在降低氧化应激中的dha和epa的制作方法
【专利摘要】本发明一般性涉及预防或治疗与氧化应激相关的病症。例如，本发明提供了用于预防或治疗在术后情况下与氧化应激相关的病症的组合物。本发明的一项实施方案是包含DHA和EPA作为活性成分的用于治疗或预防氧化应激和/或相关病症的组合物。
【专利说明】在降低氧化应激中的DHA和EPA
[0001] 本发明一般性涉及预防或治疗与氧化应激相关的病症。例如，本发明提供了用于预防或治疗在术后情况下与氧化应激相关的病症的组合物。本发明的一项实施方案是包含二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)作为活性成分的用于治疗或预防氧化应激和/或相关病症的组合物。
[0002]作为缺血和随后再灌注的后果，肠道损伤在多种成人外科手术和新生儿临床病症，即实体器官移植、感染性休克和坏死性小肠结肠炎(NEC)的并发症中起重要作用(在 Nowicki PT 等人 Clin.Perinatol.，199421:219-234，Carden DL 等人J.Pathol.，2009190:255-266 和 Cerqueira NF 等人Acta Cir.Bras..200924:290-295 中讲行了综述)。许多证据提示活性氧物质(ROS)的产生和ROS介导的损伤在肠道缺血再灌注损伤中发挥重要作用。
[0003]除了 ROS的产生增加以外，还没有较好地了解肠道缺血再灌注导致的ROS依赖性和非依赖性的活化以及复杂的下游级联反应。该活化的后果是嗜中性粒细胞粘附分子、炎性细胞因子和衍生自花生四烯酸的脂质促炎代谢产物(即，类花生酸类)的表达增加。这最终导致引起屏障通透性升高的粘膜损伤，其部分地造成远距离的器官损伤和手术并发症。
[0004]为了减少缺血再灌注后与氧化应激相关的病症，例如，作者建议用抗氧化剂例如维生素 C 治疗(Lloberas 等人，FASEB J.April23, 2002，第 908-910 页)。
[0005]但是，维生素C迅速从身体中分泌并且不能有效地起作用，除非以可能有副作用的方式反复和高剂量地使用。
[0006]因此，本领域需要可选的组合物，其在施用时能够治疗、预防或缓解与氧化应激相关的特别是缺血再灌注(IR)以后的病症。
[0007]发明人满足了该需求。
[0008]因此，本发明的目的是向本领域提供能够用于治疗或预防与氧化应激相关(例如在缺血再灌注以后)的病症的组合物，其施用容易且安全，并且是天然的且没有不期望的副作用。
[0009]发明人惊讶地发现他们可以通过独立权利要求的主题达到该目的。从属权利要求进一步发展了本发明的观点。
[0010]本发明提供了包含二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)的组合物，其可以成功地用于治疗、预防或缓解氧化应激和/或相关病症，例如由缺血再灌注诱导的病症和/或与其相关的术后病症。
[0011]已经显示，用ω-3脂肪酸例如二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)进行饮食干预对于大脑发育和减少心血管疾病死亡是重要的。
[0012]目前全世界对EPA和DHA的摄入差异很大，并且与疾病的负担密切相关，所述疾病可以通过增加EPA和DHA摄入来有效地改善(在Hibbeln JR等人Am.J.Clin.Nutr.,200683:1483-1493中进行了综述)。发明人报告了基于脂质混合物的饮食干预，其使得3周后全身和肠道内EPA和DHA含量有效升高，并保护避免由肠系膜动脉暂时闭塞诱导的肠内IR损伤后的粘膜损伤。[0013]发明人证明了增加EPA和DHA的摄取可以阻止粘膜损伤，而对中性粒细胞浸润(ΜΡ0含量)没有影响，但是，其降低了它们的活性(R0S)。
[0014]为了研究其潜在的机制，发明人检测了氧化应激调节因子(CAT和S0D)和细胞因子的变化。在肠道IR损伤和用EPA和DHA干预后使用了定量分析方法来表征我们的饮食干预对抗炎的类花生酸(例如17，18-EEP和TXB3)产生的影响。
[0015]该研究的结果显示了通过减少氧化应激对粘膜损伤的有益效果。
[0016]因此，本发明涉及包含DHA和EPA作为活性成分的用于治疗、预防或缓解氧化应激和/或相关病症的组合物。
[0017]本发明还涉及DHA和EPA作为活性成分在制备用于治疗、预防或缓解氧化应激和/或相关病症的组合物中的用途。
[0018]本发明的组合物显示当其用于治疗、预防或缓解在术后情况下的氧化应激和/或相关病症中特别有用。
[0019]例如，所述氧化应激和/或相关病症可以是由缺血再灌注诱发。
[0020]缺血再灌注损伤可以导致大量的氧自由基产生，其可以氧化细胞结构。这与治愈过程(例如手术后)适得其反。本发明能够治疗、缓解或预防所造成的氧化应激的消极影响。
[0021 ] 因此，该组合物可以在例如住院条件下使用。
[0022]该组合物显 示当其包含EPA和DHA时特别有效。
[0023]EPA和DHA可以从任何途径获得。它们可以合成或者从天然化合物中纯化。
[0024]优选地，它们可以以天然组合物或以其提取物提供。例如，DHA和EPA可以从包含海产油类例如鱼油的脂质源或者从微生物中提供。
[0025]由于鱼油通常具有在感官上令人厌恶的味道和/或气味，所以所述鱼油或整个脂质源可以以包囊的形式提供。
[0026]例如，可以加入已知能够阻止产生不期望的不正常味道或气味的化合物，例如卵磷脂或柑橘类水果的汁。
[0027]该组合物可以包含其它脂质。例如，脂质源可以包括可可脂、大豆油、鱼油和/或葵花籽油。
[0028]例如，可以调整该脂质源以满足所治疗个体的营养需要。例如，该脂质源可以对应于组合物的含热量的约7-13%，例如约10%。
[0029]必需脂肪酸亚油酸和α -亚麻酸可以分别对应于该组合物总含热量的约3-5.5%、例如约4.4%，和约0.1-0.5%、例如约0.3%。此外，该组合物中可以包含分别对应于摄入总能量的约0.2-0.4%、例如约0.3%的ΕΡΑ，和约0.1-0.3%、例如约0.2%的DHA0
[0030]这可以通过几种不同的油类混合物来实现，所述油类混合物全部可以使用并且可以根据味道或其它特点进行选择。
[0031]例如，该脂质源可以包含约5-10重量％的可可脂、约45-55重量％的大豆油、约15-25重量％的鱼油和约20-25重量％的葵花籽油。
[0032]该脂质源可以包含约7重量％可可脂、约50重量％大豆油、约20重量％鱼油和约23重量％葵花籽油。
[0033]通常情况下，该脂质源包含饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸的混合物。
[0034]这些脂肪酸的量可以基于所治疗个体的需要进行调整。
[0035]例如，该脂质源可以包含约18-22重量％的饱和脂肪酸、约20-25重量％的单不饱和脂肪酸和约50-55重量％的多不饱和脂肪酸。
[0036]氧化损伤通常是由活性氧物质介导。该活性氧物质可以是例如自由基。
[0037]因此，所述氧化应激相关的病症可以与体内自由基的存在相关,例如.02_，超氧阴离子；H202,过氧化氢；.0H,轻自由基；R00H,有机氢过氧化物；R0.,烧氧自由基；R00.,过氧自由基；H0C1，次氯酸;00Ν0_，过氧亚硝酸盐；和/或N0.。
[0038]许多器官可以直接或者间接地被氧化应激损伤。间接损伤通常在再灌注后的远距离器官中被发现。该间接损伤是有问题的，因为其可以例如在肠缺血再灌注后导致多器官障碍综合征。肺经常被间接损伤所影响。
[0039]本发明的组合物降低了对器官的直接或间接损伤的风险，并因此用于治疗或预防对肠、肝脏、肺、心脏、肾脏和/或皮肤的损伤。
[0040]所述氧化应激相关的病症可以是任何此类病症。
[0041]例如，所述氧化应激相关的病症可以选自对氧化应激的炎症应答、视网膜变性、线粒体毒物兴奋效应(mitohormesis)、动脉粥样硬化、肌萎缩侧索硬化(ALS)、多发性硬化(MS)、弗里德赖希共济失调、迟发性运动障碍、脑损伤例如缺血、皮肤光老化、再灌注损伤或中风、心肌梗塞、高血压、心力衰竭、癫痫、过高半胱氨酸血症、生理性衰老、败血症、器官移植后的应激、或其组合。
[0042]发明人已经通过实施例使用啮齿类动物模型举例说明了可以非常成功地使用本发明组合物来限制缺血再灌注(IR)之后例如在内脏区域的肠损伤。因此，特别是内脏器官可以通过本发明的组合物进行保护。
[0043]本发明组合物的效力符合剂量-效应曲线。
[0044]在治疗性应用中，组合物是以至少足以部分地治愈或阻止疾病症状及其并发症的量进行施用。足以达到该目的的量被定义为“治疗有效剂量”。对于该目的有效的量将取决于本领域技术人员已知的许多因素，例如疾病的严重性和患者的体重及一般状态。
[0045]在预防性应用中，本发明的组合物是以至少足以部分地降低疾病发生风险的量向易患病的患者或其他有特定疾病风险的患者施用。该量被定义为“预防有效剂量”。同样，准确的量取决于多种患者特定因素，例如患者的健康状态和体重。
[0046]本发明的组合物可以以治疗有效剂量或预防有效剂量施用。本领域技术人员能够基于本文所提供的信息和患者的状态来确定这些剂量。
[0047]例如，该组合物可以以对应于至少400mg的EPA和DHA的组合日剂量的量进行施用。
[0048]EPA和DHA可以以任何比例提供，例如以10:1至1:10范围的重量比，例如7:1至1:1，例如约5:1至1:1。
[0049]优选地，EPA和DHA是以约2:1至1:1范围的重量比包含在该组合物内。具有约3:2范围的EPA和DHA重量比获得了非常好的结果。
[0050]在临床机构中， 该组合物可以以对应于约2_5g (例如，3_4g)的EPA和DHA的组合
日摄取量的量进行施用。[0051]为了获得最好的结果，连续地历经几天的时期施用本发明组合物是适当的。
[0052]如果计划进行手术，并且特别是如果预见到会出现缺血再灌注，可以在手术前例如7天、3天、2天或I天作为预防措施开始施用。
[0053]例如，该施用可以在干预前3-7天开始进行。
[0054]该施用还可以在手术和/或缺血再灌注后立即开始。
[0055]该组合物可以历经至少3天(例如至少一周或至少两周)的时期每天施用。
[0056]本发明的组合物可以向任何患者施用。所述患者可以是人或动物患者。所述动物可以是伴侣动物例如狗或猫。
[0057]该组合物可以经局部、口服、肠内或胃肠外施用。
[0058]通常情况下，该组合物可以与正常食物摄取一起口服施用。
[0059]如果不能进行正常的食物摄取，该组合物可以经肠内施用，例如通过管饲，或者在严重的情况下不能进行肠内施用或者不建议肠内施用时进行胃肠外施用。
[0060]在胃肠外施用情况中，该组合物通常不包含碳水化合物源，但是碳水化合物可以单独施用，例如通过葡萄糖滴注。
[0061]但是，在通常情况下，该组合物可以作为食品或作为可饮用的组合物进行施用。
[0062]因此，该组合物可以选自食品、宠物食品、营养品、饮料、食物补充剂、在牛奶或水中重构的粉末的营养配方食品，或药物。
[0063]本领域技术人员将理解，在不背离所公开的本发明范围的情况下，他们可以自由地组合本文所述的本发明的全部特征。具体而言，用于描述本发明用途的特征可以用于本发明的组合物，反之亦然。
[0064]本发明的其它优点和特征通过以下实施例是很明显的。
实施例:
[0065]使用8周大的雄性斯普拉格-道利大鼠(Charles-River,法国)。动物收到后在我们的动物设施中进行饮食干预两周以适应。将全部动物在12小时光/暗周期下在恒定室温保持在特定的无病原菌环境中。它们自由进食常用的基础膳食(AIN-93M)和自来水。
[0066]两周后，将大鼠随机分配到三个不同实验组其中之一(每组n=8)，即，⑴假组，该组提供对照膳食3周，进行假的手术程序；(ii) I/R组，该组提供对照膳食3周，随后进行缺血再灌注手术程序；(iii)I/R+NRC脂质混合物组，该组提供添加了脂质混合物(如下所述)的膳食3周，在饮食干预结束后进行缺血再灌注手术程序。
[0067]在对照或添加NRC膳食条件下三周结束时，动物进行假的手术程序或缺血再灌注手术程序，后者由30分钟的缺血期和随后的3小时再灌注期组成(如Yoshida N.等人，MolMed R印ort，20114:81-86所述)。在再灌注期结束时，将动物处死，随后收集血清和器官。
[0068]维持性AIN-93M膳食包含提供10%的总能量的脂肪。必需脂肪酸亚油酸和α -亚麻酸分别提供约4.4%和0.3%的总能量摄入。在NRC干预膳食中，我们用下面所述的特定混合物保持这些值尽可能地接近对照。此外，EPA和DHA在对照膳食中不存在，而在添加的膳食中所提供的EPA和DHA的量接近鱼油，分别为总能量摄入的约0.3%和0.2%。 [0069]使用市售的试剂盒(来自Roche、Sigma或Cayman),测定总的小肠蛋白质、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、硝酸盐/亚硝酸盐、MPO的含量和活性。使用标准HPLC方法和适当的市售标准品测量EPA和DHA的引入。类花生酸类通过HPLC-MS/MS用适当的市售标准品进行定量，如 Pouteau E.等人，Nutr Metab, 20107:8 所述。
[0070]本文提供的所有数据表示为平均值土SEM。在适宜时使用非配对数据的学生t检验比较三个组。P值〈0.05被视为统计学显著的差异。
[0071]结果
[0072]表1a和b给出了脂质混合物的描述和所含脂肪酸的性质。
[0073]a.[0074]
【权利要求】
1.包含DHA和EPA作为活性成分的组合物，其用于治疗、预防或缓解由缺血再灌注引起的氧化应激和/或相关病症。
2.如权利要求1所述的组合物，其包含重量比约2:1至1:1、优选约3:2的EPA和DHA。
3.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中DHA和EPA是从包含海产油类例如鱼油的脂质源中提供。
4.如权利要求3所述的组合物，其中脂质源包括可可脂、大豆油、鱼油和葵花籽油。
5.如权利要求4所述的组合物，其中脂质源包含约5-10重量％的可可脂、约45-55重量％的大豆油、约15-25重量％的鱼油和约20-25重量％的葵花籽油。
6.如权利要求3所述的组合物，其中脂质源包含约18-22重量％的饱和脂肪酸、约20-25重量％的单不饱和脂肪酸和约50-55重量％的多不饱和脂肪酸。
7.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中氧化应激相关的病症与体内自由基的存在相关，所述自由基例如.02_，超氧阴离子;H202，过氧化氢；.0H，羟自由基;ROOH，有机氢过氧化物；RO ?，烷氧自由基；ROO ?，过氧自由基；H0C1，次氯酸；OONO_，过氧亚硝酸盐；和/ 或 N0.。
8.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其用于治疗或预防对肠、肝脏、肺、心脏、肾脏和/或皮肤的氧化损伤。
9.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中氧化应激相关的病症是选自对氧化应激的炎症应答、视网膜变性、线粒体毒物刺激作用、动脉粥样硬化、肌萎缩侧索硬化(ALS)、多发性硬化(MS)、弗里德赖希共济失调、迟发性运动障碍、脑损伤例如缺血、皮肤光老化、再灌注损伤或中风、心肌梗塞、高血压、心力衰竭、癫痫、过高半胱氨酸血症、生理性衰老、败血症、器官移植后的应激、或其组合。
10.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其限制例如在内脏区域的缺血再灌注(IR)后的肠损伤。
11.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中EPA和DHA以至少400mg的日剂量提供。
12.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中该组合物历经至少3天、例如至少一周或至少两周的时期每天施用。
13.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其向人或宠物施用，例如伴侣动物如狗或猫。
14.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其通过局部、口服、肠内或胃肠外施用。
15.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中该组合物选自食品、宠物食品、营养品、饮料、食物补充剂、在牛奶或水中重构的粉末的营养配方食品、或药物。
【文档编号】A61P17/00GK103648494SQ201280031582
【公开日】2014年3月19日 申请日期:2012年6月26日 优先权日:2011年6月28日
【发明者】M·N·博斯科, M·奥利维拉, F·德塔亚, J·本雅各布, V·布拉姆巴特 申请人:雀巢产品技术援助有限公司