一种矮地茶多糖的制备方法及应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种矮地茶多糖的制备方法及应用，可有效解决矮地茶多糖的制备，并有效用于抗疲劳和提高免疫力药物中的问题，其解决的技术方案是，将干燥的矮地茶粉末加蒸馏水浸泡、超声、微波间歇加热、过滤，得滤液，再将滤液浓缩并加入乙醇，离心，洗涤沉淀，得到矮地茶多糖粗品；再将粗品进行提纯得到矮地茶多糖。本发明制备的矮地茶多糖以天然中药材为原料，可以确保所生产的矮地茶多糖无毒副作用，应用于药物中，能有效抗疲劳和提高机体的免疫力，具有很好的社会效益和经济效益，是中药上的创新。
【专利说明】一种矮地茶多糖的制备方法及应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及医药领域，特别是涉及一种矮地茶多糖的制备方法及应用。
【背景技术】
[0002]矮地茶属紫金牛科植物紫金牛(A rdisia j aponica(Thunb.)Blume)的干燥全草，又名平地木、 老勿大、不出林、叶底珠。有止咳化痰、祛瘀解毒、利尿、止痛的功效；主治咽喉肿痛、关节疼痛、闭经、肺结核、慢性支气管炎、黄胆型肝炎与脱力劳伤。现在对其有效成分的研究主要涉及香豆素类，黄酮与多酚类，三萜类，挥发油类等，而对于矮地茶多糖的研究尚未见报道。多糖是存在于自然界的醛糖和(或)酮糖通过糖苷键连接在一起的聚合物，它是一切有生命的有机体必不可少的成分，它与维持生命的种种生理机能有着密切的联系。随着人们对多糖研究的深入，已经发现多糖具有许多生物活性作用。从抗癌、提高免疫、抗病毒、抗炎、降血糖、降血脂、抗氧化作用、抗衰老和骨折愈合等方面都呈现出喜人的效果。因此对矮地茶多糖的研究具有重大的意义。
【发明内容】
[0003]针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种矮地茶多糖的制备方法及应用，可有效解决矮地茶多糖的制备，并有效用于抗疲劳和提高免疫力药物中的问题。
[0004]本发明解决的技术方案是，一种矮地茶多糖的制备方法，包括以下步骤:
[0005](I)取矮地茶干燥，粉碎成粉末；称取矮地茶粉末，向矮地茶粉末中加入蒸馏水，矮地茶粉末与蒸馏水的重量比为1: 10-20，浸泡25-35min，在300-600W的功率下超声30-90min，然后在相同的功率下微波间歇加热5_50min，过滤，将滤液浓缩至矮地茶粉末重量的1.5-2倍，加入乙醇使乙醇含量达到体积浓度为60-80%，4-6°C条件下静置> 12h，离心去除上清液，收集沉淀，用无水乙醇洗去沉淀中的水分，再用丙酮洗去沉淀中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀中的丙酮，减压干燥，得到矮地茶多糖粗品；
[0006](2)将步骤(1)的矮地茶多糖粗品加入蒸馏水中溶解，配制成矮地茶多糖粗品质量浓度为0.5-1 %的多糖溶液A，用Sevag法除去多糖溶液A中的蛋白，得到多糖溶液B ;将多糖溶液B浓缩至矮地茶多糖粗品重量的1.5-2倍，加入乙醇使乙醇含量达到体积浓度为60-80%, 4-6°C条件下静置≥12h，离心去除上清液，收集沉淀，用无水乙醇洗去沉淀中的水分，再用丙酮洗去沉淀中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀中的丙酮，减压干燥，得矮地茶多糖。
[0007]步骤(1)中微波间歇加热为70-80°C加热55-65s，间隔110_130s再于70_80°C加热55-65s，再间隔110-130s，如此重复。
[0008]矮地茶为矮地茶醇提后的药渣。
[0009]步骤⑴中超声和微波间歇加热的顺序可以调换。
[0010]本发明的技术方案还在于提供一种采用本发明制备方法制备的矮地茶多糖在制备抗疲劳和提高免疫力药物中的应用。
[0011]本发明首次针对矮地茶多糖的制备方法进行研究，方法简单，原料丰富，产品应用面广，以矮地茶为原料制备矮地茶多糖，无需复杂的步骤即可得到产物。同时，本发明制备的矮地茶多糖以天然中药材为原料，可以确保所生产的矮地茶多糖无毒副作用，应用于药物中，能有效抗疲劳和提高机体的免疫力，具有很好的社会效益和经济效益，是中药上的创新。
【具体实施方式】
[0012]以下结合实施例对本发明的【具体实施方式】作详细说明。
[0013]实施例1
[0014]本实施例的矮地茶多糖的制备方法，包括以下步骤:
[0015](1)取矮地茶干燥，粉碎成粉末；称取矮地茶粉末，向矮地茶粉末中加入蒸馏水，矮地茶粉末与蒸馏水的重量比为1:10，浸泡30min，在450W的功率下超声50min，然后在相同的功率下在70°C加热60s，间隔120s再于70°C加热60s，再间隔120s，如此重复共5min，过滤，将滤液浓缩至矮地茶粉末重量的1.5倍，加入乙醇使乙醇含量达到体积浓度为80%，4°C条件下静置12h，离心去除上清液，收集沉淀，用无水乙醇洗去沉淀中的水分，再用丙酮洗去沉淀中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀中的丙酮，减压干燥，得到矮地茶多糖粗品;
[0016](2)将步骤(1)的矮地茶多糖粗品加入蒸馏水中溶解，配制成矮地茶多糖粗品质量浓度为0.5%的多糖溶液A，用Sevag法除去多糖溶液A中的蛋白，得到多糖溶液B ;将多糖溶液B浓缩至矮地茶多糖粗品重量的1.5倍，加入乙醇使乙醇含量达到体积浓度为80%，4°C条件下静置12h，离心去除上清液，收集沉淀，用无水乙醇洗去沉淀中的水分，再用丙酮洗去沉淀中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀中的丙酮，减压干燥，得矮地茶多糖。
[0017]实施例2
[0018]本实施例的矮地茶多糖的制备方法，包括以下步骤:
[0019](I)取矮地茶干燥，粉碎成粉末；称取矮地茶粉末，向矮地茶粉末中加入蒸馏水，矮地茶粉末与蒸馏水的重量比为1:15，浸泡35min，在300W的功率下超声30min，然后在相同的功率下在80°C加热55s，间隔130s再于80°C加热55s，再间隔130s，如此重复共50min，过滤，将滤液浓缩至矮地茶粉末重量的2倍，加入乙醇使乙醇含量达到体积浓度为60%，5°C条件下静置16h，离心去除上清液，收集沉淀，用无水乙醇洗去沉淀中的水分，再用丙酮洗去沉淀中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀中的丙酮，减压干燥，得到矮地茶多糖粗品;
[0020](2)将步骤(1)的矮地茶多糖粗品加入蒸馏水中溶解，配制成矮地茶多糖粗品质量浓度为I %的多糖溶液A，用Sevag法除去多糖溶液A中的蛋白，得到多糖溶液B ;将多糖溶液B浓缩至矮地茶多糖粗品重量的2倍，加入乙醇使乙醇含量达到体积浓度为60%，50C条件下静置16h，离心去除上清液，收集沉淀，用无水乙醇洗去沉淀中的水分，再用丙酮洗去沉淀中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀中的丙酮，减压干燥，得矮地茶多糖。
[0021]实施例3
[0022]本实施例的矮地茶多糖的制备方法，包括以下步骤:[0023](I)取矮地茶干燥，粉碎成粉末；称取矮地茶粉末，向矮地茶粉末中加入蒸馏水，矮地茶粉末与蒸馏水的重量比为1:20，浸泡25min，在600W的功率下超声90min，然后在相同的功率下在75°C加热65s，间隔IlOs再于75°C加热65s，再间隔110s，如此重复共30min，过滤，将滤液浓缩至矮地茶粉末重量的1.8倍，加入乙醇使乙醇含量达到体积浓度为70%，6°C条件下静置14h，离心去除上清液，收集沉淀，用无水乙醇洗去沉淀中的水分，再用丙酮洗去沉淀中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀中的丙酮，减压干燥，得到矮地茶多糖粗品;
[0024](2)将步骤(1)的矮地茶多糖粗品加入蒸馏水中溶解，配制成矮地茶多糖粗品质量浓度为0.8%的多糖溶液A，用Sevag法除去多糖溶液A中的蛋白，得到多糖溶液B ;将多糖溶液B浓缩至矮地茶多糖粗品重量的1.8倍，加入乙醇使乙醇含量达到体积浓度为70%，6°C条件下静置14h，离心去除上清液，收集沉淀，用无水乙醇洗去沉淀中的水分，再用丙酮洗去沉淀中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀中的丙酮，减压干燥，得矮地茶多糖。
[0025]上述方法所制备的矮地茶多糖可用于药品的制备，特别是用于制备抗疲劳和提高机体的免疫力药品，并经试验得到了充分证明，有关试验资料如下:
[0026]检验结果
[0027]采用苯酚-硫酸法对实施例1制备得到的矮地茶多糖成分进行鉴定，结果为阳性，多糖含量为89.76%。
[0028]矮地茶多糖 抗疲劳作用的实验
[0029]取体重为20±2g的昆明种小鼠40只，按体重随机分为4组:正常对照组、低(200mg/kg)、中(500mg/kg)、高剂量(800mg/kg)给药组；每天灌胃给药一次,正常对照组以等量的生理盐水灌胃，连续给药30天，于末次给药后30min，将小鼠放于游泳箱中，水温为25±5°C,鼠尾根部负重5%体重的铅皮,记录小鼠自游泳开始到头部没入水中8s不出水面的时间，即小鼠的负重游泳时间。小鼠在游泳结束恢复24h后，每组小鼠分别眼眶取血，分离血清，用超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒、丙二醛(MDA)测定试剂盒分别测定小鼠血清中S0D，MDA值，见表1。
[0030]表1矮地茶多糖对小鼠负重游泳时间、血清中SOD及MDA的影响
[0031]
指标对照纟目低剂量给药相中剂量给药绀高剂量给药绀
负重游泳时间
57.4±18.8084.9±24.18* 110.7±31.26* 98.4±28.21*
/min
SOD136.27±18.24 178.13±24.32* 1%, 57±31.06* 184.12±28.11*
MDA2C 37±e> ^22.14±6.13* 20.38±6.5辑 21.09±6.4妙
[0032]*表示与空白组相比Ρ〈0.05
[0033]从表1可以看出，矮地茶多糖低，中，高剂量均可显著提高机体SOD活力，降低MDA含量，从而表现出矮地茶多糖有较好的抗疲劳作用。
[0034]矮地茶多糖的免疫作用实验:[0035]取体重为20±2g的昆明种小鼠40只，按体重随机分为4组:正常对照组、低(40mg/kg)、中(60mg/kg、高剂量(80mg/kg)给药组,每天灌胃给药一次,正常对照组以等量的生理盐水灌胃，连续给药7天，最后一次给药24h后，将小鼠拉脱颈椎处死，取出肝，脾，淋巴结称重，计算各免疫器官重量占小鼠体重的比值，观察免疫器官重量的变化，结果见表2。
[0036]表2矮地茶多糖对小鼠各免疫器官重量的影响
[0037]
【权利要求】
1.一种矮地茶多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)取矮地茶干燥，粉碎成粉末；称取矮地茶粉末，向矮地茶粉末中加入蒸馏水，矮地茶粉末与蒸馏水的重量比为1:10-20，浸泡25-35min，在300-600W的功率下超声30-90min，然后在相同的功率下微波间歇加热5_50min，过滤，将滤液浓缩至矮地茶粉末重量的1.5-2倍，加入乙醇使乙醇含量达到体积浓度为60-80%，4-6°C条件下静置> 12h，离心去除上清液，收集沉淀，用无水乙醇洗去沉淀中的水分，再用丙酮洗去沉淀中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀中的丙酮，减压干燥，得到矮地茶多糖粗品； (2)将步骤(1)的矮地茶多糖粗品加入蒸馏水中溶解，配制成矮地茶多糖粗品质量浓度为0.5-1%的多糖溶液A，用Sevag法除去多糖溶液A中的蛋白，得到多糖溶液B ;将多糖溶液B浓缩至矮地茶多糖粗品重量的1.5-2倍，加入乙醇使乙醇含量达到体积浓度为60-80%, 4-6°C条件下静置≥12h，离心去除上清液，收集沉淀，用无水乙醇洗去沉淀中的水分，再用丙酮洗去沉淀中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀中的丙酮，减压干燥，得矮地茶多糖。
2.根据权利要求1所述的矮地茶多糖的制备方法，其特征在于，步骤(1)中微波间歇加热为70-80°C加热55-65s，间隔110_130s再于70_80°C加热55_65s，再间隔110_130s,如此重复。
3.根据权利要求1所述的矮地茶多糖的制备方法，其特征在于，矮地茶为矮地茶醇提后的药渣。
4.根据权利要求1所述的矮地茶多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)取矮地茶干燥，粉碎成粉末；称取矮地茶粉末，向矮地茶粉末中加入蒸馏水，矮地茶粉末与蒸馏水的重量比为1:10，浸泡30min，在450W的功率下超声50min，然后在相同的功率下在70°C加热60s，间隔120s再于70°C加热60s，再间隔120s，如此重复共5min，过滤，将滤液浓缩至矮地茶粉末重量的1.5倍，加入乙醇使乙醇含量达到体积浓度为80%，4°C条件下静置12h，离心去除上清液，收集沉淀，用无水乙醇洗去沉淀中的水分，再用丙酮洗去沉淀中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀中的丙酮，减压干燥，得到矮地茶多糖粗品； (2)将步骤(1)的矮地茶多糖粗品加入蒸馏水中溶解，配制成矮地茶多糖粗品质量浓度为0.5%的多糖溶液A，用Sevag法除去多糖溶液A中的蛋白，得到多糖溶液B ;将多糖溶液B浓缩至矮地茶多糖粗品重量的1.5倍，加入乙醇使乙醇含量达到体积浓度为80%，4°C条件下静置12h，离心去除上清液，收集沉淀，用无水乙醇洗去沉淀中的水分，再用丙酮洗去沉淀中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀中的丙酮，减压干燥，得矮地茶多糖。
5.根据权利要求1所述的矮地茶多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)取矮地茶干燥，粉碎成粉末；称取矮地茶粉末，向矮地茶粉末中加入蒸馏水，矮地茶粉末与蒸馏水的重量比为1:15，浸泡35min，在300W的功率下超声30min，然后在相同的功率下在80°C加热55s，间隔130s再于80°C加热55s，再间隔130s，如此重复共50min,过滤，将滤液浓缩至矮地茶 粉末重量的2倍，加入乙醇使乙醇含量达到体积浓度为60%，5°C条件下静置16h，离心去除上清液，收集沉淀，用无水乙醇洗去沉淀中的水分，再用丙酮洗去沉淀中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀中的丙酮，减压干燥，得到矮地茶多糖粗品； (2)将步骤(1)的矮地茶多糖粗品加入蒸馏水中溶解，配制成矮地茶多糖粗品质量浓度为I %的多糖溶液A，用Sevag法除去多糖溶液A中的蛋白，得到多糖溶液B ;将多糖溶液B浓缩至矮地茶多糖粗品重量的2倍，加入乙醇使乙醇含量达到体积浓度为60%，5°C条件下静置16h，离心去除上清液，收集沉淀，用无水乙醇洗去沉淀中的水分，再用丙酮洗去沉淀中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀中的丙酮，减压干燥，得矮地茶多糖。
6.根据权利要求1所述的矮地茶多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)取矮地茶干燥，粉碎成粉末；称取矮地茶粉末，向矮地茶粉末中加入蒸馏水，矮地茶粉末与蒸馏水的重量比为1:20，浸泡25min，在600W的功率下超声90min，然后在相同的功率下在75°C加热65s，间隔IlOs再于75°C加热65s，再间隔110s，如此重复共30min,过滤，将滤液浓缩至矮地茶粉末重量的1.8倍，加入乙醇使乙醇含量达到体积浓度为70%，6°C条件下静置14h，离心去除上清液，收集沉淀，用无水乙醇洗去沉淀中的水分，再用丙酮洗去沉淀中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀中的丙酮，减压干燥，得到矮地茶多糖粗品; (2)将步骤(1)的矮地茶多糖粗品加入蒸馏水中溶解，配制成矮地茶多糖粗品质量浓度为0.8%的多糖溶液A，用Sevag法除去多糖溶液A中的蛋白，得到多糖溶液B ;将多糖溶液B浓缩至矮地茶多糖粗品重量的1.8倍，加入乙醇使乙醇含量达到体积浓度为70%，6°C条件下静置14h，离心去除上清液，收集沉淀，用无水乙醇洗去沉淀中的水分，再用丙酮洗去沉淀中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀中的丙酮，减压干燥，得矮地茶多糖。
7.—种如权利要求1-6任一项所述制备方法制备的矮地茶多糖在制备抗疲劳和提高免疫力药物中的应用。
【文档编号】A61P37/04GK103923221SQ201410172914
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2014年4月25日 优先权日:2014年4月25日
【发明者】李建生, 刘富岗, 冯素香, 吴兆宇, 王蒙蒙, 李晓玉 申请人:河南中医学院