一种獐牙菜苦苷热转化产物及其制备方法、制剂与应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种獐牙菜苦苷热转化产物及其制备方法与应用。所述的獐牙菜苦苷热转化产物是以獐牙菜苦苷为原料经加热转化、洗脱分离纯化制备得到，所述的獐牙菜苦苷热转化产物含有重量百分比60%以上的獐牙菜内酯组合物。发明所述方法操作简便、成本低廉，解决了獐牙菜内酯成分在植物中含量低微，其分子结构复杂难以通过化学合成而大量获得的难题。与獐牙菜苦苷相比，本发明中所得獐牙菜苦苷热转化产物的保肝活性及抗乙肝病毒活性更强，可用于相关肝炎疾病的预防及治疗。
【专利说明】-种獐牙菜苦苷热转化产物及其制备方法、制剂与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物化学【技术领域】，具体涉及一种獐牙菜苦苷热转化产物及其制备方 法与应用。
【背景技术】
[0002] 獐牙菜内酯为一类多手性、高氧化、高稠和的复杂结构天然产物，多数具有抗乙肝 病毒活性，近年从抗肝炎药物青叶胆中分离得到。该类成分在植物体含量非常低微，不具备 产业化生产和商业化应用价值，由于其结构复杂亦不能通过化学合成得到。
[0003] 中国专利（申请号为201010587969. 5) "獐牙菜内酯H-K，其药物组合物及其用途" 公开了 4个獐牙菜内酯化合物的制备方法及用途：将青叶胆全草干燥粉碎后用乙醇容易回 流提取，提取液减压浓缩后悬浮于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，乙酸乙酯 部分用反复经硅胶柱层析，分离得到4个獐牙菜内酯化合物，所得化合物量少、且生产周期 长，难以产业化生产。因此，提供一种操作简便、成本低廉的产业化制备獐牙菜内酯的方法 对于獐牙菜内酯的推广应用具有重要意义。
【发明内容】
[0004] 本发明的第一目的在于提供一种獐牙菜苦苷热转化产物；第二目的在于提供所述 獐牙菜苦苷热转化产物的制备方法；第三目的在于提供所述獐牙菜苦苷热转化产物的制 齐IJ ;第四目的在于提供所述獐牙菜苦苷热转化产物的应用。
[0005] 本发明的第一目的是这样实现的，是以獐牙菜苦苷为原料经加热转化、洗脱分离 纯化制备得到，所述的獐牙菜苦苷热转化产物含有重量百分比60%以上的獐牙菜内酯组合 物。
[0006] 本发明的第二目的是这样实现的，包括以下步骤： A、 取原料獐牙菜苦苷，加入1~20倍重量的水，于80°C以上回流5~7h至獐牙菜苦苷完 全消失得到转化液； B、 将转化液冷却、过滤得到滤液和滤渣，滤渣中加入滤渣重量比0. 1~2倍的80~120目 的硅胶拌样，上硅胶柱，以体积配比15 :1~3:1的石油醚-丙酮溶液进行梯度洗脱，再用体积 配比20:1~0:1的氯仿-甲醇溶液进行梯度洗脱，TLC监测收集洗脱液，减压浓缩得到目标 物。
[0007] 本发明的第三目的是这样实现的，所述的獐牙菜苦苷热转化产物中加入药学上接 受的辅料制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、脂肪乳剂、微囊或滴丸。
[0008] 本发明的第四目的是这样实现的，所述的獐牙菜苦苷热转化产物在制备预防/治 疗肝损伤有关的疫病药物中的应用。
[0009] 本发明的有益效果： 1、本发明获得的獐牙菜苦苷热转化产物中含有大量的獐芽菜内酯，獐牙菜内酯类成分 在植物体中含量很低微，从中进行提取分离成本高昂，无产业化应用价值，且其结构复杂， 目前亦无法进行化学合成获得。本发明通过广泛并大量存在于多种植物中的獐牙菜苦苷进 行加热转化，可大量获得该类物质，为该类成分的进一步深入研究及产业化突破了技术瓶 颈。
[0010] 2、本发明所述方法操作简便、成本低，易于工业化生产。
[0011] 3、本发明中所获得的獐牙菜苦苷热转化产物具有保肝抗炎活性，且其活性优于獐 牙菜苦苷本身，其可以用于保肝药物。
[0012] 4、獐牙菜苦苷热转化产物具有抗乙肝病毒活性，可用于抗乙肝病毒性药物。
【具体实施方式】
[0013] 下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制， 基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。
[0014] 本发明所述的獐牙菜苦苷热转化产物，是以獐牙菜苦苷为原料经加热转化、洗脱 分离纯化制备得到，所述的獐牙菜苦苷热转化产物含有重量百分比60%以上的獐牙菜内酯 组合物。
[0015] 所述的猜牙菜内酯组合物中含有猜牙菜内酯A~M (swerilactone A?M)中的3 种或3种以上成分。
[0016] 所述的獐牙菜苦苷热转化产物中还含有重量百分比0. 1~10%的红白金花内酯。
[0017] 所述的红白金花内酯的重量百分比为1~6%。
[0018] 本发明所述的獐牙菜苦苷热转化产物的制备方法，包括以下步骤： A、 取原料獐牙菜苦苷，加入1~20倍重量的水，于80°C以上回流5~7h至獐牙菜苦苷完 全消失得到转化液； B、 将转化液冷却、过滤得到滤液和滤渣，滤渣中加入滤渣重量比0. 1~2倍的80~120目 的硅胶拌样，上硅胶柱，以体积配比15 :1~3:1的石油醚-丙酮溶液进行梯度洗脱，再用体积 配比20:1~0:1的氯仿-甲醇溶液进行梯度洗脱，TLC监测收集洗脱液，减压浓缩得到目标 物。
[0019] A步骤中所述的回流的温度为90~100°C . A步骤中所述的獐牙菜苦苷完全消失的监测是采用TLC监测。
[0020] 本发明的制剂，是在所述的獐牙菜苦苷热转化产物中加入药学上接受的辅料制备 成片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、脂肪乳剂、微囊或滴丸。
[0021] 本发明的应用为所述的獐牙菜苦苷热转化产物在制备预防/治疗肝损伤有关的 疫病药物中的应用。
[0022] 下面以实施例对本发明做进一步说明： 实施例1 取獐牙菜苦苷20kg，加入15倍重量的水，升温至95°C进行转化反应，经检测獐牙菜苦 苷完全消失后，反应停止，冷却至室温，过滤得滤渣；滤渣中加入1. 5倍重量的硅胶拌样，烘 干后装入硅胶柱，先用石油醚-丙酮（15:1-3:1)梯度洗脱，再用氯仿-甲醇（20:1-0:1) 进行梯度洗脱，收集目标成分，浓缩、烘干得獐牙菜苦苷热转化产物，经检测，獐芽菜内酯占 热转化产物总量的76%，其中含有獐牙菜内酯G、獐牙菜内酯I、獐牙菜内酯J、獐牙菜内酯K ; 红白金花内酯占热转化产物总量的6%。
[0023] 实施例2 取獐牙菜苦苷30kg，加入20倍重量的水，升温至100°C进行转化反应，经检测獐牙菜苦 苷完全消失后，反应停止，冷却至室温，过滤得滤渣；滤渣中加入2倍重量的硅胶拌样，烘干 后装入硅胶柱，先用石油醚-丙酮（15:1-3:1)梯度洗脱，再用氯仿-甲醇（20:1-0:1)进 行梯度洗脱，收集目标成分，浓缩、烘干得獐牙菜苦苷热转化产物，经检测，獐芽菜内酯占热 转化产物总量的80%，其中含有獐牙菜内酯A、獐牙菜内酯C、獐牙菜内酯J、獐牙菜内酯K、獐 牙菜内酯M ;红白金花内酯占热转化产物总量的4%。
[0024] 实施例3 取獐牙菜苦苷10 kg，加入5倍重量的水，升温至100°C进行转化反应，经检测獐牙菜苦 苷完全消失后，反应停止，冷却至室温，过滤得滤渣；滤渣中加入1倍重量的硅胶拌样，烘干 后装入硅胶柱，先用石油醚-丙酮（15:1-3:1)梯度洗脱，再用氯仿-甲醇（20:1-0:1)进 行梯度洗脱，收集目标成分，浓缩、烘干得獐牙菜苦苷热转化产物，经检测，獐芽菜内酯占热 转化产物总量的79%，其中含有獐牙菜内酯A、獐牙菜内酯D、獐牙菜内酯J、獐牙菜内酯K、獐 牙菜内酯M ;红白金花内酯占热转化产物总量的6%。
[0025] 实施例4 取獐牙菜苦苷15 kg，加入1倍重量的水，升温至KKTC进行转化反应，经检测獐牙菜苦 苷完全消失后，反应停止，冷却至室温，过滤得滤渣；滤渣中加入1. 5倍重量的硅胶拌样，烘 干后装入硅胶柱，先用石油醚-丙酮（15:1-3:1)梯度洗脱，再用氯仿-甲醇（20:1-0:1) 进行梯度洗脱，收集目标成分，浓缩、烘干得獐牙菜苦苷热转化产物，经检测，獐芽菜内酯占 热转化产物总量的76%，其中含有獐牙菜内酯B、獐牙菜内酯J、獐牙菜内酯K、獐牙菜内酯M ; 红白金花内酯占热转化产物总量的5%。
[0026] 实施例5 取獐牙菜苦苷25 kg，加入20倍重量的水，升温至90°C进行转化反应，经检测獐牙菜苦 苷完全消失后，反应停止，冷却至室温，过滤得滤渣；滤渣中加入2倍重量的硅胶拌样，烘干 后装入硅胶柱，先用石油醚-丙酮（15:1-3:1)梯度洗脱，再用氯仿-甲醇（20:1-0:1)进 行梯度洗脱，收集目标成分，浓缩、烘干得獐牙菜苦苷热转化产物，经检测，獐芽菜内酯占热 转化产物总量的76%，其中含有獐牙菜内酯C、獐牙菜内酯J、獐牙菜内酯K、獐牙菜内酯M ; 红白金花内酯占热转化产物总量的6%。
[0027] 实施例6 取实施例1制备的獐牙菜内酯化合物加入药学上可以接受的辅料制成片剂。
[0028] 实施例7 取实施例2制备的獐牙菜内酯化合物加入药学上可以接受的辅料制成胶囊剂。
[0029] 实施例8 取实施例3制备的獐牙菜内酯化合物加入药学上可以接受的辅料制成颗粒剂。
[0030] 实施例9 取实施例4制备的獐牙菜内酯化合物加入药学上可以接受的辅料制成注射剂。
[0031] 实施例10 取实施例5制备的獐牙菜内酯化合物加入药学上可以接受的辅料制成脂肪乳剂。
[0032] 实施例11 取实施例5制备的獐牙菜内酯化合物加入药学上可以接受的辅料制成微囊。
[0033] 实施例12 取实施例3制备的獐牙菜内酯化合物加入药学上可以接受的辅料制成滴丸。
[0034] 实施例13 以实施例3制备的獐牙菜苦苷热转化产物进行试验，其结果如下： 一、抗CC14肝损伤实验 选18?22g雄性昆明种小鼠82只，按体重随机分为7组：正常对照组；模型对照组； 联苯双酯滴丸200mg/kg组；獐牙菜苦苷0. 52、I. 05g/kg组；实施例3制备的獐牙菜苦苷热 转化物0. 42g、0. 84g/kg组；除正常组10只动物外，其余每组12只。各组动物每日按剂量 灌胃给药一次，连续7天。第6日给药后30min，除正常对照组外，各模型动物均腹腔注射 0. 12%的CCl4橄榄油溶液0. lml/10g. bw。造模后禁食不禁水16h、即末次给药后30min，眼 眶取血分离血清，测定ALT及AST，结果见表1。
[0035] 表1 实施例3制备的獐牙菜苦苷热转化物对0：14致小鼠急性肝损伤的影响
【权利要求】
1. 一种獐牙菜苦苷热转化产物，其特征在于是以獐牙菜苦苷为原料经加热转化、洗脱 分离纯化制备得到，所述的獐牙菜苦苷热转化产物含有重量百分比60%以上的獐牙菜内酯 组合物。
2. 根据权利要求1所述的獐牙菜苦苷热转化产物，其特征在于所述的獐牙菜内酯组合 物中含有猜牙菜内酯A~M (swerilactone A?M)中的3种或3种以上成分。
3. 根据权利要求1所述的獐牙菜苦苷热转化产物，其特征在于所述的獐牙菜苦苷热转 化产物中还含有重量百分比0. 1~1〇%的红白金花内酯。
4. 根据权利要求3所述的獐牙菜苦苷热转化产物，其特征在于所述的红白金花内酯的 重量百分比为1~6%。
5. -种权利要求1~4任一所述的獐牙菜苦苷热转化产物的制备方法，其特征在于包括 以下步骤： A、 取原料獐牙菜苦苷，加入1~20倍重量的水，于80°C以上回流5~7h至獐牙菜苦苷完 全消失得到转化液； B、 将转化液冷却、过滤得到滤液和滤渣，滤渣中加入滤渣重量比0. 1~2倍的80~120目 的硅胶拌样，上硅胶柱，以体积配比15 :1~3:1的石油醚-丙酮溶液进行梯度洗脱，再用体积 配比20:1~0:1的氯仿-甲醇溶液进行梯度洗脱，TLC监测收集洗脱液，减压浓缩得到目标 物。
6. 根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于A步骤中所述的回流的温度为 90?100。。。
7. 根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于A步骤中所述的獐牙菜苦苷完全消失 的监测是采用TLC监测。
8. -种权利要求1~4任一所述的獐牙菜苦苷热转化产物的制剂，其特征在于是在所述 的獐牙菜苦苷热转化产物中加入药学上接受的辅料制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、 脂肪乳剂、微囊或滴丸。
9. 一种权利要求1~4任一所述的獐牙菜苦苷热转化产物的应用，其特征在于所述的獐 牙菜苦苷热转化产物在制备预防/治疗肝损伤有关的疫病药物中的应用。
【文档编号】A61P1/16GK104497005SQ201410839888
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月30日 优先权日:2014年12月30日
【发明者】周志宏, 杨树德, 淤泽浦, 谭文红, 马晓霞 申请人:云南中医学院