一种中华戈登氏菌及制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种中华戈登氏菌及制备方法和应用，中华戈登氏菌（Gordoniasinensis）sq-15，CCTCCNO:M2013065。该细菌在察氏培养基中可产生胞壁酰二肽和脂多糖、胡萝卜素及类胡萝卜素、黄酮和多种氨基酸，尤其是γ-氨基丁酸、维生素以及多种微量元素。它们有机和谐地在一个系统之中，充分加强了系统的生理功能。并且将其与其他菌剂相结合，也能起协同作用如枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、或富硒酿酒酵母菌相组配制成不同的药物组合物，可有效地提高机体免疫力，达到抗氧化，调节肠道，调节心血管的目的。
【专利说明】一种中华戈登氏菌及制备方法和应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物医学工程领域，具体涉及一株中华戈登氏菌sq-15，还涉及一种中华戈登氏菌sq-15的制备方法，还涉及中华戈登氏菌sq-15的应用。【背景技术】
[0002]众所周知，人体的神经系统，内分泌系统和免疫系统紧密地联系在一起，共同构成一个全身性调节网络即:神经一内分泌一免疫网络(NEI网络)，这个网络支配着机体的各个功能，一旦网络的功能异常立即会引起不同程度或形式的全身性反应，也就会出现各类疾病的发生，而在许多感染性疾病的治疗过程中，细胞的免疫功能起重要作用，而一些亚健康和已发病的个体也是由于免疫力低下使得纯粹的化学药物预防和治疗的效果不佳。因此以生物调解剂(免疫调节剂)治疗生理性病变引起的多种疑难病症取得了很好的效果，成为21世纪免疫疗法和生态疗法的极为关注的热点。
[0003]许多研究发现:分枝杆菌，戈登氏菌的细胞壁有着特殊的结构，那就是胞壁酰二肽和分枝杆菌多糖(分别为MDP和MSP)。它们都具有明显的免疫调节功能，尤其调节细胞的免疫应答。更引人注目的是:MDP如果在脂质体中激活巨噬细胞的活性可增加10~100倍，它与胶原蛋白或白蛋白共价交联后的生理活动比单纯的MDP强2000倍。而MSP则是以乙酰氨基葡萄糖的磷酸链和阿拉伯糖、半乳糖以及长链(约50至90个C原子)不饱和脂肪酸，构成了脂多糖，免疫活性更强。另一方面，近年来该类菌的非甲基化磷酸胞苷酰基鸟苷的寡聚脱氧核苷酸序列(CPG)又称免疫液活序列，它能阻止Th2型免疫应答的启动并且使其向Th2型免疫应答转Th1型，而应激则是Th2型免疫应答提高。显而易见这对于由于应激而引起的感染、过敏和肿瘤的发生却起着重要治疗作用。
[0004]
【发明者】自上世纪80年代中期开始致力于分支杆菌等低等放线菌的研究，相续进行EM菌的应用基础研究。并有三个中国专利:“生态平衡营养精活素及其生产方法”;“草分枝杆菌免疫液”;“一种草分枝杆菌sq-Ι及复合微生态制剂的制备方法”得到保护。同时在人和动物的保健与治疗中得以推广和应用。实现了多年来
【发明者】用微生物技术提高人类生存质量的梦想。相继在上世纪末和本世纪初在环境的生态治理和生物修复的应用研究中，发现多种戈登氏菌，同样含有胞壁酰二肽、多糖等多种生理活性成分，更重要的是它们的脂多糖的不饱和脂肪酸的碳原子只有50个左右使其生理活性更强，赋予了该类菌的抗氧化、免疫调节等多种功能。尤其是本发明中的中华戈登氏菌sq-15，不同于世界上已有戈登氏菌中的任何一种。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种中华戈登氏菌sq_15(Gordonia sinensis sq_15),该菌由
【发明者】从空气中自行分离得到，该菌已于2013年3月5日送至中国典型培养物保藏中心进行保藏。地址:中国武汉武汉大学；分类命名:中华戈登氏菌sq_15Gordonia sinensissq-15，保藏编号:CCTCC NO:M2013065。该细菌在察氏培养基中产生胞壁酰二肽和脂多糖、胡萝卜素和类胡萝卜素、黄酮和多种氨基酸，尤其是Y-氨基丁酸、维生素以及多种微量元素。它们有机和谐地在一个系统之中，充分加强了系统的生理功能，有效地提高机体免疫力，达到抗氧化的目的。
[0006]本发明还有一个目的在于提供一种中华戈登氏菌sq-15的制备方法,制备方法简单，易行，适于大规模生产。
[0007]本发明还有一个目的在于提供了一种中华戈登氏菌sq-15的应用。该细菌可直接用于制备免疫调节剂，或动物饲料添加剂，或将其与益生菌配合使用协同调节机体功能，如:可与枯草芽孢杆菌；富硒酿酒酵母按不同的重量比进行混合，可制得不同的药物组合物，对肠道系统，心血管系统的病变均有明显预防与治疗的作用。
[0008]为了实现上述目的，本发明采取以下技术措施:
[0009]一种中华戈登氏菌sq-15，其筛选过程是:
[0010]用察氏培养基制成平板用自然沉降法在空气中暴露15分钟(湖北，武汉)，盖好平皿放置于25~32°C恒温培养箱中培养2天左右,再选出单个菌落,经多次优化培养得到一株中华戈登氏菌sq-15。
[0011]该菌在lsp-2培养基中培养，温度30°C ±1°C，液体培养在150~180rpm振培2-3天。将优良菌株的斜面保持在4°C的条件下。(所述的lsp-2培养基在中国农业菌种目录2012版附录1，培养基编号为0038)。长期保存可以在甘油中-40°C~-70°C保存，或用牛奶冻干4°C左右保存。
[0012]该株菌生理生化特点:革兰氏染色，抗酸染色皆为阳性；氧化酶阴性；H202酶阳性；脲酶阳性；乙酰胺酶阴性；硝酸盐还`原阴性；亚锑酸盐还原阳性；在马糠凯培养基上不生长；在5%似(:1中生长；能使吐温80水解；不水解淀粉；能利用柠檬酸盐、苯甲酸盐为唯一碳源；能利用蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、果糖、半乳糖、甘露糖、肌醇。不能利用乳糖、木糖、山梨糖、山梨醇。能以谷氨酸和尿素为唯一 N源；不能以乙酰胺为唯一 N源。
[0013]该菌已于2013年3月5日送至中国典型培养物保藏中心进行保藏。地址:中国武汉武汉大学；分类命名:中华戈登氏菌sq_15(Gordonia sinensis sq_15),保藏编号:CCTCCNO:M2013065o
[0014]一种中华戈登氏菌sq-15菌的制备方法，其步骤是:
[0015]1.接种:斜面种子用lsp-2培养基。将sq-15的种子接入茄子瓶斜面30°C ±1°C培养3天，镜检无杂菌且生长健壮转入接种瓶。
[0016]2.种子罐培养:将接种瓶种子转入种子罐培养，温度29_31°C，通气量1:0.6~
0.8，自动流加消泡剂，培养30~35h后进行取样镜检，菌体生长均匀无杂菌，停止发酵。
[0017]3.发酵罐培养:以5%~10%接种量将种子罐的种子液打入发酵罐，温度29-31 °C，通气量1:0.8，自动流加消泡剂，培养48-52h镜检:菌体老化成球杆状，测菌数达IO8-1O9个/ml停止发酵。
[0018]4、发酵液离心，收集菌体，108~112°C烘干收集干菌体，得到一种戈登氏菌菌粉即免疫调节剂。发酵液灭活后可直接使用，也可按下分离后使用。
[0019]种子罐和发酵罐培养基如下表。
[0020]
【权利要求】
1.一株中华戈登氏菌，其特征在于:中华戈登氏菌(Gordonia sinensis) sq-15,CCTCCNO: M 2013065。
2.权利要求1所述的中华戈登氏菌免疫调节剂的制备方法，其步骤如下: 0.接种:斜面种子用lsp-2培养基，将sq-15的种子接入茄子瓶斜面30°C 土 1°C培养3天，镜检无杂菌且生长健壮转入接种瓶； 2).种子罐培养:将接种瓶种子转入种子罐培养，温度29-31°C，通气量1:0.6^0.8，自动流加消泡剂，培养3(T35h后进行取样镜检，菌体生长均匀无杂菌，停止发酵； 3).发酵罐培养:以5%~?Ο%接种量将种子罐的种子液打入发酵罐，温度29-31°C，通气量1: 0.8,自动流加消泡剂，培养48-52h镜检:菌体老化成球杆状，测菌数达IO8-1O9个/ml停止发酵； 所述的 sq-15 为中华戈登氏菌(Gordonia sinensis) sq-15, CCTCC NO: M 2013065 ； 种子罐和发酵罐培养基配方如下:
3.权利要求1所述的中华戈登氏菌在制备动物免疫调节剂中的应用。
4.权利要求1所述的中华戈登氏菌在制备动物抗氧化剂中的应用。
5.权利要求1所述的中华戈登氏菌在制备动物饲料添加剂中的应用。
6.权利要求1所述的中华戈登氏菌在制备调节肠道药物中的应用，所述的药物为中华戈登氏菌sq-15与枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌以1:1重量比混合得到。
7.权利要求1所述的中华戈登氏菌sq-15在制备调节心血管系统的药物中的应用，所述的药物为中华戈登氏菌sq-15与富硒酿酒酵母以2:1重量比混合而成。
【文档编号】A61K35/74GK103555630SQ201310541487
【公开日】2014年2月5日 申请日期:2013年11月5日 优先权日:2013年11月5日
【发明者】张素琴, 康建南, 张世敏 申请人:张素琴