穿心莲内酯的医药用途的制造方法与工艺

本发明涉及医药保健品领域，特别是涉及一种穿心莲的医药用途及其药物组合物。

背景技术：
疼痛是一种临床常见病症，给患者带来极大痛苦，甚至会影响生活质量。用于治疗疼痛的药物很多，最常用的是非甾体类抗炎药。但此类药物可引起诸多不良反应，如消化道反应，肝毒性，肾毒性，心血管风险等。对乙酰氨基酚是非甾体抗炎药中的一种，属于苯胺类。由于其解热镇痛作用强，常用于头痛、牙痛、肌肉痛、月经痛、关节痛等慢性钝痛与感冒发热等。但是如果大剂量或者长期使用，可引起严重的肝毒性，尤以肝坏死最常见。由于国内含对乙酰氨基酚的复方制剂多达二三十种，如速效感冒胶囊、小儿速效感冒冲剂、感康、百服宁、强力银翘片、999感冒灵等，且其非处方药大量销售，使用广泛，因此由对乙酰氨基酚引起的肝损害应引起高度的重视。对150例对乙酰氨基酚中毒的病例分析发现30％的病人发生肝损害，总死亡率1％～2％。临床检查最常见的是转氨酶升高。对乙酰氨基酚引起的肝损伤一直是国内外学者研究的热点。穿心莲内酯为爵床科植物穿心莲Andrographispaniculata(Burm.f)Nees中提取得到的二萜内酯类化合物。现代药理研究表明，穿心莲内酯具有抗炎抗菌、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、治疗心脑血管疾病、保肝利胆等作用。

技术实现要素：
本发明的目的旨在提供一种穿心莲内酯的新的医药用途及其药物组合物。具体地说，本发明的第一方面是提供了穿心莲内酯或其药学上可接受的盐、水合物或前药在提高对乙酰氨基酚的镇痛作用中的应用，所述应用不以治疗为目的。本发明的第二方面是提供了穿心莲内酯或其药学上可接受的盐、水合物或前药在制备提高对乙酰氨基酚的镇痛作用的药物或保健品中的应用。本发明的第三方面是提供了穿心莲内酯或其药学上可接受的盐、水合物或前药在降低对乙酰氨基酚的肝毒性中的应用，所述应用不以治疗为目的。本发明的第四方面是提供了穿心莲内酯或其药学上可接受的盐、水合物或前药在制备降低对乙酰氨基酚的肝毒性的药物或保健品中的应用。本发明的第五方面是提供了穿心莲内酯或其药学上可接受的盐、水合物或前药在提高对乙酰氨基酚的镇痛作用且降低其肝毒性中的应用，所述应用不以治疗为目的。本发明的第六方面是提供了穿心莲内酯或其药学上可接受的盐、水合物或前药在制备提高对乙酰氨基酚的镇痛作用且降低其肝毒性的药物或保健品中的应用。本发明还提供了一种镇痛药物组合物，它包含治疗有效量的穿心莲内酯和对乙酰氨基酚，所述穿心莲内酯和对乙酰氨基酚的重量比为13.5:1～13.5:3。本发明各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本发明的特点、目的和优势将更为明显。附图说明图1.醋酸扭体法考察穿心莲内酯联用对乙酰氨基酚对小鼠扭体次数的影响，注：与醋酸模型组相比*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001；与APAP组相比#P<0.05；图2各组动物肝脏HE染色，注：放大倍数200×；图3各组动物血清ALT、AST水平。具体实施方式本发明的问世部分是基于这样一个意外发现：通过经典的镇痛实验方法(醋酸扭体法和热板法)和癌症疼痛模型实验上发现穿心莲内酯和对乙酰氨基酚两者联用后，穿心莲内酯可以提高对乙酰氨基酚的镇痛作用；与此同时，本发明人还惊奇地发现：穿心莲内酯也可以降低对乙酰氨基酚引起的ALT、AST升高。上述研究结果证明：穿心莲内酯除了能够增强对乙酰氨基酚的镇痛药效，还能降低对乙酰氨基酚的肝毒性，从而最大限度地发挥其药用价值。进而，本发明的第一方面是提供了穿心莲内酯或其药学上可接受的盐、水合物或前药在提高对乙酰氨基酚的镇痛作用中的应用，所述应用不以治疗为目的。本发明的第二方面是提供了穿心莲内酯或其药学上可接受的盐、水合物或前药在制备提高对乙酰氨基酚的镇痛作用的药物或保健品中的应用。本发明的第三方面是提供了穿心莲内酯或其药学上可接受的盐、水合物或前药在降低对乙酰氨基酚的肝毒性中的应用，所述应用不以治疗为目的。本发明的第四方面是提供了穿心莲内酯或其药学上可接受的盐、水合物或前药在制备降低对乙酰氨基酚的肝毒性的药物或保健品中的应用。本发明的第五方面是提供了穿心莲内酯或其药学上可接受的盐、水合物或前药在提高对乙酰氨基酚的镇痛作用且降低其肝毒性中的应用，所述应用不以治疗为目的。本发明的第六方面是提供了穿心莲内酯或其药学上可接受的盐、水合物或前药在制备提高对乙酰氨基酚的镇痛作用且降低其肝毒性的药物或保健品中的应用。本发明还提供了一种镇痛药物组合物，它包含治疗有效量的穿心莲内酯和对乙酰氨基酚，所述穿心莲内酯和对乙酰氨基酚的重量比为13.5:1～13.5:3。如本领域的技术人员所知，本发明的穿心莲内酯(Andrographolide，Andro)具有如下结构通式：分子式：C20H30O5分子量：350.44本发明还包括上述化合物的相应的所有药学上可以接受的盐、水合物或前药。这些盐可以由化合物中带正电荷的部分(例如，胺基)与具有相反电性的带负电荷(例如，三氟醋酸)形成；或者由化合物中带负电荷的部分(例如，羧基)与正电荷(例如，钠、钾、钙、镁)形成。化合物可以含有一个非芳香性的双键，具有一个或多个不对称中心。所以，这些化合物可以作为外消旋的混合物、单独的对映异构体、单独的非对映异构体、非对映异构体混合物、顺式或反式异构体存在。所有这些异构体都是可预期的。所述的“穿心莲内酯的前药”通常指一种物质，当用适当的方法施用后，可在受试者体内进行代谢或化学反应而转变成穿心莲内酯或其盐。本发明的穿心莲内酯可从爵床科植物穿心莲的全草或叶中分离制备获得；或者通过商业途径购买获得，其纯度均符合药用标准；或者利用市售原料，通过现有技术中传统的化合物合成方法合成获得。本领域的普通技术人员根据现有公知技术可以合成本发明的化合物。合成的化合物可以进一步通过柱色谱法、高效液相色谱法或结晶等方式进一步纯化。合成化学改造、保护官能团方法学(保护或去保护)对合成应用化合物是很有帮助的，并且是现有技术中公知的技术，如R.Larock,ComprehensiveOrganicTransformations,VCHPublishers(1989)；T.W.GreeneandP.G.M.Wuts,ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis,3rdEd.,JohnWileyandSons(1999)；L.FieserandM.Fieser,FieserandFieser’sReagentsforOrganicSynthesis,JohnWileyandSons(1994)；andL.Paquette,ed.,EncyclopediaofReagentsforOrganicSynthesis,JohnWileyandSons(1995)中都有公开。以将本发明的穿心莲内酯制成药物为例。本发明的穿心莲内酯可以单独使用或以药物组合物的形式使用。药物组合物包括作为活性成分的本发明的穿心莲内酯及可药用载体。较佳地，本发明的药物组合物含有0.1～99.9％重量百分比的作为活性成分的本发明的穿心莲内酯。“可药用载体”不会破坏本发明的穿心莲内酯的药学活性，同时其有效用量，即能发挥药物载体作用时的用量对人体无毒。所述可药用载体包括但不限于：软磷脂、硬脂酸铝、氧化铝、离子交换材料、自乳化药物传递系统、吐温或其他表面活化剂、血清蛋白、缓冲物质如磷酸盐、氨基乙酸、山梨酸、水、盐、电解质如硫酸盐精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、硅酸镁、饱和脂肪酸部分甘油酯混合物等。其他常用的药物辅料如粘合剂(如微晶纤维素)、填充剂(如淀粉、葡萄糖、无水乳糖和乳糖珠粒)、崩解剂(如交联PVP、交联羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素)、润滑剂(如硬脂酸镁)以及吸收促进剂、吸附载体、香味剂、甜味剂、赋形剂、稀释剂、润湿剂等。本领域的普通技术人员应知如何通过本领域的常规技术，按照本发明公开的重量比，将本发明的穿心莲内酯和对乙酰氨基酚混合在一起，制备本发明的具有协同镇痛作用的低肝毒性的药物组合物。本发明的穿心莲内酯以及其药物组合物可按本领域常规方法制备并可以通过肠道或非肠道或局部途径给药。口服制剂包括胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、膏剂等；非肠道给药制剂包括注射液等；局部给药制剂包括霜剂、贴剂、软膏剂、喷雾剂等。优选为口服制剂。本发明的穿心莲内酯以及其药物组合物的给药途径可以为口服、舌下、经肌肉或皮下、静脉、尿道、阴道等。下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本专利说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。实施例一穿心莲内酯联用对乙酰氨基酚的镇痛作用本发明采用醋酸扭体和热板实验考察穿心莲内酯、对乙酰氨基酚及穿心莲内酯和对乙酰氨基酚联用对小鼠的镇痛作用。1实验材料1.1受试动物ICR小鼠，♀(醋酸扭体法)或♂(热板法)，体重18～22g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，动物合格证号：SCXK(沪2007-0005)。小鼠饲养温度(22±1)℃，相对湿度(65±10)％，照明时间每天12h。1.2受试药物及其配制对乙酰氨基酚(APAP)：准确称取对乙酰氨基酚粉末108mg，溶于18ml热的(65℃)生理盐水中，混匀，配成6mg/ml溶液供小鼠灌胃用。穿心莲内酯(Andro)：准确称取穿心莲内酯粉末15mg溶于0.75mlDMSO中，配成20mg/ml的母液，取0.5ml母液加4.5ml生理盐水，配成2mg/ml的溶液供20mg/kg组用。另取0.15ml母液加2.85ml生理盐水，配成1mg/ml的溶液供10mg/kg组用。给药方式：腹腔注射。阿司匹林(AS)：取阿司匹林肠溶片(100mg阿司匹林/片)2片，研钵充分粉碎，加6.67mlCMC-Na溶液充分混悬，配成30mg/ml混悬液供小鼠灌胃用。2实验方法2.1醋酸扭体法2.1.1动物分组及给药将小鼠按体重随机分组，分组及药物处理情况如表1：表1醋酸扭体法小鼠分组及药物处理情况2.1.2处理以具有较小镇痛作用的对乙酰氨基酚剂量60mg/kg作为穿心莲内酯联用对乙酰氨基酚镇痛活性研究的剂量，以300mg/kg阿司匹林为阳性对照，考察穿心莲内酯联用对乙酰氨基酚对小鼠扭体次数的影响。0min给予相应药物，55min后腹腔注射0.75％醋酸，给药量为0.1ml/10g，观察15min内小鼠的扭体次数。扭体表现为腹部内凹、腹前壁紧贴笼底、臀部歪扭/高起或躯干后肢伸张。2.2热板法2.2.1分组将小鼠按体重随机分组，分组情况如下表2：表2动物分组及给药情况表2.2.2动物预筛将小鼠单只依次放在55℃的热板仪上，观察从小鼠后足触及热板到出现添后足或跳跃所需要的时间作为其痛阈值。预先筛选痛阈值大于5s并小于30s的小鼠备用。2.2.3处理以135mg/kg对乙酰氨基酚作为穿心莲内酯联用对乙酰氨基酚镇痛活性研究的剂量，以300mg/kg阿司匹林为阳性对照，考察穿心莲内酯联用对乙酰氨基酚对小鼠痛阈值的影响。给药前痛阈值的测定：测2次，每隔5min测一次。60s仍无反应者，按60s算。给予相应药物后30min，60min，120min各测一次痛阈值，并计算痛阈提高百分率。痛阈提高百分率＝(给药后痛阈值-给药前痛阈值)/给药前痛阈值。痛阈提高百分率大于等于50％为有效。2.3穿心莲内酯联用对乙酰氨基酚对癌症疼痛的影响2.3.1材料ICR小鼠体重(18士2)g，雌性，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，动物合格证号：SCXK(沪2007-0005)。小鼠肺癌(Lwis)瘤株由中国医学科学院实验动物中心繁育场提供。2.3.2造模建立小鼠骨癌痛模型将动物麻醉(乙醚麻醉)后，仰卧，左侧后肢剪毛，用75％酒精消毒股骨及胫骨处皮肤，于膝关节处沿着股直肌肌腱方向切一长约0.5-1cm的皮肤切口，小心，暴露髌骨，先用一次性无菌1mL注射器针头在髌骨沿股骨长轴方向穿刺打孔，然后换上10uL注射器进入股骨骨髓腔，缓慢注入10u含Lwis小鼠肺癌细胞(3×105L-)至股骨。注射完毕后用骨蜡封住针孔。无菌棉签蘸生理盐水清洗创口，缝合皮肤。空白组动物左侧髌骨段注入等体积的生理盐水，其余操作同其他各组。2.3.3分组和给药，如下表3：表3实验动物分组及给药情况表2.3.4痛行为测量痛行为测量分别在造模第10天各组用药前及第14天各组用药后进行，治疗组、模型组和空白组于末次给药后5h，对照组于给药后30min，用机械刺激法测量痛行为。用小鼠足底对2gvonFrey纤维刺激的缩足反应百分率来反映触诱发痛。具体方法：2gVonFrey纤维刺激小鼠左侧足底中部持续5-6s，观察小鼠缩足反应。每只动物试验5次，2次试验之间至少间隔2min。动物对VonFrey纤维刺激的缩足反应百分率为：(缩足次数+5)×l00％。3实验结果3.1醋酸扭体法结果如图1所示与醋酸模型组相比，APAP组、APAP+Andro10mg/kg组、APAP+Andro20mg/kg组、APAP+Andro30mg/kg组、Andro10mg/kg组、Andro20mg/kg组、Andro30mg/kg和AS组均能显著减少醋酸引起的小鼠扭体次数；与APAP组相比，APAP+Andro10mg/kg组小鼠的扭体次数显著减少，而且差异有统计学意义(#P<0.05)。这说明对穿心莲内酯联用乙酰氨基酚后，可以提高对乙酰氨基酚的镇痛活性。3.2热板法结果如表4所示表4热板法考察穿心莲内酯联用对乙酰氨基酚对小鼠痛阈值的影响注：与control相比#P<0.05，##p<0.01。如表4所示，在给药后0.5h，APAP组、APAP+Andro10组、APAP+Andro20组、APAP+Andro30组和AS组有镇痛作用(痛阈提高率>50％)。与control组相比，APAP组、APAP+Andro10组和AS组有显著差异。另外，APAP+Andro10组和APAP+Andro30组比APAP组的痛阈提高百分率高，但组间无差异；在给药后1h，APAP+Andro10组、APAP+Andro20、APAP+Andro30组和AS组有镇痛作用(痛阈提高率>50％)，并且与control组比较，均有显著差异。与APAP组比较，APAP+Andro10组、APAP+Andro20和APAP+Andro30组的痛阈提高率比APAP组高，但无统计意义；在给药后2h，除APAP组镇痛作用外，其余7组均有镇痛作用。并且与control组相比，除APAP组无显著差异外，其余7组均有显著差异。与APAP组相比，APAP+Andro10组、APAP+Andro20组和APAP+Andro30三组的痛阈提高率均有提高，但无统计意义。由上表结果可以看出，穿心莲内酯联用对乙酰氨基酚，在给药后1h和2h时具有显著的镇痛作用，且和APAP组相比，痛阈提高百分率有一定潜在的升高。说明穿心莲内酯可能对对乙酰氨基酚的镇痛活性有一定增效作用。3.3对癌性疼痛小鼠痛行为的影响痛觉超敏反应以小鼠对2gVonFrey纤维刺激的缩足反应来测量机械性痛觉超敏。结果见表5和表6。表5造模第10天各组用药前缩足反应百分率注：与空白组比较*P<0.01表6造模第14天各组用药后缩足反应百分率注：与模型组比较#P<0.05,*P<0.01，与APAP组比$P<0.05.表5说明造模第10天各组用药前，模型组、对照组及治疗组缩足反应百分率较空白组增多(P<0.01)，提示小鼠产生触诱发痛行为。由表6可以看出造模第14天，治疗组缩足反应百分率减少，小于对照组并接近空白组，与模型组比较差异显著(P<0.05或P<0.0l)，说明药物产生了镇痛作用。而且APAP+Andro组和APAP组相比P<0.05，说明穿心莲内酯联用对乙酰氨基酚可以增强对乙酰氨基酚的镇痛作用，起到了协同增效的效果。实施例二穿心莲内酯减轻对乙酰氨基酚肝毒性的研究在明确了穿心莲内酯能够增强对乙酰氨基酚的镇痛作用之后，本发明进一步考察了穿心莲内酯对对乙酰氨基酚肝毒性的影响。2.1实验材料2.1.1动物C57BL/6小鼠，♂，体重18～22g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，动物许可证号：SCXK(沪)2012-0002。小鼠饲养温度(22±1)℃，相对湿度(65±10)％，照明时间每天12h。动物适应性喂养4天，自由取食、饮水。2.1.2药物穿心莲内酯(SIGMA公司)、对乙酰氨基酚(SIGMA公司)。2.1.3仪器酶标仪(公司：GeneCompanyLimited,型号：SynergyH4)2.2实验方法动物随机分为空白对照组(CONT)、APAP组、APAP+Andro组和Andro组。实验前动物禁食不禁水12h，除CONT组(给予等体积生理盐水)外，其余各组小鼠0.2ml/10g灌胃对乙酰氨基酚，1h后腹腔注射穿心莲内酯0.1ml/10g，给予对乙酰氨基酚后6h处死动物，取血和肝脏。2.3实验结果2.3.1肝脏病理切片HE染色如图2所示，和CONT组比较，APAP组出现明显的肝损伤，肝脏出血，肝中央静脉周围肝组织水样变，少数淋巴细胞浸润，肝细胞空泡样变，胞核消失。APAP+Andro组肝损伤显著改善，损伤面积大大减小。Andro组无变化。2.3.2血清ALT、AST检测如图3所示，与APAP组比较，APAP+Andro组ALT、AST显著降低。表明穿心莲内酯能降低对乙酰氨基酚引起的ALT、AST的升高。以上结果说明：穿心莲内酯可以减轻对乙酰氨基酚引起的肝损伤，改善肝功能。从而减轻对乙酰氨基酚的肝毒性。本发明所涉及的多个方面已做如上阐述。然而，应理解的是，在不偏离本发明精神之前提下，本领域专业人员可对其进行等同改变和修饰，所述改变和修饰同样落入本申请之权利要求的覆盖范围。