一种铝胶类脂复合佐剂的制作方法
【专利摘要】本发明属于兽用生物制品的【技术领域】，具体的涉及一种铝胶类脂复合佐剂。该种铝胶类脂复合佐剂，包括杨树皮类脂、免疫增加剂和氢氧化铝胶。采用杨树皮类脂、氢氧化铝胶和免疫增强剂进行复配，达到增强灭活疫苗免疫的技术效果。
【专利说明】一种铝胶类脂复合佐剂
【技术领域】
[0001]本发明属于兽用生物制品的【技术领域】，具体的涉及一种铝胶类脂复合佐剂。
【背景技术】
[0002]佐剂(Adjuvant)这个术语来源于拉丁文“adju_vare”,有“协助”之意。佐剂最初是由Gaston Ramon作为与特异性抗原联合应用的一种物质而进行叙述的,而与佐剂联合应用的特异性抗原此时所产生的免疫应答比其单独应用时要高得多。一般而言，佐剂本身并不提供免疫，只有在与免疫原组成一种制剂时，它们才能够改善由疫苗诱导产生的免疫应答的广度和效力。目前临床上应用的疫苗用免疫佐剂为白油佐剂、氢氧化铝胶佐剂、类脂佐剂和蜂胶佐剂等。白油佐剂免疫原性好，但是毒副作用大；氢氧化铝胶胶佐剂免疫原性好，副作用小，但不能诱导细胞免疫；类脂佐剂和蜂胶佐剂免疫原性好，可诱导体液免疫和细胞免疫，免疫持续时间长，但原材料价格昂贵。因此近年来，各国科研工作者应用不同原料和采用不同方法研制了一系列新型免疫佐剂，但因为效果差或者毒力大，没有一种得到满意效果。因此研究新型免疫佐剂就成为研究高效疫苗必不可少的组成部分。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于针对上述存在的缺陷而提供一种铝胶类脂复合佐剂，采用杨树皮类脂、氢氧化铝胶和免疫增强剂复配，达到增强灭活疫苗免疫的技术效果。
[0004]本发明的技术方案为:一种铝胶类脂复合佐剂，包括杨树皮类脂、免疫增加剂和氢氧化铝胶。
[0005]所述杨树皮类脂、免疫增加剂和氢氧化铝胶的重量份比为(I~10):(1~5):(10 ~50)。
[0006]所述杨树皮类脂、免疫增加剂和氢氧化铝胶的重量份比为3:2:24。
[0007]所述杨树皮类脂、免疫增加剂和氢氧化铝胶的重量份比为8:3:35。
[0008]所述杨树皮类脂、免疫增加剂和氢氧化铝胶的重量份比为9:4:47。
[0009]所述铝胶类脂复合佐剂用于猪细小病毒灭活疫苗或鸡传染性鼻炎灭活疫苗或鸭疫里默氏杆菌-大肠杆菌灭活疫苗或细菌单价灭活疫苗。
[0010]本发明的有益效果为:本发明所述铝胶类脂复合佐剂将杨树皮类脂、免疫增加剂和氢氧化铝胶按照一定比例剂乳化制成。
[0011]杨树皮类脂是从杨树皮中提取的一种橙黄色脂溶性物质，富含大量的多糖、有机酸、甾醇、磷脂、苷类及维生素等物质，是一种宝贵的化工原料。
[0012]免疫增强剂是一类单独使用或与抗原同时使用、通过非特异性途径增强机体免疫应答的物质，可增强机体的免疫功能，缓解由环境造成的免疫功能紊乱，有利于预防和治疗传染性和条件性疾病。
[0013]氢氧化招胶是传统的免疫佐剂,免疫效果较好，毒性小，成本低，为较理想的免疫佐剂，是由十二水硫酸铝钾铝盐溶液和纯碱溶液按照一定比例在一定温度下化合、熟化、洗漆而成。
[0014]将氢氧化铝胶、杨树皮类脂和免疫增强剂有机结合，取长补短，制备出较好的免疫复合佐剂，发挥佐剂的最大优势，再与所需剂量与相关抗原合用。具体制备操作简单，效果佳，可用于多种兽用细菌疫苗的佐剂。经复合，将杨树皮类脂和免疫增强剂加入氢氧化铝胶溶液乳化即可获取。该佐剂免疫原性好、毒性小，能提高抗体滴度，所述佐剂与相应的抗原结合，组成最佳的配方，即形成免疫刺激复合物，更好的发挥免疫佐剂效果。应用该复合佐剂和单独使用油苗佐剂、氢氧化铝胶佐剂、分别配置鸡传染性鼻炎灭活疫苗免疫动物，应用新型复合佐剂组其抗体滴度均明显高于单独使用氢氧化铝胶佐剂或白油佐剂组，高出2~10个抗体滴度。
【具体实施方式】
[0015]下面将结合传染性鼻炎灭活疫苗实例对本发明作进一步说明。
[0016]在灭活的副鸡嗜血杆菌菌液加入由重量份为9杨树皮类脂、重量份为4免疫增强剂和重量份为47氢氧化铝胶复配而成的复合佐剂，经复合乳化即得鸡传染性鼻炎复合佐剂灭活疫苗。
[0017](I)抗原的制备
菌液培养:将生产种子接种于半合成培养基封好瓶口并摇匀，置37°C温室中静止培养18小时左右，期间每个6~8小时摇晃一次。当眼观菌液呈现混浊的淡黄色时即达到生长闻峰，准备收犾，此时含 囷量可以达到10亿/ml左右。
[0018]制苗菌液的浓缩与灭活:用浓缩机将纯检合格的菌液进行浓缩，然后再用PH 7.2的生理盐水制成悬浮液，使40~50亿/ml菌体，通过比浊法测定最终的含菌量。再按体积比加入1%。的甲醛溶液进行灭活，混匀后37°C灭菌I天，2~8°C放置I天，经检验无菌生长作为制苗抗原。
[0019](2)氢氧化铝胶制备
a.原料溶解
①明矾溶液配制:以吹沸溶解之矾液，调节浓度25%-28%，温度在60~65° C之间。
[0020]②纯碱溶液配制:以吹沸溶解之碱液，，调节浓度在10-12%，温度在50~55° C之间。
[0021]b.化合:将明矾溶液和纯碱溶液化合于不锈钢容器，以60rpm速度不断搅拌，化合完毕后继续5分钟，温度在49°C，pH值在6.7左右。
[0022]c.熟化:直接通入蒸汽管进行熟化，驱除C02使胶态变稀，发灰、青亮为熟化标准，PH应在7.8~8.0，吹沸时间到没有大量气泡为止，测其PH应在7.6~7.8之间。
[0023]d.冷却:加冷水使熟化胶温下降在75° C以下，搅拌均匀，测其PH应较熟化PH稍降或不变。
[0024]e.分装:用水泵将胶送入六个帆布袋内，待母液控干后进行洗涤。
[0025]f.洗涤:母液控干后即可进行洗涤，洗涤水温控制在50~55° C之间。每次洗涤间隔2.5~3小时以上。洗涤时用搅棒打碎胶盐，搅拌均匀，将水放满胶袋，待洗完六次，检查硫酸盐合格后，方可停止洗涤。
[0026]g.收胶:把过滤好的控干胶，将胶袋收起压在磅秤上，使胶量水份脱至约为明矾投料量的2~2.5倍时可进行收胶。
[0027]h.送检:可将组批收起的胶，填写送检单送检验部门检验，经检验合格后方可使用。
[0028](3)复合佐剂准备:用生理盐水溶解氢氧化铝胶，使得成品疫苗中氢氧化铝胶含量为20%并进行高压灭菌，冷却至室温后按照杨树皮类脂9份，免疫增强剂4份加入，并应用均质机混合，制成免疫复合佐剂。
[0029](4)乳化:将一定量的抗原加入准备好的复合佐剂中，按照3000rpm，乳化30分钟，运行完毕，疫苗降温至室温取样检测，待分装。
[0030]将新型复合佐剂依照国家兽药标准，验证其结果:
安全检验:用2~3月龄的三黄鸡8只，每只皮下注射疫苗0.5ml。观察20日，均应无异常反应。
[0031]检验结果:观察20日后8只三黄鸡鸡均未出现异常反应。
[0032]效力检验:选用传染性鼻炎复合佐剂灭活疫苗，用2~3月龄的三黄鸡为试验动物，8只/组，每只皮下注射疫苗0.5ml。I个月后连同条件相同的对照鸡4只，各眶下窦内注射C-Hpg-8攻毒菌液0.2ml (50~100万活菌)，观察20日，对照鸡应全部发病，免疫鸡至少保护6只，或对照鸡3只发病，免疫鸡至少保护7只为合格。
[0033]检验结果:对照组全发 病，免疫组全健活。
【权利要求】
1.一种铝胶类脂复合佐剂，其特征在于，包括杨树皮类脂、免疫增加剂和氢氧化铝胶。
2.根据权利要求1所述铝胶类脂复合佐剂，其特征在于，所述杨树皮类脂、免疫增加剂和氢氧化招胶的重量份比为(I~10): (I~5): (10~50)。
3.根据权利要求1所述铝胶类脂复合佐剂，其特征在于，所述杨树皮类脂、免疫增加剂和氢氧化招胶的重量份比为3:2:24。
4.根据权利要求1所述铝胶类脂复合佐剂，其特征在于，所述杨树皮类脂、免疫增加剂和氢氧化铝胶的重量份比为8:3:35。
5.根据权利要求1所述铝胶类脂复合佐剂，其特征在于，所述杨树皮类脂、免疫增加剂和氢氧化招胶的重量份比为9:4:47。
6.根据权利要求1所述铝胶类脂复合佐剂，其特征在于，用于猪细小病毒灭活疫苗或鸡传染性鼻炎灭活疫苗或鸭疫里默氏杆菌-大肠杆菌灭活疫苗或细菌单价灭活疫苗。
【文档编号】A61K39/108GK103690946SQ201310742749
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2013年12月30日 优先权日:2013年12月30日
【发明者】贾红梅, 郝圣峰, 郎景民, 张静, 翟庆贺 申请人:山东滨州博莱威生物技术有限公司