一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法
【专利摘要】本发明涉及食用菌有效成份提取【技术领域】，尤其涉及一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法，包括提取液准备步骤、超声辅助碱液提取步骤、残渣酶解步骤、乙酸乙酯萃取多酚步骤、超滤脱盐后提取多糖步骤。本发明将辅助萃取、酶解、膜过滤等操作有机结合，同时提取多糖和多酚，简化了生产工艺，安全可靠，产率高，较好的保留了金针菇子实体中多糖和多酚成分的生理和药理活性，具有较大的经济价值。
【专利说明】一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及食用菌有效成份提取【技术领域】，尤其涉及一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法。
【背景技术】
[0002]金针燕(Flammulina velutipes)又名朴燕,冬燕,隶属真菌门,担子菌纲,伞菌目，口蘑科，金针菌属。金针菇营养极为丰富，有增智菇和“一休菇”等美称，是世界上著名的食用菌，目前已发展成为第三大食用菌。金针菇清嫩爽口，鲜美味香，营养丰富，是一道极为高档的佳肴，具有较高的营养价值。文献报道，金针菇中含较高的蛋白质、碳水化合物和粗纤维、而脂肪含量较低，是一种不可多得的高营养食品。
[0003]金针菇含有多种活性成分，包括多糖，蛋白质、多酚类物质、挥发性成分(主要是一些不饱和酸)、氨基酸、纤维素、维生素、微量元素等，其中最主要的成份为多糖，它具有免疫调节、抗感染、抗疲劳、辅助改善记忆的功能，还具有保肝作用。在多糖的开发利用中，分离提取成本占总成本的50%左右，是获得终产品的关键步骤，它不仅影响着产品的得率，还与终产品的活性、终产品的经济价值密切相关。
[0004]金针菇多糖的提取方法主要有热水浸提，酶法，超声和酸碱提法等。以往食用菌多糖一般都采用酶解提取的方法，但是这种方法生产成本较高，条件要求比较苛刻，而且，从金针菇中提取多糖，提取率低，而其余大部分的多糖都滞留在残渣中，作为动物饲料或废弃物，造成了很大的资源浪费。目前有关金针菇多糖提取方法提取时间长，提取率很低，提取的效果极不理想。
[0005]此外，研究发现在金针菇子实体中，不仅含有较多的多糖成分，而且还有较多的多酚成分(五倍子酸、原儿茶酚、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和槲皮素)，这些多酚成分具有抗氧化、抗衰老、抗癌，预防心血管疾病等生理和药理活性。然而却未见关于同时提取金针菇多糖和多酚的技术方案的报道。
【发明内容】
[0006]本发明针对现有技术中从金针菇提取多糖时，提取率低、不能同时制备多酚成分导致浪费等缺陷，提供了一种从食药用菌金针菇中同时提取多糖和多酚的方法。
[0007]为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得以解决:
[0008]一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法，包括如下步骤:
[0009]步骤(1):将金针菇干粉与质量分数为0.5%~2%的氢氧化钠溶液按照质量比1:10~1:30混合；
[0010]步骤(2):将步骤(1)中的混合液超声处理10~30分钟，6000转/分钟离心处理10分钟，分离得到上清液I和沉淀物；
[0011]步骤(3):向步骤(2)的沉淀物中，加入沉淀物8~12倍重量的去离子水，混合均匀，调PH值为4~6，加入占混合液重量0.1%~0.5%的纤维素酶，45~55°C下酶解20~50分钟，酶解液离心，分离得上清液II和沉淀物；
[0012]步骤(4):合并步骤(2)获得的上清液I和步骤(3)获得的上清液II，加入氯化钠固体至饱和，加入乙酸乙酯进行萃取，分液，上层液经减压浓缩干燥获得金针菇多酚；
[0013]步骤(5):步骤(4)萃取后，分液获得的下层液，调节pH值至6~8，超滤脱盐，浓缩，冷冻干燥获得金针菇多糖。
[0014]碱液的使用更有利于超声能量的传递，超声和碱液的结合能够很大程度上破坏金针菇的结构，使多糖和多酚的提取更为有效；纤维素酶能水解金针菇的细胞壁，有利于多酚和多糖从金针菇细胞内释放。多酚萃取中，添加NaCl固体至饱和状态，不仅改变了多酚在水相中的溶解度，而且改变了水相的密度，有利于萃取的完成，提高了萃取效率。多糖浓缩提取前，首先超滤脱除多糖溶液中的盐，然后浓缩和制备同时进行，避免盐份混入终产品中，产品纯度高，同时也极大的提高了生产效率。
[0015]作为优选，步骤(1)之前，金针菇干粉经过超微粉碎处理。干燥金针菇经过超微粉碎，粒度小，比表面积大，与碱液的接触面积大，更有利于超声能量传递至金针菇细胞，有利于超声破碎细胞，有利于多糖和多酚的溶出，提高了多糖和多酚的收率。
[0016]作为优选，步骤(2)中，超声处理频率为100~500Hz，超声处理功率为100~1000ff0 100~500Hz，100~1000W的超声条件，能较好的破坏金针菇细胞结构，有利于多糖和多酚的溶出，提高了多糖和多酚的收率。
[0017]作为优选，步骤(3)中，加入醋酸调节pH值。
[0018]作为优选，步骤(3)中，酶解液离心转速6000转/分，离心时间10分钟。
[0019]作为优选，步骤(5)中，超滤膜截留分子量为6000D。截留分子量为6000D，较好的脱除水相中的盐分，避免多糖终产品混合盐分，产品纯度高；此外，超滤脱盐后，浓缩和多糖制备同时进行，提闻了生广效率。
[0020]本发明由于采用了以上技术方案，具有显著的技术效果:
[0021]1、金针菇先超微粉碎，更有利于多糖和多酚的提取
[0022]2、碱液的使用更有利于超声能量的传递，超声和碱液的结合能够很大程度上破坏金针菇的结构，使多糖和多酚的提取更为有效，同时更有利于纤维素酶的处理。
[0023]3、在萃取金针菇多酚时，NaCl固体的添加，不仅改变了多酚在水相中的溶解度，而且改变了水相的密度，利于萃取的完成，提高了萃取效率。
[0024]4、采用超滤步骤，脱除多糖溶液的盐分，后续处理中，浓缩和制备同时进行，大大提闻了提取效率。
[0025]5、采用此方法同时提取金针菇中的多糖和多酚，产品纯度高，产量高，提取出的多糖具有抗肿瘤和免疫活性，提取出的多酚具有较强的抗氧化活性。
【专利附图】
【附图说明】
[0026]图1是从金针菇中同时提取多糖和多酚的工艺流程图。
【具体实施方式】
[0027]下面结合附图与实施例对本发明作进一步详细描述。
[0028]纤维素酶:160000U/g，湖州礼来生物科技有限公司[0029]实施例1
[0030]一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法，如图1所示，包括如下步骤:
[0031]步骤(1):超微粉碎金针菇干粉后，将金针菇干粉与质量分数为0.5%的氢氧化钠溶液按照质量比1:20混合；
[0032]步骤(2):将步骤(1)中的混合液超声处理，处理条件为200Hz，800W，10分钟，处理液6000转/分离心10分钟，分离得到上清液I和沉淀物；
[0033]步骤(3):向步骤(2)的沉淀物中，加入沉淀物10倍重量的去离子水，混合均匀，调pH值为4，加入占混合液重量0.1%的纤维素酶，45°C下酶解20分钟，酶解液6000转/分离心10分钟，分离得上清液II和沉淀物；
[0034]步骤(4):合并步骤(2)中的上清液I和步骤(3)中的上清液II，加入氯化钠固体至饱和，加入占上清液50%的乙酸乙酯进行萃取，分液，上层液经减压浓缩干燥获得金针菇多酚，多酚得率为1.06%;
[0035]步骤(5):步骤(4)萃取后，分液获得的下层液，调节pH值至6，采用截留分子量6000D的超滤膜超滤脱盐，浓缩，冷冻干燥获得金针菇多糖，多糖得率为13.85%。
[0036]实施例2 [0037]一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法，如图1所示，包括如下步骤:
[0038]步骤(1):超微粉碎金针菇干粉后，将金针菇干粉与质量分数为1%的氢氧化钠溶液按照质量比1:30混合；
[0039]步骤(2):将步骤(1)中的混合液超声处理，处理条件为400Hz，200W，20分钟，处理液6000转/分离心10分钟，分离得到上清液I和沉淀物；
[0040]步骤(3):向步骤(2)的沉淀物中，加入沉淀物8倍重量的去离子水，混合均匀，调pH值为4.5，加入占混合液重量0.3%的纤维素酶，50°C下酶解30分钟，酶解液6000转/分离心10分钟，分离得上清液II和沉淀物；
[0041]步骤(4):合并步骤(2)中的上清液I和步骤(3)中的上清液II，加入氯化钠固体至饱和，加入占上清液50%体积的乙酸乙酯进行萃取，分液，上层液经减压浓缩干燥获得金针菇多酚，多酚得率为1.28% ；
[0042]步骤(5):步骤(4)萃取后，分液获得的下层液，调节pH值至7，采用截留分子量6000D的超滤膜超滤脱盐，浓缩，冷冻干燥获得金针菇多糖，多糖得率为15.10%。
[0043]实施例3
[0044]一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法，如图1所示，包括如下步骤:
[0045]步骤(1):超微粉碎金针菇干粉后，将金针菇干粉与质量分数为1.5%的氢氧化钠溶液按照质量比1:25混合；
[0046]步骤(2):将步骤(1)中的混合液超声处理，处理条件为100Hz，1000W，25分钟，处理液6000转/分离心10分钟，分离得到上清液I和沉淀物；
[0047]步骤(3):向步骤(2)的沉淀物中，加入沉淀物12倍重量的去离子水，混合均匀，调pH值为5，加入占混合液重量0.4%的纤维素酶，50°C下酶解40分钟，酶解液6000转/分离心10分钟，分离得上清液II和沉淀物；
[0048]步骤(4):合并步骤(2)中的上清液I和步骤(3)中的上清液II，加入氯化钠固体至饱和，加入占上清液50%体积的乙酸乙酯进行萃取，分液，上层液经减压浓缩干燥获得金针菇多酚，多酚得率为1.35% ；
[0049]步骤(5):步骤(4)萃取后，分液获得的下层液，调节pH值至7，采用截留分子量6000D的超滤膜超滤脱盐，浓缩，冷冻干燥获得金针菇多糖，多糖得率为14.52%。
[0050]实施例4
[0051]一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法，如图1所示，包括如下步骤:
[0052]步骤(1):超微粉碎金针菇干粉后，将金针菇干粉与质量分数为2%的氢氧化钠溶液按照质量比1:10混合；
[0053]步骤(2):将步骤(1)中的混合液超声处理，处理条件为500Hz，100W，30分钟，处理液离心6000转/分离心10分钟，分离得到上清液I和沉淀物；
[0054]步骤(3):向步骤(2)的沉淀物中，加入沉淀物10倍重量的去离子水，混合均匀，调pH值为6，加入占混合液重量0.5%的纤维素酶，55°C下酶解50分钟，酶解液6000转/分离心10分钟，分离得上清液II和沉淀物；
[0055]步骤(4):合并步骤(2)中的上清液I和步骤(3)中的上清液II，加入氯化钠固体至饱和，加入占上清液50%体积的乙酸乙酯进行萃取，分液，上层液经减压浓缩干燥获得金针菇多酚，多酚得率为1.54% ；
[0056]步骤(5):步骤(4) 萃取后，分液获得的下层液，调节pH值至7，采用截留分子量6000D的超滤膜超滤脱盐，浓缩，冷冻干燥获得金针菇多糖，多糖得率为16.23%。
[0057]总之，以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所作的均等变化与修饰，皆应属本发明专利的涵盖范围。
【权利要求】
1.一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法，其特征在于，包括如下步骤: 步骤(1):将金针菇干粉与质量分数为0.5%~2%的氢氧化钠溶液按照质量比1:10~I: 30混合； 步骤(2):将步骤(1)中的混合液超声处理10~30分钟，离心，分离得到上清液I和沉淀物； 步骤(3):向步骤(2)的沉淀物中，加入沉淀物重量8~12倍的去离子水，混合均匀，调pH值至4~6，加入占混合液重量0.1%~0.5%的纤维素酶，45~55°C下酶解20~50分钟，酶解液离心，分离得上清液II和沉淀物； 步骤(4):合并步骤(2)中获得的上清液I和步骤(3)中获得的上清液II，加入氯化钠固体至饱和，加入乙酸乙酯进行萃取，分液，上层液经减压浓缩，干燥获得金针菇多酚； 步骤(5):步骤(4)萃取后，分液获得的下层液，调节pH值至6~8，超滤脱盐，浓缩，冷冻干燥获得金针菇多糖。
2.根据权利要求1所述的一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法，其特征在于:步骤(1)之前，金针菇干粉经过超微粉碎处理。
3.根据权利要求1所述的一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法，其特征在于:步骤(2)中，超声处理频率为100~500Hz，超声处理功率为100~1000W。
4.根据权利要求1所述 的一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法，其特征在于:步骤(3)中，采用醋酸调节pH值。
5.根据权利要求1所述的一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法，其特征在于:步骤(3)中，酶解液离心转速6000转/分，离心时间10分钟。
6.根据权利要求1所述的一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法，其特征在于:步骤(5)中，超滤膜截留分子量为6000D。
【文档编号】A61K36/06GK103788229SQ201410056357
【公开日】2014年5月14日 申请日期:2014年2月19日 优先权日:2014年2月19日
【发明者】张作法, 范雷法, 吕国英, 苗立祥, 潘慧娟 申请人:浙江省农业科学院