一种过敏性哮喘的组合物及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种过敏性哮喘的组合物及其制备方法，其各组成成分及所占比例为：人参抽出浓缩液粉末10％，五加皮抽出浓缩液粉末10％，榆根皮抽出浓缩液粉末10％，枳椇子抽出浓缩液粉末10％，葛根抽出浓缩液粉末10％，桔梗抽出浓缩液粉末50％。该过敏性哮喘的组合物有效抑制支气管哮喘的气道炎症。
【专利说明】一种过敏性哮喘的组合物及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于医药【技术领域】，涉及一种过敏性哮喘的组合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002]过敏性哮喘(哮喘)是严重威胁人类健康的慢性免疫变态反应性疾病，近年来其发病率在全球迅速增长，占哮喘疾病总人数的2/3，近80%儿童和成人哮喘为过敏性哮喘，已成为最常见的慢性呼吸道疾病。在我国40多个大中城市，对40万儿童进行的大规模调查中发现，儿童哮喘的发病率与10年前相比增加了 2.6倍，达到2.05%。WHO报道，预测到2025年还将出现I亿例新的哮喘病患者，哮喘病将带给各国政府、家庭及患者十分沉重的负担，已成为全球关注的公众健康问题。
[0003]哮喘是由嗜酸性粒细胞、肥大细胞等多种炎症细胞参与的以气道高反应性和慢性气道炎症为特征的免疫变态反应性疾病。一直以来在哮喘病的治疗方法中有一个误区，就是对症不对因，在治疗的时候通常都是用一些抗过敏的激素类的药物，糖皮质激素不论对慢性哮喘还是急性哮喘发作都是最有效的治疗药物，已成为防治哮喘的一线药物。据研究发现，具有诱导嗜酸性粒细胞凋亡，抑制肺成纤维细胞合成IL-6，抑制平滑肌释放IL-8和嗜酸性粒细胞活化趋化因子，抑制上皮细胞释放GM-CSF及T细胞增生等的作用。糖皮质激素作为治疗哮喘的主要药物，长期反复使用可引起耐药性和严重的副作用。因此，有必要研究哮喘的发病机理，寻求无耐药性和严重副作用的标本兼治哮喘防治新方法。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于克服上述技术存在的缺陷，提供一种过敏性哮喘的组合物及其制备方法。
[0005]其具体技术方案为 :
[0006]一种过敏性哮喘的组合物，其各组成成分及所占比例为:人参抽出浓缩液粉末10%，五加皮抽出浓缩液粉末10%，榆根皮抽出浓缩液粉末10%，枳犋子抽出浓缩液粉末10%，葛根抽出浓缩液粉末10%，桔梗抽出浓缩液粉末50%。
[0007]—种本发明所述的过敏性哮喘的组合物的制备方法，包括以下步骤:1)将权利要求I所述原材料按照其所述质量百分含量放入提取用过滤器中；
[0008]2)将过滤器注入提取机械中再加入10倍的纯净水；
[0009]3)在110°C温度下进行第一次提取24h ；
[0010]4)将第一次提取物加压过滤后进行第二次提取；
[0011]5)第二次提取时原料中注入10倍的79%酒精；
[0012]6)在 100°C下提取 24h ；
[0013]7)将提取液真空浓缩至60_70brix ；
[0014]8)70°C 干燥；
[0015]9)粉碎；[0016]10)按比例混匀；
[0017]11)每粒胶囊中装入500mg ；
[0018]12)灌装；
[0019]13)装箱。
[0020]与现有技术相比，本发明的有益效果为:我们成功制作了支气管哮喘小鼠模型，发现哮喘模型组小鼠支气管肺泡灌洗液中炎症细胞总数和中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞计数较正常对照组明显升高，差异显著(P <0.05);哮喘组小鼠支气管肺泡灌洗液中IL-4、IL-5、TNF-a水平升高和IFN-Y水平降低，与正常对照组比较差异显著(P < 0.05)；哮喘模型组为哮喘组支气管管腔被粘液所堵塞，黏膜上皮增生，黏膜下层增宽，气道壁及气道平滑肌明显增厚，炎症细胞明显侵润(P <0.05):哮喘模型组支气管粘膜杯状细胞明显增生和增厚，一般呈粉红色(P < 0.05)。但是，我们发现过敏性哮喘的组合物分低、高剂量连续灌胃服用十天后，小鼠BALF中细胞总数和中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞计数较哮喘模型组明显降低，差异显著(P < 0.05);支气管肺泡灌洗液中细胞因子IL-4、IL-5、IL-13水平降低和IFN-Y水平升高，差异显著(P <0.05);光镜下观察HE染色，支气管管腔被粘液所堵塞、黏膜上皮增生、黏膜下层增宽、气道壁及气道平滑肌明显增厚、炎症细胞明显侵润等症状明显减轻(P < 0.05);光镜下观察和PAS (过碘酸雪夫)染色结果显示，支气管粘膜杯状细胞增生和增厚明显得到抑制，上述改变较哮喘组明显减轻(P <0.05)。表明，过敏性哮喘的组合物有效抑制支气管哮喘的气道炎症。
【专利附图】
【附图说明】
[0021]图1是支气管肺泡灌洗液中炎症细胞总数和各类炎症细胞的变化图，其中图1a是正常组，图1b是模型组，图1c是清气丸低剂量组，图1d是清气丸高剂量组；
[0022]图2是肺组织HE染 色(X 200)，其中图2a是正常组，图2b是模型组，图2c是清气丸低剂量组，图2d是清气丸高剂量组；
[0023]图3是肺组织PAS染色(X 200)，其中图3a是正常组，图3b是模型组，图3c是清气丸低剂量组，图3d是清气丸高剂量组。
【具体实施方式】
[0024]下面结合附图和具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细地说明
[0025]1.哮喘模型的复制
[0026]无特异病原体影响的6?8周龄雄性BALB/c小鼠40只(延边大学实验动物中心提供)，体重18?22g,随机分为四组:正常组(η = 10);模型组(η = 10);清气丸低剂量组(η = 10);清气丸高剂量组(η = 10)。正常组不给任何刺激。哮喘模型组小鼠第1、14天，用20g鸡卵清蛋白(OVA)和2.25氢氧化铝溶入200ul生理盐水中腹腔注射致敏，第21、22、23天连续3天3 %的OVA生理盐水溶液雾化吸入激发哮喘。对照组用生理盐水代替3 %的OVA生理盐水溶液雾化吸入。清气丸低、高剂量组在3%的OVA生理盐水溶液雾化吸入前一天按200、400mg/kg/d灌胃，共计11天。末次激发24h后处死小鼠，剪开颈部皮肤，并于气管正中处剪一小口，插入气管套管。以磷酸盐缓冲液ImL行支气管肺泡灌洗，来回冲洗3次，收集BALF。混匀BALF，取其中50 μ L加入等量的细胞计数液，用细胞计数板计数细胞。余液4°C、3000r/min离心lOmin，取上清液，_80°C低温保存，待测细胞因子。沉淀涂片，高倍镜下观察嗜酸性粒细胞、中性粒细胞及淋巴细胞分类。取右肺下叶，放入液氮中速冻，_80°C保存。
[0027]2.检测末梢血液和支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)内哮喘特异性指标的变化
[0028]①BALF采取方法:麻醉处死并取血后的小鼠，沿正中线切开颈胸部，并剥离气管周围的肌组织，暴露气管颈段切开，将细静脉管插入气管中，注入Iml的生理盐水溶液，然后回抽，取得BALF。取得的BALF在200 X g，4°C下离心10分钟，分离上清液，保存在_20°C。余下细胞用适量的生理盐水溶液再悬浮，然后进行细胞涂片使细胞沉淀在载玻片上。
[0029]②细胞染色及细胞因子的测定:载玻片上涂抹的血液细胞和BALF的细胞用Diff-quik染色，在100倍光学纤维镜下，每只小鼠随机抽取载玻片，取10个视野记录每平方毫米内的细胞数(n/mm2)，用均数土标准差表示，在100倍的倍率下摄片。利用ELISA Kit测定细胞因子IFN- Y、Th2细胞因子(IL-4、IL_5、IL-13等)和炎症活性物质。
[0030]3.组织学观察
[0031]小鼠处死后，取出肺置于10%的甲醛溶液中固定，然后常规脱水、石蜡包埋、切片(厚度4?5 μ m)，进行组织化学染色、观察肺部炎症。肺组织炎症病理学分级评分标准:
[0032]O分:周围血管和支气管无细胞浸润，无水肿，无上皮细胞损伤。
[0033]I分:周围血管和支气管轻度炎症细胞浸润、无组织损伤，轻度水肿，上皮细胞轻度损伤。
[0034]2分:周围血管和支气管轻-中度炎症细胞浸润、轻度组织损伤，中度肺泡和细支气管水肿，上皮细胞轻度损伤 。
[0035]3分:周围血管和支气管中度炎症细胞浸润、轻度组织损伤，区域性合病灶性水肿，上皮细胞中度损伤。
[0036]4分:周围血管和支气管中-重度炎症细胞浸润、明显组织损伤，明显水肿，上皮细胞中度损伤。
[0037]5分:周围血管和支气管重度炎症细胞浸润、明显组织损伤，肺炎样水肿，上皮细胞变形。
[0038]本发明技术效果通过卵白蛋白致敏复制哮喘动物模型，采用灌胃方式给药用过敏性哮喘的组合物来干预治疗模型小鼠的气道炎症。结果提示过敏性哮喘的组合物灌胃治疗能明显降低小鼠支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞的聚集和浸润，明显减轻肺组织局部的炎症，减轻气道炎症平滑肌增生及气道上皮下胶原沉积。
[0039]1、支气管肺泡灌洗液中炎症细胞的变化
[0040]正常对照组支气管肺泡灌洗液中炎症细胞总数和各类炎症细胞数非常的少见。支气管哮喘模型组小鼠支气管肺泡灌洗液中炎症细胞总数和中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞等炎症细胞计数较正常对照组明显升高，差异显著(P <0.05)。过敏性哮喘的组合物主要成分为人参、五加皮、榆根皮、枳犋子、葛根、桔梗等。人参具有镇静大脑、调节神经、刺激血管、促进代谢、恢复疲劳、增强肝脏解毒功能、改善骨髓造血能力、活跃内分泌系统、加强机体免疾反应等功效；五加皮有抗炎镇痛作用、抗应激作用、提高免疫、抗镉致突变作用、促进核酸合成等药理作用；枳犋子有显著的解酒、保肝、抗肝纤维化及抗衰老、抗疲劳等作用；葛根对冠心病、动脉硬化有较好的改善作用、可降低血压、增加脑血流量、增加冠脉血流量、对心肌有保护作用、有解痉、解热及降低血糖作用；桔梗具有祛痰、镇咳、抗炎、降血压、抗肿瘤、提高人体免疫力等广泛的药理活性。以上表明过敏性哮喘的组合物通过合理的配比都具有明显的抗炎作用，可有效抑制气道炎症。而过敏性哮喘的组合物低、高剂量组小鼠灌胃给予以后支气管肺泡灌洗液中炎症细胞总数和中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞等炎症细胞计数较哮喘模型组明显降低，差异显著(p<0.05)，见图1和表I。
[0041]从图1中我们可以看到哮喘模型组小鼠支气管肺泡灌洗液中炎症细胞总数和中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞计数较正常对照组明显升高，差异显著(P <0.05);而过敏性哮喘的组合物剂量组小鼠BALF中细胞总数和中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞计数较哮喘模型组明显降低，差异显著(P < 0.05)，见表I。
[0042]表I各组小鼠支气管肺泡灌洗液中炎症细胞总数和分类结果(X106/mL，7±s)
[0043]
【权利要求】
1.一种过敏性哮喘的组合物，其特征在于，其各组成成分及所占比例为:人参抽出浓缩液粉末10%，五加皮抽出浓缩液粉末10%，榆根皮抽出浓缩液粉末10%，枳犋子抽出浓缩液粉末10%，葛根抽出浓缩液粉末10%，桔梗抽出浓缩液粉末50%。
2.—种权利要求1所述的过敏性哮喘的组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: 1)将权利要求1所述原材料按照其所述质量百分含量放入提取用过滤器中； 2)将过滤器注入提取机械中再加入10倍的纯净水； 3)在110°C温度下进行第一次提取24h； 4)将第一次提取物加压过滤后进行第二次提取； 5)第二次提取时原料中注入10倍的79%酒精； 6)在100°C下提取24h； 7)将提取液真空浓缩至60-70brix； 8)70°C干燥； 9)粉碎； 10)按比例混匀； 11)每粒胶囊中装入500mg`； 12)灌装； 13)装箱。
【文档编号】A61P11/06GK103432230SQ201310355839
【公开日】2013年12月11日 申请日期:2013年8月13日 优先权日:2013年8月13日
【发明者】李官浩, 金炯国, 延光海, 汪庭瑞 申请人:李官浩