痘病毒溶瘤载体的制作方法

专利名称：痘病毒溶瘤载体的制作方法
技术领域：
溶瘤病毒是一类用于治疗癌症，具有肿瘤依赖性自我永续独特性质的新型治疗因子(HERMISTON. A demand for next-generation oncolytic adenoviruses. Currentopinion in molecular therapeutics. 2006，8 卷，4 号，322-30 页 )。溶瘤病毒能够在恶性细胞中选择性复制，并因此提供可能远远超过癌症常规治疗的效力和特异性的/Jc 平(FISHER. Striking out at disseminated metastases: the systemic deliveryof oncolytic viruses. Current opinion in molecular therapeutics. 2006,8 卷，4号，301-13页.)。使用这些病毒的好处是，当他们复制时，他们溶解其宿主细胞。癌细 胞是多种病毒的理想寄主，因为它们的抗病毒的干扰素途径灭活或者具有突变的肿瘤抑制基因，这能使病毒复制不受阻碍地继续下去(CHERNAJ0VSKY，等Fighting cancer withoncolytic viruses. British medical journal. 2006, 332 卷,7534 号,170-2 页.)。一些病毒天然地可以在肿瘤细胞中选择性地复制，但也可以通过修饰天然存在的病毒而获得溶瘤病毒。为了这一目的，目前使用的修饰病毒的主要策略包括主要病毒基因中的功能性缺失；控制这些病毒基因的表达的肿瘤或组织特异性启动子；向性修饰将腺病毒重定向至癌细胞表面。在不久的将来，溶瘤腺病毒需要被优化，以充分发挥其作为重要的抗癌工具的潜力，并且从而改善恶性神经胶质瘤病人的预后(JIANG，等 Oncolyticadenoviruses as antiglioma agents. Expert review of anticancertherapy. 2006，6 卷，5 号，697-708 页 )。例如，腺病毒0NYX-015，被选择性的修饰从而在具有p53突变的细胞中复制并杀死细胞，其正由Onyx Pharmaceuticals开发,用于各种实体瘤,包括头部和颈部、胃肠和胰腺肿瘤的潜在治疗。它是一个重组腺病毒，它在ElB座位载有功能缺失性突变，其产物是结合于P53肿瘤抑制蛋白并使其灭活的55kDa的蛋白质。因此，认为ONYX-015腺病毒应使正常细胞不受影响。P53肿瘤抑制基因突变是癌症遗传异常中最常见的类型，存在于一半以上的所有主要癌症类型中。因此，这些细胞对能很容易的复制并导致细胞死亡的病毒敏感。ONYX-015正处于用于治疗复发性头部和颈部癌症的III期临床试验，结直肠、卵巢、胰腺和口腔肿瘤的II期临床试验，以及消化疾病、食道和肝脏肿瘤的I期临床试验(C0HEN，等ONYX-015. Onyx Pharmaceuticals. Current opinion in investigational drugs. 2001, 2卷，12 号，1770-5 页 )。天然的溶瘤病毒是具有复制能力的病毒，其具有选择性感染并杀死肿瘤细胞的先天能力。尽管50年前被用于使用活病毒治疗癌症的最初尝试，但对天然溶瘤病毒作为癌症疗法的关注已经滞后于支持改造的腺病毒和疱疹病毒作为癌症疗法。然而，最近已经对这些天然存在的物质的高效能和选择性重新关注了(ROBERTS,等Naturally oncolyticviruses. Currentopinion in molecular therapeutics. 2006, 8 卷，4 号，314-21 页.)。在天然溶瘤病毒中，痘苗病毒(痘病毒科)具有很多用于溶瘤病毒疗法的理想病毒主链所必需的关键属性。这些包括生命周期短、和快速的细胞间播散、裂解能力强、巨大的克隆能力和明确的分子生物学。此外，尽管它们能够在人类细胞中复制，但并不考虑为天然的健康问题，且它们特别好地得到表征，在消灭天花的战争中已经被递送给数百万人。使用疫苗株或基因修饰的牛痘株的早期临床结果已经证明了抗癌效果(TH0RNE，等Vaccinia virus and oncolytic virotherapy of cancer. Current opinion in moleculartherapeutics. 2005, 7 卷，4 号，359-65 页.)。相比之下，痘病毒粘液瘤病毒是一种新型的溶瘤候选者，其没有直接用于人类的历史，因为它对兔类(兔子)有特殊的和绝对的宿主种类向性。最近已证明粘液瘤病毒也能够选择性的感染并杀死人类肿瘤细胞，该特有的向性联系在大多数人类癌症中所见的失调的细胞内信号途径。这篇综述概述了关于粘液瘤病毒对人类癌细胞向性的现有知识，以及展示其在癌症的动物模型中感染和清除肿瘤能力的临床前期数据(STANFORD，等Myxoma virus and oncolytic virotherapy:a new biologic weapon in the war against cancer. Expert opinion on biological therapy. 2007, 7 卷，9 号，1415-25 页.)。技术问题注射达到抗肿瘤效果所需的高剂量的痘病毒引发了毒性的问题。不利的事件大多不严重，通常与痘苗病毒有关的不良反应是自限性的，包括发烧、头痛、疲劳、肌痛、寒战、局部皮肤反应、非特异性疹、多形性红斑、淋巴结病、和种痘位置疼痛。其他反应可能需要另外的治疗方法(例如，首要的治疗VIG，第二线治疗西多福韦)。不良反应可能需要进一步的评估或治疗，包括非故意接种、全身性牛痘(GV)、牛痘性湿疹(EV)、进行性牛痘(PV)、种痘后的中枢神经系统疾病、和胎儿牛痘(C0N0,等Smallpox vaccination and adversereactions. Guidance for clinicians. MMWR. Recommendations and reports!Morbidityand mortality weekly report. Recommendations and reports/Centers for DiseaseControl. 2003，52 卷，RR-4 号，1-28 页 )。因此，需要更安全的、具有与对于其天然相应物一样好的溶瘤活性的痘病毒。
背景技术：
1994 年 11 月 15 日的美国 5364773 (VIR0GENETICS 公司(TR0Y，纽约))描述了改造的重组痘病毒，更特别是有灭活的非必要的病毒编码遗传功能的痘苗病毒，使重组痘病毒具有减弱的毒力和增强的安全性。特别地，通过缺失编码毒力因子的开放阅读框，或通过编码毒力因子的开放阅读框的插入失活，灭活遗传功能。更特别的是，这项专利描述了痘苗病毒，其中J2R、B13R+B14R、A26L、A56R、C7L-K1L和I4L的开放阅读框已被灭活。这种病毒(NYVAC)可以被改造为用于外源核酸的载体，并用作疫苗诱导宿主动物中的免疫应答。但是，NYVAC不能在大多数哺乳动物细胞中有效地复制，且不能被用作溶瘤病毒(XIANGZHI，等 Vaccinia virus KlL protein supports viral replication in human and rabbitcells through a cell-type-specific set of its ankyrin repeat residues that aredistinct from its binding site for ACAP2. Journal of Virology. 2006，353 卷，I号，220-233 页 )。
2004年2月19日的WO 2004/014314 (KIRN DAVID (美国))描述了在其病毒基因组中包含了一个或更多突变的改变的痘苗病毒。所描述的突变是以下多肽种类中的一种或多种1)干扰素调节多肽；2)补体控制多肽；3)TNF或趋化因子调节多肽；4)丝氨酸蛋白酶抑制剂；5) IL-Ip调节多肽；6)非感染性EEV形式的多肽；和7)用作抑制传染性病毒从细胞中释放的病毒多肽(抗传染病毒形式的多肽)。此外，还公开了痘苗病毒A41L或CllR中的突变。在这一申请中更特别描述了牛痘基因组区域，如A34R、A41L、A53R、B5R、B7R、B8R、B13R、B15R、B18R、B22R、B28R、B29R、CUR、E3L、K2L、NIL、vC12L,和 vCKBP。本发明的方法涉及使用任何本文中讨论的痘病毒。本发明的发明人还公开 了通过给予癌细胞或患者有效量的这一改变的痘苗病毒来治疗癌症的方法。发明公开本发明的发明人吃惊地发现，包含缺损I4L和/或F4L基因的痘病毒具有改善的安全性，但是保持了相同的溶瘤活性(与其天然相应物相比)。本发明涉及一种包括缺损I4L和/或F4L基因的痘病毒，条件是所述痘病毒非NYVAC0在整个申请中所使用的术语“一个”和“一种”是用意为表示所引用的成分或步骤中的“至少一个”、“至少第一个”、“一个或多个”或“多种”，除非上下文清楚规定了其它的意思。例如，术语“一个细胞”包括多个细胞，包含其混合物。本文所用的术语“和/或”包括，“和”、“或”和“全部或任何其它由该词连接的成分的组合”的含义。本文所用的术语“大约”或“约”表示在给定值或范围的20%以内，优选在10%以内，且更优选在5%以内。本文所用的术语“包含”和“包括”意在表示产物、组成物和方法包括所提及的成分或步骤，但不排除其它的。当“基本上由…组成”被用于定义产物、组成物和方法时，表示不包括其他任何具显著性的成分和步骤。因此，基本上由所述的成分组成的组合物将不排除微量污染物和可药用的载体。“由…组成”意味着排除其它不止是微量成分的成分或步骤。本文所用的术语“包括缺损基因的痘病毒”指的是痘病毒，其在所述缺损基因的一个或多个核酸中包含缺失、取代或添加，或这些可能的任何组合，其中所述修饰导致该病毒无法产生这样的蛋白质，即具有未修改的基因所产生的蛋白质的活性的蛋白质。在本发明的优选的实施方案中，包含基因缺损的痘病毒，是指其中整个基因序列已被删除的痘病毒。可以通过本领域的技术人员所知道的许多方法，利用重组技术进行突变。本领域内有修饰痘病毒基因组的方法。例如，MCCART,等Systemic cancer therapy with atumor selective vaccinia virus mutant lacking thymidine kinase and vacciniagrowth factor genes. . Cancer res. . 2001，61 号，8751-57 页.,KIM,等.Systemic armedoncolytic ans immunologic therapy for cancer with JX—594，a targeted poxvirusexpressing GM-CSF. Molecular Therapeutic. 2006，14 号，361-70 页 ，2004 年 2 月 9 日的WO 2004/014314 (KIRN DAVID (US))和 1994 年 11 月 15 日的 US 5364773 (VIR0GENETICSCORPORATION (TR0Y，NY))所公开的方法，可以被用来生产本发明的痘病毒。在本申请的实施例中公开的方法与生产根据本发明的痘病毒特别相关。本领域内可得到各种痘病毒的基因组序列，例如，痘苗病毒(vaccinia virus)、痘苗病毒(cowpox virus)、金丝雀痘病毒、鼠痘病毒、粘液瘤病毒基因组可在Genbank中得到(登录号分别是NC_006998、NC_003663、NC_005309、NC_004105、NC_001132)。本发明中所使用的术语“痘病毒”是指属于痘病毒科(Poxviridae family)的病毒。根据优选的实施方案，根据本发明的痘病毒属于脊椎动物痘病毒亚科(Chordopoxvirinae subfamily),更优选地属于正痘病毒属(Orthopoxvirus genus),更加优选地属于痘苗病毒种(Vaccinia virus specie)。例如，可以利用痘苗病毒株Dairen I、IHD-J、L-IPV、LC16M8、LC16M0、Lister、LIVP、Tashkent,、WR 65-16> Wyeth, Ankara> Copenhagen> Tian Tan 和 WR。根据特别优选的实施方案，根据本发明的痘病毒是痘苗病毒株Copenhagen。 痘病毒牛痘包含大的双链DNA基因组(187千碱基对)，并且是仅知的在受感染细胞的细胞质中进行复制的DNA病毒家族成员。由于被感染的细胞必须向细胞质的复制位点递送大量的DNA前体，该病毒编码并表达DNA代谢与合成所需的许多酶的活性，包括核糖核苷酸还原酶和脱氧尿嘧啶核苷5’ -三磷酸核苷酸水解酶(脱氧尿苷三磷酸酶，dUTPase)。核糖核苷酸还原酶(EC1. 2317. 4. I)催化核糖核苷酸还原为脱氧核糖核苷酸，该反应表示DNA生物合成中的第一实行步骤。病毒酶在亚基结构上与哺乳动物酶相似，由两个异源命名为Rl和R2的亚基组成。编码病毒核糖核苷酸还原酶亚基的(多个)基因已被测序，并固定于牛痘基因组的位置上，相隔thymidylate synthase. VacciniadUTPase is a 15kDaprotein encoded by the F2L gene(MCGE0GH. . Nucleic AcidsResearch. 1990, no. 1835 千喊基(SLABAUGH,等.Journal of virology. 1988,卷 62，页 4105-10. ;BROYLES. 519-27. ;TENGELSEN,等.Virology. 19931988,编号 195164，页863-5.). Sequence of the F2L genel21_31. ;SCHMITT,等 Journal of virology. 1988,编号62，页1889-97.)。痘苗病毒大亚基的单体(命名为R1，由I4L基因编码)为86-kDa的多肽，并包含核苷酸底物变构效应体的结合位点(SLABAUGH，等.Journal ofvirology. 1984,编号 52，页 507-14. ; SLABAUGH,等 Journal of virology. 1984,编号52，页501-6.)。小亚基(命名为R2，由F4L基因编码)为包含两个37_kDa的多肽的同二聚体；各多肽包含催化所需的、铁-稳定的、基于蛋白的自由基(H0WELL，等.Journal ofBiological Chemistry. 1992，编号 267，页 1705-11.)。I4L 和 F4L 基因的序列及其在不同痘病毒基因组中的定位可在公共数据库中获得，例如通过登录号NC_006998，DQ121394, NC_001611，AY689436, AY689437, NC_008291, DQ437594, DQ437593, DQ377804, AH015635, AY313847，AY313848, NC_006966, NC_005309, NC_003391, NC_003389, NC_001132, NC_003310, NC_002188，M35027, AY243312, AF170726, DQ011157, DQ011156, DQ011155, DQOl1154, DQ011153, X94355，Y16780, AY318871, U94848, AF198100 和 M34368X71982, AF438165, U60315, AF410153，AF380138, U86916, L22579, NC_006998, DQ121394 和 NC_008291。本文所使用的基因命名是Copenhagen牛痕株的基因命名，除非另有注明，其也被用于其他痘病毒科的同源基因。然而，基因命名可能根据痘株而不同。作为信息，Copenhage和MVA基因的对应关系可以在ANTOINE. . Virology. 1998，244号，365-396页.的表中找到。根据优选的实施方案，本发明的痘病毒还包含缺损的J2R基因。J2R基因编码一种胸苷激酶(TK)，其形成嘧啶脱氧核苷酸合成补救途径的一部分。TK催化的反应涉及将Y-磷酰基部分从ATP转移至2’脱氧-胸苷(dThd)，以产生胸苷5’-单磷酸(dTMP)。痘苗病毒的TK是2型TK。2型TK相对于I型具有较小的多肽链，具有约25KDa，但形成同源四聚体。它们对反馈抑制剂dTDP或dTTP敏感，其在代谢途径的最终生成。2型TK相对于I型TK具有窄得多的底物特异性，并且只能使2’脱氧尿苷(dU)和 / 或 dThd 憐酸化(EL OMARI,等 Structure of vaccinia virus thymidine kinase incomplex with dTTP:insights for drug design. BMC structural biology. 2006，6号，22页)。本领域内已知J2R区域缺损的痘病毒和获得它们的方法。例如MCCART,等Systemic cancer therapy with a tumor-selective vaccinia virus mutant lackingthymidine kinase and vaccinia growth factor genes, cancer research.2001,61卷，24 号，8751-7 页.、PUHLMANN,等 Vaccinia as a vector for tumor-directedgene therapy:biodistribution of a thymidine kinase-deleted mutant. Cancergenetherapy. 2000,7 卷，I 号，66-73 页 、GNANT,等 Systemic administration of arecombinant vaccinia virus expressing the cytosine deaminase gene and subsequent treatment with 5-fluorocytosine leads to tumor-specific geneexpression and prolongation of survival in mice. Cancer Research. 1999, 59 卷，14号，3396-403页.的教导可用于产生J2R区域缺失的痘病毒。根据优选的实施方案，根据本发明的痘病毒还包含缺损的F2L基因。脱氧尿嘧啶核苷5’ -三磷酸核苷酸水解酶(dUTPase, EC 3. 6. I. 23)在Mg离子(2+)存在下催化dUTP水解为dUMP和焦磷酸盐。在将dUTP从dNTP池中除去并产生dUMP时，dUTPase参与维持DNA复制的保真度并参与为通过胸苷酸合酶生产TMP提供前体。牛痘脱氧尿苷三磷酸酶(dUTPase)是由F2L基因编码的15kDa的蛋白质(MCGE0GH. .Nucleic AcidsResearch. 1990，18 号，4105-10 页 ；BR0YLES. Virology. 1993，195 号，863-5 页.)。痘苗病毒F2L基因的序列可以通过登录号M25392从GenBank中得到，不同痘病毒类基因组中F2L基因的序列和位点也可以从GenBank中获得，例如，通过登录号NC_006998、DQl21394、NC_001611、AY689436、AY689437、NC_008291、DQ437594、DQ437593、AY313847、AY313848、NC_006966、NC_005309、NC_003391、NC_003389、NC_001132、NC_003310、NC_002188、M35027、AY243312、AF170726、DQ011157、DQ011156、DQ011155、DQ011154、DQ011153、X94355、Y16780、AY318871、U94848、AF198100 和 M34368。根据优选的实施方案，根据本发明的痘病毒还包含目的核酸。在优选的实施方案中，目的核酸包含至少一种目的序列，其编码作为治疗性分子的基因产物(即治疗的基因)。“治疗性分子”是这样的分子，其在适当地施用于患者，尤其是患疾病或病症的患者，或者应受保护以避免该疾病或病症者，具有药理学的或保护性的活性。该药理学或保护性活性预期与对所述疾病或所述病症的病程或症状产生有利的影响相关。当技术人员按本发明选择编码治疗性分子的基因时，他通常将他的选择与先前获得的结果联系起来，并可以合理地预期得到这样的药理学特性，而无需实施本发明所主张以外的过多实验。根据本发明，目的序列与其被转入其中的靶细胞可以是同源的或者异源的。有利地，所述目的序列编码全部或部分的多肽，尤其是给出治疗或预防特性的治疗性或预防性多肽。多肽被理解为多核苷酸的任何翻译产物，不论其大小、糖基化与否，且包括肽和蛋白质。作为一个首要的实例，治疗性多肽包括那些可以在动物或人类有机体中补偿缺损或缺陷蛋白质的多肽，或者那些通过毒性作用从机体中限制或除去有害细胞的多肽。它们也可以是赋予免疫性的多肽，其作为内源性抗原激起体液或细胞反应，或两者兼有。由治疗性基因编码的多肽的实例包括，编码细胞因子(a、0或Y干扰素，白细胞介素，特别是IL-2、IL-6、IL-10或IL-12，肿瘤坏死因子(TNF)，集落刺激因子GM-CSF、C-CSF, M-CSF....)、免疫刺激多肽(B7. I、B7. 2等)、凝结因子(FVIII、FIX...)、生长因子(转化生长因子TGF、成纤维细胞生长因子FGF等)、酶(脲酶、肾素、凝血酶、金属蛋白酶、一氧化氮合酶N0S、S0D，过氧化氢酶...)、酶抑制剂(a I-抗胰蛋白酶、抗凝血酶III、病毒蛋白酶抑制剂、纤溶酶原激活物抑制剂PAI_1)、CFTR (囊性纤维化跨膜传导调节因子)蛋白质、胰岛素、肌营养不良蛋白、I或II类MHC抗原、可以调节/调控细胞基因表达的多肽、能够抑制细菌、寄生虫或病毒感染或其发展的多肽(抗原多肽、抗原表位、通过竞争抑制天然蛋白质作用的转显性(transdominant)变体....)、凋亡诱导剂或抑制剂(Bax、Bcl2、BclX...)、细 胞生长抑制剂(p21、pl6、Rb...)、载脂蛋白(ApoAI、ApoAIV、ApoE.)，血管生成抑制剂(血管生成抑制素、内皮他丁(endostatin)...)、血管生成多肽(血管内皮细胞生长因子VEGF家族、FGF家族、CCN家族,包括CTGF、Cyr61和Nov)、氧自由基scaveyer、具有抗肿瘤作用的多肽、抗体、毒素，免疫毒素和标记(P -半乳糖苷酶、荧光素酶....)的基因或本领域内认为可以被用于临床症状的治疗或预防的任何其它目的基因。适当的抗肿瘤基因包括但不限于，那些编码肿瘤抑制基因(如Rb、p53、DCC、NF-U肾母细胞瘤、NM23、BRUSH-1、pl6、p21、p56、p73以及它们各自的突变体)、自杀基因产物、抗体、抑制细胞分裂或转导信号的多肽的基因。根据特别优选的实施方案，本发明的痘病毒还包含自杀基因。自杀基因是指能将药物前体转化成细胞毒性化合物的蛋白质的编码基因。自杀基因包括但不限于，编码具有胞嘧啶脱氨酶活性、胸苷激酶活性、尿嘧啶磷酸核糖转移酶活性、嘌呤核苷磷酸化酶活性和/或胸苷激酶活性的蛋白质的基因。下表中公开了包含一个核碱基(nuc leobase)部分的自杀基因和相应的药物前体的例子表I
权利要求
1.用于治疗增殖性疾病或与破骨细胞活性增强相关的疾病的痘病毒，其包含缺损的I4L和/或F4L基因。
2.根据权利要求I的用于治疗增殖性疾病或与破骨细胞活性增强相关的疾病的痘病毒，其中所述增殖性疾病是癌症或再狭窄。
3.根据权利要求I的用于治疗增殖性疾病或与破骨细胞活性增强相关的疾病的痘病毒，其中所述与破骨细胞活性增强相关的疾病是类风湿性关节炎或骨质疏松症。
4.根据前述权利要求任一项的用于治疗增殖性疾病或与破骨细胞活性增强相关的疾病的痘病毒，其中所述痘病毒还包含缺损J2R基因。
5.根据前述权利要求任一项的用于治疗增殖性疾病或与破骨细胞活性增强相关的疾病的痘病毒，其中所述痘病毒还包含缺损F2L基因。
6.根据前述权利要求任一项的用于治疗增殖性疾病或与破骨细胞活性增强相关的疾病的痘病毒；其中所述痘病毒属于脊椎动物痘病毒亚科。
7.根据权利要求6的用于治疗增殖性疾病或与破骨细胞活性增强相关的疾病的痘病毒，其中所述痘病毒属于痘苗病毒种。
8.根据权利要求7的用于治疗增殖性疾病或与破骨细胞活性增强相关的疾病的痘病毒，其中所述痘病毒是痘苗病毒Copenhagen株。
9.根据权利要求7的用于治疗增殖性疾病或与破骨细胞活性增强相关的疾病的痘病毒，其中所述痘病毒是痘苗病毒WR株。
10.根据前述权利要求任一项的用于治疗增殖性疾病或与破骨细胞活性增强相关的疾病的痘病毒；其中所述痘病毒还包含核酸序列，其包含编码透性酶的基因。
11.根据权利要求10的用于治疗增殖性疾病或与破骨细胞活性增强相关的疾病的痘病毒，其中所述透性酶是酿酒酵母的嘌呤或胞嘧啶透性酶。
12.根据权利要求11的用于治疗增殖性疾病或与破骨细胞活性增强相关的疾病的痘病毒，其中所述透性酶选自于FCY2、Fur4及其类似物。
13.根据权利要求10至12任一项的用于治疗增殖性疾病或与破骨细胞活性增强相关的疾病的痘病毒，其中所述痘病毒还包含表达包含编码透性酶的基因的核酸序列所必需的元件。
14.组合物，其包含根据权利要求I至13中任一项所述的痘病毒和可药用的赋形剂，用于治疗增殖性疾病或与破骨细胞活性增强相关的疾病。
15.根据权利要求14的用于治疗增殖性疾病或与破骨细胞活性增强相关的疾病的组合物，其中所述组合物通过全身途径施用。
16.根据权利要求14或15的用于治疗增殖性疾病或与破骨细胞活性增强相关的疾病的组合物，其中还施用可药用数量的前药。
17.根据权利要求16的用于治疗增殖性疾病或与破骨细胞活性增强相关的疾病的组合物，其中在施用所述痘病毒至少3天之后施用所述前药。
18.根据权利要求16的用于治疗增殖性疾病或与破骨细胞活性增强相关的疾病的组合物，其中在施用所述痘病毒7天之后施用所述前药。
19.包含缺损的I4L和/或F4L基因的痘病毒在制备用于治疗增殖性疾病或与破骨细胞活性增强相关的疾病的药物中的用途。
20.根据权利要求19的用途，其中所述增殖性疾病是癌症或再狭窄。
21.根据权利要求19的用途，其中所述与破骨细胞活性增强相关的疾病是类风湿性关节炎或骨质疏松症。
22.根据权利要求19-21任一项的用途，其中所述痘病毒还包含缺损J2R基因。
23.根据权利要求19-22任一项的用途，其中所述痘病毒还包含缺损F2L基因。
24.根据权利要求19-23任一项的用途,其中所述痘病毒属于脊椎动物痘病毒亚科。
25.根据权利要求24的用途，其中所述痘病毒属于痘苗病毒种。
26.根据权利要求25的用途，其中所述痘病毒是痘苗病毒Copenhagen株。
27.根据权利要求25的用途，其中所述痘病毒是痘苗病毒WR株。
28.根据权利要求19-27任一项的用途；其中所述痘病毒还包含核酸序列，其包含编码透性酶的基因。
29.根据权利要求28的用途，其中所述透性酶是酿酒酵母的嘌呤或胞嘧啶透性酶。
30.根据权利要求29的用途，其中所述透性酶选自于FCY2, Fu r 4及其类似物。
31.根据权利要求28至30任一项的用途，其中所述痘病毒还包含表达包含编码透性酶的基因的核酸序列所必需的元件。
32.包含根据权利要求I至13中任一项所述的痘病毒和可药用的赋形剂的组合物在制备用于治疗增殖性疾病或与破骨细胞活性增强相关的疾病的药物中的用途。
33.根据权利要求32的用途，其中所述组合物通过全身途径施用。
34.根据权利要求32或33的用途，其中还施用可药用数量的前药。
35.根据权利要求34的用途，其中在施用所述痘病毒至少3天之后施用所述前药。
36.根据权利要求34的用途，其中在施用所述痘病毒7天之后施用所述前药。
全文摘要
本发明涉及包含I4L和/或F4L基因缺损的痘病毒，涉及包含该痘病毒的组合物，以及将该组合物和痘病毒用于治疗目的、更具体地用于治疗癌症的方法和用途。
文档编号A61P29/00GK102703389SQ201210160650
公开日2012年10月3日 申请日期2008年11月17日 优先权日2007年11月19日
发明者J·弗洛派, P·厄博斯 申请人:特朗斯吉有限公司