一种疫苗组合物及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种疫苗组合物，该疫苗组合物包括免疫量的猪伪狂犬病病毒抗原和免疫量的猪链球菌病病毒抗原。本发明还提供了制备该疫苗组合物的方法，通过该方法制备的疫苗组合物副作用小，不含内毒素，具有较好的免疫安全性。
【专利说明】一种疫苗组合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种疫苗组合物，以及该疫苗组合物的制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 猪伪狂犬病（Pseudorabies，PR)是多种动物共患的传染病，引起家畜和野生动物 急性致死性的传染病，以发热、奇痒和脑脊髓炎为主要症状，猪是其自然易感宿主，主要引 起妊娠母猪流产、死胎和木乃伊胎，仔猪感染主要是神经症状，成年猪则以隐性感染为主。
[0003] 猪伪狂犬病是一种由伪狂犬病毒引起的高死亡率的急性传染病。猪伪狂犬病病毒 (PRV)属于痛疫病毒科（Herpesvirdae)、α2痛疫病毒亚科（Alpherpesvirinae)。目前仅 发现一种血清型的PRV。该病最早发现于美国，后由匈牙利学者Aujeszky首次分离出该病 毒，因而又称奥耶斯基病（Aujeszkys Disease)。目前该病分布于全世界50多个国家和地 区，对养猪业的发展构成了严重的威胁，已引起世界各国的高度关注。该病在我国的发生已 较严重，是现在危害我国规模养猪业最严重的疫病之一。猪伪狂犬病的发生往往继发或混 合感染一种或几种某些病毒性，细菌性，寄生虫性疾病。这种混合感染的诊断与防治都十分 困难。猪伪狂犬病病毒可侵害各种日龄阶段的猪，病毒可在康复猪的嗅球、三叉神经节和其 他神经组织中潜伏，在猪受到体内外因素的刺激时，体内的病毒活化后通过排毒和传播，弓丨 起妊娠母猪流产、死胎或木乃伊胎，即使具有较高的母源抗体水平的哺乳仔猪在受到野毒 感染时，也会出现神经症状，如麻痹，最后因衰竭而死亡，而不易致死的，也会表现出体温升 高、食欲下降等临床症状，且耐过病后常出现生长阻滞。猪伪狂犬病野毒更可能诱导或加剧 呼吸道症状，也可能与断奶后的腹泻有关，并且还可降低猪的机体对其他疫苗如猪瘟疫苗 的体液免疫应答能力，抑制抗体水平的升高。猪伪狂犬病病毒的持续性感染和潜在的免疫 抑制，对于猪的疾病防治工作带来了很大的困难。目前，进行疫苗接种是预防、控制甚至消 灭伪狂犬病最主要的措施之一。国内外已研制出猪伪狂犬病的常规弱毒疫苗、灭活疫苗、基 因缺失弱毒疫苗和基因缺失灭活疫苗，而病毒载体重组疫苗和基因疫苗尚处于实验室研究 阶段。基因缺失疫苗已在生产中发挥着重要的作用，尤其在美国和欧洲一些发达国家的PRV 根除计划中功不可没。
[0004] 当前伪狂犬疫苗的种类有：一：灭活苗。优点是安全，不会散毒；缺点是免疫效果 不是很好。二：自然缺失弱毒活疫苗，弱毒活疫苗是将分离到的野毒株经非猪源细胞反复传 代，或适应鸡胚，或加入致突变剂在高于一般的培养温度条件下，在细胞上反复传代而获得 的疫苗。目前使用较多的是Bartha、Buk毒株。优点是弱毒苗具有良好的免疫原性，而且价 格低廉，至今仍在伪狂犬病的防控中起着重要作用。缺点是未经充分致弱的弱毒苗的毒力 可能会返强而导致疾病的流行；弱毒疫苗可建立潜伏感染，并有可能散毒。三，基因工程疫 苗：包括基因工程缺失弱毒活疫苗、亚单位疫苗、核酸疫苗、重组病毒疫苗。（一）1.基因工 程缺失弱毒活疫苗优点：都缺失了目的基因的几百甚至几千个碱基，缺失区域明确，所以它 们返祖的可能性极小。2.基因工程缺失弱毒活疫苗缺点：基因缺失疫苗能否引起潜伏感染 或被激活为感染性病毒令人担忧。（二)亚单位疫苗：是利用PRV保护性抗原基因，在原核或 真核系统中表达所获得的产物制成的疫苗。1.亚单位疫苗的优点：不含有核酸物质因此比 较安全，接种后不会产生持续感染或潜伏感染。产生的免疫应答可以与野毒感染相区分，有 利于疫病的控制和消灭。2.亚单位疫苗的缺点：生产成本高，免疫原性不及弱毒疫苗及灭 活疫苗，应用受到限制。（三)核酸疫苗：核酸疫苗是指将编码外源蛋白质的核酸表达载体注 射入机体，以激发机体产生针对外源蛋白质特异性的免疫应答。1.核酸疫苗的优点：能克 服伪狂犬病病毒的潜伏感染，安全性高，免疫期长，而且能激发细胞免疫。2.核酸疫苗的缺 点：虽然核酸疫苗的免疫能产生较高的抗体水平，但对强毒攻击的保护力不理想。（四）重 组疫苗。重组疫苗的优点：载体病毒较稳定，免疫原性持久，删除毒力基因的活载体疫苗能 诱发体液免疫和细胞免疫，避免了灭活苗免疫的缺点，接种方便安全。重组疫苗的缺点：有 些载体对人或动物具有潜在致病性，对人或动物具有潜在的威胁。另外，重复使用会使动物 对载体病毒产生免疫反应。
[0005] 猪链球菌病（Swine streptococosis)是由链球菌属中致病性链球菌所致的一种 传染病。链球菌的抗原构造比较复杂，有核蛋白抗原（P抗原），无群型的特异性；C抗原，具 有群特异性；表面抗原，具有型特异性。根据C抗原的不同，用兰氏（Lance field)血清学 分类，可将链球菌分成A、B、C、D、E、F、G等20个血清群。根据细菌的荚膜多糖抗原（CPS) 特性的不同，D群又可分为35个血清型，S卩1型?34型和1/2型（同时含有1型和2型抗 原的菌株）。目前，以C群兽疫链球菌病和D群中的2型链球菌病影响最严重，危害最大。 C群兽疫链球菌（Streptococcus zooepidemicus)现名马链球菌兽疫亚种（Streptococcus equisubsp. zooepidemicus)，在自然界中分布很广，一直是我国猪链球菌病的重要病原。猪 链球菌病也是一种人畜共患的急性、热性传染病，表现为急性出血性败血症、心内膜炎、脑 膜炎、关节炎、哺乳仔猪下痢和孕猪流产等，在特定诱因作用下，发病猪死亡率可达80%，严 重影响养猪业的发展。猪链球菌病在我国华南、西南、华东、江西及江苏等地曾大面积爆发 流行过，发病率和死亡率都较高，造成了严重的经济损失，主要血清型为兰氏C群，其次为 兰氏D群、E群。近年来，在猪链球菌众多血清型中，猪链球菌2型（R群）是猪的最主要病 原，致病性最强，从表征健康的猪扁桃体内分离的所有猪链球菌中，2型多达50. 6%，而且 可感染特定人群发病，并可致死亡，危害严重，其中1998年江苏部分地区爆发的猪链球菌， 造成25人感染，14人死亡；2005年四川部分地区爆发2型疫情，造成205人感染，37人死 亡。
[0006] 近年来，随着集约化养猪业的发展，猪链球菌病的发生在中国一直呈上升趋势，除 猪链球菌2型外，C群兽疫链球菌仍是最主要的病原之一，引起的损失巨大，更为严重的是 现有的疫苗不能提供有效的免疫保护，因此对该病的有效防控开展研究是当务之急。
[0007] 对猪链球菌病的防治包括药物预防与治疗，免疫接种等。但是，近年来，由于抗生 素的滥用，不仅使治疗成本提高，耽误了有效治疗的最佳时机，而且产生了大量耐药菌，抗 生素也失去应有的作用，疾病难以控制；其次猪链球菌的耐药率较高，而敏感率又普遍偏 低，不同地区分离株耐药性也不一致，表现出多重耐药性；再就是链球菌的血清型较多，其 间的交叉免疫保护作用也不确定，再加上猪链球菌具有较强的地域性，即使同一地区的不 同菌株也有明显的差异，因而彻底根除本病难度较大。
[0008] 免疫接种是猪链球菌病和猪伪狂犬病防制的重要措施，但目前市场上仅有猪链球 菌病疫苗和猪伪狂犬病疫苗单苗，为了有效预防猪链球菌病和猪伪狂犬病的发生，需单独 免疫上述两种疫苗。单独免疫猪链球菌病疫苗和猪伪狂犬病活疫苗存在繁琐、费时、费力、 增加成本等问题，且容易造成漏种，直接影响免疫效果。
【发明内容】
[0009] 本发明提供了预防和治疗猪伪狂犬病与猪链球病的疫苗组合物，以解决现有技术 没有猪伪狂犬病，猪链球菌病二联苗的问题，同时还解决了现有技术没有猪伪狂犬病，猪链 球菌病二联苗的使用方法与免疫程序。
[0010] 本发明的主要目的在于提供一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包括免疫量的猪伪 狂犬病病毒抗原和免疫量的猪链球菌病细菌抗原。
[0011] 优选地，所述猪伪狂犬病病毒抗原为灭活的猪伪狂犬病全病毒抗原、改良的活的 猪伪狂犬病全病毒抗原、含有猪伪狂犬病的免疫原性氨基酸序列的重组病毒、或含有猪伪 狂犬病的免疫原性氨基酸序列的多肽；以及所述猪链球菌病细菌抗原为灭活的猪链球菌病 全菌抗原、改良的活的猪链球菌病全菌抗原、含有猪链球菌病的免疫原性氨基酸序列的重 组菌株、或含有猪链球菌病的免疫原性氨基酸序列的多肽。
[0012] 优选地，本发明所述的猪链球菌病、猪伪狂犬病二联疫苗中，所述的猪链球菌病抗 原为猪链球菌病疫苗、改良/嵌合的猪链球菌病疫苗、至少含有猪链球菌病的免疫原性氨 基酸序列的重组菌株，至少含有猪链球菌病的免疫原性氨基酸序列的多肽或成分的一种或 任意几种的组合。
[0013] 优选地，本发明所述的猪链球菌病、猪伪狂犬病二联疫苗中，所述的猪伪狂犬病病 毒抗原为猪伪狂犬活病毒、改良/嵌合的猪伪狂犬活病毒，至少含有猪伪狂犬病病毒的免 疫原性氨基酸序列的重组病毒、猪伪狂犬病病毒基因缺失病毒或弱毒病毒的一种或任意几 种的组合。
[0014] 更优选地，所述猪伪狂犬病病毒抗原为猪伪狂犬病病毒基因缺失SA215株、Ea株、 WKQ-001株或猪伪狂犬病病毒弱毒株Bartha株、Bartha-K61株、Bucharest株、BUK株、Η 株和C株中的一种或任意几种的组合；以及所述猪链球菌病细菌抗原为灭活的猪链球菌 血清2型SC株全菌抗原，猪链球菌2型分离株ΗΑ9801全菌抗原以及马链球菌兽医亚种 ATCC35246全菌抗原一种或任意几种的组合。
[0015] 优选地，所述的猪伪狂犬病病毒抗原为伪狂犬病病毒基因缺失SA215株（CCTCC， 保藏编号V200002)公开于中国专利CN101186902A、Ea株（CGMCC，保藏编号Ν0. 0907)、 WKQ-001株（CCTCC，保藏号V200511)或伪狂犬病病毒弱毒株Bartha株、Bartha-K61株(保 藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏日期：2011年7月21日，保 藏号：CGMCC N0. 5076)专利
【发明者】张许科, 孙进忠, 田克恭 申请人:普莱柯生物工程股份有限公司