碱性磷酸酶在治疗肾功能减退中的用途

碱性磷酸酶在治疗肾功能减退中的用途
【专利摘要】本发明涉及医学领域且特别是碱性磷酸酶在治疗如肾功能减退等肾病中的用途。本发明还涉及药学领域且特别是碱性磷酸酶的药物用途。本发明提供通过使用碱性磷酸酶来改善肾功能减退情况的备选治疗。
【专利说明】碱性磷酸酶在治疗肾功能减退中的用途
[0001] 本申请是申请日为2008年1月30日，申请号为200880003595. 9,发明名称为"碱 性磷酸酶在治疗肾功能减退中的用途"的发明专利申请的分案申请。

【技术领域】
[0002] 本发明涉及医学领域，且特别是碱性磷酸酶在治疗如肾功能减退等肾病中的用 途。本发明还涉及药学领域，且特别是碱性磷酸酶的药物用途。

【背景技术】
[0003] 有多种肾病可以导致肾功能减退。急性肾衰竭（ARF)是一种可以导致肾功能减退 的肾病。下面对ARF进行详述，这些描述并不限制本发明的范围。
[0004] 急性肾衰竭（ARF)是指导致血清肌酸酐水平升高的急性肾功能损失。
[0005] 社区获得性ARF的年发病率为每一百万人口约100例，而其仅在1 %的住院者中被 诊断出。另一方面，医院获得性ARF发生在4%的住院者和20%的重护理住院者中。医院 获得性ARF发病率的增加有多方面的因素：其与患ARF风险增加的老年人群、可能在医院的 设置中暴露于对肾脏有害的环境的高度普遍性以及疾病严重性的增加有关。
[0006] 在过去的40年中，急性肾衰竭的存活率并没有得到改善，主要原因是受其影响 的患者年龄增大且患有更多的并发症。依据肾衰竭的严重性，其死亡率可以在7%至高达 80 %的范围。
[0007] 在急性肾衰竭中，肾小球滤过率在数天至数周内下降。结果造成含氮废物的排泄 降低，并且不能维持体液和电解质平衡。患有急性肾衰竭的患者通常没有症状，而所述病症 是通过所观察到的血尿素氮（BUN)和血清肌酸酐水平的上升来诊断的。当血清肌酸酐水平 每天增加至少0. 5mg/dL(等于每天44ymol/L)且每天的尿排出小于400mL(少尿症）时， 则出现完全的肾机能停止。
[0008] 病理生理学：肾小球滤过的驱动力是从肾小球到肾小囊腔的压力梯度。肾小球压 力主要依赖于肾血流（RBF)并受控于肾入球和出球微动脉的联合阻力。不管ARF的成因是 什么，RBF的降低代表肾小球滤过率（GFR)减小的共同病理途径。ARF的病因包括三种主要 机制。
[0009] ?肾前性肾衰竭定义为具有正常肾小管和肾小球功能的病症。在肾前性急性肾衰 竭中，问题是肾血流减少，这种肾血流减少由实际血管内损耗、肾有效循环血容量的下降、 或引起肾血流减少使GFR下降的药剂所引起。
[0010] ?肾实质性急性肾衰竭被细分为四类：肾小管疾病、肾小球疾病、血管疾病和间质 疾病。在肾实质性急性肾衰竭中，肾实质受到损伤。
[0011] ?梗阻后肾衰竭首先引起肾小管压力增加，从而降低过滤驱动力。肾后性急性肾 衰竭仅在两条排尿管均被阻塞，或孤立肾的排出管被阻塞时才会发生。这种病症最通常由 下尿路的阻塞造成的。
[0012] 肾前性肾衰竭
[0013] 引起肾前性急性肾衰竭的主要药剂是血管紧张素转化酶（ACE)抑制剂和非甾体 抗炎药（NSAIDs)。对ACE的抑制阻止了血管紧张素 I向血管紧张素 II的转化，这导致血管 紧张素 II水平的降低。血管紧张素 II通过引起出球微动脉收缩来增加肾小球滤过率；其 缺乏使肾小球滤过率降低，这是由于出球微动脉的扩张而引起的。
[0014] 肾实质性急性肾衰竭
[0015] 肾小管疾病
[0016] 由RBF下降引起的急性肾小管坏死是住院患者患肾实质性急性肾衰竭的最常见 病因。肾血流的减少引起肾实质缺血。如果长时间的缺血，就可能发展为急性肾小管坏死。 这种最初的缺血损伤引发产生即使在RBF恢复后还会继续导致细胞损伤的氧自由基和酶。 肾小管细胞损伤导致细胞间紧密连接的断裂，这使得肾小球滤出物回漏并进一步降低有效 的GFR。此外，临终的细胞脱落进入小管，形成阻塞脱落物，这进一步降低GFR并导致少尿 症。缺血性急性肾小管坏死通常是可逆的，但是如果缺血严重到足以引起皮质层坏死，则会 发生不可逆的肾衰竭。
[0017] 急性肾小管坏死有三个阶段。肾损伤在持续数小时至数天的起始阶段中发展。在 持续数天至数周的维持阶段期间，肾小球滤过率达到其最低点，且尿排出也处于其最低点。 恢复阶段持续数天，通常首先出现后急性肾小管坏死多尿症。在此阶段还会出现由于过量 尿排出导致的血容量不足。尽管产尿量得到恢复，但由于肾小管功能尚未完全恢复，患者仍 面临尿毒症以及电解质和酸的体内平衡的难题。
[0018] 肾小球疾病
[0019] 导致ARF的最常见肾小球疾病是肾小球肾炎。肾小球肾炎的特征是高血压、蛋白 尿和血尿。在肾小球肾炎的众多类型中，大多数与慢性肾疾病有关。大体而言，引起急性肾 衰竭的两类肾小球肾炎是急进性肾小球肾炎和急性增殖性肾小球肾炎。后一种类型发生在 患有细菌性心内膜炎或其它后传染性病症的患者中。
[0020] 血管疾病
[0021] 微血管或大血管疾病（主要肾动脉阻塞或严重腹主动脉疾病）可以引起急性肾衰 竭。
[0022] 间质疾病
[0023] 急性间质性肾炎通常表现出发热、皮疹和嗜曙红细胞增多。嗜曙红细胞为阳性的 尿染色预示患有这种病症。急性间质性肾炎通常是对药物过敏性反应的结果，但是其也可 以由自身免疫性疾病、感染或浸润性疾病所引起。
[0024] ARF的恢复首先依赖于RBF的恢复。RBF正常化早预示着肾功能恢复的预后更好。 在肾前性肾衰竭中，循环血量的恢复通常是充分的。在肾后性肾衰竭中，尿阻塞的快速缓解 可使血管收缩迅速下降。对于肾实质性肾衰竭，单独的血量恢复无法恢复肾功能。对于肾 小球或肾小管疾病，去除肾小管毒素和开始对其进行治疗会降低肾入球血管收缩并可逆转 ARF。尽管正在探寻急性肾衰竭的病因，但最初的治疗应该关注于纠正体液和电解质平衡和 尿毒症。用盐水复苏体液容量不足的患者。然而，更常见的是体液容量过度负荷，特别是在 患者患少尿症或无尿症的情况下。
[0025] 现有治疗的一个实例是经静脉施用速尿灵（Lasix)。现有治疗中的另一个实例是 经静脉施用钙。利用经静脉施用的胰岛素（10个单位）和葡萄糖（25g)、吸入的β-激动剂 或经静脉施用碳酸氢钠可以使钾临时移入细胞内结构。施用聚苯乙烯磺酸钠（Kayexalate) 和/或利尿剂来实现钾的排泄。聚苯乙烯磺酸钠口服给药（25至50g，混合有100mL20%山 梨醇）或作为灌肠剂给药（50g，于50mL70%山梨醇和150mL自来水中）。如果这些方法不 能控制钾水平，则开始进行透析。
[0026] 如果血清碳酸氢盐水平小于15mEq/L(15mmol/L)或pH小于7. 2,则通常通过静脉 或口服施用碳酸氢钠来治疗酸中毒。也可以通过口服碳酸氢钠片剂、30mL剂量的Shohl溶 液或粉末状碳酸氢钠对患者进行治疗。血清碳酸氢钠水平和pH应该密切相关。难以减轻 的酸中毒需要进行透析。
[0027] 应对全部药物做出评价，并应基于药物的肾小球滤过率和血清水平调节它们的剂 量。
[0028] 有20%至60%的患者需要短期透析，特别是当8^超过1001^/乩(35.7臟〇1/每 升尿液）且血清肌酸酐水平超出5-10mg/dL(442-884ymol/L)的范围时。透析的适应症包 括对药理学治疗无反应的酸中毒或电解质紊乱、对利尿剂无反应的体液过多、和尿毒症。对 于患进行性急性肾衰竭的患者，需要肾病学家的紧急会诊。
[0029] -些上述治疗导致（部分）恢复的肾功能。与未经治疗人群相比，其它治疗导致 功能的改善。然而，仍需要备选的治疗。


【发明内容】

[0030] 本发明的目的是提供改善肾功能的备选治疗，特别是在肾功能至少部分地受损/ 减退的情况中。
[0031] 本发明提供使用碱性磷酸酶以改善肾功能减退的情况的备选治疗。
[0032] 在第一实施方案中，本发明提供了碱性磷酸酶（AP)在制备改善肾功能减退的药 物中的用途。
[0033] 术语"改善"包括使延缓减退、终止减退或至少部分地逆转肾功能的减退。
[0034] 术语"肾功能减退"通常用于表示通过将至少一种肾相关参数的值与所述参数公 认的或平均（实验室）值相比，而确定肾功能下降的情况。例如，如果受试者（优选人） 尿中蛋白质含量（显著地）大于公认的或平均（实验室）值，则称此人患有"肾功能减 退"。相应的分析可以在实验室中进行，也可以在家中进行。例如，自2006年9月起，荷 兰"Nierstichting"已引入了可以在家中进行的，测试肾功能是否正常的简单测试（称为 Niercheck)。此测试针对于尿液中蛋白质的含量。
[0035] 可以测试的参数的其它实例是肾小球滤过率（GFR)、血清肌酸酐水平、电解质紊 舌U产尿量、血尿素氮（BUN)、钙、磷、白蛋白水平、或尿中的红细胞和白细胞。可以进行的其 它测试是分类全血细胞计数。优选地，对全部可能的患者进行以下尿液检查：浸渍检查法、 显微镜检查、钠和肌酸酐水平和尿摩尔渗透压浓度测定。
[0036] 如本文实验部分所公开，也可以分析尿样品中RNA分子的存在或缺失。优选地，所 述RNA分子是mRNA分子。更优选地，所述mRNA分子是iNOSmRNA。在最优选的实施方案中， 所述RNA从分泌尿的肾细胞中获得。
[0037] 基于上述分析，确定是否受试者（优选人）正患有肾功能减退。例如，GFR降低或 血清肌酸酐水平升高或产尿量下降或上述指标的任意组合是所测试的受试者需要本文所 述治疗的明显指标。
[0038] 因此，在本文所述的用途之前可以有分析步骤，例如，所述分析步骤包括从疑似患 有肾功能减退的受试者中取样，并分析所述样品中任何上述给出的参数（或其组合），并将 所获得的结果与平均或公认的值进行比较。适合的样品的实例是尿样品或血液样品。在对 尿和/或血液样品的分析之外，还可以附加肾超声检查。在优选的实施方案中，由医生或在 医生负责下进行分析。当很明确有肾功能减退时，则开始如本发明的治疗。
[0039] 肾功能减退可以是不同疾病的结果。肾功能受损的许多病例导致轻微，无症状的 疾病，此疾病未被患者察觉，未引起医学关注且仍未确诊。此轻微肾功能受损事件的发病率 和流行程度尚不确定，但认为其是相当大的。然而，此轻微的功能障碍会发展为严重的问 题，因此早期治疗（例如如本文所述）很重要。
[0040] 在优选的实施方案中，本发明提供了碱性磷酸酶（AP)在制备改善肾功能减退的 药物中的用途，其中所述肾功能减退是由肾衰竭引起的。肾衰竭是肾无法正常发挥功能的 病症。生理学上，将肾衰竭描述为肾小球滤过率的下降。在临床上，其表现为血清肌酸酐升 高。其大致分为两类：急性肾衰竭和慢性肾衰竭。
[0041] 慢性肾衰竭（CRF)发展缓慢，并且最初几乎不表现出症状。其可以是大量肾病如 肾小球肾炎、慢性肾盂肾炎和尿潴留的并发症。末期肾衰竭（ESRF)是其最终的结果，在此 类病例中通常需要透析直到找到用于肾移植的供体。在急性肾衰竭中，肾功能几乎完全被 破坏。在优选的实施方案中，所述肾衰竭是急性肾衰竭。
[0042] 如其名称的意思，急性肾衰竭（ARF)是肾功能的快速进行性损失，通常的特征为 少尿症（产尿量下降，定量表示为成人小于400mL/天，儿童小于0. 5mL/kg/h或婴儿小于 lmL/kg/h)、体内水分和体液失调以及电解质紊乱。由于其病症的严重性，患有急性肾衰竭 的患者通常需要住院治疗。目前，必需确定根本病因以阻止疾病进程，并且需要透析来弥补 治疗这些根本病因所需的时间间隔。基于本发明，即便不知道其根本病因，就可以立即开始 使用碱性磷酸酶的治疗，而且不浪费宝贵时间。在优选的实施方案中，本发明提供了碱性磷 酸酶（AP)在制备改善肾功能减退的药物中的用途，其中所述肾功能减退是由于肾衰竭所 引起或维持或加重的，且其中肾衰竭是急性肾衰竭，即在优选的实施方案中，本发明提供了 碱性磷酸酶（AP)在制备治疗由急性肾衰竭（ARF)所引起或维持或加重的肾功能减退的药 物中的用途。
[0043] 急性肾衰竭可以在慢性肾衰竭的基础上存在。这被称为慢性肾衰竭基础上的急性 肾功能衰竭（AoCRF)。AoCRF的急性部分是可逆的，且治疗的目的是使患者恢复其原始的肾 功能，这通常通过血清肌酸酐来测定。在另一实施方案中，本发明因此提供了碱性磷酸酶 (AP)在制备改善肾功能减退的药物中的用途，其中所述肾功能（进一步）下降是由于慢性 肾衰竭基础上的急性肾功能衰竭引起的。
[0044] 在另一优选的实施方案中，肾功能减退是可逆的，即通过根据本发明的治疗可以 至少使肾功能在某种程度上得到改善。
[0045] 如 Agrawal 和 Swartz(American Family Physician, Aprill，2000volume61，no7 ; cover story)所述，急性肾衰竭的病因可以通过使用步进式方法来确定。基于此文章，技 术人员能够很好地将患者细分到3个ARF类别中的任意一个，即确定是否患者患有肾前性 ARF、肾实质性ARF或肾后性ARF。
[0046] 例如，诊断肾实质性ARF通常基于病史和身体检查、大于3 %的钠排泄分数、 250-300m0sm的尿摩尔渗透压浓度、活性尿沉淀物来确定。在肾实质性急性ARF中，肾实质 受到损伤。肾小管细胞的损伤导致某些特定的尿显微镜检查结果。实质损伤引起钠再吸收 受损并导致上述参数，例如大于3 %的钠排泄分数和250-300m0sm等渗压的尿摩尔渗透压 浓度。肾实质性急性肾衰竭被细分为四类：肾小管疾病、肾小球疾病、血管疾病和间质疾病。
[0047] 急性肾小管坏死是住院患者中肾实质性急性肾衰竭的最主要病因。此病症通常由 缺血或毒素所引起。与肾前性急性肾衰竭不同，在缺血性急性肾小管坏死中，肾小球滤过率 不随肾血流的恢复而改善。缺血性急性肾小管坏死通常是可逆的，但是如果缺血严重到足 以引起皮质层坏死，则会发生不可逆的肾衰竭。造影剂和抗生素，特别是氨基糖苷是与急性 肾小管坏死最相关的药剂。该病症也可以由来自肌红蛋白尿（横纹肌溶解）或血红蛋白尿 (溶血）中的色素引起。急性肾小管坏死有3个阶段。肾损伤在持续数小时至数天的起始 阶段中发展。在持续数天至数周的维持阶段期间，肾小球滤过率达到其最低点，且尿排出也 处于其最低点。恢复阶段持续数天，通常首先出现后急性肾小管坏死多尿症。在此阶段还 会出现由于过量尿排出导致的血容量不足。尽管产尿量恢复，但由于肾小管功能尚未完全 恢复，患者仍面临尿毒症和电解质和酸的体内平衡的难题。持续监测应贯穿于急性肾小管 坏死的全部阶段。有患急性肾小管坏死风险的患者包括那些患有糖尿病、充血性心力衰竭 或慢性肾功能不全的患者。可以通过迅速治疗带有缺血性或肾前性急性肾衰竭的可逆病因 的患者，并通过在接受肾毒素的患者中保持适当的水合来预防急性肾小管坏死。一旦急性 肾小管坏死发展，则要进行辅助治疗。药物如甘露醇、袢利尿剂、多巴胺和钙通道阻断剂在 促进动物利尿上取得了一些成功，但是在人类中并未获得类似的结果。
[0048] 在优选的实施方案中，本发明提供了碱性磷酸酶（AP)在制备改善肾功能减退的 药物中的用途，其中所述肾功能减退是由于肾衰竭（优选急性肾衰竭）所引起，且其中所述 肾功能减退是由于肾实质性急性肾衰竭（优选急性肾小管坏死）所引起或维持或加重的。 艮P，本发明还提供了碱性磷酸酶（AP)在制备治疗急性肾小管坏死的药物中的用途。
[0049] 肾小球肾炎的特征是高血压、蛋白尿和血尿。肾小球肾炎通常被描述为肾小球发 炎。在肾小球肾炎的众多类型中，大多数与慢性肾疾病有关。大体而言，引起急性肾衰竭的 两类肾小球肾炎是急进性肾小球肾炎和急性增殖性肾小球肾炎。后一种类型发生在患有细 菌性心内膜炎或其它后传染性病症的患者中。急进性肾小球肾炎可以是原发疾病，或其可 以在全身疾病后发生。一旦怀疑有此病症，必需通过血清学标记物或肾活检来检查可治疗 的全身疾病。肾功能在急进性肾小球肾炎患者中快速下降，且在数天至数周内后会发展为 末期肾疾病。通常用糖皮质激素和环磷酰胺（Cytoxan)治疗急进性肾小球肾炎患者。人们 认为血浆交换对Goodpasture综合症患者有利，但尚未证实其也对其它类型的肾小球肾炎 患者有利。
[0050] 此类型的ARF也可以使用碱性磷酸酶来治疗，因此，在优选的实施方案中，本发明 提供了碱性磷酸酶（AP)在制备改善肾功能减退的药物中的用途，其中所述肾功能减退是 由于肾衰竭（优选急性肾衰竭）所引起，且其中所述肾功能减退是由于肾实质性急性肾衰 竭（优选肾小球肾炎）所引起或维持或加重的。即，本发明还提供了碱性磷酸酶（AP)在制 备治疗肾小球肾炎的药物中的用途。
[0051] -般的肾衰竭和具体的急性肾衰竭可以因不同的根本诱因而发生，或在不同 疾病的病程中发展，所述疾病如缺血、造影剂色素、系统性红斑狼疮、小血管血管炎、 Henoch- Sch0nleill紫癜、Goodpasture综合症、心内膜炎、后链球菌感染、后肺炎球菌感染、 糖尿病、高血压、动脉粥样硬化或癌症。已知使用某些抗微生物剂（如两性霉素 B、卡泊芬 净、万古霉素、左氧氟沙星和氨基糖苷，如托普霉素和庆大霉素）、其它药物（如化疗药剂 (如顺钼、卡钼、甲氨蝶呤）、蛋白酶抑制剂（如茚地那韦和利托那韦）、金、锂、抗炎药（如非 甾体抗炎药、环孢菌素、他克莫司、西罗莫司）、血压药（如血管紧张素转化酶（ACE)抑制剂 和血管紧张素受体阻断剂（ARB))、和某些化学品（如硅酸盐、烃、重金属（如0(1、!^、？13)、杀 虫剂、除草剂、乙二醇和细菌毒素（如破伤风、链球菌毒素））也可以引起服用或接触所述药 剂或化学品的受试者肾功能减退。
[0052] 本发明可以用于治疗由任何上述诱因所引起或维持或加重的肾功能减退。因此， 在优选的实施方案中，本发明提供了碱性磷酸酶（AP)在制备改善肾功能减退的药物中的 用途，其中所述肾功能减退是由于药物、药剂和/或毒素所引起或维持或加重的，所述药 物、药剂和/或毒素优选自由以下组成的组：抗生素、蛋白酶抑制剂、化疗药剂、抗炎药、血 压药、杀虫剂、除草剂、乙二醇、造影剂、重金属和细菌毒素。
[0053] 在另一优选实施方案中，本发明提供了碱性磷酸酶（AP)在制备改善肾功能减退 的药物中的用途，其中所获得的肾功能改善并非通过AP对LPS解毒的结果。
[0054] 在更优选的实施方案中，本发明提供了碱性磷酸酶（AP)在制备改善肾功能减退 的药物中的用途，其中所述肾功能减退是由于肾血流下降和/或缺血所引起或维持或加重 的。所述肾血流下降和/或缺血优选是由于脱水、心力衰竭、感染性休克、严重失血、高血 压、动脉粥样硬化和/或血栓形成所引起或维持或加重的。
[0055] 在另一优选实施方案中，本发明提供了碱性磷酸酶（AP)在制备改善肾功能减退 的药物中的用途，其中所述肾功能减退是由于肾血流下降和/或缺血所引起或维持或加 重的，其中所述肾血流下降和/或缺血优选是由于药物或药剂或毒素所引起或维持或加 重的，所述药物、药剂和/或毒素优选自由以下物质组成的组：抗炎药（最优选非留体抗 炎药）和血压药（最优选血管紧张素转化酶（ACE)抑制剂和/或血管紧张素受体阻断剂 (ARB))。
[0056] 本发明还提供了碱性磷酸酶（AP)在制备治疗或预防由于（肾）诱导型N0合酶 (iNOS)表达增加所引起的肾功能减退的药物中的用途。此治疗在所谓早期肾损伤/衰竭 的治疗中十分有用，且因此可以用于如治疗或预防早期肾病。需要此治疗的人群可以很容 易通过测定iNOS含量并将获得的值与平均水平比较来确定。通过向被诊断为早期肾损伤 /衰竭的个人施用有效量的碱性磷酸酶，可以降低肾iNOS的含量。本发明人已经确定碱性 磷酸酶治疗导致肾细胞中iNOS mRNA表达增加的减缓，从而导致N0代谢物尿排泄的减少。 AP治疗缓解炎症反应，从而导致对肾iNOS表达诱导的减少，这引起N0代谢物产量减少和邻 近肾小管损伤的减少。
[0057] 肾衰竭通常伴随有分泌到尿中的肾细胞的结构损伤。从尿样品中分离这些细胞和 随后进行RNA合成分析为肾功能、肾损伤和损伤最终逆转提供了有用的监测工具。在实施 例1中，将分泌尿的肾细胞中诱导型一氧化氮合酶（iNOS)mRNA的表达用作为肾衰竭的标志 物，且由此可将其用于监测损伤和由AP治疗所引起的损伤逆转。损伤的根本机制是iNOS 诱导活性氧化物产物（reactive oxide species, R0S)，从而导致肾泄漏。使用此方法可以 监测通过iNOS下调而导致的对ROS的诱导的减少。
[0058] 在另一实施方案中，本发明提供了 AP在制备改善肾功能减退的药物中的用途，进 一步包括分析尿样品中RNA分子的存在或缺失。优选地，所述RNA分子是mRNA分子。更优 选地，所述mRNA分子是iNOS mRNA。在最优选的实施方案中，所述RNA从分泌尿的肾细胞中 获得。
[0059] 本发明使用碱性磷酸酶（AP)来改善肾功能减退（或损伤）。
[0060] 碱性磷酸酶（AP)(根据IUBMB酶命名法为EC3. 1. 3. 1，常用名为碱性磷酸酶）是催 化磷酸酶单酯和H20反应生成醇和磷酸盐的酶。AP的其它名称为碱性磷酸单酯酶、磷酸单 酯酶、甘油磷酸酶、碱性磷酸水解酶、碱性苯基磷酸酶、正磷酸单酯磷酸水解酶（最适宜碱 性）。AP的系统名称为磷酸单酯磷酸水解酶（最适宜碱性）。
[0061] AP是广谱特异性酶，其也可以催化转磷酸作用。已知在人和其它动物中至少有四 种不同但相关的碱性磷酸酶。它们是肠、胎盘、胎盘样和肝/骨/肾（或组织非特异性）碱 性磷酸酶。前三种一起位于2号染色体上，而组织非特异性形式则位于1号染色体上。尚 不知道AP具体的生理学功能，但AP似乎参与大量生理学过程。
[0062] AP的来源可以是商业的AP酶、或包含AP酶的任何组合物、和能生产本发明所述功 能性AP酶的任何手段，如编码AP蛋白质的DNA或RNA核酸。可以将编码AP的核酸插入到 适合的载体中，如质粒、噬菌粒、噬菌体、（逆转录）病毒、转座子、基因治疗载体和能够诱导 或使AP产生的其它载体。此外天然或重组微生物，如细菌、真菌、原生动物和酵母也可以用 作本发明所述AP的来源。
[0063] 根据本发明所用的包含AP的组合物优选包含真核生物AP，更优选哺乳动物AP，其 类型可以是组织非特异性AP，如肝-骨或肾类型、或组织特异性，如胎盘AP、肠 AP、胎盘样 AP。后者也被称为生殖细胞AP，其位于睾丸、胸腺和某些生殖细胞肿瘤（1)，且与胎盘和肠 形式的碱性磷酸酶紧密相关（2)。技术人员能够熟练地搜索核酸文库并选择编码碱性磷酸 酶的序列。最优选地，哺乳动物AP是人或牛AP。因此，在优选的实施方案中，本发明提供了 碱性磷酸酶（AP)在制备改善肾功能减退的药物中的用途，其中所述AP是哺乳动物AP，且更 优选地所述AP是人AP。人AP序列的非限定性实例可以在NCBI (Genp印t)集合中找到，且 其包括 NP_001622 (肠 AP)、NP_001623 (胎盘 AP)、NP_112603 (胎盘样 AP)或 NP_000469 (组 织非特异性AP)。本发明还包括任何所述序列多态性的用途。在另一优选的实施方案中，所 述AP是胎盘AP、胎盘样AP、肠 AP或肝/骨/肾AP。
[0064] 在另一优选的实施方案中，本发明提供了 AP在制备改善肾功能减退的药物中的 用途，其中所述AP是重组的AP。
[0065] 在构象方面，碱性磷酸酶大致由两个结构域构成：花冠结构域和活性位点结构域。 活性位点结构域可以分为单独的部分，如催化残基和三个金属离子位点（Znl、Zn2和Mg3)。 从一级结构看，很明显花冠结构域与形成活性位点结构域的氨基酸侧面连接。碱性磷酸酶 的氨基酸序列和催化和花冠结构域的相对位置是技术人员已知的。例如，以图10作为参 考，所述图10中显示出四条人碱性磷酸酶的氨基酸序列。这些序列中的花冠结构域用下划 线标出。
[0066] 碱性磷酸酶存在于从细菌到人类的几乎所有生物体中。在优选的实施方案中，提 供了根据本发明的方法，其中AP是包含花冠结构域和催化结构域的分离或重组的碱性磷 酸酶，其中所述花冠结构域和所述催化结构域可以从不同的碱性磷酸酶获得，且其中所述 不同的磷酸酶中的至少一个是人磷酸酶。其它磷酸酶是如ECAP(大肠杆菌（Escherichia coli)碱性磷酸酶）或七个已知BIAP (牛肠碱性磷酸酶）中的一个。在优选的实施方案中， 使用包含花冠结构域和催化结构域的分离或重组的碱性磷酸酶，其中所述花冠结构域和所 述催化结构域获得自不同的碱性磷酸酶，且其中不同的碱性磷酸酶是人磷酸酶。这一点在 将修饰的磷酸酶随后用在人治疗中的情况下特别有用。希望此（遗传）修饰的人源磷酸酶 没有免疫原性或免疫原性很低。然而，技术人员清楚如果将修饰的磷酸酶用在如"体外"或 "离体"诊断中，修饰的磷酸酶可以由如人和大肠杆菌碱性磷酸酶构成，或可以由牛和大肠 杆菌碱性磷酸酶构成。
[0067] 在另一优选的实施方案中，提供了根据本发明的方法，其中AP是包含花冠结构域 和催化结构域的分离或重组的碱性磷酸酶，其中所述花冠结构域和所述催化结构域可以从 不同的碱性磷酸酶获得，且其中所述花冠结构域是胎盘AP(ALPP)的花冠结构域，且其中所 述催化结构域是肠 AP(ALPI)的催化结构域。优选地，所述不同的磷酸酶中的至少一个是人 磷酸酶，且在更优选的实施方案中，两个不同的磷酸酶都是人磷酸酶。
[0068] 基于人碱性磷酸酶的其它优选的结构域交换突变体为：
[0069]

【权利要求】
1. 碱性磷酸酶（AP)在制备改善肾功能减退的药物中的用途。
2. 如权利要求1所述的用途，其中所述肾功能是由肾衰竭引起减退的。
3. 如权利要求1或2所述的用途，其中所述肾功能减退是由急性肾衰竭所引起或维持 或加重的。
4. 如权利要求1至3中任一项所述的用途，其中所述肾功能减退是由于肾实质性急性 肾衰竭所引起或维持或加重的。
5. 如权利要求4所述的用途，其中所述肾实质性急性肾衰竭是急性肾小管坏死。
6. 如权利要求4所述的用途，其中所述肾实质性急性肾衰竭是肾小球肾炎。
7. 如权利要求1至6中任一项所述的用途，其中所述肾功能减退是由于药物、药剂和/ 或毒素所引起或维持或加重的。
8. 如权利要求7所述的用途，其中所述药物或药剂或毒素选自由以下物质组成的组 中：抗生素、蛋白酶抑制剂、化疗药剂、抗炎药、血压药、杀虫剂、除草剂、乙二醇、造影剂、重 金属和细菌毒素。
9. 如权利要求1至8中任一项所述的用途，其中所述肾功能减退是由于肾血流减少和 /或缺血所引起或维持或加重的。
10. 如权利要求9所述的用途，其中所述肾血流下降和/或缺血是由于脱水、心力衰竭、 感染性休克、严重失血、高血压、动脉粥样硬化和/或血栓形成所引起或维持或加重的。
11. 如权利要求9所述的用途，其中所述肾血流减少和/或缺血是由于药物或药剂或毒 素所引起或维持或加重的。
12. 如权利要求11所述的用途，其中所述药物或药剂或毒素选自由以下物质组成的组 中：血管紧张素转化酶（ACE)抑制剂和非留体抗炎药（NSAIDs)。
13. 如权利要求1至12中任一项所述的用途，其中所述AP是哺乳动物AP。
14. 如权利要求1至13中任一项所述的用途，其中所述AP是人AP。
15. 如权利要求1至14中任一项所述的用途，其中所述AP是胎盘AP、胎盘样AP、肠 AP 或肝/骨/肾AP。
16. 如权利要求1至15中任一项所述的用途，其中所述AP是重组的AP。
17. 治疗患有肾功能减退的受试者（优选人）的方法，包括向需要施用AP的受试者施 用有效量的AP。
【文档编号】A61P13/12GK104189896SQ201410332389
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2008年1月30日 优先权日:2007年1月30日
【发明者】鲁洛夫·彼得·皮克斯, 苏珊娜·海姆斯凯科, 马克温·保罗·韦尔德斯, 威兰姆·拉本, 马提·贝尔纳杜斯·弗朗西斯库斯·武尔费林克 申请人:安-法玛公司