用于治疗痤疮和其它病症的内脂素治疗药物的制作方法

用于治疗痤疮和其它病症的内脂素治疗药物的制作方法
【专利摘要】本申请涉及治疗痤疮和其它病症的组合物和方法。尤其是，所述组合物和方法用于治疗皮脂有关的病症。
【专利说明】用于治疗痤疮和其它病症的内脂素治疗药物
[0001]相关申请
[0002]本申请是2011年08月22日进入中国国家阶段的申请号为201080008874.1、发明名称为“用于治疗痤疮和其它病症的内脂素治疗药物”的中国专利申请的分案申请。本申请要求2009年02月24日提交的美国专利申请第61/208,386号和2009年11月16日提交的美国专利申请第61/261，453号的优先权。
【技术领域】
[0003]本发明涉及用于治疗痤疮和其它与皮肤的皮脂水平改变有关的病症，如干性或油性皮肤的组合物和方法。
【背景技术】
[0004]寻常性痤疮在美国和其它国家是一种最常治疗的皮肤病。寻常性痤疮通常也简称为“痤疮”，尽管已知许多其它不同且临床上形式各异的痤疮。痤疮影响着许多青少年和成年人。
[0005]痤疮的最早证据通常为，在个体皮肤的毛囊气孔形成了皮脂栓。通常，皮脂栓非常小，肉眼无法看见。当皮肤上角质层的死亡角化细胞与皮脂结合并堵塞这些皮肤气孔的开放时，就形成了皮脂栓。细菌,如痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes) (P.acnes)可随后在含有皮脂栓的皮肤气孔中增殖。同时，产生的细胞栓和皮脂结合到皮肤气孔的壁上，导致在气孔中形成更大的栓，随后扩大气孔。这些扩大的栓被称为粉刺，通常被称为“黑头”或“白头”。最终，这种扩张会导致气孔壁的破裂并引起发炎反应。一旦这种破裂发生，机体尝试通过刺激从上皮中长出细胞鞘来修复皮肤并包裹住发炎反应的部位。然而，产生的包裹作用经常是不完全的，反而会引起已经产生的病灶进一步破裂。这样，反过来会导致形成多通道神经束(multichann`eled tract)以及发炎的丘疫和发炎的脓疱。这些发炎的丘疫和脓疱通常被称为“粉刺”。
[0006]痤疮会产生疤痕，并被认为是缺乏美感和不美观。其结果就是痤疮的其它影响通常是心理上的，如自尊心降低。令事情复杂化的是，痤疮通常出现在青春期，那个时候许多人已经容易产生社交焦虑。因此，倡导进行早期积极治疗以减轻痤疮对人的身心影响。
[0007]有四种治疗痤疮的主要策略。这四种治疗策略针对痤疮的一个或多个方面。一种策略是纠正痤疮期间的滤泡角质化变化模式。第二种策略是降低皮脂腺的活力和皮脂的产生。第三种策略是降低滤泡菌群的大小，尤其是降低痤疮丙酸杆菌的数量。第四种策略是抑制胞外发炎介质(如细胞激素和炎性细胞)的产生或影响。重要地是，大多数这些治疗策略因为效果有限或不良副作用而受到限制。
[0008]已有多种组合物用于实现这些不同的痤疮治疗策略。异维甲酸和维生素A衍生物代表这样一类组合物。异维甲酸通过减少基础皮脂腺细胞的增殖、减少达90%的皮脂生产并抑制皮脂腺细胞的分化来降低皮脂腺大小。异维甲酸可以适于局部施用或口服施用的药物剂型提供。异维甲酸的口服施用彻底改革了严重痤疮的治疗。这是因为异维甲酸是第一种可改变滤泡角质化、改变皮脂产生、减少滤泡菌群和产生抗炎效果的药物。不幸的是，异维甲酸是一种已知的致畸物，可引起先天缺陷。还有许多其它严重的副作用与异维甲酸的治疗有关。这些副作用包括精神障碍，如抑郁症和精神病，以及颅内高压、急性胰腺炎、血脂水平升高、听觉障碍、肝中毒和炎性肠道疾病。
[0009]过氧化苯甲酰以及相关的化合物代表第二类用于痤疮治疗的组合物。过氧化苯甲酰是一种最常用的治疗局部痤疮的药剂。过氧化苯甲酰具有较强的抗菌特性、较弱的抗炎特性和抗粉刺特性。用于痤疮治疗的过氧化苯甲酰以剂型，如用于局部施用的乳膏、凝胶剂、泡沫剂、肥皂或洗涤剂的形式提供。这些制剂通常含有2.5~10%的过氧化苯甲酰。然而，许多副作用也与过氧化苯甲酰的治疗有关，包括接触性过敏反应如皮肤的灼烧、瘙痒、脱皮和肿胀。
[0010]抗雄性激素和相关的化合物代表第三类用于痤疮治疗策略的组合物。雄性激素为甾族性激素，如与雄性性征发育有关的睾酮。用于治疗痤疮的抗雄性激素的实例有醋酸伊诺特隆、螺内酯、醋酸环丙孕酮、氟他胺和5-α还原酶抑制剂，如非那雄胺。雌性留族性激素雌激素是另一种抗雄性激素的实例。抗雄性激素在体内结合雄性激素受体并抑制它们的生物学活性或产生与那些雄性激素相反的生物效应(如雌激素)。用抗雄性激素治疗抑制皮脂的生产有助于控制痤疮。然而，通过口服或其它途径进行抗雄性激素治疗通常仅限于女性患者。这是因为男性患者接受抗雄性激素会产生女性第二性征，如乳房增大，并失去男性第二性征。这种男性第二性征的失去包括肌肉耗失、男性器官活性和性欲降低。总之，这意味着痤疮抗雄性激素治疗存在严重的局限性和副作用。
[0011]抗生素和其它抗微生物化合物代表第四类用于痤疮治疗的组合物。用于痤疮治疗的抗生素实例包括可口服或局部施用的克林霉素和红霉素，用于减少皮肤表面和毛孔内部细菌数量。抗生素可减少痤疮丙酸杆菌和其它细菌的数量，从而减少皮肤表面可能堵塞毛孔的脂肪酸的产生，如痤疮丙酸杆菌产生的丙酸。这意味着抗生素既具有抗粉刺作用(如预防“黑头”和“白头”的形成)，还能有助于控制因毛孔壁破裂及与此有关的局部细菌感染引起的炎症的发生。然而，使用抗生素治疗痤疮的主要限制因素是抗生素抗性细菌菌株数量的增加，包括目前正在传播中`的抗生素抗性痤疮丙酸杆菌菌株。
[0012]如上所述,皮脂生产(sebum production)在痤疮的发病机制中起着关键的作用。已知皮脂生产促进粉刺的形成，并且皮脂生产的增加是引起痤疮发生的早期事件中的一种。
[0013]皮脂是相对非极性脂类(如油、蜡和脂肪)的混合物，其主要是在皮脂腺中合成的。皮脂腺为皮肤外表面提供一种防水、疏水包衣。因此，皮脂通常有助于润滑和保护皮肤。
[0014]皮脂由皮脂腺分泌。在皮肤中皮脂腺与毛囊相连。每个人皮肤中皮脂腺的数量在一生中是大致维持恒定的，而这些皮脂腺的大小易于随年龄而增加。人类皮脂腺是全分泌组织，大体存在于除手掌和脚底外的所有皮肤区域。
[0015]全分泌物如皮脂，是腺体中分泌细胞裂解的结果。全分泌物最初在腺体内的分泌细胞内部产生。接着，这些分泌细胞破裂释放(分泌)这些细胞的内容物到腺体的内腔(lumen)或内部空间。
[0016]在皮脂腺中，已知负责释放皮脂的细胞为皮脂腺细胞。皮脂腺中的皮脂腺细胞填充有脂类和其它皮脂组分。填充了这些皮脂组分的皮脂腺细胞最终失去了完整性并破裂。这引起了皮脂腺分泌皮脂。填充有皮脂的皮脂腺细胞具有典型的的泡状细胞形态。
[0017]对许多人而言，皮脂分泌的增加始于约9岁的时候，并持续增加到17岁，这个时候皮脂分泌通常达到了成年人的水平。这一皮脂生产增加的阶段正是多数痤疮发生的时候。然而，如上所述，许多用于治疗痤疮和控制皮脂生产的策略具有不良副作用或其它明显的局限。在其它病症，如皮脂溢出(皮脂分泌和释放的异常增加)以及干性皮肤和皲裂皮肤病症中，皮脂生产也发挥着重要的作用。
[0018]内脂素是一种由成熟的脂肪细胞分泌的脂肪素。内脂素还被称为前B细胞克隆增强因子(PBEF)、Nampt和烟酰胺磷酸核糖转移酶。内脂素最初报道认为其是从内脏脂肪中分泌的，后来的报道认为其是由下皮组织的皮下脂肪细胞分泌的。皮下组织是位于皮肤下面的含脂肪的组织。皮下组织还含有血管和毛囊的基部(底部)部分。内脂素还可由细胞，如中性粒细胞和组织中的细胞，如肝脏、心脏和肌肉细胞表达。
[0019]内脂素被认为是内脏脂肪衍生的激素，并且据日本研究小组的报道，无论是体外(试管中)在培养的细胞中和体内(活体内)，其都是通过降低小鼠中的血糖水平来模拟胰岛素的生物活性。然而，这个日本研究小组随后从《科学》杂志中撤下了他们报道这些发现的整篇论文。内脂素的生理作用还不清楚，因为血浆的内脂素浓度比血浆的胰岛素浓度低40~100倍。内脂素还被报道具有酶活性并催化烟酰胺和5-磷酸核糖-1-焦磷酸酯缩合生成烟酰胺单核苷酸。重要的是，烟酰胺单核苷酸的合成是辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)生物合成中的一步。
[0020]这意味着人们 对内脂素的生物活性和其在生理过程中的作用，如在痤疮的发病机制和其它与皮脂生产相关的病症中的作用了解得还不够。重要的是，内脂素可能在痤疮的发病机制和其它与皮脂生产相关的病症，如干性或油性皮肤中起作用。
[0021]因此，人们需要调节内脂素活性以帮助治疗痤疮和其它与皮脂生产相关病症的改进的组合物和方法。
[0022]发明概述
[0023]本发明一方面提供一种药物组合物，其含有内脂素活性剂和药用载体。该药用载体可包括稀释剂和佐剂。在一个优选的实施方案中，传送肽可与或不与药用载体联用，但与内脂素活性剂组合使用。
[0024]本发明的另一方面提供一种治疗患者皮脂生产过剩病症的方法，其包括给皮脂生产过剩病症患者施用治疗有效量的内脂素拮抗剂或含有内脂素拮抗剂的药物组合物；以此治疗皮脂生产过剩病症。
[0025]本发明的另一方面提供一种治疗患者寻常性痤疮的方法，其包括给寻常性痤疮患者施用治疗有效量的内脂素拮抗剂或含有内脂素拮抗剂的药物组合物；以此治疗寻常性痤疮。
[0026]本发明的另一个方面提供一种治疗患者皮脂生产缺陷病症的方法，其包括给皮脂生产缺陷病症患者施用治疗有效量的内脂素激动剂或含有内脂素激动剂的药物组合物；以此治疗皮脂生产缺陷病症。
[0027]本发明的另一个方面提供一种增加患者皮脂生产的方法，其包括给患者皮肤施用治疗有效量的内脂素激动剂或含有内脂素激动剂的药物组合物；以此增加患者的皮脂生产。[0028]本发明的另一个方面提供一种减少患者皮脂生产的方法，其包括给患者皮肤施用治疗有效量的内脂素拮抗剂或含有内脂素拮抗剂的药物组合物；以此减少患者的皮脂生产。
[0029]本发明的另一个方面提供含有选自下述核酸序列的SiRNA在制备治疗皮脂生产过剩病症的药物中的应用:SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID N0:21、SEQ ID NO:22,SEQID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、and SEQ ID NO:18。
[0030]本发明的另一个方面提供含有选自下述核酸序列的SiRNA在制备治疗选自痤疮、脂溢出症、脂溢性皮炎、皮脂腺囊肿和皮脂腺增生病症的药物中的应用:SEQ ID NO: 19、SEQID NO:20,SEQ ID N0:21、SEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:24,SEQ ID NO:25,SEQID NO:26,SEQ ID N0:9、SEQ ID NO:10,SEQ ID NO:13,SEQ ID NO:14,SEQ ID NO:17和SEQID NO:18。
[0031 ] 本发明的另一个方面提供FK-866在制备治疗皮脂生产过剩病症的药物中的应用。
[0032]本发明的另一个方面提供FK-866在制备治疗选自皮脂痤疮、脂溢出症、脂溢性皮炎、皮脂腺囊肿和皮脂腺增生病症的药物中的应用。
[0033]本发明的另一个方 面提供AP0866在制备治疗皮脂生产过剩病症的药物中的应用。
[0034]本发明的另一个方面提供AP0866在制备治疗选自痤疮、脂溢出症、脂溢性皮炎、皮脂腺囊肿和皮脂腺增生病症的药物中的应用。
[0035]本发明的另一个方面提供含有选自下述核酸序列的SiRNA在制备治疗寻常性痤疮的药物中的应用:SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO:20, SEQ ID N0:21、SEQ ID N0:22、SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ IDNO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17 和 SEQ ID NO:18。
[0036]本发明的另一个方面提供含有至少一种选自下述的氨基酸序列的内脂素激动剂在制备治疗皮脂生产缺陷病症的药物中的应用:SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6和 SEQ ID NO:8。
[0037]本发明的另一个方面提供含有至少一种选自下述氨基酸序列的内脂素激动剂在制备治疗与皲裂、皮炎、牛皮癣、糖尿病、肾衰竭、肾移植、血液透析、维生素A缺乏症和口角炎中的至少一种有关的干燥症的药物中的应用:SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6和 SEQ ID NO:8。
[0038]本发明另一个方面提供一种适合于治疗患者皮脂生产过剩病症的药物组合物，其中治疗方法包括给皮脂生产过剩病症患者施用治疗有效量的内脂素拮抗剂；以此治疗皮脂生产过剩病症。
[0039]本发明另一个方面提供一种适合于治疗患者寻常性痤疮的药物组合物，其中治疗方法包括给寻常性痤疮患者施用治疗有效量的内脂素拮抗剂；以此治疗寻常性痤疮。
[0040]本发明另一个方面提供一种适合于治疗患者皮脂生产缺陷病症的药物组合物，其中治疗方法包括给皮脂生产缺陷病症患者施用治疗有效量的内脂素激动剂；以此治疗皮脂生产缺陷病症。[0041]本发明另一个方面提供一种适合于增加患者皮脂生产的药物组合物，其中增加皮脂生产的方法包括给患者皮肤施用治疗有效量的内脂素激动剂；以此增加患者的皮脂生产。
[0042]本发明另一个方面提供一种适合于减少患者皮脂生产的药物组合物，其中减少皮脂生产的方法包括给患者皮肤施用治疗有效量的内脂素拮抗剂；以此减少患者的皮脂生产。
[0043]附图简述
[0044]图1所示为内脂素表达限于皮脂腺，其中图1A为10倍放大原图，图1B为图1A的局部放大，放大倍数为40倍，而图1C是对图1A和图1B的进一步分析标示。
[0045]图2所示为内脂素在皮脂腺的皮脂积累细胞中表达，其中图2A为放大原图，而图2B是对图2A的进一步分析标示。
[0046]图3所示为内脂素增加了皮脂腺中泡状皮脂腺细胞的数量。
[0047]图4所示为局部施用内脂素诱导皮脂腺内成熟和脂类积聚。
[0048]图5所示为局部施用内脂素拮抗剂SiRNA抑制了皮脂腺内皮脂的生产。
[0049]图6所示为局部施用内脂素拮抗剂SiRNA抑制了皮脂腺内皮脂的生产。
[0050]发明详述
[0051]应当理解，下述的描述倾向于提供有关本发明具体有代表性的方面的细节。还应当理解，在不脱离本发明所附权利要求中所述精神和范围下，很多种等同物可用于对本发明所述方法的具体元件进行替换。此外，本申请中所引用的所有的出版物包括但不限于专利和专利申请，以引文形式并入本申请，犹如完全公开。本申请对范围的定义倾向于包括所述范围的上限和下限的数值、所有在范围内的离散值和范围内的任何离散子范围。
[0052]本申请中所使用的术语“内脂素活性剂”包括但不限于通过任何机制直接或间接地正调节或负调节内脂素蛋白的任何分子。该内脂素活性剂的实例包括如本申请所述的内脂素激动剂和内脂素拮抗剂分子。
[0053]本申请中所使用的术语“内脂素激动剂”包括但不限于通过任何机制部分或完全增加内脂素蛋白活性的分子。内脂素激动剂可为能直接或间接地大幅增加或促进内脂素介导的信号转导的分子。内脂素激动剂还可为能直接或间接地大幅增加或促进内脂素蛋白的酶活性，如催化烟酰胺和5-磷酸核糖-1-焦磷酸酯缩合生成烟酰胺单核苷酸的分子。例如，内脂素激动剂可增加含有如SEQ ID N0:2、SEQ ID NO:4, SEQ ID N0:6或SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的内脂素蛋白，或由细胞产生的这些蛋白同系物的活性。特别地，当患者(皮肤)细胞或组织中存在的内脂素蛋白分子相对于一些初始状态增加了数量，内脂素激动剂可增加患者(皮肤)细胞或组织的内脂素的活性。因此，内脂素激动剂可包括如SEQID N0:2、SEQ ID NO:4, SEQ ID N0:6或SEQ ID NO:7所示氨基酸序列，或已经递送到到细胞或组织的这些序列的同系物。
[0054]内脂素激动剂还可通过其它的机制发挥作用，包括例如通过重组的基因活化，制备组成型活化或诱导性活化的基因组或编码内脂素激动剂的DNA(如基因敲入(knock-1n)、启动子劫持(hijacking)或其它基因方法)。
[0055]用于本发明方法的内脂素激动剂，如化合物或分子，可包括例如小的有机分子、肽链(如蛋白)、抗体、抗体片段、多核苷酸或这些的组合。[0056]用于本发明方法的激动剂还可以是核酸分子。或者，多核苷酸分子，如编码内脂素激动剂(如肽链)或具有内脂素激动剂功能的双链和单链质粒DNA载体、人工染色体或线性核酸或其它载体可用于本发明方法中，用于给患者施用激动剂。
[0057]本申请中所使用的术语“内脂素拮抗剂”包括但不限于通过任何机制部分或完全抑制内脂素蛋白活性的分子。内脂素拮抗剂可为能直接或间接地大幅抵消、降低或抑制内脂素介导的信号转导的分子。内脂素拮抗剂还可为能直接或间接地大幅抵消、降低或抑制内脂素蛋白的酶活性，如催化烟酰胺和5-磷酸核糖-1-焦磷酸酯缩合生成烟酰胺单核苷酸的分子。例如，内脂素拮抗剂可部分或完全抑制由细胞产生的含有如SEQ ID NO:2,SEQ IDNO:4, SEQ ID N0:6或SEQ ID N0:7所示氨基酸序列的内脂素蛋白或由细胞产生的这些蛋白同系物的活性。
[0058]用于本发明方法的内脂素拮抗剂，如化合物或分子，可包括例如小的有机分子、肽链(如蛋白)、抗体、抗体片段、多核苷酸或这些的组合。
[0059]重要的是，内脂素拮抗剂可通过如RNA干扰而抑制内脂素蛋白的表达。内脂素拮抗剂还可通过其它的机制发挥作用，包括例如通过重组而基因失活使得基因组DNA(如基因敲除、启动子劫持或其它突变的方法)失活和使用反义RNA的基因转录失活。
[0060]用于本发明方法的拮抗剂还可以是核酸分子。所述的核酸分子可干扰核酸分子如短干扰RNA，或作为内脂素活性拮抗剂的反义分子。或者，多核苷酸分子，如编码拮抗剂(如肽链或RNA)或具有拮抗剂功能的双链和单链质粒DNA载体、人工染色体或线性核酸或其它载体可用于本发明方法中，用于给患者施用拮抗剂。
[0061]内脂素活性剂还可被称为内脂素调节剂。
[0062]本申请中所使用的术语“传送肽”包括但不限于，施用含活性剂和传送肽的组合物后，将活性剂传送至患者的组织或增加这种传送的肽链。可通过比较当含活性剂和传送肽的组合物施用于患者组织时的其组织中活性剂的数量或生物效应量，以及当含活性剂却不含传送肽的组合物施用时活性 剂的数量或生物效应量，评价活性剂至患者组织中的传送。传送肽可为例如阳离子、亲脂性肽链。所述肽链可包含在特定PH条件下带正电荷的侧链基团，或者被偶合到在特定条件下带正电荷的化学基团或组合物(如离子交换树脂)。所述的肽链还可包含亲脂性部分或疏水性化学基团。所述的亲脂性部分可共价结合到脂类基团，如脂肪、蜡和包括脂肪酸、甘油三酯、胆固醇、脂溶性维生素等的固醇类。所述的阳离子、亲脂性肽链的一个实例为含有如SEQ ID N0:27所示氨基酸序列的氨基末端豆蘧酰化的肽。传送肽还可以形成胶粒或其它结构从而传送活性剂或增强活性剂传送至患者组织。传送肽还可以是载体，其可化学偶合到活性剂或与活性剂机械结合(如通过封装)将活性剂传送至患者组织。所述作为载体的传送肽可包含细胞器靶向信号、被胞饮的分子等。
[0063]本申请中所使用的术语“siRNA”包括但不限于介导靶基因转录本裂解的短干扰核酸序列。短干扰RNA(SiRNA)可为双链或短发夹类型。双链siRNA可包含两条单独的、反向平行的退火RNA链或含有RNA和DNA的退火核酸链(如V -ttttuuuu-3 ,退火到5' -ttttuuuu-3'或 5' -tttt-3'退火到 5' -uuuu-3')。通常，双链 siRNA 含有两条彼此杂交的18~21个核苷酸的单核酸链,而且16~19个RNA核苷酸位于每条链的5'末端，两个“tt”DNA核苷酸位于每条链的3'末端。短发夹类型的siRNA可由能形成茎环结构或其它起siRNA作用的二级结构的RNA单链或RNA = DNA杂合单链组成。本领域技术人员应当承认，siRNA可包含其它修饰，如核苷酸类似物、骨架修饰和其它仍可以使修饰的siRNA核酸介导靶基因转录本裂解的修饰。
[0064]本申请中所使用的术语“皮脂生产过剩病症”包括但不限于，患者生产大量的皮脂而引起的病理性病症或不良病症。所述皮脂生产过剩病症的实例包括但不限于痤疮、脂溢出症、脂溢性皮炎、皮脂腺囊肿和皮脂腺增生以及相关的病症。至于痤疮的相关病症可包括例如寻常性痤疮、人工痤疮、溴痤疮、恶病质痤疮、睑缘痤疮、化妆品痤疮、囊肿性痤疮、暴发性痤疮、全身性痤疮、卤素痤疮、肥厚性痤疮、碘痤疮、药物性痤疮、初生儿痤疮、香膏剂痤疮、红斑性痤疮、脓疱性痤疮、酒糟鼻痤疮、类固醇痤疮、氯痤疮，热带痤疮、坏死性痤疮和荨麻疹痤疮。
[0065]本申请中所使用的术语“患者”包括但不限于属于表明进行皮脂生产过剩的病症、皮脂生产缺陷的病症、皮脂生产增加或皮脂生产减低的治疗的任何物种的动物。该患者的实例为人类，如人类患者。
[0066]本申请中所使用的术语“施用”包括但不限于给患者的至少一个组织，如皮肤提供组合物。所述的组合物可体内或体外施用于患者。将组合物体外施用于患者的组织时，组织的一部分如血液或骨髓被从患者身体中移除并与提供的组合物进行接触，然后将与该组合物接触后的一部分组织返回到患者身体中。局部施用和皮下施用为体内施用的形式。
[0067]本申请中所使用的术语“治疗有效量”包括但不限于在给定的患者个体中产生响应从而改善或治疗患者的皮脂生产过剩病症、皮脂生产缺陷病症、皮脂生产增加或皮脂生产减低症状中一个或多个的组合物的那些剂量。例如，组合物的治疗有效量可以是改善或治疗痤疮如寻常型痤疮症状的活性剂剂量，如内脂素活性剂的剂量。通过本领域技术人员公知的临床方法(如剂量响应图)可轻易确定适合个体患者的治疗有效量或剂量。所述的剂量可包括例如每千克患者体重lxl0_12g~100g的内脂素激动剂或内脂素拮抗剂。
[0068]本领域普通技术人员可通过组织学、H&E染色、角蛋白14染色或免疫化学或通过观察脓肿形成和通过其它本领`域普通技术人员易于实施的常规实验确定组合物的有效量。
[0069]本领域技术人员还可通过仅观察或测定治疗前和治疗适当时间后被病症影响区域的改变，确认有效量的组合物已经施用于患者。本发明的组合物可包含这些组合物的治疗有效量的组分。
[0070]在本发明的方法中，将治疗有效量的活性剂(如内脂素活性剂)或含有它的药物组合物施用于需要其的患者。可通过以溶液、膏剂、凝胶剂、乳膏形式局部应用或任何局部应用(如皮下注射)施用该组合物。该活性剂可以是药物组合物的形式，并可以通过药物洗脱装置，如纱布、膏药、纱布块、海绵施用。
[0071]应以必要的频率和必要长的时间施用组合物，以治疗如上所示的患者皮脂生产过剩病症、皮脂生产缺陷病症，或使患者皮脂生产增加或皮脂生产减低，从而达到所期望的终点，如直到病症如痤疮彻底解决。本领域普通技术人员根据本发明的组合物和方法即可轻易确定适合的疗程。
[0072]本申请中所使用的术语“皮脂生产缺陷病症”包括但不限于患者生产少量的皮脂而引起的病理性病症或不良病症。所述的皮脂生产缺陷病症的实例包括与皲裂、皮炎、牛皮癣、糖尿病、肾衰竭、肾移植、血液透析、维生素A缺乏症和口角炎有关的干燥症(干性皮肤)。
[0073]本申请中所使用的术语“药物洗脱支架”包括但不限于能释放生理活性分子的固定材料。药物洗脱支架可包含不可溶、可溶、非生物可吸收或生物可吸收的固相材料。
[0074]本申请中所使用的术语“同系物”包括但不限于与参考序列具有85%~100%序列一致性的蛋白序列。例如，SEQ ID N0:2所示的人内脂素蛋白的同系物可包括氨基酸序列与SEQ ID NO: 2具有90%~100%序列一致性的那些蛋白。两个蛋白之间的一致性百分比可通过使用 AlignX module of Vector NTI v.9.0.0 (Invitrogen Corp., Carslbad, CA)的默认设置进行双序列比对确定。
[0075]本申请中所使用的术语“肽链”包括但不限于含有通过肽键连接至少两个氨基酸残基形成链的分子。多于50个氨基酸的大肽链可被称为“多肽”或“蛋白质”。小于50个氨基酸的小肽链可被称为“肽”。
[0076]本申请中所使用的术语“药用载体”包括但不限于一种或多种可兼容的固体或液体填料稀释剂或适合施用于人类或其它动物的封装物质。
[0077]合适的药用载体的实例包括水、凡士林、石蜡油、矿物油、植物油、动物油、有机和无机蜡如微晶质、石蜡和地蜡，天然聚合物如黄原胶、麦芽、滑石、明胶、蔗糖、纤维素、胶原、淀粉或阿拉伯胶，合成聚合物、醇类、多元醇、磷酸盐缓冲液、可可油、乳化剂、洗涤剂如TWEENs?等。载体可为基本上可在水中混合的水可混合载体组合物，如醇类。水可混合局部药用载体可包括由上述一种或多种成分制备的那些载体，还可包括维持或延迟释放载体，包括含水、水可分散或水溶性组合物如脂质体、微海绵、微球或微胶囊、基于水的软膏、油包水或水包油乳剂、凝胶等。本领域普通技术人员还会识别出其它的药用载体。
[0078]其它可相容的药物活性剂和添加剂可包括在药用载体中用于本发明的组合物。例如，本发明的组合物可含有用于治疗痤疮的药物，如抗生素、异维甲酸、维生素A衍生物、过氧化苯甲酰和抗雄性激素。在药用载体中还可包括局部麻醉剂，如N0V0CAINE?、利多卡因或其它。在药用载体中还可包括佐剂。在药用载体中也可包括添加剂，如苯甲醇和其它防腐剂。本领域普通技术人员会轻易识别出其它适合包含在本发明组合物中的药用活性剂和添加剂。
[0079]可重组表达内脂素激动剂。`可通过本领域技术人员公知的常规技术将重组DNA转化到宿主细胞中进行重组表达。宿主细胞可以是原核、古细菌或真核细胞。可通过公知的技术分离和纯化重组表达的多肽如重组内脂素蛋白，包括如制备色谱和使用特异性地结合给定多肽的抗体或其它分子的亲和纯化。
[0080]可使用公用的方法，如α-氨基的t-B0C或FMOC保护以合成所述的蛋白质。这两种方法均涉及分步骤的合成，以此在从肽的羧基末端起始的每个步骤中加入单个氨基酸(Coligan 等人，Current Protocols in Immunology, Wiley Interscience, 1991，Unit9)。本发明的肽和可通过公知的固相肽合成方法合成，其描述于Merrifield (85J.Am.Chem.Soc.2149 (1962)), Stewart 和 Young 的 Solid Phase Peptides Synthesis, (Freeman, SanFrancisco, 1969, pp.27-62)，并使用含0.1-1.0mMol胺/g的(苯乙烯-二乙烯苯)共聚物。化学合成后，通过用液体HF-10%苯甲醚于0°C处理1/4~I小时，使所述肽脱保护并与聚合物分开。试剂蒸发后，用1%乙酸溶液从聚合物中萃取肽，将其冻干后获得粗原料。通常，可通过用5%乙酸作为溶剂在葡聚糖凝胶(SephadeX)G-15上进行凝胶过滤这样的方法进行纯化。对层析柱的合适流分(fraction)进行冻干获得均相的(homogeneous)肽或肽衍生物，然后，可通过氨基酸分子、薄层层析、高效液相色谱、紫外吸收光谱、摩尔旋光度和基于溶解度的方法这些标准的方法进行表征。
[0081]还可通过任何生物学方法合成肽，如在哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母和细菌以及无细胞系统如体外(试管中)转录和翻译系统重组表达蛋白质。可通过已被大家接受的方法对每个系统的蛋白表达进行优化。可通过标准的方法对蛋白进行纯化(Frederich M.Ausubel 等人，Current Protocols in Molecular Biology, WileyInterscience, 1989)。例如，可在细菌中以GST-融合蛋白的形式表达蛋白，并通过如(Erangionic and Neel, Analytical Biochemistry, 210:179，1993)所述的谷胱甘妝琼脂糖微球(Sigma)进行纯化。可选地，可在哺乳动物中以分泌产物的形式表达蛋白，并从条件培养基中纯化(Cadena 和 Gill, Protein Expression and Purification^:: 177，1993)。根据Merrifield的方法制备的肽可使用自动肽合成器如Applied Biosystems431A-01Peptide Synthesizer (Mountain View, Calif.)进行合成，或使用 Houghten, Proc.Natl.Acad.Sc1.,USA82:5131 (1985)中所述的肽合成方法指南进行合成。还可通过共价修饰、液-相肽合成或任何其它本领域普通技术人员知晓的方法进行合成。
[0082]可使用氨基酸或氨基酸类似物合成肽，必要时，可使用如叔丁氧羰基(t-B0C)或芴甲氧羰基(FMOC)对其活性基团进行保护。氨基酸或氨基酸类似物可市售获得(SigmaChemical C0.;Advanced Chemtec)或通过本领域公知的方法合成。
[0083]本申请中公开的肽的氨基酸可通过一个或多个如示例肽中所示的特定氨基酸的取代进行修饰。氨基酸取代的改变可包括用一个碱性氨基酸取代另一个碱性氨基酸、一个疏水性氨基酸取代另一个疏水性氨基酸或其它保守的取代。氨基酸取代还可包括使用非天然的氨基酸，如鸟氨酸(Orn)或高精氨酸(homoArg)取代Arg。
[0084]还可通过共价吸附其它分子或肽中的功能基团反应对肽进行修饰。这种修饰的实例包括连接聚乙二醇分子、脂类、碳水化合物或其它分子。这种修饰的具体实例为豆蘧酰化，如氨基末端的豆蘧酰化。肽的共价修饰方法是本领域公知的，而且本领域普通技术人员可识别许多这样的方法。
`[0085]本申请中所使用的术语“标准状态”包括但不限25°C +/_2°C的温度和I个大气压的压强。本申请所述的并以单位体积计(如mol/L、M、单位/ml、μ g/ml等)或以相对于组合物总重的重量百分比计的溶液、悬浮液和其它制剂的浓度是在标准状态下测定的。本领域中，术语标准状态不用于指代单个技术认可的温度或压强状态，而是指代详细指明温度和压强的参比状态，其用于在参比标准状态条件下描述含有特定组合物的溶液、悬浮液或其它制剂。溶液的体积可部分地随温度和压强而变。本领域技术人员可确认与本申请所公开的组合物等同的组合物可在其它的温度和压强下制备。
[0086]适于本申请中公开的方法中施用的组合物可以是溶液、软膏剂、乳剂、乳膏、凝胶剂、颗粒剂、膜剂和膏剂的形式。本领域技术人员可确认适合将本申请的组合物施用于患者的其它剂型。
[0087]本申请的一个方面提供了一种组合物，其含有内脂素活性剂和药用载体。
[0088]在本申请组合物的一个实施方案中，其还含有传送肽。
[0089]在本申请组合物的另一个实施方案中，其中内脂素活性剂为内脂素激动剂。
[0090]在本申请组合物的另一个实施方案中，其含有约0.001~约10wt%的内脂素激动剂。[0091]在本申请组合物的另一个实施方案中，其含有约lwt%的内脂素激动剂、约95wt%的水、约0.2wt%的褐煤蜡、约0.2wt%的蜂蜡、约0.2wt%的山梨醇、约0.2wt%的乳木果油、约lwt%的琉璃苣油、约lwt%的金盖花油、0.2wt%的金缕梅提取物和约0.lwt%的蓖麻油。
[0092]在本申请组合物的另一个实施方案中，其中，所述的内脂素激动剂含有至少一种选自下组的氨基酸序列:SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 6 和 SEQ ID NO: 8。
[0093]在本申请组合物的另一个实施方案中，其中，所述的内脂素激动剂含有SEQ IDNO:2所示的氨基酸序列。
[0094]在本申请组合物的另一个实施方案中，其为乳膏。
[0095]本申请的另一个方面提供一种组合物，其中，所述的内脂素活性剂为内脂素拮抗剂，并且传送肽为具有如SEQ ID N0:27所示氨基酸序列的氨基末端豆蘧酰化的肽。
[0096]在本申请组合物的另一个实施方案中，其中，所述的内脂素拮抗剂为至少一种靶向编码蛋白的核酸的siRNA，该蛋白含有选自下组的序列:SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQID NO:6 和 SEQ ID NO:8。
[0097]重要的是，所述的siRNA可靶向选自下组的核酸:SEQ ID NO: USEQ ID NO:3,SEQID NO:5 和 SEQ ID NO:9。
[0098]双链类型的siRNA，包括短发夹siRNA，可用下述法则进行构建。通常，siRNA靶向的序列长度为21个核苷酸，并应该避免起始密码子和终止(停止)密码子的50~100个碱基对以内的区域，避免内含子区域，避免4个或多个碱基的拉伸(5' -aaaa-3 /、
-cccc-3/等)，避免GC含量在30%~60%之间的区域，避免重复序列，避免低复杂度序列，避免单核苷酸多态性位点。候选的siRNA靶向序列满足这些标准就可以设计。应当对候选的siRNA进行基于BLAST算法的同源性搜索，如基于BLAST算法的搜索来鉴定与其它基因序列无同源性或者仅有较低同源性的`候选序列。这样有助于避免脱靶效应。应该构建每个候选siRNA的阴性对照RNA类型，其中候选siRNA的核酸序列是杂乱的。阴性对照RNA应该具有与siRNA相同的长度和核苷酸组成，但与siRNA至少具有4~5个碱基的错配。可以通过基于BLAST算法的搜索来确认阴性对照RNA与其它基因无同源性。候选的siRNA，如作为内脂素拮抗剂的siRNA，可在条件受控的试验中确认为siRNA，如果可以在体内(活体中)或体外(试管中)减少靶基因转录本的水平，或相对于阴性对照RNA减少了靶基因编码的蛋白的水平。
[0099]还可通过Dharmacon算法、Ambion算法或本领域普通技术人员公知的其它siRNA设计算法构建siRNA。所述的算法可轻易地通过因特网或市售的软件包获得。可选地，以往已经鉴定的siRNA可用于本申请的方法中或包含于本发明的组合物中。
[0100]在本申请组合物的另一个实施方案中，其含有至少一种选自下组的siRNA:第一siRNA、第二 siRNA、第三siRNA和第四siRNA ;其中，所述的第一 siRNA为含有SEQ ID NO: 19和SEQ ID NO: 20所示序列的双链核酸，第二 siRNA为含有SEQ ID NO: 21和SEQ ID NO: 22所示序列的双链核酸，第三siRNA为含有SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24所示序列的双链核酸，第四siRNA为含有SEQ ID N0:25和SEQ ID NO:26所示序列的双链核酸。
[0101]在本申请组合物的另一个实施方案中，其含有至少一种选自下组的siRNA:第一siRNA、第二 siRNA和第三siRNA ;其中，所述的第一 siRNA为含有SEQ ID NO:9和SEQ IDNO: 10所示序列的双链核酸，第二 siRNA为含有SEQ ID NO: 13和SEQ ID NO: 14所示序列的双链核酸，第三siRNA为含有SEQ ID NO: 17和SEQ ID NO: 18所示序列的双链核酸。
[0102]在本申请组合物的另一个实施方案中，其还含有水性载体和DMSO。
[0103]所述的水性载体的实例包括蒸馏水、缓冲溶液如PBS和含水凝胶。
[0104]本申请的另一个方面提供一种治疗患者皮脂生产过剩病症的方法，其包括给皮脂生产过剩病症患者施用治疗有效量的内脂素拮抗剂或含有内脂素拮抗剂的药物组合物；以此治疗皮脂生产过剩病症。
[0105]在本申请方法的另一个实施方案中，其中，所述的皮脂生产过剩病症选自下组:痤疮、脂溢出症、脂溢性皮炎、皮脂腺囊肿和皮脂腺增生。
[0106]在本申请方法的其它实施方案中，其中，所述的内脂素拮抗剂含有至少一种靶向编码蛋白的核酸的siRNA，所述蛋白含有选自下组的序列:SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQID NO:6 和 SEQ ID NO:8。
[0107]在本申请方法的其它实施方案中，其中，所述的siRNA为至少一种选自下组的siRNA:第一 siRNA、第二 siRNA、第三siRNA和第四siRNA ;其中，所述的第一 siRNA为含有SEQ ID NO: 19和SEQ ID NO: 20所示序列的双链核酸，第二 siRNA为含有SEQ ID NO: 21和SEQ ID NO:22所示序列的双链核酸，第三siRNA为含有SEQ ID N0:23和SEQ ID N0:24所示序列的双链核酸，第四siRNA为含有SEQ ID N0:25和SEQ ID NO:26所示序列的双链核酸。
[0108]在本申请方法的其它实施方案中，其中，所述的siRNA为至少一种选自下组的siRNA:第一 siRNA、第二 siRNA和第三siRNA ;其中，所述的第一 siRNA为含有SEQ ID NO: 9和SEQ ID NO: 10所示序列的双链核酸，第二 siRNA为含有SEQ ID NO: 13和SEQ ID NO: 14所示序列的双链核酸，第三siRNA为含有SEQ ID NO: 17和SEQ ID NO: 18所示序列的双链 核酸。
[0109]在本申请方法的其它实施方案中，其中，所述的内脂素拮抗剂含有至少一种选自FK-866和AP0866的化合物。
[0110]FK-866为一种内脂素拮抗剂，也被称为K22.175或N-[4_(l-苯甲酰基_4_哌啶基)丁基]-3- (3-吡啶基)-2E-丙烯酰胺，是一种内脂素高特异性的非竞争性抑制剂，其引起NAD+的逐渐消耗。FK-866的分子式为C24H29N3O2,分子量为391.5。FK-866可从CaymenChemical, Ann Arbor, MI, USA获得。FK-866的结构如下所不,但FK-866分子还可包括这一
结构的衍生物。
[0111]
【权利要求】
1.一种药物组合物，其含有内脂素活性剂和药用载体，其中所述的内脂素活性剂为内脂素激动剂。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其还含有传送肽。
3.如权利要求2所述的药物组合物，其含有约0.001wt%~约10wt%的内脂素激动剂。
4.如权利要求3所述的药物组合物，其含有约lwt%的内脂素激动剂、约95wt%的水、约0.2wt%的褐煤蜡、约0.2wt%的蜂蜡、约0.2wt%的山梨醇、约0.2wt%的乳木果油、约lwt%的琉璃苣油、约lwt%的金盏花油、约0.2wt%的金缕梅提取物和约0.lwt%的蓖麻油。
5.如权利要求4所述的药物组合物，其中，所述的内脂素激动剂含有至少一种选择下组的氨基酸序列:SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6 和 SEQ ID NO:8。
6.如权利要求5所述的药物组合物，其中，所述的内脂素激动剂含有SEQID NO:2所示的氨基酸序列。
7.如权利要求6所述的药物组合物，其为乳膏。
8.内脂素激动剂或含有内脂素激动剂的药物组合物在制备用于治疗患者皮脂生产缺陷病症的药物中的用途。
9.如权利要求8所述的用途，其中，所述的皮脂生产缺陷病症为与选自皲裂、皮炎、牛皮癣、糖尿病、肾衰竭、肾移植、血液透析、维生素A缺乏症和口角炎中的至少一种有关的干燥症。
10.如权利要求8所述的用途，其中，所述的内脂素激动剂含有至少一种选自下组的氨基酸序列:SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6 和 SEQ ID NO:8。
11.如权利要求10所述的用途，其中，所述的内脂素激动剂组合物含有SEQID NO:2所示的氨基酸序列。
12.如权利要求8所述的用途，其中，含有内脂素激动剂的药物组合物为权利要求3~7任一项所述的药物组合物。
13.一种增加患者皮脂生产的方法，其包括给患者皮肤施用治疗有效量的内脂素激动剂或含有内脂素激动剂的药物组合物；以此增加患者的皮脂生产。
14.如权利要求13所述的用途，其中，所述内脂素激动剂采用局部施用或皮内施用。
15.如权利要求14所述的用途，其中，所述的内脂素激动剂含有至少一种选自下组的氨基酸序列:SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6 和 SEQ ID NO:8。
16.如权利要求15所述的用途，其中，所述的内脂素激动剂含有SEQID NO:2所示的氨基酸序列。
17.如权利要求13所述 用途，其中，所述的含有内脂素激动剂的药物组合物为权利要求3~7任一项所述的药物组合物。
18.含有至少一种选自下述氨基酸序列的内脂素激动剂在制备治疗与选自皲裂、皮炎、牛皮癣、糖尿病、肾衰竭、肾移植、血液透析、维生素A缺乏症和口角炎中的至少一种有关的干燥症的药物中的应用:SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6 和 SEQ ID NO:8。
【文档编号】A61K38/00GK103800903SQ201310291486
【公开日】2014年5月21日 申请日期:2010年1月6日 优先权日:2009年2月24日
【发明者】他玛·特南鲍姆, 罗拉·布赖曼-维克斯曼, 雷威托·曼迪尔-莱文 申请人:希尔洛有限公司