一种猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂及其制备方法，该微球制剂是以猪白细胞介素-16为包裹对象，以丙交脂-乙交脂共聚物为微球载体，采用复乳法制备的。本发明的猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂，以猪白细胞介素-16为包裹对象，以丙交脂-乙交脂共聚物为微球载体，缓释微球的包封率大于75%,可持续释放30天以上，减少了用药次数，提高了生物利用度，能有效预防和控制疫病特别是病毒性疾病的发生和流行，同时还可促进猪的生长。
【专利说明】一种猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂及其制备 方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于兽药【技术领域】，具体涉及一种猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球 制剂，同时还涉及一种猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂的制备方法。
【背景技术】
[0002] 白细胞介素-16是一种前炎症因子，由⑶8+T淋巴细胞分泌，属分泌型蛋白，过去 称之为淋巴细胞趋化因子，1995正式命名为白细胞介素-16 (IL-16)。自从被克隆获得之 后，白细胞介素-16的结构和功能得到广泛的研究，其生物学功能研究也取得了一定的进 展。IL-16是多种免疫细胞的趋化因子，参与机体的炎症反应，还与过敏反应、自身免疫系统 疾病等其他疾病有关。
[0003] 到目前为止，IL-16被发现具有以下功能：⑴诱导人⑶4+淋巴细胞、单核细胞和 嗜酸性细胞迁移；（2)通过⑶4+受体结合T细胞；（3)诱导人⑶4+淋巴细胞和单核细胞的 IL-2R和HLA-DR表达；（4)抑制HIV和SIV复制。近年来，有科学家证明：白细胞介素-16 能够有效地抑制H1V和S1V的复制。这种细胞因子在H1V感染的无症状携带状态阶段呈高 活性水平，是维持健康HVI感染者体内低病毒滴度存在和感染S1V的非洲绿猴不发病的重 要原因。
[0004] 此外，IL-16在皮肤移植方面又有重要的发现：它在同种异处的皮肤移植中起着 免疫抑制作用，能延长移植皮肤的存活时间。IL-16在生产应用方面前景可观，在疫苗中能 良好的发挥免疫佐剂的活性。关于IL-16的实际应用，Mannie等（2007)研究报道了一种 新耐受性疫苗采用IL-16作为佐剂，其发挥的佐剂效果比IL-2、IL-10、IL-13等要好，因此 认为IL-16是此种疫苗的最佳佐剂。
[0005] IL-16具有优越的免疫佐剂功效和潜在抗病毒作用，但是其目前仅有注射剂型，由 于IL-16半衰期较短，消除较快，临床应用时需多次注射且间隔时间较短，给临床应用带来 很多不便。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种具有长持续释放期、高生物利用度的猪白细胞介素-16 注射用长效缓释微球制剂。
[0007] 本发明的第二个目的是提供一种猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂的 制备方法。
[0008] 为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：一种猪白细胞介素-16注射用 长效缓释微球制剂，以猪白细胞介素-16为包裹对象，以丙交脂-乙交脂共聚物为微球载 体，由以下方法制备的：
[0009] 1)将猪白细胞介素-16加入含有稳定剂的水溶液中，搅拌，得猪白细胞介素-16的 浓度为6?8mg/ml的混合物A ;
[0010] 2)将丙交脂-乙交脂共聚物加入二氯甲烷中溶解，得丙交脂-乙交脂共聚物的浓 度为130?150mg/ml的混合物B，按照混合物A :混合物B的体积比为0. 5?1:1?1. 5的 比例将步骤1)所得混合物A加入到混合物B中，搅拌得混合物C ;
[0011] 3)将步骤2)所得混合物C加入到第一聚乙二醇溶液中，搅拌得混合物D ;
[0012] 4)将步骤3)所得混合物D加入第二聚乙二醇溶液中，持续搅拌进行溶剂挥发，经 洗涤、离心分离、冷冻干燥后，收集即得。
[0013] 所述丙交脂-乙交脂共聚物的分子量为5000?70000道尔顿。
[0014] 所述丙交脂-乙交脂共聚物是由丙交脂、乙交脂按丙交脂与乙交脂的质量比为 20?80:20?80共聚所得。
[0015] 所述混合物A中稳定剂的质量浓度为0. 1%?10%。
[0016] 所述稳定剂为明胶、锌盐、甘露醇和海藻盐。
[0017] 所述锌盐为季戊四醇锌盐（市售商品）。所述锌盐还可以为其他可用的无机或有 机锌盐。
[0018] 步骤1)中所述搅拌的转速为5000rpm，搅拌时间为30s ;步骤2)中所述搅拌的转 速为5000rpm，搅拌时间为2min ;步骤3)中所述搅拌的转速为250rpm，搅拌时间为5min。
[0019] 步骤3)中所述第一聚乙二醇溶液的质量浓度为3%?5% ;所述混合物C与第一聚 乙二醇溶液的体积比为1. 5?2. 5:10?20。
[0020] 步骤4)中所述第二聚乙二醇溶液的质量浓度为1%?2% ;所述混合物D与第二聚 乙二醇溶液的体积比为11. 5?22. 5:250?500。
[0021] 一种猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂的制备方法，包括下列步骤：
[0022] 1)将猪白细胞介素-16加入含有稳定剂的水溶液中，搅拌，得猪白细胞介素-16的 浓度为6?8mg/ml的混合物A ;
[0023] 2)将丙交脂-乙交脂共聚物加入二氯甲烷中溶解，得丙交脂-乙交脂共聚物的浓 度为130?150mg/ml的混合物B，按照混合物A :混合物B的体积比为0. 5?1:1?1. 5的 比例将步骤1)所得混合物A加入到混合物B中，搅拌得混合物C ;
[0024] 3)将步骤2)所得混合物C加入到第一聚乙二醇溶液中，搅拌得混合物D ;
[0025] 4)将步骤3)所得混合物D加入第二聚乙二醇溶液中，持续搅拌进行溶剂挥发，经 洗涤、离心分离、冷冻干燥后，收集即得。
[0026] 本发明的猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂，使用时，给药量为1? 10mg/kg体重，以微球的重量计。
[0027] 本发明的猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂，微球中猪白细胞介素的重 量分数为〇. 1%?10%，丙交脂-乙交脂共聚物的质量分数为50%?99. 9% ;微球的平均粒径 在10?100 μ m。其中丙交脂-乙交脂共聚物为可生物降解且具有生物相容性的药用高分 子材料。
[0028] 本发明的猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂，以猪白细胞介素-16为包 裹对象，以丙交脂-乙交脂共聚物为微球载体，缓释微球的包封率大于75%，可持续释放30 天以上，减少了用药次数，提高了生物利用度，能有效预防和控制疫病特别是病毒性疾病的 发生和流行，同时还可促进猪的生长。
[0029] 本发明的猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂的制备方法，成功制备猪白 细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂，使缓释微球的包封率大于75% ;工艺简单，操作方 便，适合大规模工业化生产。
【具体实施方式】
[0030] 下面结合【具体实施方式】对本发明作进一步的说明。
[0031] 实施例1
[0032] 本实施例的猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂，以猪白细胞介素-16为 包裹对象，以分子量为5000道尔顿的丙交脂-乙交脂共聚物为微球载体，由以下方法制备 的：
[0033] 1)将猪白细胞介素-16加入含有锌盐水溶液中，搅拌使猪白细胞介素-16与Zn2+ 充分结合，再加入浓度为l〇mg/ml的明胶溶液(该明胶溶液中含有质量分数为10%的甘露醇 和质量分数为10的海藻糖)，经5000rpm搅拌30s，得猪白细胞介素-16的浓度为6mg/ml的 混合物A ;所述混合物A中稳定剂的总质量分数为0. 1% ;
[0034] 2)将丙交脂-乙交脂共聚物加入二氯甲烷中溶解，得丙交脂-乙交脂共聚物的浓 度为130mg/ml的混合物B，按照混合物A :混合物B的体积比为1:1. 5的比例将步骤1)所 得混合物A加入到混合物B中，经5000rpm搅拌2min，得混合物C ;
[0035] 3)按照混合物C与第一聚乙二醇溶液的体积比为2. 5:20的比例，将步骤2)所得 混合物C加入到质量浓度为5%的第一聚乙二醇溶液中，经250rpm磁力搅拌5min，得混合物 D ；
[0036] 4)按照混合物D与第二聚乙二醇溶液的体积比为22. 5:500的比例，将步骤3)所 得混合物D加入质量浓度为2%的第二聚乙二醇溶液中，持续搅拌进行溶剂挥发，经洗涤、离 心分离、冷冻干燥后，收集即得。
[0037] 其中，所述丙交脂-乙交脂共聚物是由丙交脂、乙交脂按丙交脂与乙交脂的质量 比为20:80共聚所得。
[0038] 本实施例的猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂的制备方法，其特征在 于：包括下列步骤：
[0039] 1)将猪白细胞介素-16加入含有锌盐水溶液中，搅拌使猪白细胞介素-16与Zn2+ 充分结合，再加入浓度为l〇mg/ml的明胶溶液(该明胶溶液中含有质量分数为10%的甘露醇 和质量分数为10%的海藻糖)，经5000rpm搅拌30s，得猪白细胞介素-16的浓度为6mg/ml 的混合物A ;所述混合物A中稳定剂的总质量分数为0. 1% ;
[0040] 2)将丙交脂-乙交脂共聚物加入二氯甲烷中溶解，得丙交脂-乙交脂共聚物的浓 度为130mg/ml的混合物B，按照混合物A :混合物B的体积比为1:1. 5的比例将步骤1)所 得混合物A加入到混合物B中，经5000rpm搅拌2min，得混合物C ;
[0041] 3)按照混合物C与第一聚乙二醇溶液的体积比为2. 5:20的比例，将步骤2)所得 混合物C加入到质量浓度为5%的第一聚乙二醇溶液中，经250rpm磁力搅拌5min，得混合物 D ；
[0042] 4)按照混合物D与第二聚乙二醇溶液的体积比为22. 5:500的比例，将步骤3)所 得混合物D加入质量浓度为2%的第二聚乙二醇溶液中，持续搅拌进行溶剂挥发，经洗涤、离 心分离、冷冻干燥后，收集即得。
[0043] 其中，所述丙交脂-乙交脂共聚物分子量为5000道尔顿，是由丙交脂、乙交脂按丙 交脂与乙交脂的质量比为20:80共聚所得。
[0044] 实施例2
[0045] 本实施例的猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂，以猪白细胞介素-16为 包裹对象，以分子量为70000道尔顿的丙交脂-乙交脂共聚物为微球载体，由以下方法制备 的：
[0046] 1)将猪白细胞介素-16加入含有锌盐水溶液中，搅拌使猪白细胞介素-16与Zn2+ 充分结合，再加入浓度为l〇mg/ml的明胶溶液(该明胶溶液中含有质量分数为10%的甘露醇 和质量分数为10%的海藻糖)，经5000rpm搅拌30s，得猪白细胞介素-16的浓度为8mg/ml 的混合物A ;所述混合物A中稳定剂的总质量分数为10% ;
[0047] 2)将丙交脂-乙交脂共聚物加入二氯甲烷中溶解，得丙交脂-乙交脂共聚物的浓 度为150mg/ml的混合物B，按照混合物A :混合物B的体积比为0. 5:1的比例将步骤1)所 得混合物A加入到混合物B中，经5000rpm搅拌2min，得混合物C ;
[0048] 3)按照混合物C与第一聚乙二醇溶液的体积比为1. 5:10的比例，将步骤2)所得 混合物C加入到质量浓度为3%的第一聚乙二醇溶液中，经250rpm磁力搅拌5min，得混合物 D ；
[0049] 4)按照混合物D与第二聚乙二醇溶液的体积比为11. 5:250的比例，将步骤3)所 得混合物D加入质量浓度为1%的第二聚乙二醇溶液中，持续搅拌进行溶剂挥发，经洗涤、离 心分离、冷冻干燥后，收集即得。
[0050] 其中，所述丙交脂-乙交脂共聚物是由丙交脂、乙交脂按丙交脂与乙交脂的质量 比为80:20共聚所得。
[0051] 本实施例的猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂的制备方法，其特征在 于：包括下列步骤：
[0052] 1)将猪白细胞介素-16加入含有锌盐水溶液中，搅拌使猪白细胞介素-16与Zn2+ 充分结合，再加入浓度为l〇mg/ml的明胶溶液(该明胶溶液中含有质量分数为10%的甘露醇 和质量分数为10%的海藻糖)，经5000rpm搅拌30s，得猪白细胞介素-16的浓度为8mg/ml 的混合物A ;所述混合物A中稳定剂的总质量分数为10% ;
[0053] 2)将丙交脂-乙交脂共聚物加入二氯甲烷中溶解，得丙交脂-乙交脂共聚物的浓 度为150mg/ml的混合物B，按照混合物A :混合物B的体积比为0. 5:1的比例将步骤1)所 得混合物A加入到混合物B中，经5000rpm搅拌2min，得混合物C ;
[0054] 3)按照混合物C与第一聚乙二醇溶液的体积比为1. 5:10的比例，将步骤2)所得 混合物C加入到质量浓度为3%的第一聚乙二醇溶液中，经250rpm磁力搅拌5min，得混合物 D ；
[0055] 4)按照混合物D与第二聚乙二醇溶液的体积比为11. 5:250的比例，将步骤3)所 得混合物D加入质量浓度为1%的第二聚乙二醇溶液中，持续搅拌进行溶剂挥发，经洗涤、离 心分离、冷冻干燥后，收集即得。
[0056] 其中，所述丙交脂-乙交脂共聚物分子量为70000道尔顿，是由丙交脂、乙交脂按 丙交脂与乙交脂的质量比为80:20共聚所得。
[0057] 实施例3
[0058] 本实施例的猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂，以猪白细胞介素-16为 包裹对象，以分子量为40000道尔顿的丙交脂-乙交脂共聚物为微球载体，由以下方法制备 的：
[0059] 1)将猪白细胞介素-16加入含有锌盐水溶液中，搅拌使猪白细胞介素-16与Zn2+ 充分结合，再加入浓度为l〇mg/ml的明胶溶液(该明胶溶液中含有质量分数为10%的甘露醇 和质量分数为10的海藻糖)，经5000rpm搅拌30s，得猪白细胞介素-16的浓度为7mg/ml的 混合物A ;所述混合物A中稳定剂的总质量分数为5% ;
[0060] 2)将丙交脂-乙交脂共聚物加入二氯甲烷中溶解，得丙交脂-乙交脂共聚物的浓 度为140mg/ml的混合物B，按照混合物A :混合物B的体积比为0. 7:1. 3的比例将步骤1) 所得混合物A加入到混合物B中，经5000rpm搅拌2min，得混合物C ;
[0061] 3)按照混合物C与第一聚乙二醇溶液的体积比为2. 0:15的比例，将步骤2)所得 混合物C加入到质量浓度为4%的第一聚乙二醇溶液中，经250rpm磁力搅拌5min，得混合物 D ；
[0062] 4)按照混合物D与第二聚乙二醇溶液的体积比为17:400的比例，将步骤3)所得 混合物D加入质量浓度为1. 5%的第二聚乙二醇溶液中，持续搅拌进行溶剂挥发，经洗涤、离 心分离、冷冻干燥后，收集即得。
[0063] 其中，所述丙交脂-乙交脂共聚物是由丙交脂、乙交脂按丙交脂与乙交脂的质量 比为50:50共聚所得。
[0064] 本实施例的猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂的制备方法，其特征在 于：包括下列步骤：
[0065] 1)将猪白细胞介素-16加入含有锌盐水溶液中，搅拌使猪白细胞介素-16与Zn2+ 充分结合，再加入浓度为l〇mg/ml的明胶溶液(该明胶溶液中含有质量分数为10%的甘露醇 和质量分数为10的海藻糖)，经5000rpm搅拌30s，得猪白细胞介素-16的浓度为7mg/ml的 混合物A ;所述混合物A中稳定剂的总质量分数为5% ;
[0066] 2)将丙交脂-乙交脂共聚物加入二氯甲烷中溶解，得丙交脂-乙交脂共聚物的浓 度为140mg/ml的混合物B，按照混合物A :混合物B的体积比为0. 7:1. 3的比例将步骤1) 所得混合物A加入到混合物B中，经5000rpm搅拌2min，得混合物C ;
[0067] 3)按照混合物C与第一聚乙二醇溶液的体积比为2. 0:15的比例，将步骤2)所得 混合物C加入到质量浓度为4%的第一聚乙二醇溶液中，经250rpm磁力搅拌5min，得混合物 D ；
[0068] 4)按照混合物D与第二聚乙二醇溶液的体积比为17:400的比例，将步骤3)所得 混合物D加入质量浓度为1. 5%的第二聚乙二醇溶液中，持续搅拌进行溶剂挥发，经洗涤、离 心分离、冷冻干燥后，收集即得。
[0069] 其中，所述丙交脂-乙交脂共聚物的分子量为40000道尔顿，是由丙交脂、乙交脂 按丙交脂与乙交脂的质量比为50:50共聚所得。
[0070] 实验例1
[0071] 对实施例1?3所得猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂进行检测，结果 如表1所示。
[0072] 表1实施例1?3所得猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂检测结果
[0073]
【权利要求】
1. 一种猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂，其特征在于：以猪白细胞介素-16 为包裹对象，以丙交脂-乙交脂共聚物为微球载体，由以下方法制备的： 1) 将猪白细胞介素-16加入含有稳定剂的水溶液中，搅拌，得猪白细胞介素-16的浓度 为6?8mg/ml的混合物A ; 2) 将丙交脂-乙交脂共聚物加入二氯甲烷中溶解，得丙交脂-乙交脂共聚物的浓度为 130?150mg/ml的混合物B，按照混合物A :混合物B的体积比为0. 5?1:1?1. 5的比例 将步骤1)所得混合物A加入到混合物B中，搅拌得混合物C ; 3) 将步骤2)所得混合物C加入到第一聚乙二醇溶液中，搅拌得混合物D ; 4) 将步骤3)所得混合物D加入第二聚乙二醇溶液中，持续搅拌进行溶剂挥发，经洗涤、 离心分离、冷冻干燥后，收集即得。
2. 根据权利要求1所述的猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂，其特征在于： 所述丙交脂-乙交脂共聚物的分子量为5000?70000道尔顿。
3. 根据权利要求1或2所述的猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂，其特征 在于：所述丙交脂-乙交脂共聚物是由丙交脂、乙交脂按丙交脂与乙交脂的质量比为20? 80:20?80共聚所得。
4. 根据权利要求1所述的猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂，其特征在于： 所述混合物A中稳定剂的质量浓度为0. 1%?10%。
5. 根据权利要求1或4所述的猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂，其特征在 于：所述稳定剂为明胶、锌盐、甘露醇和海藻盐。
6. 根据权利要求1或4所述的猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂，其特征在 于：所述锌盐为季戊四醇锌盐。
7. 根据权利要求1所述的猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂，其特征在 于：步骤1)中所述搅拌的转速为5000rpm，搅拌时间为30s ;步骤2)中所述搅拌的转速为 5000rpm，搅拌时间为2min ;步骤3)中所述搅拌的转速为250rpm，搅拌时间为5min。
8. 根据权利要求1所述的猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂，其特征在于： 步骤3)中所述第一聚乙二醇溶液的质量浓度为3%?5% ;所述混合物C与第一聚乙二醇溶 液的体积比为1. 5?2. 5:10?20。
9. 根据权利要求1所述的猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂，其特征在于： 步骤4)中所述第二聚乙二醇溶液的质量浓度为1%?2% ;所述混合物D与第二聚乙二醇溶 液的体积比为11. 5?22. 5:250?500。
10. -种猪白细胞介素-16注射用长效缓释微球制剂的制备方法，其特征在于：包括下 列步骤： 1) 将猪白细胞介素-16加入含有稳定剂的水溶液中，搅拌，得猪白细胞介素-16的浓度 为6?8mg/ml的混合物A ; 2) 将丙交脂-乙交脂共聚物加入二氯甲烷中溶解，得丙交脂-乙交脂共聚物的浓度为 130?150mg/ml的混合物B，按照混合物A :混合物B的体积比为0. 5?1:1?1. 5的比例 将步骤1)所得混合物A加入到混合物B中，搅拌得混合物C ; 3) 将步骤2)所得混合物C加入到第一聚乙二醇溶液中，搅拌得混合物D ; 4) 将步骤3)所得混合物D加入第二聚乙二醇溶液中，持续搅拌进行溶剂挥发，经洗涤、 离心分离、冷冻干燥后，收集即得。
【文档编号】A61P37/02GK104208661SQ201310456839
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2013年9月29日 优先权日:2013年9月29日
【发明者】李厚伟, 徐进, 陈建晖 申请人:郑州后羿制药有限公司