甲烷注射液在制备治疗缺血再灌注损伤药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了甲烷注射液在制备治疗缺血再灌注损伤药物中的应用，包括了甲烷注射液的制备方法。本发明对甲烷注射液进行动物实验，结果证明：甲烷注射液对大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型能明显降低谷丙转氨酶水平，减轻肝脏损伤，减少肝脏细胞死亡，因此可用于治疗肝脏缺血再灌注损伤。因此本发明的甲烷注射液可用做治疗缺血再灌注损伤的药物。
【专利说明】甲烷注射液在制备治疗缺血再灌注损伤药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及医药【技术领域】，是一种可以用于制备治疗缺血再灌注损伤药物的含甲烷注射液。
【背景技术】
[0002]缺血再灌注损伤是心脏骤停等疾病重要的病理生理过程。缺血再灌注后，早期局部组织出现中性粒细胞和肥大细胞浸润和激活，产生大量炎症因子；后期存在单核细胞浸润和小胶质细胞激活以及星型胶质细胞增殖等典型改变。肝脏缺血再灌注是组织缺血再灌注的一种，肝脏缺血再灌注的保护也可能提示对其他器官的缺血再灌注损伤具有保护作用。
[0003]目前常用治疗缺血再灌注损伤的方法主要是以恢复全省血液供应为主，辅助针对相应症状治疗。
[0004]缺血再灌注损伤可导致机体炎症反应和细胞死亡，在其对应的治疗方式中至今未见有关采用含甲烷注射液防治缺血再灌注损伤的相关报道。也无任何有关甲烷注射液可降低谷丙转氨酶水平、以及甲烷注射液用于治疗肝脏损伤的相关报道。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种甲烷注射液的新用途。
[0006]本发明提供了甲烷注射液在制备预防或治疗缺血再灌注损伤药物中的应用。
[0007]所述的缺血再灌注损伤，是指缺血再灌注导致的组织损伤或器官功能障碍。
`[0008]进一步地，本发明提供了甲烷注射液用于治疗肝脏缺血再灌注导致的组织损伤或器官功能障碍。
[0009]甲烷注射液可以降低谷丙转氨酶水平。
[0010]甲烷注射液可以用于治疗肝脏损伤。
[0011]所述的甲烷注射液，甲烷的浓度为1.28-1.32mM，溶液优选生理盐水。
[0012]本发明的甲烷注射液，是根据以下方法制备得到的:
[0013]1.脱气处理:生理盐水等软包装医用注射液，常温中放置于0.4~0.8个绝对大气压下的低压舱内2~24小时，再在常温、常压下放置4~12小时，使超饱和部分的气体充分析出，随后抽除析出的气体。
[0014]2.低温预处理:将脱气处理后的注射液软包装袋置于2~10°C充分冷却，以便注入甲烷后增加对甲烷的溶解度。
[0015]3.注入甲烷气体:从低温处理后的注射液软包装抽取总体积5%~15%的注射液，注入甲烷使包装袋充盈。
[0016]4.加压助溶:将注入甲烷后的注射液软包装袋放入加压舱，I~5°C下持续加压12~24小时，6个绝对大气压，使甲烷充分溶于注射液，减压后取出置O~5°C保存备用，稳定24小时后即可使用。[0017]本发明经动物实验证明:对大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型能明显降低谷丙转氨酶水平，减轻肝脏损伤，减少肝脏细胞死亡，因此可用于治疗肝脏缺血再灌注损伤。因此本发明的甲烷注射液可用做治疗缺血再灌注损伤的药物。
【专利附图】
【附图说明】
[0018]图1是本发明在肝脏损伤后降低谷丙转氨酶水平的情况。
[0019]图2是本发明在肝脏损伤后减轻大体损伤情况。
[0020]图3是本发明在肝脏损伤后减少肝脏细胞死亡情况。
[0021]其中:Control为没有干预的空白对照组；IR为肝缺血再灌注损伤组；IR+0.5ml为肝缺血再灌注损伤后给予0.5ml/100g含甲烷生理盐水治疗组；IR+2ml为肝缺血再灌注损伤后给予2ml/100g含甲烷生理盐水治疗组；IR+4ml为肝缺血再灌注损伤后给予4ml/100g含甲烷生理盐水治疗组。
【具体实施方式】
[0022]现结合实施例，对本发明作详细描述，但本发明的实施不仅限于此。
[0023]下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。
[0024]实施例1:制备含甲烷生理盐水注射液
[0025]1.脱气处理生理盐水注射液500ml软包装袋置于低压舱中，常温下以0.4个绝对大气压减压处理2小时，取出后常温、常压下放置4小时，将析出的气体用注射器抽除。
[0026]2.低温预处理常压下将上述脱气处理后的注射液软包装置于2°C环境下2小时充分冷却。
[0027]3.注入甲烷气体从上述低温处理后的软包装袋中抽出50ml的生理盐水，常压下注入甲烷50ml。
[0028]4.加压助溶将注入甲烷后的注射液软包装放入加压舱5°C以下持续加压12小时，6个绝对大气压，使甲烷充分溶入注射液，减压后取出常压下放置24小时后即可使用。
[0029]实施例2:动物实验
[0030]一、实验动物:SD雄性大鼠，体质量220~250g，购于第二军医大学实验动物中心。
[0031]取大鼠40只，雄性，随机分成5组:
[0032]正常对照组，(Control);
[0033]缺血再灌注损伤组，(IR);
[0034]缺血再灌注损坏0.5ml/100g治疗组，(IR+0.5ml)；
[0035]缺血再灌注损坏2ml/100g治疗组，(IR+2ml)；
[0036]缺血再灌注损坏4ml/100g治疗组，(IR+4ml)。
[0037]除正常对照组外，其余各组分别肝脏缺血60分钟后再灌注6小时，不同剂量治疗组分别在缺血结束后给予不同剂量甲烷生理盐水治疗。
[0038]二、肝脏缺血再灌注模型的制备:
[0039]SD大鼠用水合氯醛麻醉固定于鼠板，腹部旁正中切口，分离肝脏暴露支持肝脏左叶和中叶的肝动脉和门静脉，动脉夹夹闭血管造成缺血60分钟，缺血后松开动脉夹造成再灌注损伤。本实验采用的动物模型均为缺血60分钟后再灌注6小时模型。
[0040]上述各组大鼠在再灌注6小时后处死，分别取肝脏组织进行拍照并切片染色，取血清检测肝功能。
[0041]三、实验结果:
[0042]1.观察甲烷生理盐水对大鼠肝脏缺血再灌注损伤后肝功能改善情况取大鼠血清300ul送检测肝功能。结果见图1，图中Control为没有干预的空白对照组；IR为肝缺血再灌注损伤组；IR+0.5ml为肝缺血再灌注损伤后给予0.5ml/100g治疗组；IR+2ml为肝缺血再灌注损伤后给予2ml/100g治疗组；IR+4ml为肝缺血再灌注损伤后给予4ml/100g治疗组。图中星号表明各组之间比较有显著性差异(P < 0.05)。
[0043]结果表明，本发明注射液可明显改善大鼠肝脏缺血再灌注损伤后肝功能情况。
[0044]2.观察甲烷生理盐水对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的大体影响取大鼠肝脏组织，4°C生理盐水清洗后，置于滤纸拍照。结果见图2，图中Control为正常对照组，IR为模型组，IR+0.5为0.5ml/100g甲烷生理盐水治疗组。图中褐色部分为大体上观察到的缺血再灌注损伤，可见模型组的损伤弥漫而且严重，治疗组的损伤较缩小而集中。
[0045]结果表明，本发明注射液可明显改善肝脏缺血再灌注损伤。
[0046]3.观察甲烷生理盐水对大鼠肝脏缺血再灌注损伤后细胞死亡情况的改善
[0047]取大鼠肝 脏组织，石蜡固定并切片，采用苏木紫伊红染色。结果见图3，图中Control为正常对照组，IR为模型组，IR+0.5为0.5ml/100g甲烷生理盐水治疗组，其中治疗组细胞死亡情况较模型组有明显改善。结果表明，本发明注射液可减轻大鼠肝缺血再灌注损伤后肝脏细胞死亡情况。
[0048]上述实验表明，本发明可降低肝脏损伤后谷丙转氨酶水平，减轻肝脏缺血再灌注后大体损伤，减少肝脏损伤后肝脏细胞死亡。
[0049]因此本发明可用做肝脏缺血再灌注损伤的治疗药物。
[0050]以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。
【权利要求】
1.甲烷注射液在制备预防或治疗缺血再灌注损伤药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的甲烷注射液在制备预防或治疗缺血再灌注损伤药物中的应用，其特征在于，所述的缺血再灌注损伤是指缺血再灌注导致的组织损伤或器官功能障碍。
3.根据权利要求1所述的甲烷注射液在制备预防或治疗缺血再灌注损伤药物中的应用，其特征在于，所述的甲烷注射液，甲烷的浓度是1.28-1.32mM。
4.根据权利要求1、2或3所述的甲烷注射液在制备预防或治疗缺血再灌注损伤药物中的应用，其特征在于，所述的甲烷注射液，是根据以下方法制备得到的: A.脱气处理:医用注射液软包装，常温中放置于0.4~0.8个绝对大气压下的低压舱内2~24小时，再在常温、常压下放置4~12小时，使超饱和部分的气体充分析出，随后抽除析出的气体； B.低温预处理:将脱气处理后的医用注射液软包装置于2~10°C充分冷却； C.注入甲烷气体:从低温处理后的医用注射液软包装中抽取总体积5%~15%的注射液，注入甲烷使医用注射液软包装充盈； D.加压助溶:将注入甲烷后的医用注射液软包装放入加压舱，I~5°C下持续加压12~24小时，6个绝对大气压，使甲烷充分溶于注射液，减压后取出置O~5°C保存备用，稳定24小时后即 可使用。
【文档编号】A61K9/08GK103690481SQ201310717851
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2013年12月23日 优先权日:2013年12月23日
【发明者】孙学军, 叶周恒, 张荣佳, 刘文武, 陈欧阳, 翟晓, 陈晓 申请人:中国人民解放军第二军医大学