专利名称：hsa-miR-545miRNA及其应用的制作方法
技术领域：
本发明属于生物医学材料技术领域，具体是涉及一种与癌症发生相关的hsa-miR-545miRNA及其在制药中的应用。
背景技术：
癌症，亦称恶性肿瘤，为由控制细胞生长增殖机制失常而引起的疾病。癌细胞除了生长失控外，还会局部侵入周遭正常组织甚至经由体内循环系统或淋巴系统转移到身体其他部分。癌症是当今世界死亡率最高的疾病之一。已严重威胁人类健康。mircoRNA简称miRNA，通常长度19-25个核苷酸，纯在与各种生物钟，是进化上保守的小分子单链RNA。miRNA基因通常是在核内由RNA聚合酶II(polII)转录的，最初产物pr1-miRNA。pr1-miRNA在Drosha RNase和其辅助因子Pasha的作用下被处理成70个核苷酸组成的pre-miRNA。RNA - GTP 和 exportin5 将 pre-miRNA 输送到细胞质中。随后，另一个 DicerRNase将其剪切产生约为22个核苷酸长度的miRNA:miRNA*双链。这种双链很快被引导进入沉默复合体(RISC)复合体中，其中一条成熟的单链miRNA保留在这一复合体中。成熟的miRNA结合到与其互补的mRNA的位点通过碱基配对调控基因表达。miRNA通过在转录后水平调节靶基因的表达在细胞中行使功能。在细胞增殖，生长，分化，凋亡的重要生理过程中起着重要的作用。因此，miRNA的表达异常往往与肿瘤的发生，转移等相关。50%以上的miRNA定位在肿瘤相关基因组区域，包括染色体扩增区及脆性位点的。这些都表明，我们可以从miRNA调控的角度揭示肿瘤发生机制，并为肿瘤诊断和治疗提供新的基因靶点和分子标记。
目前尚无关于hsa-miR-545用于肺癌诊断和治疗的报道。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种新的hsa-miR-545miRNA,该hsa_miR-545miRNA可以用于治疗肿瘤。实现上述目的的技术方案如下。一种 hsa-miR-545miRNA，其碱基组成为 SEQ ID NO:1。本发明的另一目的是提供上述hsa-miR-545miRNA的应用。具体技术方案如下。hsa-miR-545miRNA在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明的另一目的是提供一种治疗肿瘤的药物组合物。具体技术方案如下:一种治疗肿瘤的药物组合物，其活性成分包括有如上所述的hsa-miR-545miRNA。在其中一个实施例中，所述肿瘤为肺癌。本发明通过对miRNA的研究，进行肿瘤治疗药物的开发，提供一种新的hsa-miR-545miRNA及其在治疗肿瘤药物中的用途。本发明的hsa-miR-545可以有效的降低癌细胞的增殖，诱导癌细胞凋亡及动物成瘤能力，因此可以作为一种的抗癌药物，特别是在治疗肺癌中的应用，其癌症治疗中有极为重要的应用前景。
图1是实时定量PCR检测hsa-miR-545在成对的肺癌与癌旁组织中的表达水平，用5S的表达水平作标准化，数据来自3次独立实验(土SD);*，P〈0.05; **，P〈0.01; ***，P〈0.001。图2是用celItiter试剂盒检测hsa-miR-545对癌细胞的增殖作用。A,hsa-miR-545对A549细胞增殖的影响；B，hsa-miR-545对NIH-H460 (H460)细胞增殖的影响；*，P<0.05; **，P〈0.01; ***，P〈0.001。图3是检测hsa-miR-545对癌细胞凋亡作用。A，hsa-miR-545对A549细胞凋亡的影响；B, hsa-miR-545 对 H460 细胞凋亡的影响；*，P〈0.05;**，P〈0.01;***，P〈0.001。
图4是动物成瘤实验检测hsa-miR-545对肺癌细胞A549皮下成瘤能力的作用，A，肿瘤图片；B，肿瘤体积；C，肿瘤质量；*，P〈0.05;**，P〈0.01;***，P〈0.001。
具体实施例方式为了能够更清楚地理解本发明的技术内容，特举以下实施例结合附图详细说明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人,分子克隆:实验室手册(NewYork:Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。miR-545mimics 序列:成熟序列:5，-UCAGCAAACAUUUAUUGUGUGC-3，(hsa_miR-545miRNA，SEQID N0.1)互补序列:3’-A⑶CGUUUGUAAAUAACACACG-5’(SEQ ID N0.2)。miR-545 inhibitor 序列:5，-mGmCmAmCmAmCmAmAmUmAmAmAmUmGmUmUmUmGmCmUmGmA-3，(SEQ ID N0.3)。其中，m为甲基化修饰。本发明所述的由hsa-miR_545miRNA制备的药物可以是纳米颗粒组合物、脂质组合物、由生物相容性分子和/或生物可降解分子组成。本发明所述的由hsa-miR_545miRNA制备的药物,可以经肠内或胃肠外给药。肠内给药是口服给药胃肠外给药是血管内给药、颅内给药、胸膜内给药、肿瘤内给药、腹腔内给药、肌肉内给药、淋巴给药、腺内给药、皮下给药、局部给药、支气管给药、气管内给药、鼻内给药、吸入给药或者滴注给药。本发明所述的由hsa-miR_545miRNA制备的药物应用时,浓度在0.01mg/kg体重至10mg/kg体重，miR-506miRNA是由化学合成方法合成得到的；或者通过构建载体表达后纯化，则以每剂量为IXlO5至IXlO14个病毒颗粒或者IOOmg至4000mg的DNA质粒载体。实施例1:实时定量PCR分析hsa-miR-545表达:1.样本准备:收集15例肺癌病人手术切除标本，-80°C冻存，液氮运输。
权利要求
1.一种碱基组成为 SEQ ID NO:1 的 hsa-miR-545miRNA。
2.权利要求1所述的hsa-miR-545miRNA在制备抗肿瘤药物中的应用。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征是，所述肿瘤为肺癌。
4.一种治疗肿瘤的药物组合物，其特征是，其活性成分包括有权利要求1所述的 hsa_miR-545miRNA0
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征是，所述肿瘤为肺癌。
全文摘要
本发明公开了一种碱基组成为SEQ ID NO1的hsa-miR-545miRNA。本发明的hsa-miR-545可以有效的降低癌细胞的增殖，诱导癌细胞凋亡及动物成瘤能力，因此可以作为一种的抗癌药物，特别是在治疗肺癌中的应用。
文档编号A61K48/00GK103233007SQ20131004724
公开日2013年8月7日 申请日期2013年2月5日 优先权日2013年2月5日
发明者张必良, 杜博文 申请人:中国科学院广州生物医药与健康研究院