒性(cytotoxicity)试验,要查明诱导生成细胞毒性T淋巴细胞的HPV类型16E7表位,其中，所述细胞毒性T淋巴细胞能够治疗具有HLA-A*2402类型的子宫颈癌患者。
发明内容
技术课题本发明是鉴于上述的必要性而提出的，本发明的目的在于，提供一种诱导生成细胞毒性T淋巴细胞的HPV类型16E7肽，其中，所述细胞毒性T淋巴细胞能够治疗具有HLA-A*2402类型的子宫颈癌患者。本发明的另一个目的在于，提供一种用于预防或治疗上述HPV相关疾病的组合物。解决课题手段为了实现上述目的，本发明提供具有9个-10个源自HPV类型16E7蛋白质的氨基酸序列的肽及其功能上相同的突变体。此外，在本发明中，上述肽序列优选包含⑶STLRLCV(序列号16)或LCVQSTHVDI (序列号35)的氨基酸序列，但并不限于此。在本发明中，“功能上相同”及“实质上相同的生物学功能或活性”分别是指，在通过相同的步骤来测定各自的多肽的生物学活性的情况下，其生物学活性的约50%至约100%或其以上程度的生物学活性在与该多肽相比较的多肽中显示。例如，图3的利用流式细胞测定法来确认HPV类型16E7表位特异性的IFN- Y的生成和/或图4的利用51Cr释放法(51Cr release assay)来确认HPV类型16E7表位(9mer, IOmer)特异性的杀伤子宫颈癌细胞的效果的试验结果是，本发明的功能上相同的肽是指，通过如图6b所示的步骤在图6c和图6d中显示出与本发明的肽实质上相同的生物活性的肽，优选地，上述功能上相同的肽优选具有CYQSTHVDI (序列号43)或CYVTL RVCL (序列号47)的氨基酸序列，但并不限于此。
此外，本发明提供一种编码上述本发明序列号16或序列号35的肽的核酸。另外，本发明中，优选编码序列号16的肽的基因具有序列号48的碱基序列，并且编码序列号35的肽的基因具有序列号49的碱基序列，但诱发这些碱基序列上发生一个以上的置换、缺失、增添等突然变异，显示出与本发明的目标效果相同的活性的所有突然变异基因也包括在本发明的范围内。此外，本发明提供分别编码序列号43或序列号47的肽的核酸。这些CYQSTHVDI (m3，被置换的肽3号)和CYVTLRVCL (m7，被置换的肽7号)肽可利用RNA密码子来推测其基因序列，可以出现如下的多种组合(例如，序列号50-107)。表I
权利要求
1.种免疫原性肽及其功能上相同的突变体，其具有CDSTLRLCV即序列号16或LCVQSTHVDI即序列号35的氨基酸序列。
2.据权利要求1所述的免疫原性肽及其功能上相同的突变体，其特征在于，所述功能上相同的突变体具有CYQSTHVDI即序列号43或CYVTLRVCL即序列号47的氨基酸序列。
3.种核酸,其编码权利要求1所述的序列号16或序列号35的肽。
4.据权利要求3所述的核酸，其特征在于，所述核酸分别具有序列号48及序列号49的碱基序列。
5.种核酸，其编码权利要求2所述的序列号43或序列号47的肽。
6.据权利要求5 所述的核酸，其特征在于，所述核酸具有序列号50至序列号107中的任一碱基序列。
7.种用于预防或治疗HPV感染相关疾病的组合物，其包含(a)权利要求1或2所述的肽以及(b)可药用的载体。
8.据权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述HPV感染相关疾病是鲍温样丘疹病、肛门异常、呼吸道或结膜乳头状瘤、宫颈非典型增生、子宫颈癌、外阴癌、或前列腺癌。
9.种微粒、脂质体或免疫刺激复合物，其包含权利要求1所述的肽作为有效成分。
10.种微粒、脂质体或免疫刺激复合物，其包含权利要求3所述的核酸作为有效成分。
11.据权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述组合物是HLA-A*2402类型患者特异性的。
全文摘要
本发明涉及免疫原性肽以及包含该肽的用于预防或治疗HPV相关疾病的组合物，更详细地说，涉及诱导生成HLA-A*2402类型子宫颈癌患者特异性的细胞毒性T淋巴细胞的HPV类型16E7表位、以及包含该肽的用于预防或治疗HPV相关疾病的组合物。
文档编号A61P31/20GK103097398SQ201180044102
公开日2013年5月8日 申请日期2011年9月9日 优先权日2010年9月13日
发明者李炅律, 林钟伯, 张善弼 申请人:博康有限公司