本发明属于金黄色葡萄球菌技术领域，更具体地说，尤其涉及一种金黄色葡萄球菌的流式细胞术检测方法。
背景技术：
金黄色葡萄球菌，一种球形的革兰氏阳性菌，存在于空气、水、灰尘、人类或动物的皮、土壤等，是人类化脓性感染最常见的病原菌。它除了从受感染的人或动物直接接触被感染，还可以通过空气飞沫或间接接触传染如打喷噴等。由金黄色葡萄球菌引起的疾病可以从轻微的皮肤感染、脓肿到危及生命的疾病如肺炎、脑膜炎、骨髓炎、心内膜炎、胃肠道感染、菌血症、败血症等。因此发展高灵敏的金黄色葡萄球菌检测方法具有重大意义。
传统的金黄色葡萄球菌检测方法一般都是基于对细菌的选择性培养和富集形态，比如平板计数法、染色观察法等。然而，这些检测方法需要耗时到天，相当费时、费力。而且检测时受到的局限性多，精确度差，不适合广泛的推广和普及。
技术实现要素：
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种金黄色葡萄球菌的流式细胞术检测方法。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种金黄色葡萄球菌的流式细胞术检测方法，包括如下步骤：
s1、把金黄色葡萄球菌菌株放入脑心浸液培养基内在34-40摄氏度的有氧条件下过夜培养，然后再取出脑心浸液培养基培养后的金黄色葡萄球菌菌株放入lb培养基中用摇床在150rpm/min、34-40摄氏度条件下培养3-4小时；
s2、用接种环挑取lb培养基中的金黄色葡萄球菌菌落和大肠杆菌在8000-12000rpm/min的离心机内离心3-7分钟，随后用缓冲洗1-3次，离心吸弃上清；
s3、将核酸适配体均匀搅拌后用四种折叠方式保存，然后使用四种折叠方式的核酸适配体分别加入金黄色葡萄球菌菌落溶液和大肠杆菌溶液与缓冲液补充孵育体系，冰上25-35min后，洗涤重悬；
s4、接着将孵育后的四组金黄色葡萄球菌和大肠杆菌悬浮液分别用sybrgreeni染料在20-25摄氏度下染色10-20分钟；
s5、打开流式细胞仪并调整分析面的电压模式和电压、直方图的电压和阀值，四组金黄色葡萄球菌和大肠杆菌悬浮液依次放入流式管并插入流式细胞仪的进样口处；
s6、最后用激光共聚焦显微镜成像技术观察分析荧光信号，然后多次重复上述操作得出的数据进行对比分析。
优选的，所述步骤s3中的四种折叠方式分别包括（1）将水浴锅升温至95℃-100℃，将离心管插于浮漂上，放入水中，3-7min后，关掉水浴锅，使其自然降温过夜，最后取出放至2℃-6℃的快速辅助存贮器内保存备用；（2）使用pcr仪，设置pcr程序为95℃-100℃，2-7min，每35s-45s降1℃-3℃，降至35℃-40℃，从pcr仪中取出，直接放于零下10℃-20℃的快速辅助存贮器内备用，使用前现融化；（3）在95℃-100℃的金属浴中3-7min，立即置于冰盒上8min-12min；（4）不进行任何处理，直接从2℃-6℃的离心管中取出使用。
优选的，所述步骤s3中的缓冲液包括结合缓冲液和含有百分之一牛血清蛋白的bb缓冲液。
优选的，所述流式细胞仪的顶部设有与计算器电性连接的氩离子激光器。
本发明的技术效果和优点：本发明提供的一种金黄色葡萄球菌的流式细胞术检测方法，与传统的检测方法相比，本发明以两组培养基先后培养金黄色葡萄球菌来提高金黄色葡萄球菌的活性和实现金黄色葡萄球菌数量的快速增加，便于后期多组检测适用，将金黄色葡萄球菌加入四种折叠方式的核酸适配体内进行孵育，可以有效的得出流式细胞术中适配体折叠方式对检测的影响，缓冲液和激光成像便于染色后的金黄色葡萄球菌进行观察和统计，流式细胞仪顶部与计算器电性连接的氩离子激光器可以提高检测的准确性，便于推广使用，本发明简单方便，步骤操作容易，检测周期短，精确度高，适用范围广，有利于推广和普及。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种金黄色葡萄球菌的流式细胞术检测方法，包括如下步骤：
s1、把金黄色葡萄球菌菌株放入脑心浸液培养基内在34摄氏度的有氧条件下过夜培养，然后再取出脑心浸液培养基培养后的金黄色葡萄球菌菌株放入lb培养基中用摇床在150rpm/min、34摄氏度条件下培养3小时；
s2、用接种环挑取lb培养基中的金黄色葡萄球菌菌落和大肠杆菌在8000rpm/min的离心机内离心3分钟，随后用缓冲洗1次，离心吸弃上清；
s3、将核酸适配体均匀搅拌后用四种折叠方式保存，四种折叠方式分别包括（1）将水浴锅升温至95℃，将离心管插于浮漂上，放入水中，3min后，关掉水浴锅，使其自然降温过夜，最后取出放至2℃的快速辅助存贮器内保存备用；（2）使用pcr仪，设置pcr程序为95℃，2min，每35s降1℃，降至35℃，从pcr仪中取出，直接放于零下10℃的快速辅助存贮器内备用，使用前现融化；（3）在95℃的金属浴中3min，立即置于冰盒上8min；（4）不进行任何处理，直接从2℃的离心管中取出使用，然后使用四种折叠方式的核酸适配体分别加入金黄色葡萄球菌菌落溶液和大肠杆菌溶液与缓冲液补充孵育体系，冰上25min后，洗涤重悬，缓冲液包括结合缓冲液和含有百分之一牛血清蛋白的bb缓冲液；
s4、接着将孵育后的四组金黄色葡萄球菌和大肠杆菌悬浮液分别用sybrgreeni染料在20摄氏度下染色10分钟；
s5、打开流式细胞仪并调整分析面的电压模式和电压、直方图的电压和阀值，四组金黄色葡萄球菌和大肠杆菌悬浮液依次放入流式管并插入流式细胞仪的进样口处，流式细胞仪的顶部设有与计算器电性连接的氩离子激光器；
s6、最后用激光共聚焦显微镜成像技术观察分析荧光信号，然后多次重复上述操作得出的数据进行对比分析。
实施例2
一种金黄色葡萄球菌的流式细胞术检测方法，包括如下步骤：
s1、把金黄色葡萄球菌菌株放入脑心浸液培养基内在37摄氏度的有氧条件下过夜培养，然后再取出脑心浸液培养基培养后的金黄色葡萄球菌菌株放入lb培养基中用摇床在150rpm/min、37摄氏度条件下培养3.5小时；
s2、用接种环挑取lb培养基中的金黄色葡萄球菌菌落和大肠杆菌在10000rpm/min的离心机内离心5分钟，随后用缓冲洗2次，离心吸弃上清；
s3、将核酸适配体均匀搅拌后用四种折叠方式保存，四种折叠方式分别包括（1）将水浴锅升温至98℃，将离心管插于浮漂上，放入水中，5min后，关掉水浴锅，使其自然降温过夜，最后取出放至4℃的快速辅助存贮器内保存备用；（2）使用pcr仪，设置pcr程序为97℃，5min，每40s降2℃，降至37℃，从pcr仪中取出，直接放于零下15℃的快速辅助存贮器内备用，使用前现融化；（3）在98℃的金属浴中5min，立即置于冰盒上10min；（4）不进行任何处理，直接从4℃的离心管中取出使用，然后使用四种折叠方式的核酸适配体分别加入金黄色葡萄球菌菌落溶液和大肠杆菌溶液与缓冲液补充孵育体系，冰上30min后，洗涤重悬，缓冲液包括结合缓冲液和含有百分之一牛血清蛋白的bb缓冲液；
s4、接着将孵育后的四组金黄色葡萄球菌和大肠杆菌悬浮液分别用sybrgreeni染料在23摄氏度下染色15分钟；
s5、打开流式细胞仪并调整分析面的电压模式和电压、直方图的电压和阀值，四组金黄色葡萄球菌和大肠杆菌悬浮液依次放入流式管并插入流式细胞仪的进样口处，流式细胞仪的顶部设有与计算器电性连接的氩离子激光器；
s6、最后用激光共聚焦显微镜成像技术观察分析荧光信号，然后多次重复上述操作得出的数据进行对比分析。
实施例3
一种金黄色葡萄球菌的流式细胞术检测方法，包括如下步骤：
s1、把金黄色葡萄球菌菌株放入脑心浸液培养基内在40摄氏度的有氧条件下过夜培养，然后再取出脑心浸液培养基培养后的金黄色葡萄球菌菌株放入lb培养基中用摇床在150rpm/min、40摄氏度条件下培养4小时；
s2、用接种环挑取lb培养基中的金黄色葡萄球菌菌落和大肠杆菌在12000rpm/min的离心机内离心7分钟，随后用缓冲洗3次，离心吸弃上清；
s3、将核酸适配体均匀搅拌后用四种折叠方式保存，四种折叠方式分别包括（1）将水浴锅升温至100℃，将离心管插于浮漂上，放入水中，7min后，关掉水浴锅，使其自然降温过夜，最后取出放至6℃的快速辅助存贮器内保存备用；（2）使用pcr仪，设置pcr程序为100℃，7min，每45s降3℃，降至40℃，从pcr仪中取出，直接放于零下20℃的快速辅助存贮器内备用，使用前现融化；（3）在100℃的金属浴中7min，立即置于冰盒上12min；（4）不进行任何处理，直接从6℃的离心管中取出使用，然后使用四种折叠方式的核酸适配体分别加入金黄色葡萄球菌菌落溶液和大肠杆菌溶液与缓冲液补充孵育体系，冰上35min后，洗涤重悬，缓冲液包括结合缓冲液和含有百分之一牛血清蛋白的bb缓冲液；
s4、接着将孵育后的四组金黄色葡萄球菌和大肠杆菌悬浮液分别用sybrgreeni染料在25摄氏度下染色20分钟；
s5、打开流式细胞仪并调整分析面的电压模式和电压、直方图的电压和阀值，四组金黄色葡萄球菌和大肠杆菌悬浮液依次放入流式管并插入流式细胞仪的进样口处，流式细胞仪的顶部设有与计算器电性连接的氩离子激光器；
s6、最后用激光共聚焦显微镜成像技术观察分析荧光信号，然后多次重复上述操作得出的数据进行对比分析。
综上所述：本发明提供的一种金黄色葡萄球菌的流式细胞术检测方法，与传统的检测方法相比，本发明以两组培养基先后培养金黄色葡萄球菌来提高金黄色葡萄球菌的活性和实现金黄色葡萄球菌数量的快速增加，便于后期多组检测适用，将金黄色葡萄球菌加入四种折叠方式的核酸适配体内进行孵育，可以有效的得出流式细胞术中适配体折叠方式对检测的影响，缓冲液和激光成像便于染色后的金黄色葡萄球菌进行观察和统计，流式细胞仪顶部与计算器电性连接的氩离子激光器可以提高检测的准确性，便于推广使用，本发明简单方便，步骤操作容易，检测周期短，精确度高，适用范围广，有利于推广和普及。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。