抗体制剂的制作方法

抗体制剂的制作方法
【专利摘要】本发明描述了VLA-4结合抗体的制剂。
【专利说明】抗体制剂
[0001]本申请是申请日为2008年6月13日，申请号为200880102434.5 (国际申请号为PCT/US2008/066928)，名称为“抗体制剂”的发明专利申请的分案申请。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请要求2007年6月14日提交的序号为60/944，076的美国临时申请的优先权,其全部内容通过引用并入本文。
[0004]背景
[0005]多发性硬化症(MS)为中枢神经系统最常见疾病中的一种。现今全世界超过2，500，000个人患有MS。
[0006]概述
[0007]本发明部分是基于对含有高浓度VLA-4结合抗体的制剂的开发。一些实施方案适于通过皮下(SC)或肌肉内(IM)递送来递送至受治疗者，诸如人类，例如人类患者。制剂例如当稀释于可接受的 输注基质(诸如生理盐水)中时亦适于静脉内(IV)施用。举例而言，VLA-4结合抗体可为那他珠单抗(natalizumab),且抗体浓度介于约120mg/mL至约190mg/mL的范围内。制剂对炎性、免疫或自体免疫病症提供治疗作用。举例而言，制剂可对中枢神经系统(CNS)炎性病症，诸如多发性硬化症(MS)提供治疗作用。
[0008]一方面，本发明特征为含水药物组合物，诸如稳定含水药物组合物，其含有浓度为约 120mg/mL 至约 190mg/mL (例如浓度为约 135mg/mL,约 140mg/mL,约 150mg/mL,约 160mg/mL或约165mg/mL)的VLA-4结合抗体,及具有约pH5.5至约pH6.5的磷酸盐缓冲液。在一些实施方案中，VLA-4抗体浓度为约130mg/mL至约180mg/mL或约140mg/mL至约160mg/mL。在一实施方案中，VLA-4抗体浓度大于约150mg/mL,例如其在大于约150mg/mL至约190mg/mL的范围内。在一实施方案中，VLA-4抗体浓度为约150mg/mL。
[0009]在一实施方案中，VLA-4结合抗体为人源化单克隆抗体，诸如那他珠单抗。在另一实施方案中，VLA-4结合抗体为那他珠单抗的变体。举例而言，在一些实施方案中，抗体的轻链可变区具有与那他珠单抗的轻链可变区拥有一或多个氨基酸残基但不多于2、3、4、5或6个氨基酸残基的差异的氨基酸序列，且/或重链可变区具有与那他珠单抗的重链可变区拥有一或多个氨基酸残基但不多于2、3、4、5或6个氨基酸残基的差异的氨基酸序列。在一些实施方案中，一些或所有差异均为保守性变化。
[0010]在另一实施方案中，VLA-4结合抗体拥有具有美国专利第5，840，299号(其以引用的方式并入本文中)中SEQ ID N0:7氨基酸序列的轻链可变区及具有美国专利第5，840，299号中SEQ ID NO: 11氨基酸序列的重链可变区之一或两者。在其它实施方案中，VLA-4抗体为这些抗体之一的变体。举例而言，在一些实施方案中，轻链可变区具有与美国专利第5，840，299号中SEQ IDNO: 7的序列拥有一或多个氨基酸残基但不多于2、3、4、5或6个氨基酸残基的差异的氨基酸序列，且/或重链可变区具有与由美国专利第5，840，299号中的SEQ ID NO: 11所定义的序列拥有一或多个氨基酸残基但不多于2、3、4、5或6个氨基酸残基的差异的氨基酸序列。
[0011]在又一实施方案中，VLA-4结合抗体具有表1-1中SEQ ID NO:1的轻链氨基酸序列及表1-2中SEQ ID NO: 2的重链氨基酸序列之一或两者。在其它实施方案中，VLA-4抗体为这些抗体之一的变体。举例而言，在一些实施方案中，抗体的轻链具有与SEQ ID NO:1的序列拥有一或多个氨基酸残基但不多于2、3、4、5或6个氨基酸残基的差异的氨基酸序列，且/或抗体的重链具有与SEQ ID NO:2的序列拥有一或多个氨基酸残基但不多于2、3、4、5或6个氨基酸残基的差异的氨基酸序列。
[0012]如用于本上下文中的氨基酸序列的“差异”指氨基酸同一性差异(例如，以不同氨基酸取代上文所提及的SEQ ID N0:7或11中的氨基酸)或缺失或插入。差异可位于例如框架区、CDR、铰链区或恒定区。差异可在蛋白质序列的内部或末端。在一些实施方案中，与所述序列相比，一些或所有差异均为保守性变化。
[0013]在某些实施方案中，组合物的pH值为约6.0±0.5(例如，约5.0±0.5，约
6.0±0.5，约7.0±0.5)，且磷酸盐缓冲液组合物在约5mM与约30mM之间(例如，约10mM，约15mM,约20mM，约25mM)。在另一实施方案中，组合物还包含浓度在约IOOmM与约200mM(例如，约120mM、140mM、160mM、180mM)之间的盐，诸如氯化钠。在另一实施方案中，组合物包含L-精氨酸盐酸盐或甘油。在另一实施方案中，组合物含有浓度为约200mM至约300mM(例如，约220mM、240mM、260mM、280mM)的氨基酸，诸如甘氨酸。在另一实施方案中，组合物含有约 0.001%至约 2.0%、约 0.004%至约 0.4%、约 0.008%至约 0.2%、约 0.02%至约 0.08%(w/v)(例如，约 0.01 %、约 0.02%、约 0.03%、约 0.04%、约 0.05%、约 0.06%、约 0.07%,约1%、约1.5% )的 量的药学上可接受的赋形剂，诸如表面活性剂，诸如聚山梨酯80。
[0014]在某些实施方案中，组合物包括甘油，且基本不含L-精氨酸盐酸盐或氯化钠。在其它实施方案中，组合物包括L-精氨酸盐酸盐，但基本无甘油或氯化钠(除来自磷酸盐缓冲液及L-精氨酸盐酸盐中的以外)。在其它实施方案中，组合物包括氯化钠，但基本无甘油或L-精氨酸盐酸盐。
[0015]在一些实施方案中，抗体制剂包括组氨酸缓冲液，例如代替磷酸盐缓冲液，且组氨酸缓冲液为约PH5至约pH7(例如，约ρΗ5.5±0.5、ρΗ6±0.5或ρΗ6.5±0.5)。组氨酸缓冲液组合物是在约IOmM与约30mM之间(例如，约15mM、约20mM、约25mM)。组氨酸缓冲液制剂亦包括约200mM至约300mM甘油(例如，约240mM、约250mM、约260mM、约270mM、约280mM甘油)及约 0.001%至约 2.0% (w/v)(例如，约 0.02%、约 0.03%、约 0.04%、约 0.05%、约0.06%、约0.07%、约I %、约1.5% )的聚山梨酯80。组氨酸制剂任选地包括约5mM至约15mM的L-甲硫氨酸(例如，约IOmM的L-甲硫氨酸)。
[0016]在一实施方案中，为本文特征的组合物含有140mg/mL至160mg/mL那他珠单抗、5mM至15mM磷酸钠缓冲液、130mM至150mM氯化钠及0.01 %至0.1 % (w/v)聚山梨酯80,pH值为6±0.5。在另一实施方案中，组合物含有140mg/mL至160mg/mL那他珠单抗、5mM至15mM磷酸钠缓冲液、250mM至300mM甘油及0.01%至0.1% (w/v)聚山梨酯80，pH值为6±0.5。在又一实施方案中，组合物含有140mg/mL至160mg/mL那他珠单抗、5mM至15mM磷酸钠缓冲液、150mM至170mM L-精氨酸盐酸盐及0.01 %至0.1 % (w/v)聚山梨酯80，pH值为 6±0.5。
[0017]在一实施方案中，为本文特征的组合物为液体。
[0018]在另一实施方案中，组合物在约2°C至约8°C (例如约5°C )的温度下稳定至少12个月(例如，至少24、30、36个月)。在另一实施方案中，组合物在环境温度(约20-30°C，诸如约25°C )下稳定至少2、3、4、5、6或7天(例如，至少一周或12或14天)。
[0019]在又一实施方案中，组合物适于SC或頂施用。在又一实施方案中，组合物适于IV施用。
[0020]在另一方面中，本发明特征为制备含水组合物，诸如稳定含水组合物的方法，该组合物在磷酸盐缓冲液中包括约120mg/mL至约190mg/mL的VLA-4结合抗体及聚山梨酯。该方法包括使抗体在细胞培养物中表达，使抗体经历至少一个层析纯化步骤，使抗体经历磷酸盐缓冲液中的至少两个超滤/透析过滤步骤，使抗体经历磷酸盐缓冲液中的至少一个超滤步骤，且通过添加聚山梨酯和/或磷酸盐缓冲液来调节抗体浓度，例如下调至约120mg/mL至约190mg/mL。在一实施方案中，VLA-4结合抗体为那他珠单抗，且在另一实施方案中，聚山梨酯为聚山梨酯80。抗体浓度可为例如约135mg/mL至约165mg/mL,例如约150mg/mL。在一些实施方案中，磷酸盐缓冲液包括其它赋形剂，诸如甘油、L-精氨酸盐酸盐或氯化钠。最终制剂具有约5至约7，例如约5.5至约6.5的pH值。
[0021]在另一方面中，本发明特征为设计用于或适于SC或IM施用的递送装置，其中该递送装置封装有或含有单位剂量的本文所述的组合物，例如含有适于SC或IM施用的那他珠单抗的浓缩制剂的组合物。在一实施方案中，单位剂量为约IOOmg至约450mg(例如，约120mg至约350mg ;约150mg、约200mg、约250mg、约300mg)。在一实施方案中，单位剂量介于大于约IOOmg至约450mg的范围内。在另一实施方案中，单位剂量将向人类递送每千克体重约1.4mg/kg与约3.0mg/kg之间的VLA-4结合抗体或其片段。在另一实施方案中，单位剂量为约0.25mL至约1.5mL (例如，约0.5mL、约0.75mL、约1.0mL)。
[0022]在一实施方案中，单位剂量为约300mg那他珠单抗，且在另一实施方案中，将单位剂量分成数份，诸如分成两个半份，每半份含有约150mgVLA-4结合抗体。在又一实施方案中，按照方案向患者施用那他珠单抗。在一实施方案中，每月一次向患者施用约300mg那他珠单抗，例如通过施用两个连续剂量的150mg那他珠单抗。在一替代性实施方案中，通过150mg那他珠单抗的第一剂,接着在约两周后150mg那他珠单抗的第二剂,每月向患者施用约300mg那他珠单抗。
[0023]本发明特征为优化向患者提供例如那他珠单抗的VLA-4结合抗体的高度浓缩液体制剂的方法。
[0024]在一实施方案中，该方法允许逐渐增大所提供抗体的浓度。这允许斜坡增大(ramp-up)抗体浓度且可允许在浓度增大时就耐受性、反应及类似情况来监测患者。举例而言，该方法可由向患者提供一或多个初始浓度或相对较低浓度的那他珠单抗开始，接着向患者提供最终较高浓度的那他珠单抗。就初始浓度而言，示例性制剂将通常具有小于最终较高浓度的80 %、70 %、50 %、30 %、20 %或10 %的抗体浓度。典型初始浓度可为例如20mg/mL、30m g/mL或40mg/mL。典型最终浓度将为例如约120mg/mL至约190mg/mL (例如，约 135mg/mL、约 140mg/mL、约 150mg/mL、约 160mg/mL 或约 165mg/mL)。在一些实施方案中，患者将接受一次或在一个或多个初始浓度下的多次施用。举例而言，在一实施方案中，患者将历经多次施用接受渐增的浓度。在一些实施方案中，患者将在达到最终浓度之前接受在一或多个初始浓度下的2、3、4、5、6、7或8次施用。举例而言，患者将接受第一初始浓度下的一或多次施用，及第二较高浓度下的一或多次施用。在一些实施方案中，在一或多次施用之后评估患者的症状(包括不良症状)。在一些实施方案中，仅在确定患者对先前施用不具有不可接受的不良反应之后，向患者施用具有增大浓度的那他珠单抗的制剂。
[0025]在一实施方案中，该方法允许逐渐增大所提供的抗体剂量(如本文所用的剂量是指以一次或以所确定的小数字例如2次施用中每一次提供的抗体的量)。这允许斜坡增大剂量且可允许监测当剂量增大时患者的耐受性、不良反应及类似情况。举例而言，该方法可由向患者提供一或多个初始剂量或相对较低剂量的那他珠单抗开始，接着向患者提供最终较高剂量的那他珠单抗。典型初始剂量可为例如最终较高剂量的80^^70^^50^^30%、20%或10%或10%或以下。典型最终剂量将基于达成稳态施用后的施用频率而变化。举例而言，一些实施方案包括在75mg与500mg之间的最终剂量(例如，lOOmg、150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg)(这些剂量通常可大致为每月施用剂量)。其它实施方案包括在50mg与250mg之间的最终剂量(例如，75mg、lOOmg、150mg、200mg)(这些剂量通常为每两周施用剂量)。其它实施方案包括在25mg与150mg之间的最终剂量(例如，50mg、75mg、100mg、125mg)(这些剂量通常为每周施用剂量)。在一些实施方案中，患者将接受一次或在一个或多个初始剂量下的多次施用。举例而言，在一实施方案中，患者将历经多次施用接受渐增的剂量。在一些实施方案中，患者将在达到最终剂量之前接受在一或多个初始剂量下的2、3、4、5、6、7或8次施用。举例而言，患者将接受第一初始剂量下的一或多次施用，及第二较高初始剂量下的一或多次施用。在一些实施方案中，在一或多次施用之后评估患者的症状(包括不良症状)。在一些实施方案中，仅在确定患者对先如剂量不具有不可接受的不良反应之后，向患者施用增大剂量的那他珠单抗。
[0026]本发明亦包括例如起动包(starter pack)的试剂盒以实施浓度或剂量的斜坡增大。在一实施方案中，向患者或护理人员提供那他珠单抗制剂的试剂盒或“起动包”，其包括渐增浓度或剂量的那他珠单抗的包装。指导被提供起动包的患者或护理人员自我施用或施用第一、例如低或最低剂量或浓度的那他珠单抗，且等待指定的时间段。若患者未经历或经历较小程度的不良症状，则指导患者或护理人员自我施用或施用第二制剂，例如较高，例如下一最高浓度或剂量。指导患者或护理人员继续逐步增大剂量或浓度直至达到所需剂量或浓度。可指导患者或护理人员保持以定期间隔自我施用或施用最终制剂，持续规定的时间段。
[0027]在一实施方案中，向患者提供预封装于诸如注射器的合适递送装置中的VLA-4结合抗体的高度浓缩制剂。
[0028]在另一方面中，本发明特征为一种方法，例如指导需要VLA-4结合抗体疗法的患者如何施用本文所述的制剂的方法。该方法包括(i)向患者提供至少一单位剂量的本文所述的VLA-4结合抗体的高度浓缩制剂；及(ii)指导患者以肌肉内或皮下方式自我施用该至少一单位剂量。另一方法(例如治疗方法)包括(i)向患者提供至少两单位剂量的VLA-4结合抗体的高度浓缩制剂 '及(ii)指导患者以皮下或肌肉内方式自我施用该单位剂量，例如一次一剂量。
[0029]在一实施方案中，患者具有炎性病症，诸如多发性硬化症。在其它实施方案中，患者具有例如哮喘(例如过敏性哮喘)、关节炎病症(例如，类风湿性关节炎、银屑病关节炎)、糖尿病(例如I型糖尿病)、纤维化病症(例如，肺纤维化、骨髓纤维化、肝硬化、系膜增生性肾小球肾炎、新月体性肾小球肾炎、糖尿病性肾病、肾间质性纤维病)或炎性肠病(例如，Crohn病、溃瘍性结肠炎)。[0030]另一方面，本发明特征为本文所述的VLA-4结合抗体的浓缩制剂的单位剂量，其中单位剂量为约0.25mL至约1.5mL (例如，约0.5mL、约0.75mL或约1.0mL)。在一实施方案中，单位剂量为约IOOmg至约450mg(例如，约150mg、约160mg、约180mg、约200mg、约250mg、约 300mg 或约 350mg)。
[0031]在另一方面中，本发明特征为VLA-4结合抗体的含水制剂的单位剂量，其中向人类施用单位剂量将向人类递送每千克体重约1.4mg与约3.0mg之间的VLA-4结合抗体或其片段。
[0032]在另一方面中，本发明特征为通过向患者施用适于SC或頂施用的制剂形式的含有VLA-4结合抗体的组合物来治疗患者的方法。在一实施方案中，患者具有炎性病症，诸如多发性硬化症、哮喘、类风湿性关节炎、糖尿病或Crohn病。在另一实施方案中，按照方案施用组合物。在另一实施方案中，方法还包括选择适于以该组合物治疗的患者。适于治疗的患者例如已显示指示疾病发作的体征或症状，诸如指示MS的体征或症状。在又一实施方案中，方法还包括向患者施用第二治疗剂，诸如溶血栓剂、神经保护剂、抗炎剂、类固醇、细胞因子或生长因子。
[0033]在另一方面中，本发明特征为通过确定患者是否符合预先选定的标准，且如果患者符合预先选定的标准，则向患者核准、提供、指定或施用本文所述的VLA-4结合抗体制剂来评估患者的方法。在一实施方案中，预先选定的标准为患者未能对先前替代性治疗性治疗或方案(例如用于治疗MS)作出充分反应。在另一实施方案中，预先选定的标准为不存在进行性多病灶白质脑病(PML)的任何体征或症状，或不存在PML的任何诊断。在另一实施方案中，标准如2006年8 月9日提交的USSN60/836，530(以引用的方式并入本文中)中所述，其描述药物分装(distribution)的方法及系统。
[0034]在另一方面中，本发明特征为指导接受者施用那他珠单抗的高度浓缩制剂的方法。该方法包括指导接受者(例如，最终使用者、患者、医师、零售或批发药房、经销商，或在医院、疗养院诊所或HMO的药剂部门)应以皮下或肌肉内方式向患者施用药物。
[0035]在另一方面中，提供分装本文所述的组合物的方法。组合物含有那他珠单抗的高度浓缩制剂且适于皮下或肌肉内或静脉内施用。该方法包括向接受者(例如，最终使用者、患者、医师、零售或批发药房、经销商或在医院、疗养院诊所或HMO的药剂部门)提供含有治疗患者至少6、12、24或36个月的药物的足够单位剂量的包装。
[0036]在另一方面中，本发明特征为评估本文所述的含有高度浓缩量的VLA-4结合抗体的组合物的包装或一批包装的质量的方法(例如，测定其是否已过期)。该方法包括评估包装是否已过期。过期日期为自诸如制造、检定或包装的预先选定的事件起至少6、12、24、36或48个月，例如大于24或36个月。在一些实施方案中，由分析结果作出决定或采取步骤，例如，将包装中的抗体加以使用或丢弃、分类、选择、投放或保留、载运、移动至新位置、投放市场、出售或供给销售、自市场退出或不再供给销售，取决于产品是否已过期。
[0037]在另一方面中，本发明特征为含有至少2单位剂量的含水组合物的包装，该组合物含有高度浓缩量的VLA-4结合抗体。在一实施方案中，所有单位剂量均含有相同量的抗体，且在其它实施方案中，存在两个或两个以上强度的单位剂量，或两种或两种以上不同制剂，其例如具有不同强度或释放特性。在一实施方案中，至少一个剂量含有约IOOmg至约450mg 的 VLA-4 结合抗体，例如约 lOOmg、约 200mg、约 250mg、约 300mg、约 350mg 或约 400mg的VLA-4结合抗体。
[0038]在另一方面中，本发明包括指导接受者施用含有VLA-4结合抗体的含水制剂的方法。该方法包括指导接受者(例如，最终使用者、患者、医师、零售或批发药房、经销商，或医院、疗养院诊所或HMO的药剂部门)应在过期日期之前向患者施用抗体。过期日期为自例如制造、检定或包装的预先选定的事件起至少6、12、18、24、36或48个月，例如大于18、24或36个月。在一实施方案中，接受者亦接受抗体供应，例如单位剂量供应。
[0039]在另一方面中，本发明特征为本文所述的制剂在PCT/US2007/07557 (公开为W0/2008/021954)中所述的方法或系统的用途。实施方案包括分装本文所述的制剂、监测或跟踪本文所述的制剂对药房、输注中心或患者的提供、监测一或多个患者、选择患者，或汇编或报导关于本文所述的制剂的用途的数据的方法。PCT/US2007/075577(公开为W0/2008/021954)是以引用的方式并入本文中。
[0040]在另一方面中，本发明特征为选择以本文所述的制剂治疗本文所述的病症(例如多发性硬化症)的患者的方法。该方法包括:
[0041]选择或提供已通过静脉内递送例如那他珠单抗的VLA-4结合抗体来治疗的患者；且
[0042]向患者提供或施用本文所述的制剂，
[0043]藉此治疗患者。
[0044]在另一方面中，本发明特征为分析产物或过程(例如制造过程)的方法。该方法包括提供高度浓缩VLA-4结合抗体组合物的含水制剂，例如通过本文所述的过程制造的含水制剂，且通过评估溶液参数，诸如颜色(例如，无色至微黄，或无色至黄色)、透明度(例如，澄清至微乳光或澄清至乳光)或粘度(例如，当在环境温度下(诸如在20°C -30°C下，例如25。。下)测量时在约5cP与30cP之间(例如，10cP、20cP))提供对制剂的评估。评估可包括评估一或多个溶液参数。任选地,确定溶液参数是否符合预先选定的标准，例如确定预先选定的标准是否存在，或是否存在于预先选定的范围内，藉此分析该过程。
[0045]在一实施方案中，对过程的评估包括测量抗VLA-4抗体制剂的稳定性。可例如通过聚集体形成来测量抗体制剂的稳定性，该聚集体形成例如通过尺寸排阻高压液相层析(HPLC)，通过如本文中所述的颜色、透明度或粘度来检定。若历经预设时间段且任选地在给定温度下检定参数变化小于约10%、5%、3%、2%、1%、0.5%、0.05%或0.005%或更小，则可确定制剂为稳定的，且因此可接受进一步加工或分装。在一实施方案中，高度浓缩液体抗VLA-4抗体制剂在室温下(例如，在约18°C、19°C、20°C、21°C、22 V、23°C、24 V或25 V下)稳定1、2、3、4或5天或更久。
[0046]在一实施方案中，该方法还包括比较所测定的值与参考值以藉此分析制造过程。
[0047]在一实施方案中，该方法还包括至少部分基于分析来维持制造过程。在一实施方案中，该方法还包括基于分析来改变制造过程。
[0048] 在另一实施方案中，该方法包括评估通过所选过程制得的高度浓缩VLA-4结合抗体的含水制剂的过程，例如制造过程，其包括基于本文所述的方法或分析作出关于过程的决定。在一实施方案中，该方法还包括至少部分基于方法或分析来维持或改变制造过程。因此，在另一实施方案中，进行评估的一方不实施本文所述的方法或分析而仅依赖于通过本文所述的方法或分析获得的结果。[0049]在另一实施方案中，该方法包括比较监测或控制批间偏差的方法中的两种或多种制品或将制品与参考标准作比较。
[0050]在又一实施方案中，该方法可还包括作出决定，以至少部分基于该决定来例如分类、选择、接受或丢弃、发行或保留、加工为药品、载运、移动至不同位置、配制、贴标签、包装、投放市场、出售或供给销售制品。
[0051]在另一方面中，本发明特征为储存、分装或使用本文所述的VLA-4结合抗体制剂例如那他珠单抗制剂的方法。该方法包括:
[0052]在第一低温下将制剂储存第一时期，该低温例如低于18°C，例如高于冰点但等于或低于 15。。、10。。或 4。。；
[0053]在第二较高温度下将制剂储存第二时期，该较高温度例如不冷藏或在室温下，例如在18°C与25°C之间，其中该第二时期不多于24、48、72或96小时，且其中在一些实施方案中，在向患者施用制剂或丢弃制剂后第二时期即结束。
[0054]在另一方面中，本发明特征为储存、分装或使用本文所述的VLA-4结合抗体制剂例如那他珠单抗制剂的方法。该方法包括:
[0055]在第一低温下 储存制剂，该低温例如低于18 °C，例如高于冰点但等于或低于15。。、10。。或 4。。；
[0056]向接受者，例如最终用户，例如患者或护理人员提供制剂；
[0057]任选地，指导最终用户可将制剂储存在第二较高温度下，该较高温度例如不冷藏或在室温下，例如在18°C与25°C之间；且
[0058]在接受者收到之后，在第二温度下将制剂储存至多24、48、72或96小时。
[0059]在另一方面中，本发明特征为指导实体(例如药房、经销商、或最终用户，例如患者或护理人员)如何储存、分装或使用本文所述的VLA-4结合抗体制剂例如那他珠单抗制剂的方法。该方法包括:
[0060]指导实体应将制剂储存在第一低温下，例如低于18°C，例如高于冰点但等于或低于15°C、10°C或4°C第一时期，其中该第一时期延长至将制剂提供给最终用户或至在施用于患者之前24、48、72或96小时内；且
[0061]指导实体可将制剂储存在第二较高温度下，该较高温度例如不冷藏或在室温下，例如在18°C与25°C之间第二时期，其中该第二时期不超过24、48、72或96小时，藉此指导实体。
[0062]在另一方面中，本发明特征为储存、分装或使用本文所述的VLA-4结合抗体制剂例如那他珠单抗制剂的方法。该方法包括:
[0063]在第一低温下储存制剂，该低温例如低于18°C，例如高于冰点但等于或低于15°C、10°C或 4°C ;且
[0064]在第二较高温度下储存制剂，该较高温度例如不冷藏或在室温下，例如在18°C与25°C之间不多于24、48、72或96小时。
[0065]在另一方面中，本发明特征为评估的方法，诸如，例如在质量控制或发行规格分析中评估高度浓缩VLA-4结合抗体的含水制剂的质量。该方法包括提供对抗体制剂的溶液参数的评估，所述参数诸如颜色(例如，无色至微黄，或无色至黄色)、透明度(例如，澄清至微乳光或澄清至乳光)或粘度(例如，当在环境温度下(诸如在20°C-3(TC下，例如25°C)测量时在约5cP与30cP之间)。评估可包括对以上参数中一或多个的评估。该方法亦任选地包括确定溶液参数是否符合预先选定的标准，例如预先选定的标准是否存在，或是否存在于预先选定的范围内。若所观察到的溶液参数在预先选定的值范围内，或符合预先选定的标准规范，则制品被选择用来诸如包装、使用、出售、投放市场、丢弃等。
[0066]在另一方面中，本发明特征为遵循管理要求，例如管理机构(例如FDA)的批准后要求的方法。该方法包括提供对抗体制剂的溶液参数的评估，诸如颜色(例如，无色至微黄，或无色至黄色)、透明度(例如，澄清至微乳光或澄清至乳光)或粘度(例如，当在环境温度下(诸如在20°C -30°C下)测量时在约5cP与30cP之间)。批准后要求可包括对以上参数中一或多个的测量。该方法任选地亦包括确定所观察到的溶液参数是否符合预先选定的标准或参数是否在预先选定的范围内；任选地记下分析的值或结果，或与该机构沟通，例如通过将值或结果传送至管理机构。
[0067]在另一方面中，本发明特征为制造一批VLA-4结合抗体的含水制剂的方法，该批次具有预先选定的特性，例如满足发行规格、标签要求或药典(compendial)要求,例如本文所述的特性。该方法包括提供测试抗体制品；根据本文所述的方法来分析测试抗体制品；确定测试抗体制品是否满足预先选定的标准，例如与参考值例如本文中所公开的一或多个参考值具有预先选定的关系，且选择测试抗体制品以制造一批产品。
[0068]在另一方面中，本发明特征为多批VLA-4结合抗体的含水制剂，其中各批的一或多个溶液参数(例如，通过本文所述的方法测定的值或溶液参数)偏离预先选定的所需参考值或标准(例如 本文所述的范围或标准)的变化小于预先选定的范围。在一些实施方案中，测定一或多批抗体制剂的一或多个参数且经由该测定结果来选择一批或多批。一些实施方案包括将测定结果与预先选定的值或标准(例如参考标准)作比较。其它实施方案包括例如基于值或参数的测定结果来调节待施用的批的剂量。
[0069]在另一方面中，本发明特征为以下各项中一或多个的方法:向报告-接收实体提供报告，评估VLA-4结合抗体的含水制剂样本与参考标准(例如FDA要求)的同一性，自另一方寻求VLA-4结合抗体制品符足一些预先确定要求的指示，或对另一方递交关于VLA-4结合抗体制品的信息。示例性接收实体或其它方包括政府，例如美国联邦政府，例如政府机构，例如FDA。该方法包括以下步骤中的一或多个(或全部):在第一国家(例如US)制造和/或测试VLA-4结合抗体的含水制剂；将样本的至少一个小份送到第一国家之外，例如将其送到美国之外，至第二国家；制备或接收包括关于VLA-4结合抗体的制品结构的数据的报告，例如与本文所述的结构和/或链相关的数据，例如通过本文所述方法中的一或多个产生的数据；且向报告接受者实体提供报告。
[0070]在一实施方案中，报告接收实体可确定数据是否符合预定要求或参考值，且任选地，例如VLA-4结合抗体的含水制剂的制造商、经销商或卖方是否收到来自报告接收实体的反应。在一实施方案中，收到报告接收者实体的批准后即将VLA-4结合抗体的制品加以选择、包装或投入市场中。
[0071]在另一方面中，本发明特征为评估VLA-4结合抗体的含水制剂的方法。该方法包括接收关于VLA-4结合抗体的存在或含量的数据，例如其中通过本文所述方法中的一或多个来准备数据；提供包括该数据且任选地包括VLA-4结合抗体的批次标识符的记录；将该记录递交给决策者，例如政府机构，例如FDA ;任选地接收来自该决策者的通信；任选地基于来自决策者的通信决定是否发行或销售该批VLA-4结合抗体。在一实施方案中，该方法还包括发行样本。
[0072]示例性制剂包括以下:
[0073]1.125-175mg/mL,或 140-160mg/mL,例如 150mg/mL 的那他珠单抗；
[0074]1-lOOmM,5-20mM 或 5_50mM，例如 IOmM 的磷酸钠缓冲液；
[0075]50-200mM、100-180mM 或 120_160mM，例如 140mM 的氯化钠；
[0076]0.01-0.12%、0.02-0.08%或 0.02-0.06%，例如 0.04% (w/v)的聚山梨酯 80，及
[0077]pH 值为 6.0±1.0，例如 6.0±0.5 ;
[0078]2.125_175mg/mL 或 140-160mg/mL,例如 150mg/mL 的那他珠单抗；
[0079]IOmM磷酸钠缓冲液；
[0080]140mM 氯化钠；
[0081]0.04% (w/v)聚山梨酯 80 及
[0082]pH 值为 6.0 ±0.5;
[0083]3.150mg/mL 那他珠单抗；
[0084]1-lOOmM,5-20mM 或 5_50mM，例如 IOmM 的磷酸钠缓冲液；
[0085]140mM 氯化钠；
[0086]0.04% (w/v)聚山梨酯 80 ;及
[0087]pH 值为 6.0 ±0.5;
[0088]4.150mg/mL 那他珠单抗；
[0089]IOmM磷酸钠缓冲液；
[0090]50-200mM、100-180mM 或 120_160mM，例如 140mM 的氯化钠；
[0091]0.04% (w/v)聚山梨酯 80 及
[0092]pH 值为 6.0 ±0.5;
[0093]5.150mg/mL 那他珠单抗；
[0094]IOmM磷酸钠缓冲液；
[0095]140mM 氯化钠；
[0096]0.01-0.12%、0.02-0.08%或 0.02-0.06%，例如 0.04% (w/v)的聚山梨酯 80，及
[0097]pH 值为 6.0 ±0.5;
[0098]6.150mg/mL 那他珠单抗； [0099]IOmM磷酸钠缓冲液；
[0100]140mM 氯化钠；
[0101]0.04% (w/v)聚山梨酯 80 及
[0102]pH 值为 6.0 ± 1.0，例如 pH 值为 6.0 ± 0.5 ;
[0103]及
[0104]7.150mg/mL 那他珠单抗；
[0105]IOmM磷酸钠缓冲液；
[0106]140mM 氯化钠；
[0107]0.04% (w/v)聚山梨酯 80 ;及
[0108]pH 值为 6.0±0.5。[0109]在一些实施方案中，以上制剂1-7中任一个可基本上不含氨基酸，例如精氨酸或甘氨酸，或甘油。
[0110]本文中公开的方法及组合物可用于混合物中一或多种结构的存在、分布或量可具有或影响生物活性的地方。自结构活性远景来看该方法亦适用于评估或确保生物等效性。
[0111]如本文中所用的“高度浓缩VLA-4结合抗体制剂”是指稳定的含水制剂，其含有在约 120mg/mL 至约 190mg/mL 之间(例如，约 120mg/mL、130mg/mL、140mg/mL、150mg/mL、160mg/mL> 17Omg/mL> 180mg/mL> 190mg/mL)的 VLA-4 结合抗体,诸如那他珠单抗。
[0112]“适于SC或頂施用”指向诸如人类的受治疗者施用组合物将具有治疗作用，诸如以改善受治疗者的一或多种症状。
[0113]术语“治疗”是指以有效改善与病症相关的病状、症状或参数或预防病症进展至统计上显著的程度或至本领域技术人员可检测的程度的量、方式和/或模式来施用疗法。有效量、方式或模式可根据受治疗者而变化且可适合于受治疗者。
[0114]VLA-4结合抗体的“稳定”制剂历经例如12个月、24个月、36个月或更长的延长时间段显示极少或无聚集、断裂、脱酰胺、氧化或生物活性变化中任一或多个的证据。举例而言，在一实施方案中，少于10%的组合物发生聚集、断裂或氧化。可通过已知方法，诸如目视检验颜色和/或透明度或通过UV 光散射或尺寸排阻层析法来评估聚集、沉淀和/或变性。可通过检测且定量抗体的化学改变形式来评估蛋白质保持其生物活性的能力。尺寸修改(例如修剪)，其可例如使用尺寸排阻层析法、SDS-PAGE和/或基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱法(MALDI/TOF MS)，或经蛋白质内切酶处理的抗体的肽图分析来评估。其它类型的化学变化包括电荷变化(例如，由于脱酰胺而发生)，其可通过例如离子交换层析加以评估。如果在例如抗原结合检定测定中，抗体在给定时刻的生物活性在制备药物制剂时所显示的生物活性的约10%以内，则抗体在药物制剂中“保持其生物活性”。
[0115]“VLA-4结合抗体”指与VLA-4整联蛋白结合，诸如与VLA-4整联蛋白的α 4亚基结合，且至少部分抑制VLA-4的活性，尤其VLA-4整联蛋白的结合活性或信号传输活性，例如转导VLA-4介导的信号的能力的抗体。举例而言，VLA-4结合抗体可抑制VLA-4与VLA-4的同源配体(例如细胞表面蛋白质，诸如VCAM-1)的结合，或与诸如纤连蛋白或骨桥蛋白的细胞外基质组分的结合。VLA-4结合抗体可与α 4亚基或β I亚基或两者结合。在一实施方案中，抗体与α 4的BI表位结合。VLA-4结合抗体可以小于约10_6、10_7、10_8、10_9或10-10Μ的 Kd 与 VLA-4 结合。VLA-4 亦称为 α 4/ β I 及 CD29/CD49b。
[0116]如本文中所用，术语“抗体”是指包括至少一个免疫球蛋白可变区，例如，提供免疫球蛋白可变域或免疫球蛋白可变域序列的氨基酸序列的蛋白质。举例而言，抗体可包括重(H)链可变区(本文中缩写为VH)及轻(L)链可变区(本文中缩写为VL)。在另一实例中，抗体包括两个重(H)链可变区及两个轻(L)链可变区。术语“抗体”涵盖抗体的抗原结合片段(例如，单链抗体、Fab片段、F (ab’) 2片段、Fd片段、Fv片段及dAb片段)以及完整抗体，例如IgA、IgG、IgE、IgD、IgM型(以及其亚型)完整免疫球蛋白。免疫球蛋白的轻链可为K或λ型。在一实施方案中，抗体经糖基化。抗体对于抗体依赖性细胞毒性和/或补体介导的细胞毒性而言可具有功能性，或对于这些活性中一或两者而言可不具有功能性。
[0117]VH及VL区可进一步再分成称为“互补决定区”(“⑶R”)的高变区，其间散置有称为“框架区”(FR)的更保守区域。已精确界定FR及⑶R的范围(参见Kabat，Ε.Α.，等人(1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest (免疫关注的蛋白质的序列)，第五版，U.S.Department of Health and Human Services, NIH 公布第 91-3242 号；及Chothia, C.等人(1987) T.Mol.Biol.196:901-917)。本文中使用 Kabat 定义。每个 VH 及VL通常由三个⑶R及四个FR组成，其自氨基末端至羧基末端按以下顺序排列:FR1、⑶R1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。
[0118]“免疫球蛋白域”指免疫球蛋白分子的可变域或恒定域的域。免疫球蛋白域通常含有两个由约七个β链形成的β片层，及保守的二硫键(例如参见A.F.Williams及A.N.Barclayl988Ann.Rev Immunol.6:381-405)。
[0119]如本文中所用，“免疫球蛋白可变域序列”指可形成免疫球蛋白可变域的结构的氨基酸序列。举例而言，该序列可包括天然存在的可变域的所有或部分氨基酸序列。举例而言，该序列可省略一个、两个或两个以上N端或C端氨基酸、内部氨基酸，可包括一或多个插入或额外末端氨基酸，或可包括其它变化。在一实施方案中，包括免疫球蛋白可变域序列的多肽可与另一免疫球蛋白可变域序列缔合以形成靶标结合结构(或“抗原结合位点”)，例如与VLA-4相互作用的结构。
[0120]抗体的VH或VL链可还包括所有或部分重链或轻链恒定区以藉此分别形成重或轻免疫球蛋白链。在一实施方案中，抗体为两个免疫球蛋白重链与两个免疫球蛋白轻链的四聚体。免疫球蛋白重链与免疫球蛋白轻链可由二硫键连接。重链恒定区通常包括三个恒定域，CH1、CH2及CH3。轻链恒定 区通常包括CL域。重链及轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合域。抗体的恒定区通常介导抗体与包括免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)及经典补体系统的第一成分(Clq)的宿主组织或因子的结合。
[0121]抗体的一或多个区可为人类的、有效人类的或人源化的。举例而言，可变区中的一或多个可为人类的或有效人类的。举例而言，CDR中的一或多个，例如HC⑶Rl、HC⑶R2、HC CDR3、LC CDRULC CDR2及LC CDR3，可为人类的(HC，重链；LC，轻链)。轻链CDR中的每一个可为人类的。HCCDR3可为人类的。框架区中的一或多个可为人类的，例如HC或LC的FR1、FR2、FR3及FR4。在一个实施方案中，所有框架区均为人类的，例如来源于人类体细胞，例如产生免疫球蛋白的造血细胞，或非造血细胞。在一个实施方案中，人类序列为例如由种系核酸编码的种系序列。恒定区中的一或多个可为人类的、有效人类的或人源化的。在另一个实施方案中，框架区的至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%或98% (例如FR1、FR2及FR3总体，或FR1、FR2、FR3及FR4总体)或全部抗体可均为人类的、有效人类的或人源化的。举例而言，FRU FR2及FR3总体可与人类种系区段所编码的人类序列至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、98%或 99%—致。
[0122]“有效人类的”免疫球蛋白可变区为包括足够数目的人类框架氨基酸位置以使得免疫球蛋白可变区在正常人类中不引发免疫原性反应的免疫球蛋白可变区。“有效人类的”抗体为包括足够数目的人类氨基酸位置以使得抗体在正常人类中不引发免疫原性反应的抗体。
[0123]“人源化的”免疫球蛋白可变区为经修饰以使得在人类中该修饰形式比非修饰形式引发较少免疫反应，例如经修饰以包括足够数目的人类框架氨基酸位置以使得免疫球蛋白可变区在正常人类中不引发免疫原性反应的免疫球蛋白可变区。“人源化的”免疫球蛋白的描述包括例如美国专利第6，407，213号及美国专利第5，693，762号。在一些情况下，人源化的免疫球蛋白可在一或多个框架氨基酸位置包括非人类氨基酸。
[0124]所有或部分抗体可由免疫球蛋白基因或其区段编码。示例性人类免疫球蛋白基因包括 K、λ、a (IgAl 及 IgA2)、Y (IgGl、IgG2、IgG3、IgG4)、δ、ε 及 μ 恒定区基因，以及无数免疫球蛋白可变区基因。全长免疫球蛋白“轻链”(约25Kd或214个氨基酸)由順2-末端的可变区基因(约110个氨基酸)及COOH-末端的K或λ恒定区基因编码。全长免疫球蛋白“重链”(约50Kd或446个氨基酸)类似地由可变区基因(约116个氨基酸)及例如Y的其它上述恒定区基因中的一个(编码约330个氨基酸)编码。
[0125]术语全长抗体的“抗原结合片段”指保留与所关注靶标(例如VLA-4)特异性结合的能力的全长抗体的一或多个片段。涵盖于术语全长抗体的“抗原结合片段”中的结合片段的实例包括⑴Fab片段，其为由VL、VH、CL及CHl域组成的单价片段；(ii)F(ab’)2片段，其为包括两个由铰链区的二硫化物桥连接的Fab片段的二价片段；(iii)由VH及CHl域组成的Fd片段；(iv)由抗体的单臂的VL及VH域组成的Fv片段；(V)由VH域组成的dAb片段(Ward等人，(1989) Nature341:544-546);及(vi)保留功能性的孤立互补决定区(CDR)。另外，尽管Fv片段的两个域VL及VH是由独立基因编码，但其可使用重组法由合成连接体结合，该连接体使其能够制成为其中VL及VH区配对以形成称为单链Fv(ScFv)的单价分子的单一蛋白质链。例如参见Bird等人(1988) Science242:423-426 ;及Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85:5879-5883。
[0126]如本文中所用，“约”指在给定值的0.1%至5%以内(例如在给定值的上下5%、3%,2%U%>0.5%,0.1%之内)。当本文中提供量及其它指定值时，可容许偏差在药学上可接受的标准以内。
[0127]本发明的实施方案提供某些优势。在一些情况下，难以制造适用于药物组合物的高浓度蛋白质(例如抗体)制剂。本文提供制备这些制剂的方法。含有高浓度蛋白质，例如抗VLA-4抗体的药物组合物可适用于历经较短时段的施用。高浓度制剂，例如抗VLA-4抗体的高浓度制剂亦可通过简化方法(例如皮下)施用。
[0128]在附图及以下描述中阐述本发明的一或多个实施方案的细节。本发明的其它特征、目标及优势将通过说明书及附图和权利要求而明显。
[0129]具体地，本发明涉及如下各项:
[0130] 1.一种含水药物组合物，其包含浓度约120mg/mL至约190mg/mL的VLA-4结合抗体，并且还包含甘油及具有约pH5至约pH7的磷酸盐缓冲液。
[0131 ] 2.一种含水药物组合物，其包含浓度约120mg/mL至约190mg/mL的VLA-4结合抗体，并且还包含L-精氨酸盐酸盐及具有约pH5至约pH7的磷酸盐缓冲液。
[0132]3.一种含水药物组合物，其包含浓度约120mg/mL至约190mg/mL的VLA-4结合抗体，并且还包含氯化钠、聚山梨酯80及具有约pH5至约pH7的磷酸盐缓冲液。
[0133]4.如项1、2或3所述的组合物，其中所述VLA-4结合抗体为那他珠单抗。
[0134]5.如项1、2或3所述的组合物，其中所述VLA-4结合抗体的浓度范围为约130mg/mL 至约 180mg/mL。
[0135]6.如项1、2或3所述的组合物，其中所述VLA-4结合抗体的浓度范围为约140mg/mL 至约 160mg/mL。
[0136]7.如项1、2或3所述的组合物，其中所述VLA-4结合抗体的浓度为约150mg/mL。[0137]8.如项1、2或3所述的组合物，其中所述组合物的pH为约6±0.5。
[0138]9.如项1、2或3所述的组合物，其中所述磷酸盐缓冲液为在约5mM与约30mM之间的磷酸钠缓冲液。
[0139]10.如项1、2或3所述的组合物，其中所述磷酸盐缓冲液为约IOmM的磷酸钠缓冲液。
[0140]11.如项I所述的组合物，其中所述组合物基本不含氯化钠。
[0141]12.如项2所述的组合物，其中所述组合物包含小于60mM的钠含量。
[0142]13.如项I或2所述的组合物,其还包含表面活性剂。
[0143]14.如项13所述的组合物，其中所述表面活性剂选自由聚山梨酯80、单硬脂酸甘油酯、硬脂酸聚烃氧酯、聚桂醇及脱水山梨糖醇油酸酯组成的组。
[0144]15.如项13所述的组合物，其中所述表面活性剂为聚山梨酯80。
[0145]16.如项13所述的组合物,其中所述表面活性剂以约0.001%至约2.0% (w/v)的量存在。
[0146]17.如项13所述的组合物，其中所述表面活性剂以约0.04% (w/v)的量存在。
[0147]18.如项1、2或3所述的组合物，其中所述组合物适于皮下或肌肉内施用。
[0148]19.如项1、2或3所述的组合物，其中所述组合物在约2°C至约8°C的温度下稳定至少12个月。
[0149]20.如项3所述的组合物，其包含140mM氯化钠。
[0150]21.如项3所述的组合物，其包含0.04%聚山梨酯80 (w/v)。
[0151]22.一种设计用于或适于皮下或肌肉内施用的递送装置，其中所述递送装置封装有或含有单位剂量的项1、2或3所述的组合物。
[0152]23.如项22所述的递送装置，其中所述单位剂量向人类的施用将向人类递送每千克体重约1.4mg/kg至约3.0mg/kg的VLA-4结合抗体或其片段。
[0153]24.如项22所述的递送装置，其中所述单位剂量为约0.25mL至1.5mL。
[0154]25.如项22所述的递送装置，其中所述单位剂量为约lmL。
[0155]26.如项22所述的递送装置，其中所述单位剂量为约120mg至约350mg。
[0156]27.如项22所述的递送装置，其中所述单位剂量为约150mg。
[0157]28.如项22所述的递送装置，其中所述单位剂量为约300mg。
[0158]29.如项22所述的递送装置，其中所述单位剂量被分成多份。
[0159]30.如项22所述的递送装置，其中所述单位剂量被分成两个半份，每个半份含有约150mg VLA-4结合抗体。
[0160]31.一种指导需要VLA-4结合抗体疗法的患者治疗该患者的方法，所述方法包括(i)向该患者提供至少一单位剂量的项1、2或3所述的组合物；及(ii)指导该患者以皮下方式自我施用所述至少一单位剂量。
[0161]32.一种指导需要VLA-4结合抗体疗法的患者治疗该患者的方法，所述方法包括
(i)向该患者提供至少两单位剂量的项1、2或3所述的组合物；及(ii)指导该患者以皮下一次一剂量的方式自我施用所述单位剂量。
[0162]33.如项31所述的方法，其中所述患者具有炎性病症。
[0163]34.如项31所述的方法，其中所述患者具有选自由多发性硬化症、哮喘、关节炎、糖尿病、纤维化及炎性肠病组成的组的病症。
[0164]35.一种项1、2或3所述的组合物的单位剂量，其中所述单位剂量为约0.25mL至1.5mL0
[0165]36.如项35所述的单位剂量，其中所述单位剂量为约lmL。
[0166]37.一种项1、2或3所述的组合物的单位剂量，其中所述单位剂量向人类的施用将向人类递送每千克体重约1.4mg至约3.0mg的VLA-4结合抗体或其片段。
[0167]38.一种治疗患者的方法,其包括向所述患者施用项1、2或3所述的组合物。
[0168]39.如项38所述的方法，其中所述患者具有炎性病症。
[0169]40.如项38所述的方法，其中所述患者具有选自由多发性硬化症、哮喘、类风湿性关节炎、糖尿病或Crohn病组成的组的病症。
[0170]41.如项38所述的方法，其中所述组合物按照方案施用。
[0171]42.如项38所述的方法，其还包括选择适合以所述组合物治疗的患者。
[0172]43.如项42所述的方法，其中所述患者具有多发性硬化症，且适于治疗的患者已显示对多发性硬化症的 在先替代治疗的不充分反应。
[0173]44.如项38所述的方法,其还包括向所述患者施用第二治疗剂,例如溶血栓剂、神经保护剂、抗炎剂、类固醇、细胞因子或生长因子。
[0174]45.一种评估患者的方法，其包括(i)确定所述患者是否符合预先选定的标准，及
(ii)如果所述患者符合所述预先选定的标准，则向所述患者批准、提供、指定或施用项1、2或3所述的组合物。
[0175]46.如项45所述的方法，其中所述患者具有多发性硬化症，且所述患者已对多发性硬化症的在先替代治疗具有不充分反应。
[0176]47.一种含水药物组合物，其包含135mg/mL至165mg/mL那他珠单抗、5mM至15mM磷酸钠缓冲液、130mM至150mM氯化钠及0.02 %至0.08 % (w/v)聚山梨酯80，pH为6 ± 0.5。
[0177]48.一种含水药物组合物，其包含135mg/mL至165mg/mL那他珠单抗、5mM至15mM磷酸钠缓冲液、250mM至300mM甘油及0.02%至0.08% (w/v)聚山梨酯80，pH为6±0.5。
[0178]49.一种含水药物组合物，其包含135mg/mL至165mg/mL那他珠单抗、5mM至15mM磷酸钠缓冲液、150mM至170mM L-精氨酸盐酸盐及0.02%至0.08% (w/v)聚山梨酯80，pH为 6±0.5。
[0179]50.一种制备于磷酸盐缓冲液中包含120mg/mL至190mg/mL VLA-4结合抗体及聚山梨酯的含水组合物的方法，其包括:
[0180](i)使所述抗体在细胞培养物中表达，
[0181](ii)使所述抗体经历至少一个层析纯化步骤，
[0182](iii)使所述抗体经历磷酸盐缓冲液中的至少两个超滤/透析过滤步骤，
[0183](iv)使所述抗体经历磷酸盐缓冲液中的至少一个超滤步骤，及
[0184](V)通过添加聚山梨酯及磷酸盐缓冲液将所述抗体的浓度调节为120mg/mL至190mg/mLo
[0185]51.如项51所述的方法，其中所述VLA-4结合抗体为那他珠单抗。
[0186]52.如项51所述的方法，其中所述聚山梨酯为聚山梨酯80。
[0187]53.一种评估项1、2或3的组合物的质量的方法，其包括:评估所述组合物的溶液参数，确定所述溶液参数是否符合预先选定的标准，并且如果所述溶液参数符合所述预先选定的标准，则确定所述组合物的质量适于使用。
[0188]54.如项53所述的方法，其中所述溶液参数为颜色。
[0189]55.如项54所述的方法，其中所述溶液参数为透明度。
[0190]56.如项55所述的方法，其中所述溶液参数为粘度。
【专利附图】

【附图说明】
[0191]图1展示在各种制剂中浓度为150mg/mL的那他珠单抗在搅拌前及搅拌后的可溶性聚集体的水平。HCN= 20mM纟目氡酸、240mM甘氡酸、0.04% (w/v)聚山梨酯80，pH6。HOL=20mM 组氨酸、240mM 甘油、0.04% (w/v)聚山梨酯 80，pH6。PCN = 20mM 磷酸盐、240mM 甘氨酸、0.02% (w/v)聚山梨酯 80，pH6。PST = 20mM 磷酸盐、140mM NaCl.0.02% (w/v)聚山梨酯 80，pH6。
[0192]图2展示如图1所述在制剂中浓度为150mg/mL的那他珠单抗在搅拌前及搅拌后在溶液中在340nm下的UV吸光度。
[0193]图3展示对于那他珠单抗(150mg/mL)而言聚集与HOL制剂中各种含量的聚山梨酯80之间的关系(HOL = 20mM组氨酸、240mM甘油，pH6 ;聚山梨酯80为实验的变量)。
[0194]图4展示对于储存在 40°C下在如图1中所述各种制剂中的那他珠单抗(150mg/mL)而言随时间的聚集百分比。
[0195]图5展示对于在2_8°C之间储存于小瓶中、在如图1中所述各种制剂中的那他珠单抗(150mg/mL)而言随时间的聚集百分比。
[0196]图6展示对于储存在2_8°C之间及40°C下、在如图1中所述的各种制剂中的那他珠单抗(150mg/mL)而言随时间的甲硫氨酸氧化百分比。
[0197]图7展示对于那他珠单抗(150mg/mL)而言历经6个月作为自由基净化剂赋形剂函数的甲硫氨酸氧化百分比。
[0198]图8展示对于在各种浓度下且在各种制剂中的那他珠单抗而言，相对于时间(8周)的断裂速率。
[0199]发明详述
[0200]高度浓缩VLA-4结合抗体的稳定制剂适用于皮下(SC)、肌肉内(IM)或静脉内(IV)施用。为本发明特征的制剂含有约120mg/mL至约190mg/mL的VLA-4结合抗体，诸如那他珠单抗。
[0201]药物组合物
[0202]将本文所述的组合物配制为药物组合物。可例如以在约120mg/mL与190mg/mL之间的浓度(例如，在约120mg/mL与约180mg/mL之间，在约140mg/mL与约160mg/mL之间，在约 135mg/mL 与约 165mg/mL 之间；例如，约 120mg/mL、130mg/mL、135mg/mL、140mg/mL、150mg/mL、160mg/mL> 165mg/mL> 170mg/mL> 180mg/mL> 190mg/mL)在缓冲溶液中提供 VLA-4结合抗体(例如那他珠单抗)。在一实施方案中，以大于150mg/mL且小于约190mg/mL的浓度在缓冲溶液中提供VLA-4结合抗体(例如那他珠单抗)。在另一实施方案中，以较高浓度(例如，170mg/mL至190mg/mL)制备制剂,且接着将其稀释回所需浓度(例如，135mg/mL至165mg/mL)。举例而言,可以例如175mg/mL、180mg/mL或185mg/mL的抗体浓度制备制剂,且接着将其稀释回施用所需的浓度，例如140mg/mL、145mg/mL、150mg/mL> 155mg/mL或160mg/mL。可将组合物储存在2-8 °C下(例如，4 °C、5 °C、6 °C、7 °C )。
[0203]在一实施方案中，可将VLA-4结合抗体用诸如160mM L-精氨酸盐酸盐(±10% )、磷酸盐缓冲液(例如，七水合磷酸氢二钠及磷酸二氢钠)及聚山梨酯80的赋形剂物质配制，其中总钠含量不超过60mM。在另一实施方案中，可将VLA-4结合抗体用275mM甘油(±10% )、磷酸盐缓冲液(例如，七水合磷酸氢二钠及磷酸二氢钠或其它磷酸盐)及聚山梨酯80配制，且基本不含氯化钠。在另一实施方案中，可将VLA-4结合抗体用140mM氯化钠(±10% )、磷酸盐缓冲液及聚山梨酯80配制。下文例如在实施例8、9、10、11及12中提供包括磷酸盐缓冲液的示例性制剂。
[0204]在一实施方案中，可将VLA-4结合抗体用诸如240mM甘油(±10% )、组氨酸缓冲液、聚山梨酯80及任选地L-甲硫氨酸的赋形剂物质配制。下文例如在实施例13及14中提供包括组氨酸缓冲液的示例性制剂。
[0205]磷酸盐缓冲液是本领域已知的且包括例如调节至适当pH值的磷酸氢二钠(无水)、七水合磷酸氢二钠、 二水合磷酸氢二钠、无水磷酸二氢钠、单水合磷酸二氢钠、二水合磷酸二氢钠、无水磷酸三钠或十二水合磷酸三钠的水溶液。磷酸盐缓冲液亦包括例如调节至适当pH值的磷酸二氢钾、无水磷酸氢二钾或磷酸三钾。
[0206]组氨酸缓冲液是本领域已知的且包括例如以盐酸或氢氧化钠或本领域已知的其它酸或碱调节至适当PH值的D-组氨酸、单水合一氯化D-组氨酸、DL-组氨酸、单水合一氯化DL-组氨酸、L-组氨酸或单水合一氯化L-组氨酸的水溶液。
[0207]药物组合物通常包括药学上可接受的载体。如本文中所用，“药学上可接受的载体”包括任何及所有溶剂、分散介质、涂料、抗菌剂及抗真菌剂、等渗剂及吸收延迟剂，及生理上相容的类似药剂。
[0208]“药学上可接受的盐”指保留抗体的所需生物活性且不赋予任何不希望的毒理作用的盐(例如参见Berge，S.M.，等人(1977) J.Pharm.Sc1.66:1-19)。这些盐的实例包括酸加成盐及碱加成盐。酸加成盐包括衍生自诸如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸及类似酸的无毒无机酸，以及衍生自诸如脂族单羧酸及二羧酸、苯基取代烷酸、羟基烷酸、芳族酸、脂族及芳族磺酸、游离氨基酸及类似酸的无毒有机酸的盐。碱加成盐包括衍生自诸如钠、钾、镁、钙及类似金属的碱土金属，以及衍生自诸如N，N’ - 二苄基乙二胺、N-甲基葡萄胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、普鲁卡因及类似有机胺的无毒有机胺的盐。
[0209]通常将生理上相容的药剂，诸如游离氨基酸、游离氨基酸的盐酸盐、钠盐或钾盐用作药物制剂中的赋形剂以促进抗体稳定性。本文中的制剂可包括添加剂，诸如甘油、甘露糖醇、山梨糖醇及其它多元醇，以及糖(例如蔗糖)以促进稳定性。
[0210]为本文特征的制剂可包括药学上可接受的赋形剂，诸如表面活性剂，例如聚山梨酯80、单硬脂酸甘油酯、硬脂酸聚烃氧酯(polyoxyl stearate)、聚桂醇(Iauromacrogol)或脱水山梨糖醇油酸酯(sorbitan oleate)。在一实施方案中，为本文特征的制剂包括约0.01% (w/v)至约0.1% (w/v)聚山梨酯80，例如约0.2%或0.04%聚山梨酯80。
[0211]含有高度浓缩VLA-4结合抗体的药物组合物呈液体溶液(例如，可注射及可输注溶液)的形式。这些组合物可通过胃肠外模式(例如，皮下、腹膜内或肌肉内注射)施用。如本文中所用的短语“胃肠外施用”及“胃肠外地施用”指通常通过注射的不同于肠内及局部施用的施用模式，且包括皮下或肌肉内施用以及静脉内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、表皮下、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外及胸骨内注射及输注。在一实施方案中，皮下施用本文所述的制剂。
[0212]药物组合物无菌且在制造及储存条件下稳定。亦可测试药物组合物以确保其符合施用的管理及行业标准。
[0213]可将含有高度浓缩量的VLA-4结合抗体的药物组合物配制为溶液、微乳液、分散液、脂质体或其它适于高抗体浓度的有序结构。可通过将所需量的本文所述的药剂并入具有上文列举的成份中的一个或组合的适当溶剂中，视需要接着过滤灭菌来制备无菌可注射溶液。一般通过将本文所述的药剂并入含有基本分散介质及来自上文列举的那些所需其它成份的无菌媒介物中来制备分散液。溶液的适当流动性可例如通过使用诸如卵磷脂的涂料、在分散液的情况下通过保持所需粒度及通过使用表面活性剂来保持。可通过使组合物包括延迟吸收的药剂(例如，单硬脂酸盐及明胶)来达成可注射组合物的延长吸收。
[0214]在一些实施方案中，表征描述制剂的参数，例如可出现于产品标签上的参数。这些参数包括例如颜色(通常无色至微黄色，或无色至黄色)、透明度(通常澄清至微乳光，或澄清至乳光)及粘度(当在环境温度(诸如在20°C至30°C下)下测量时，通常在约5cP与30cP之间)。这些参数可通过是本领域已知的方法测量。举例而言，可使用市售乳光标准(例如可获自 HunterLab Associates, Inc.(Reston, VA))来测量透明度。
[0215]在一些实施方案中，检定抗体制剂的稳定性。示例性方法包括例如聚集研究、氧化研究、断裂研究、唾液酸化研究、等电点研究、半抗体研究、重链及轻链同位(parity)研究及分析二级结构(例如通过圆二色性)、热变性(例如通过差示扫描热量测定的圆二色性)、色氨酸环境(例如通过荧光)、IgG折叠(例如通过远紫外线圆二色性)及芳族残基环境(例如通过UV-Vis分光光度测定法)。
[0216]制造抗体制剂的方法
[0217]可如经修改以适应高浓度抗体(例如，约75mg/mL至约190mg/mL、100mg/mL至约 180mg/mL、约 120mg/mL 至约 170mg/mL、135mg/mL 至约 165mg/mL 的浓度)的美国公开申请案2005/0053598中所述来制造含有VLA-4结合抗体制剂的制剂。过程可如本领域技术人员所已知加以改变，但一般将遵照诸如以下的程序。自含有制造所关注的抗体或蛋白质的细胞的工作细胞库获得安瓿。制备接种物。必要时以额外饲料培养或发酵接种物的细胞。通过离心和/或过滤来收集/澄清细胞。举例而言，这可通过例如螺旋卷式过滤将细胞浓缩10倍来执行。诸如经由0.2μπι过滤器的中度过滤之后例如诸如通过蛋白A Sepharose Fast Howii进行亲和层析,且接着反向洗脱。含抗体的组合物接着在低pH值下，诸如在PH3.6-3.7下接受处理。混合物接着接受病毒过滤，随后进行浓缩/透析过滤步骤。通过例如阴离子交换层析法，诸如通过i)FAF.Sepharosc Fast.Fknvx来进一步纯化组合物。此步 骤可进行多次。自此点，接着将组合物进一步浓缩且接着纯化，例如通过凝胶过滤层析法，诸如经由Sephacryl S300HR?系统。如果需要，则可进一步浓缩含抗体的组合物。通过添加缓冲液及聚山梨酯，且经由超滤过程再浓缩抗体来制得最终制剂。所得抗体制剂可经质量控制测试且发布质量保证(QA)。可根据下文表1中所例示的任何方法来制造抗体制剂。举例而言，含有诸如那他珠单抗的VLA-4结合抗体的制剂可通过以下过程来制造。如本领域已知，将诸如5，000至20，000升(例如，5，000 ；10, 000 ； 15, 000 ；20, 000升)的大批量细胞培养物接种、培养、进料、收集及澄清。例如通过层析、病毒灭活及病毒过滤来纯化经澄清的材料。超滤/透析过滤(UF/DF)经澄清的材料得到磷酸盐方法中间体。可将磷酸盐方法中间体储存在2-8°C下例如用于未来加工，诸如通过进一步浓缩蛋白质的方法加工。为制造最终制剂，将聚山梨酯及缓冲液(如本文中所述)添加至磷酸盐方法中间体中以达到最终所需抗体浓度。在一替代方案中，通过将磷酸盐方法中间体反稀释至缓冲液中达到最终所需浓度(例如，诸如20mg/mL的低浓度)来产生最终制剂。通常在最终稀释步骤期间添加聚山梨酯。
[0218]在一实施方案中，如上所述在组氨酸制剂中制造VLA-4结合抗体制剂，但使磷酸盐方法中间体经历至少一个第二 UF/DF过程，及任选地至少一个额外UF过程，至如本文中所述的组氨酸制剂缓冲液中达到最终所需浓度，诸如在约75mg/mL与190mg/mL之间,例如约 75mg/mL 至约 190mg/mL,例如 75mg/mL、100mg/mL、125mg/mL、135mg/mL、150mg/mL、165mg/mL、180mg/mL> 190mg/mL。在一替代方案中，将组氨酸缓冲液中的抗体制剂调节至大于所需浓度的最终浓度。接着通过反稀释至组氨酸制剂缓冲液中达到所需蛋白质浓度来产生最终制剂。通常在最终稀释步骤期间添加聚山梨酯。
[0219]在另一实施方案中，如上所述在磷酸盐制剂中制造抗体制剂，除了使磷酸盐方法中间体经历至少一个第二 UF/DF过程，及任选地至少一个额外UF过程，至如本文中所述的磷酸盐制剂缓冲液中达到最终所需浓度，诸如在约75mg/mL与190mg/mL之间，例如约75mg/mL 至约 190mg/mL,例如 75mg/mL、100mg/mL、125mg/mL、135mg/mL、150mg/mL、165mg/mL、180mg/mL> 190mg/mL。在一替代方案中,将磷酸盐缓冲液中的抗体制剂调节至大于所需浓度的最终浓度，且通过反稀释至磷酸盐缓冲液中达到所需浓度来产生最终制剂。通常在最终稀释步骤期间添加聚山梨酯。
[0220]在另一实施方案中，如上所述在磷酸盐制剂中制造VLA-4结合抗体制剂，但遵照用于磷酸盐配制的商业UF/DF方法，且添加聚山梨酯以制造所需最终浓度的VLA-4结合抗体制剂，该所需最终浓度诸如在约75mg/mL与190mg/mL之间,例如约75mg/mL至约190mg/mL,例如 75mg/mL、100mg/mL、125mg/mL、135mg/mL、150mg/mL、165mg/mL、180mg/mL、190mg/mL。在一替代方案中，将磷酸盐缓冲液中的抗体制剂调节至大于所需浓度的最终浓度，且接着通过反稀释至磷酸盐制剂缓冲液中达到所需蛋白质浓度来产生最终制剂。通常在最终稀释过程期间添加聚山梨酯。
[0221] 表1.制造抗体制剂的方法
[0222]
【权利要求】
1.一种用于皮下或肌肉内递送的含水药物组合物，其包含浓度120mg/mL至190mg/mL的那他珠单抗，50mM至200mM氯化钠、0.01 % w/v至0.12% w/v聚山梨酯80, ImM至IOOmM磷酸钠缓冲液，PH为6± 1.0。
2.如权利要求1所述的组合物,其包含约IOmM的磷酸钠缓冲液。
3.如权利要求1或2所述的组合物，其包含140mM氯化钠。
4.如权利要求1-3之一所述的组合物，其包含约0.04% (w/v)的聚山梨酯80。
5.如权利要求1-3之一所述的组合物，其包含约0.02% (w/v)的聚山梨酯80。
6.如权利要求1-5之一所述的组合物，其中所述组合物的pH为约6±0.5。
7.稳定的用于皮下或肌肉内递送给患者的含水药物组合物，包含约150mg/mL那他珠单抗，约IOmM磷酸钠缓冲液,约140mM氯化钠，以及约0.04% (w/v)聚山梨酯80, pH值为约 6.0±0.5
8.权利要求1-7之一的组合物，其中所述组合物在约2°C至约8°C的温度下稳定至少12个月。
9.权利要求1-7之一的组合物，其中所述组合物在约2°C至约8°C的温度下稳定至少24个月。
10.如权利要求1-7之一所述的组合物，其中所述组合物按照方案施用。
11.如权利要求1-7之一所述的组合物，其用于治疗炎性病症、免疫病症、或自体免疫病症。
12.如权利要求1-7之一所述的组合物，其用于治疗多发性硬化症、哮喘、类风湿性关节炎、糖尿病或Crohn病。
13.如权利要求1-7之一所述的组合物，其用于治疗多发性硬化症。
14.如权利要求1-7所述的组合物，其中所述组合物用于对选出的适合以所述组合物治疗的患者给药。
15.如权利要求14所述的组合物，其中所述适合治疗的患者有经证实的指示疾病发作的体征或症状。
16.如权利要求14所述的组合物，其中所述患者不存在进行性多病灶白质脑病(PML)的任何体征或症状，或不存在PML的任何诊断。
17.如权利要求14所述的组合物，其中所述患者具有多发性硬化症，且已显示对多发性硬化症的在先替代治疗的不充分反应。
18.如权利要求11所述的组合物，其用于与第二治疗剂一起施用。
19.权利要求18的组合物，其中所述第二治疗剂是溶血栓剂、神经保护剂、抗炎剂、类固醇、细胞因子，或生长因子。
20.单位剂量的权利要求7所述的组合物，其中所述单位剂量为约0.25mL至1.5mL。
21.单位剂量的权利要求8所述的组合物，其中所述单位剂量是0.25-1.5ml。
22.单位剂量的权利要求11所述的组合物，其中所述单位剂量是0.25-1.5ml。
23.预填充注射器，已用包含权利要求7的组合物的溶液填充，填充量使得使用时有Iml溶液被注射给患者。
24.预填充注射器，已用包含权利要求8的组合物的溶液填充，填充量使得使用时有Iml溶液被注射给患者。
25.预填充注射器，已用包含权利要求11的组合物的溶液填充，填充量使得使用时有.1ml溶液被注射给患者。
【文档编号】A61P29/00GK103977404SQ201410163087
【公开日】2014年8月13日 申请日期:2008年6月13日 优先权日:2007年6月14日
【发明者】凯文.马洛尼 申请人:比奥根艾迪克Ma公司