一种从苜蓿中提取高纯度生物碱的方法
【专利摘要】一种从苜蓿中提取高纯度生物碱的方法，其特征是包括如下步骤：⑴将苜蓿清洗、干燥、粉碎研磨；⑵用正丁醇回流提取，减压浓缩得粗浓缩液；⑶粗浓缩液采用盐酸酸化，再用丙酮作为萃取剂萃取得到酸性水相；⑷酸性水相经碳酸钠碱化后用氯仿萃取，得萃取相；⑸所得萃取相用大孔吸附树脂柱进行吸附，采用水和乙醇洗脱后浓缩。本发明方法的原料廉价易得，为国内外种植面积最大的豆科植物，可大批量用于生物碱的提取，生产成本低，纯度高，方法绿色环保，在整个操作过程中多种提取方法有效避免了生物碱的分解，提高了生物碱的纯度，使用减压浓缩、减压蒸馏、大孔树脂吸附等方法，大大提高了生物碱的提取率和纯度。
【专利说明】一种从苜蓿中提取高纯度生物碱的方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及从植物中提取生物碱的方法，具体为从苜蓿中高效分离提取高纯度生物碱的方法。
【背景技术】
[0002]苜猜(MedicagosativaLinn.)为豆科(Legu-minosae)蝶形花亚科(Faboideae)苜蓿属植物，因其产草量高、富含蛋白质、适口性好、适应性强等特点而被称为牧草之王。苜蓿在我国已有2000多年的栽培历史，主要分布在东北、华北、西北地区，具有广泛的生态适应性和稳定的生产力，同时在抗旱、抗风沙、改良土壤、防止水土流失、保护生态环境等方面也起到积极的作用。苜蓿含有大量生物碱等多种次生代谢产物，在抗血栓、镇痛、消炎、抗氧化、抗菌、抗虫、化感等方面具有广泛的生物活性。然而目前没有从苜蓿中分离提取生物碱的相关研究。
[0003]生物碱(Alkaloids) —般指存在于生物体内的碱性含氮化合物，多数具有复杂的含氮杂环，有光学活性和显著的生理效应。主要分布在毛茛科、罂粟科、防己科、茄科、夹竹桃科、芸香科、豆科、小檗科等植物中。生物碱是从生物体内的氨基酸途径得到的目前已发现生物碱约6000种，并且仍以每年约100种的速度递增。多数生物碱具有显著的生理活性，如黄连中的小聚碱(黄连素)具有抗菌消炎作用；罗芙木中的利血平具有降压作用；长春花中的长春新碱具有抗癌活性；婴粟中的吗啡具有镇痛作用；延胡索中的去氢紫碱具有抗血栓的作用；包公中的包公藤甲素具有缩小瞳孔、降低眼压的作用，可用以治疗青光眼；海洋生物海绵中的抗体生物碱具有抗菌的作用。
[0004]由于生物碱本身有不稳定性，提取难度大，现有方法有的提取纯度过低、有的则提取成本过高、不适合大规模生产，如中国专利101653470中所记载的提取方法只能提取到纯度为50%的生物碱。随着市场上对生物碱需求不断增长，如何快速地从原料中得到质量稳定、纯度高、收率高、安全可靠的生物碱的提取方法研究很有必要，本发明将多种提取方法进行了集成改良，能够快速提取出提取率高、提取成本低、纯度大的苜蓿生物碱。
【发明内容】
[0005]本发明针对现有生物碱制备技术的不足之处，为此本发明进行了大量研究实验，提出一种从苜蓿中快速便捷高收率的提取高纯度生物碱的制备方法。
[0006]一种从苜蓿中提取高纯度生物碱的方法，包括如下步骤:
[0007]⑴将苜蓿清洗、干燥、粉碎研磨；
[0008]⑵用正丁醇回流提取，减压浓缩得粗浓缩液；
[0009]⑶粗浓缩液采用盐酸酸化，再用丙酮作为萃取剂萃取得到酸性水相；
[0010]⑷酸 性水相经碳酸钠碱化后用氯仿萃取，得萃取相；
[0011](5)所得萃取相用大孔吸附树脂柱进行吸附，采用水和乙醇洗脱后浓缩。
[0012]本发明以处在成熟期的无污染的苜蓿为原材料，根和叶片重量达全株的80%以上，苜蓿的根部及叶片含有大量的生物碱，原料研磨后要经60目筛子过筛去杂，有利于高纯度生物碱的提取。该方法除可用苜蓿作为原料外，还可广泛应用于金银花、杜仲叶等其他中草药原料提取生物碱。
[0013]进一步地，所述正丁醇的剂量是所述经研磨的苜蓿体积的8倍。
[0014]经实验表明可以作为有机提取剂的有正丁醇、异丙醇、石油醚或乙醚等，其中用正丁醇作为有机提取剂的提取干膏量最高，相关数据见表1。
[0015]进一步地，所述减压浓缩在温度40°C、真空度0.06-0.1MPa下进行。
[0016]进一步地，所述粗浓缩液经盐酸酸化至pH2~5 ;所述丙酮的用量是所述粗浓缩液体积的8倍。
[0017]经实验表明可以作为酸化剂的有盐酸、硝酸、磷酸或醋酸醚等，其中用4%盐酸作为酸化剂的提取率最高，相关数据是见表2。
[0018]经实验表明步骤⑶可以作为萃取剂的有丙酮、乙酸乙酯、石油醚或乙醚等，其中用丙酮作为萃取剂的萃取率最高，相关数据见表3。
[0019]进一步地，所述酸性水相经碳酸钠碱化至pH8~10。
[0020]经实验表明可以作为碱化剂的有碳酸钠、醋酸钠、硫酸钠或硝酸钠等，其中用碳酸纳作为喊化剂的提取率最闻，相关数据见表4。
[0021]进一步地，所述氯仿的用量是所述酸性水相体积的8倍。
[0022]经实验表明步骤⑷可以作为有机萃取剂的有氯仿、丙酮、石油醚或乙醚等，其中用氣仿作为此步有机萃取剂的萃取率最闻，相关数据见表5。
[0023]进一步地，所述大孔吸附树脂柱选自WLD-1II (购自四川中药研究所)、DA201 (购自天津农药厂)或DlOl (购自天津农药厂)。
[0024]大孔吸附树脂柱WLD-1II型极性好，能大量吸附生物碱，进一步提高生物碱的提取率，经实验表明使用WLD-1II的提取率最高，相关数据见图1。
[0025]进一步地，所述洗脱依次用5倍大孔吸附树脂柱体积的水、75%乙醇水溶液洗脱，流速为0.5/h,能最大程度将生物碱洗脱下来。
[0026]进一步地，所述洗脱后收集乙醇洗脱液，减压蒸馏至干，真空度为0.1MPa0
[0027]进一步地，所述方法得到的苜蓿生物碱，其特征在于所述苜蓿生物碱的纯度为70%—90% ο
[0028]本发明有益效果如下:
[0029]1.本发明方法的原料廉价易得，为国内外种植面积最大的豆科植物，可大批量用于生物碱的提取，生产成本低，纯度高，方法绿色环保。
[0030]2.在整个操作过程中多种提取方法有效避免了生物碱的分解，提高了生物碱的纯度。
[0031]3.使用减压浓缩、减压蒸馏、大孔树脂吸附等方法，大大提高了生物碱的提取率和纯度。
[0032]4.本发明的方法具有工艺先进、操作容易、成本低、无有害溶剂、纯度高、提取率高，适用于工业化大生产等优点。
【专利附图】
【附图说明】[0033]本发明附图1幅，
[0034]图1为三种型号树脂洗脱苜蓿生物碱效果曲线。
【具体实施方式】
[0035]下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
[0036]实施例1
[0037](I)将苜蓿材料(主要是根和叶)用清水洗净、初次去杂，自然干燥，之后将其放入烘箱中烘4h烘至恒重，粉碎后过60目筛，将过筛的粉末置于干燥器中备用。
[0038](2)将干燥好的苜蓿粉末500g加入8倍其体积的有机提取剂90%正丁醇水溶液加热回流提取4次，回收并合并提取液，采用蒸馏的方法回收正丁醇；将合并后的提取液在40°C真空度0.1MPa下进行减压浓缩，浓缩2次得到浓缩液。除本实施例1采用的正丁醇外，不同提取剂对提取苜蓿生物碱干膏重量的影响见表1。
[0039](3)添加4%的盐酸水溶液作为酸化剂将所得浓缩液酸化至pH4，用8倍浓缩液体积的丙酮室温下萃取3次，收集酸性水相。
[0040](4)将酸性水相用4%的碳酸钠水溶液作为碱化剂碱化至pH9，用8倍酸性水相体积的氯仿萃取3次，收集萃取相。
[0041](5)将收集得到的萃取相用WLD-1II系列大孔树脂吸附，流速为0.5/h，使生物碱都吸附在树脂上。
[0042](6)经吸附后，先用5倍柱体积的蒸馏水洗脱，控制流速为0.5/h,收集洗脱液；再用等量75%乙醇洗脱，控制流速为0.5/h，合并收集洗脱液。
[0043](7)将收集好的洗脱液在温度40°C真空度0.1MPa下减压蒸馏至干得到纯度在75%的苜蓿生物碱。
[0044]表1不同提取剂对提取苜蓿生物碱干膏重量的影响
【权利要求】
1.一种从苜蓿中提取高纯度生物碱的方法，其特征是包括如下步骤: ⑴将苜蓿清洗、干燥、粉碎研磨； ⑵用正丁醇回流提取，减压浓缩得粗浓缩液； ⑶粗浓缩液采用盐酸酸化，再用丙酮作为萃取剂萃取得到酸性水相； ⑷酸性水相经碳酸钠碱化后用氯仿萃取，得萃取相； (5)所得萃取相用大孔吸附树脂柱进行吸附，采用水和乙醇洗脱后浓缩。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述正丁醇的剂量是所述经研磨的苜蓿体积的8倍。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述减压浓缩在温度40°C、真空度0.06-0.1MPa 下进行。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述粗浓缩液经盐酸酸化至PH2~5;所述丙酮的用量是所述粗浓缩液体积的8倍。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述酸性水相经碳酸钠碱化至pH8~10。
6.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于所述氯仿的用量是所述酸性水相体积的8倍。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述大孔吸附树脂柱选自WLD-1I1、DA201或D101。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述洗脱依次用5倍大孔吸附树脂柱体积的水、75%乙醇水溶液洗脱，流速为0.5/h。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述洗脱后收集乙醇洗脱液，减压蒸馏至干，真空度为0.1MPa0
10.权利要求1-9任意一项所述方法得到的苜蓿生物碱，其特征在于所述苜蓿生物碱的纯度为70% — 90%。
【文档编号】A61P7/02GK103720742SQ201410018330
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2014年1月14日 优先权日:2014年1月14日
【发明者】姜健, 王强, 郭鹏, 杨宝灵, 张万筠, 高明波 申请人:大连民族学院