银杏提取物纳米脂质体在治疗妇科病中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及银杏提取物纳米脂质体在制备治疗妇科病的外用制剂中的用途。所述银杏提取物可通过化学分离方法，从银杏的叶、果、根茎等部位的提取物中得到。所述银杏提取物纳米脂质体，通过采用薄膜超声-高压均质法制备。含有银杏提取物纳米脂质体的治疗妇科病的药物、化妆品或消毒剂外用制剂，含银杏提取物纳米脂质体0.001－80%，以及药学上常用的外用制剂基质或可接受的载体；所述制剂是任何一种药剂学上所说的外用剂型。药理学研究和临床试用结果表明，本发明对多种妇科病具有显著的治疗作用，使用安全无副作用。
【专利说明】银杏提取物纳米脂质体在治疗妇科病中的应用
【技术领域】
[0001]本发明属于生物医药【技术领域】，具体涉及银杏提取物纳米脂质体在制备治疗妇科病的外用制剂中的用途。
【背景技术】
[0002]妇科病如滴虫性阴道炎、真菌性阴道炎、细菌性阴道炎、外阴瘙痒症、宫颈炎、宫颈糜烂等，是临床最常见的疾病之一，此类疾病持续时间长，易反复发作，给患者带来痛苦，严重影响患者的身心健康。目前治疗此类疾病多为抗微生物药，这些药物虽有一时效果，但停药后易复发，不能达到修复创面的作用；而且长期应用会引起诸多副作用。为了避免此类不良现象的发生，市场需要研制开发一种来源于天然、效果显著、无明显不良反应的治疗妇科病的外用制剂，以减轻患者痛苦。此类疾病患者众多，因此开发治疗此类疾病的外用制剂产品具有良好的临床应用前景，对患者是十分有益和必要的。
[0003]银杏是我国珍贵的药用植物，银杏的叶、果和外种皮等皆具有药用开发价值。据《本草纲目》记载，银杏性甘、苦、平、涩；有定喘止咳、止带浊、止痛之功；主治寒嗽痰喘、哮喘、小便频数、赤白带下、手足皲裂等。特别是近几十年来人们发现银杏叶中含有多种有效成分，主要有效成分为黄酮类和萜类内酯化合物，具有防治心脑血管疾病的功能。
[0004]纳米脂质体是将药物包封于类脂质双分子层所形成的超微球状载体制剂。近年来脂质体作为一种新型的药物载体，在皮肤外用制剂研究与应用方面得到了迅速的发展。纳米脂质体用作皮肤给药载体的特点为:兼容性，能增强药物的透皮作用；皮肤组织靶向性；缓释性；脂质体包封可提高药物溶解度和稳定性。纳米脂质体外用制剂具有高效、长效、安全、皮肤靶向作用强等优点。开发皮肤外用纳米脂质体制剂是改进皮肤用药的趋势，已成为外用药物和化妆品研究开发 的方向。
[0005]目前尚未见银杏提取物纳米脂质体在治疗妇科病中的应用的报道。因此，有关银杏提取物纳米脂质体外用制剂防治妇科病新型药物、化妆品、消毒剂的研究开发，以及对银杏资源的充分开发利用，将产生巨大的社会和经济效益。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是提供银杏提取物纳米脂质体的新用途，即银杏提取物纳米脂质体在制备防治妇科病的外用制剂中的用途。它具有疗效显著、使用安全的特点。
[0007]本发明的目的是这样实现的:
提供银杏提取物纳米脂质体在制备治疗妇科病的外用制剂中的用途。
[0008]所述妇科病为滴虫性阴道炎、真菌性阴道炎、细菌性阴道炎、外阴瘙痒症、宫颈炎、宫颈糜烂等。
[0009]所述银杏提取物通过化学分离方法，从银杏的叶、果、根茎等部位的提取物中得到，提取溶剂可为乙醇、水、乙醚、石油醚等有机溶剂；或对银杏叶、果、根茎提取加工产物在提取加工过程中剩余的废料中重新回收。[0010]所述银杏提取物纳米脂质体，通过采用薄膜超声-高压均质法制备。
[0011]还提供含有银杏提取物纳米脂质体的治疗妇科病的药物、消毒剂外用制剂，含有银杏提取物纳米脂质体0.001 - 80%,以及药学上常用的外用制剂基质或外用制剂可接受的载体。
[0012]更进一步的，含有银杏提取物纳米脂质体0.001 — 30%。
[0013]更进一步的，含有银杏提取物纳米脂质体0.5 — 20%。
[0014]按上述重量比范围取主药银杏提取物纳米脂质体、药学上常用的外用制剂基质或可接受的载体制备得到银杏提取物纳米脂质体外用制剂；以及包含银杏提取物纳米脂质体和任何物质组合用于治疗妇科病的药物、消毒剂外用制剂。所述制剂是任何一种药剂学上所说的外用剂型，为液体制剂、膏霜剂、凝胶剂、膜剂、洗剂、粉剂、气雾喷雾剂、栓剂、透皮吸收制剂。
[0015]本发明的有益效果是，药理学试验研究表明本发明对大鼠细菌性阴道炎、真菌性阴道炎、宫颈炎模型具有显著的治疗作用，并可抑制人乳头瘤病毒(HPV)感染细胞的增殖，具有抗HPV病毒感染的作用；更为重要的是，银杏提取物纳米脂质体作用显著优于银杏提取物对照组。局部刺激性实验研究表明本发明安全，无皮肤刺激、过敏等不良反应。临床多种妇科病患者试用结果表明，本发明对多种妇科病具有显著的治疗作用，有效率达100%，使用安全无副作用。
【具体实施方式】
[0016]下面结合实施例，对本发明作进一步地描述。
[0017]实施例1:
将白果去皮，放入组织捣碎机中粉碎。准确称取一定量经粉碎的白果，加入料液比为I:10 (W/V)的80%乙醇，在水浴温度60°C下，搅拌浸提2次，每次提取时间4小时。浸提结束后，离心(5000转/分，15分钟)，取上清液。用真空旋转蒸发仪浓缩上清液，条件为温度55°C，压强0.008-0.009MPa，减压浓缩，并于60°C真空干燥，得银杏提取物浸膏，性状为:浅黄色浸膏，溶于醇，不溶于水。
[0018]磷脂无水乙醇溶液，过滤；加入上述银杏提取物浸膏、维生素E，振摇均匀，置圆底烧瓶中，30°C水浴恒温旋转蒸发，减压成膜，使膜材在瓶壁上形成均匀的类脂薄膜，加入PBS缓冲液50°C下充分振荡水化，至壁上薄膜完全脱落，浸入50°C水浴中搅拌，于25°C水浴条件下超声5min, 200Hz每次5s,间歇5s ,至形成半透明略显乳光的池液。高压均质，100 Mpa压力下循环3次，过微孔滤膜，即得浅黄色透明胶体状银杏提取物纳米脂质体悬液。
[0019]酊剂的制备:取上述银杏提取物纳米脂质体悬液100ml，溶解于600ml 95%乙醇溶液中，再向其中加入丙二醇200ml搅拌，补95%乙醇溶液至足量1000 ml,即得淡黄色银杏提取物纳米脂质体酊剂1000 ml，银杏提取物纳米脂质体含量为10%。分装于50支小管中，每支20 ml 。
[0020]实施例2:
将白果去皮，放入组织捣碎机中粉碎。准确称取一定量经粉碎的白果，加入料液比为1:10(W/V)的蒸馏水，在水浴温度60°C下，搅拌浸提2次，每次提取时间4小时。浸提结束后，离心(5000转/分，15分钟)，取上清液。浓缩上清液，并于60°C真空干燥，得银杏提取物浸膏，性状为:浅黄色浸膏，溶于醇，不溶于水。
[0021]按实施例1银杏提取物纳米脂质体悬液制备工艺制备银杏提取物纳米脂质体悬液。
[0022]凝胶剂的制备:将卡波普IOg洒在500ml蒸馏水表面，溶胀过夜。称取甘油60g，丙二醇120ml，分别加入至溶胀好的卡波普中，迅速研磨均匀，得到透明的凝胶基质。取上述银杏提取物纳米脂质体悬液40ml，溶解于100ml 95%乙醇溶液中，缓慢加入至凝胶基质中，搅拌均匀。再缓慢加入三乙醇胺15ml，补蒸馏水至足量1000 g，即得淡黄色银杏提取物纳米脂质体凝胶1000 g，银杏提取物纳米脂质体含量为4%。分装于50支小管中，每支20g°
[0023]实施例3:
将白果去皮，放入组织捣碎机中粉碎。准确称取一定量经粉碎的白果，加入料液比为1:10 (W/V)的80%石油醚，在水浴温度60°C下，搅拌浸提2次，每次提取时间4小时。浸提结束后，离心(5000转/分，15分钟)，取上清液。用真空旋转蒸发仪浓缩上清液，条件为温度55°C，压强0.008-0.009MPa，减压浓缩，并于60°C真空干燥，得银杏提取物浸膏，性状为:浅黄色浸膏，溶于醇，不溶于水。
[0024]按实施例1银杏提取物纳米脂质体悬液制备工艺制备银杏提取物纳米脂质体悬液。
[0025]软膏剂的 制备:取上述银杏提取物纳米脂质体悬液5ml，溶解于100ml 95%乙醇溶液中，再向其中加入三乙醇胺50ml，加温至70°C。将石蜡300g、硬脂酸300g、丙二醇100ml分别加入搅拌融化，补蒸馏水至足量1000 g，搅拌均匀至膏状，即得淡黄色银杏提取物纳米脂质体软膏1000g，银杏提取物纳米脂质体含量为0.5%。分装于50支小管中，每支20 g0
[0026]实施例4:
将银杏叶剪碎，放入粉碎机中将其粉碎。准确称取一定量经粉碎的银杏叶，加入料液比为1:6 (W/V)的80%乙醇，在水浴温度60°C下，搅拌浸提2次，每次提取时间4小时。浸提结束后，离心(5000转/分，15分钟)，取上清液。用真空旋转蒸发仪浓缩上清液，条件为温度55°C，压强0.008-0.009MPa，减压浓缩，并于60°C真空干燥，得银杏提取物浸膏，性状为:浅黄色浸膏，溶于醇，不溶于水。
[0027]按实施例1银杏提取物纳米脂质体悬液制备工艺制备银杏提取物纳米脂质体悬液。
[0028]取上述银杏提取物纳米脂质体悬液20ml，按实施例3软膏剂制备工艺制备银杏提取物纳米脂质体软膏1000g，银杏提取物纳米脂质体含量为2%。分装于50支小管中，每支20 g0
[0029]实施例5:
将银杏叶剪碎，放入粉碎机中将其粉碎。准确称取一定量经粉碎的银杏叶，加入料液比为1:6 (W/V)的蒸馏水，在水浴温度60°C下，搅拌浸提2次，每次提取时间4小时。浸提结束后，离心(5000转/分，15分钟)，取上清液。浓缩上清液，于60°C真空干燥，得银杏提取物浸膏，性状为:浅黄色浸膏，溶于醇，不溶于水。
[0030]按实施例1银杏提取物纳米脂质体悬液制备工艺制备银杏提取物纳米脂质体悬液。[0031]取上述银杏提取物纳米脂质体悬液300ml，按实施例1酊剂制备工艺制备银杏提取物纳米脂质体酊剂1000 ml，银杏提取物纳米脂质体含量为30%。分装于50支小管中，每支 20 ml ο
[0032]实施例6:
将银杏叶剪碎，放入粉碎机中将其粉碎。准确称取一定量经粉碎的银杏叶，加入料液比为1:6 (W/V)的石油醚，在水浴温度60°C下，搅拌浸提2次，每次提取时间4小时。浸提结束后，离心(5000转/分，15分钟)，取上清液。用真空旋转蒸发仪浓缩上清液，条件为温度55°C，压强0.008-0.009MPa，减压浓缩，并于60°C真空干燥，得银杏提取物浸膏，性状为:浅黄色浸膏，溶于醇，不溶于水。
[0033]按实施例1银杏提取物纳米脂质体悬液制备工艺制备银杏提取物纳米脂质体悬液。
[0034]取上述银杏提取物纳米脂质体悬液200ml，按实施例2凝胶剂制备工艺制备银杏提取物纳米脂质体凝胶1000 g，银杏提取物纳米脂质体含量为20%。分装于50支小管中，每支20 g。
[0035]实施例7:
按实施例1银杏提取物浸膏制备工艺制备银杏提取物浸膏。
[0036]按实施例1银杏提取 物纳米脂质体悬液制备工艺制备银杏提取物纳米脂质体悬液。
[0037]取上述银杏提取物纳米脂质体悬液400ml，按实施例1酊剂制备工艺制备银杏提取物纳米脂质体酊剂1000 ml，银杏提取物纳米脂质体含量为40%。分装于50支小管中，每支 20 ml ο
[0038]实施例8:
按实施例2银杏提取物浸膏制备工艺制备银杏提取物浸膏。
[0039]按实施例1银杏提取物纳米脂质体悬液制备工艺制备银杏提取物纳米脂质体悬液。
[0040]取上述银杏提取物纳米脂质体悬液1ml，按实施例3软膏剂制备工艺制备银杏提取物纳米脂质体软膏1000g，银杏提取物纳米脂质体含量为0.1%。分装于50支小管中，每支 20 g。
[0041]实施例9:
按实施例4银杏提取物浸膏制备工艺制备银杏提取物浸膏。
[0042]按实施例1银杏提取物纳米脂质体悬液制备工艺制备银杏提取物纳米脂质体悬液。
[0043]取上述银杏提取物纳米脂质体悬液0.1ml，按实施例2凝胶剂制备工艺制备银杏提取物纳米脂质体凝胶1000 g，银杏提取物纳米脂质体含量为0.01%。分装于50支小管中，每支20 g。
[0044]实施例10:
按实施例5银杏提取物浸膏制备工艺制备银杏提取物浸膏。
[0045]按实施例1银杏提取物纳米脂质体悬液制备工艺制备银杏提取物纳米脂质体悬液。[0046]取上述银杏提取物纳米脂质体悬液IOml，按实施例2凝胶剂制备工艺制备银杏提取物纳米脂质体凝胶1000g，银杏提取物纳米脂质体含量为1%。分装于50支小管中，每支20 g0
[0047]用以上方法制成的银杏提取物纳米脂质体外用制剂，进行相关的药理、局部刺激性安全性评价实验和临床试用试验。下面是本发明的实验数据:
对大鼠细菌性阴道炎的治疗作用:体重200-250g的雌性大鼠，从阴道注入金黄色葡萄球菌(3X 105CFU/ml)和大肠杆菌(1.6X106CFU/ml)的混合菌液，菌液注入量为
0.05ml/100g体重，隔日再接种I次。第5天及第7天分别取阴道分泌物做镜检、细菌培养，并分别分离出金黄色葡萄球菌和大肠杆菌，再分别接种于培养基中，经培养后，做菌株鉴定。镜检及菌株鉴定均为阳性者为感染成功的大鼠。取感染成功的大鼠随机分为4组，模型对照组、银杏提取物对照组、本发明银杏提取物纳米脂质体组、氧氟沙星软膏组，每组10只。给药组各只大鼠阴道内分别注入相应药物，模型对照组各只大鼠阴道内注入生理盐水，每天I次，连续5天。停药后第I天和第4天取大鼠阴道分泌物进行鉴定，2次鉴定病原体均为阴性定为转阴。停药后第5天将大鼠解剖，取阴道标本进行肉眼观察；阴道标本按充血、水肿、出血3项指标进行评分:无充血、水肿、出血评O分；阴道粘膜尚平滑有轻度充血，评为I分；阴道粘膜尚平滑中度充血，可见点状出血点，评为2分；阴道粘膜不平滑，重度充血，可见大量出血点，组织轻度水肿，评为3分。以模型对照组的分值定为100% (炎症程度)，药物组与模型对照组比较，可得出药物组炎症抑制率。用t检验对炎症评分进行统计，用X2检验对转阴率进行统计。结果表明(见表1)，本发明银杏提取物纳米脂质体凝胶对大鼠细菌性阴道炎具有显著的治疗作用，且作用显著优于氧氟沙星和银杏提取物外用制剂对照组。
[0048]表1.对大鼠细菌性阴道炎的治疗作用
【权利要求】
1.银杏提取物纳米脂质体在制备防治妇科病的外用制剂中的用途。
2.如权利要求1所述的用途，所述妇科病为滴虫性阴道炎、真菌性阴道炎、细菌性阴道炎、外阴瘙痒症、宫颈炎、宫颈糜烂。
3.如权利要求1所述的银杏提取物纳米脂质体，所述银杏提取物通过化学分离方法，从银杏的叶、果、根茎部位的提取物中得到，提取溶剂为乙醇、水、乙醚、石油醚有机溶剂；或对银杏叶、果、根茎提取加工产物在提取加工过程中剩余的废料中重新回收；所述银杏提取物纳米脂质体，通过采用薄膜超声-高压均质法制备。
4.如权利要求1所述的外用制剂，为含有银杏提取物纳米脂质体的治疗妇科病的药物、化妆品或消毒剂外用制剂；以及包含银杏提取物纳米脂质体和任何物质组合用于治疗妇科病的药物、化妆品或消毒剂外用制剂；其特征是，所述制剂是任何一种药剂学上所说的外用剂型，为液体制剂、膏霜剂、凝胶剂、粉剂、膜剂、洗剂、气雾喷雾剂、透皮吸收制剂、皮下注射剂。
5.如权利要求4所述的药物、化妆品或消毒剂外用制剂，其特征是，含有银杏提取物纳米脂质体0.0Ol — 80%O
6.如权利要求4所述的药物、化妆品或消毒剂外用制剂，其特征是，含有银杏提取物纳米脂质体0.001 — 30%O
7.如权利要 求4所述的药物、化妆品或消毒剂外用制剂，其特征是，含有银杏提取物纳米脂质体0.5 - 20%。
【文档编号】A61K9/127GK103751230SQ201310409369
【公开日】2014年4月30日 申请日期:2013年9月11日 优先权日:2013年9月11日
【发明者】雷红, 王青 申请人:王青