本发明涉及医药领域，更具体的，本发明涉及一种含有人甲状腺激素的药物组合物及其制备方法，以及该药物组合物用于制备冻干制剂的方法及其在治疗和/或预防骨质疏松症方面的用途。
背景技术：
：骨质疏松症是一种以骨量低下，骨微结构破环而导致骨脆性增加，易发生骨折为特征的常见的全身性疾病，已严重威胁着中老年人群，尤其是绝经后女性的身体健康。目前，全世界约有2亿以上人群患有骨质疏松，其发病率已跃居常见病、多发病的第六位。我国骨质疏松患者居于世界首位，约9000万人，其发生率在50岁以上的人群中约为15.7％，在60岁以上的人群中约56％，其中绝经后妇女发生率高于男性，为60～70％，一般发生在妇女绝经后的5～10年内。随着社会老龄化的发展，骨质疏松症的发病率呈上升趋势，预计到2050年将增加到2.21亿。目前，用于治疗绝经后妇女骨质疏松症的药物主要有雌激素、选择性雌激素受体调节剂、双磷酸盐和钙素等，这些药物主要通过抑制骨吸收来提高骨密度，却不能维持正常骨量和骨强度，而促进骨形成的药物可以弥补其不足。甲状旁腺激素(ParathyroidHormone，PTH)是由甲状旁腺主细胞合成和分泌的一种单链多肽激素，成熟PTH含有84个氨基酸残基，是人体内调节钙磷代谢及骨转换最为重要的激素之一，小剂量间断给药能提高骨密度、改善骨质量、降低骨折的发生率。研究表明，PTH生物学活性主要来自其N端，如N端片段PTH(1-34)保留了PTH完整肽段的生物学活性，可促进骨生长而有效治疗骨质疏松症，临床应用中多采用PTH(1-34)治疗骨质疏松疾病。SerValSerGluIleGlnLeuMetHisAsnLeuGlyLysHisLeuAsnSerMetGluArg15101520ValGluTrpLeuArgLysLysLeuGlnAspValHisAsnPhe2530PTH(1-34)氨基酸序列PTH(1-34)的N末端和C末端序列的完整与否决定了其生物活性，而作为一种大分子蛋白质，PTH(1-34)对氧化、脱酰胺基和水解尤为敏感，使得在生产、制剂及储运过程中保证其N末端和C末端序列完整是保证产品质量的技术关键之一。目前PTH(1-34)原料多采用基因工程重组技术获得，市售人重组PTH(rhPTH(1-34))注射液(Teriparatide，特立帕肽)采用的是预装式笔式注射器，其生产工艺复杂，生产成本高，储运存在不便，使得产品价格昂贵，其处方主要包含冰醋酸、无水醋酸钠、甘露醇、间甲酚和注射用水等。其中，间甲酚容易氧化生成醌类及其他复杂的化合物，使得特立帕肽注射液在制备和储存过程中易产生杂质，导致注射液产品不稳定，长期使用间甲酚对人体易产生毒副作用。因此，寻找一种储运方便、使用方便、工艺简单、稳定性高的rhPTH(1-34)制剂产品是现有技术没有解决的技术问题。技术实现要素：本发明从解决现有技术的不足出发，提供了一种含有rhPTH(1-34)的稳定药物组合物及其进一步得到的冻干制剂，该药物组合物可用于大规模生产制备rhPTH(1-34)冻干制剂，制备得到的冻干制剂具有稳定性高、复溶性好等特点。本发明的上述目的通过如下技术方案实现：一种含有rhPTH的药物组合物，所述药物组合物为溶液体系，其pH值为6～7，所述药物组合物包括治疗有效剂量的rhPTH、稳定剂、氯化钠和可药用缓冲剂。所述的rhPTH是指rhPTH(1-34)，可通过现有公知的基因工程重组技术制备。所述药物组合物中rhPTH浓度为50～60μg/ml，优选的，所述药物组合物中rhPTH浓度为56.5μg/ml。所述的稳定剂为蔗糖和甘露醇的组合物。由于rhPTH(1～34)的N末端及C末端不稳定，稳定剂一方面可以保证rhPTH(1-34)在制备及储存过程中不会发生降解反应，另一方面还可以在冻干过程中起到支撑作用。具体的，作为最终产品的主要成分之一，对稳定剂的选择需要同时考量其稳定作用、原辅料兼容性及对于冻干工艺的适应性等，本发明所述的稳定剂具有多羟基糖结构，且亲水性强，玻璃态温度较高，可有效阻止rhPTH(1-34)二级结构的改变，并使其在冷冻干燥失去水分后仍能保持其生物活性；另外，本发明所述的稳定剂在冷冻干燥中同时还具有膨化、支撑的作用，有利于在冻干时形成多孔疏松粉状物，便于冻干工艺中水分的去除，保证rhPTH(1-34)冻干制剂的重建稳定性。所述药物组合物中稳定剂的浓度(用量)存在选择，过高浓度不会对rhPTH(1-34)保护作用提高，且在某些配方中的保护作用反而会有所下降；过低浓度不足以在rhPTH(1-34)蛋白表面形成单分子层，而不能有效保护rhPTH(1-34)的活性，具体的，所述药物组合物中稳定剂的浓度为20～50mg/ml，更具体的，所述稳定剂蔗糖和甘露醇的组合，其中蔗糖浓度为10～20mg/ml；甘露醇浓度为10～30mg/ml，优选20mg/ml。所述的可药用缓冲剂为磷酸氢二钠/磷酸二氢钠，优选的，所述药物组合物中的缓冲剂为浓度0.20～0.45mg/ml磷酸氢二钠与浓度0.25～1.20mg/ml磷酸二氢钠的组合。选用缓冲剂的目的在于将药物组合物pH值稳定在6～7之间，在保证有效成分稳定的同时，将制剂的复溶性保证在较好的状态，并将给药疼痛降低到最小。所述的氯化钠(NaCl)为渗透压调节剂，其在药物组合物中的浓度为0.50～1mg/ml。上述rhPTH(1-34)药物组合物的处方中原、辅料具有较好的兼容性，所包含的辅料种类及用量使得处方在整体上保证了产品的稳定性，并最有利于后续的生产工艺，并通过后续工艺制备得到符合临床使用的冻干制剂产品。所得冻干制剂同样具有稳定性好的特性，并且具有较好的复溶性能。本发明的另一目的在于提供一种前述含有rhPTH(1-34)的药用组合物的制备方法，并进一步包含将药物组合物制备成冻干制剂的方法，所述的方法包括如下步骤：1)将rhPTH(1-34)蛋白原液加入到含有稳定剂、NaCl和可药用缓冲剂的混合溶液中，混匀；2)采用盐酸或氢氧化钠溶液将体系pH值调节至6～7；3)除菌、无菌分装；4)冷冻干燥，即得所述冻干制剂。所述步骤3)的除菌优选过滤除菌；所述步骤4)中冷冻干燥的过程进一步包括：a)预冻；b)一次干燥；c)二次干燥。所述步骤a)中的预冻温度为：室温～-45℃，预冻时间为2～4h；所述步骤b)中一次干燥温度为：-40℃～-20℃，一次干燥时间为10～15h，真空度为：15～10Pa；所述步骤c)中二次干燥温度为：-15℃～30℃，二次干燥时间为10～15h，真空度为10～2Pa。所述一次干燥和二次干燥的温度可选择恒温，也可以选择梯度变温干燥。本发明的一个优选的冷冻干燥过程：采用逐步降温法，具体的，所述的预冻温度为室温～-45℃，预冻时间为3h；所述的一次干燥温度为：-40℃～-20℃，一次干燥时间为13h，真空度为：15～10Pa；所述的二次干燥温度为：-15℃～30℃，二次干燥时间为11h，真空度为10～2Pa。所述一次干燥和二次干燥选择的是梯度变温干燥。本发明的第三个目的在于提供一种含有rhPTH(1-34)药用组合物在制备用于治疗和/或预防骨质疏松症的药物中的用途。由于该药物组合物含有高浓度的rhPTH(1-34)，可有效得减少临床给药次数/频率，且采用基因工程重组技术规模化生产rhPTH(1-34)，可满足临床大量用药的需求，具有良好的临床应用前景。本发明相对于现有技术具有如下的优点及有益效果：1、提供了一种含有rhPTH(1-34)的药用组合物，所述药物组合物具有成分简单，稳定性好等特点，其进一步制备得到的冻干制剂同样具有稳定性高的特点，且其复溶性好，符合临床用药要求；2、提供了一种制备含有rhPTH(1-34)的药物组合物的方法，并将所得药物组合物进一步用于制备药物冻干制剂的方法，该生产方法有利于制备得到符合临床用药要求的冻干制剂产品，且生产方法简单易行，适用于工业化大规模生产；3、提供了一种含有rhPTH(1-34)的药用组合物在制备用于治疗和/或预防骨质疏松症的药物中的应用，由于该药物组合物含有高浓度的rhPTH(1-34)，可有效得减少临床给药次数/频率；且所用的组合物配方安全无毒，不含杂质，降低药物发生毒副反应的概率，有效增加了rhPTH(1-34)药物的顺应性。具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但发明的实施方式不限于此。实施例使用的含有rhPTH(1-34)的蛋白质原液采用文献：SungWL.JBiolChem.1991；266(5):2831-5.的方法制备。所得蛋白质原液含有rhPTH(1-34)浓度为2mg/ml，纯度98.0％。实施例1含有rhPTH(1-34)药物组合物及其冻干制剂的制备1、含rhPTH(1-34)药物组合物的制备将重组制备的rhPTH(1-34)蛋白原液(纯度98％，浓度2mg/ml)于室温或2～8℃下解冻，解冻后于2～8℃保存。按照下表中A-D各辅料配比，分别准确称量稳定剂、氯化钠、缓冲剂，用800mL注射用水溶解后配制为混合液，加入解冻后的rhPTH(1-34)蛋白原液，搅拌混匀，盐酸或氢氧化钠溶液调节至目的pH值，继续用注射用水定容至1L，无菌条件下用孔径为0.22μm滤膜过滤除菌，并无菌分装后分别得到A-D药物组合物。0.20～0.45mg/ml磷酸氢二钠与浓度0.25～1.20mg/ml磷酸二氢钠的组合组分ABCDrhPTH(1-34)(μg/ml)56.556.55060磷酸氢二钠(mg/ml)0.210.4330.210.21磷酸二氢钠(mg/ml)1.180.2691.181.18蔗糖(mg/ml)11.22011.211.2甘露醇(mg/ml)20202020NaCl(mg/ml)0.5610.560.56pH6.07.06.06.0装量(ml/支)11112、含rhPTH(1-34)药物组合物冻干制剂的制备将前述步骤制备得到的药物组合物，按照下表的冻干工艺制备分别为冻干制剂A-D，具体步骤如下：(1)预冻阶段：将温度由室温降至-45℃，再将药物组合物置于-45℃，维持3h，真空度为0Pa。(2)一次干燥阶段：维持真空度为15～10Pa，将药物组合物置于-40℃下干燥1h；-35℃下干燥1h；-30℃下干燥1h；-25℃下干燥1h；-20℃下干燥9h；(3)二次干燥阶段：维持真空度为10～2Pa，将药物组合物置于-15℃下干燥1h；-10℃下干燥1h；-5℃下干燥1h；0℃下干燥3h；5℃下干燥1h；10℃下干燥1h；15℃下干燥1h；20℃下干燥1h；30℃下干燥1h，分别对应得到冻干制剂A-D。所得冻干制剂A-D均未发生喷瓶现象，且冻干粉末呈白色疏松体，成形性好，水分去除充分、完全，符合临床用药质量控制要求。对比实施例1含有rhPTH(1-34)药用组合物E及其冻干制剂的制备1、含rhPTH(1-34)药用组合物的制备将重组制备的rhPTH(1-34)蛋白原液(纯度98％，浓度2mg/ml)，解冻后于2～8℃保存。按照下表中E各辅料配比，分别准确称量稳定剂、氯化钠、缓冲剂，用800mL注射用水溶解后配制为混合液，加入解冻后的rhPTH(1-34)蛋白原液，搅拌混匀，用盐酸或氢氧化钠溶液调节pH为7.0，继续用注射用水定容至1L，无菌条件下用孔径为0.22μm滤膜过滤除菌，并无菌分装得到E药物组合物。组分ErhPTH(1-34)(μg/ml)56.5磷酸氢二钠(mg/ml)0.433磷酸二氢钠(mg/ml)0.269甘露醇(mg/ml)50NaCl(mg/ml)1pH值7.0装量(ml/支)12、含rhPTH(1-34)药用组合物冻干制剂的制备采用与实施例1相同的冻干步骤制备得到冻干制剂E。所得冻干制剂E未发生喷瓶现象，且冻干粉末呈白色疏松体，成形性好，水分去除充分、完全。对比实施例2含有rhPTH(1-34)药用组合物F及其冻干制剂的制备1、含rhPTH(1-34)药用组合物的制备按照下表中F各辅料配比，采用与实施例1相同的方法制备得到F药物组合物。组分FrhPTH(1-34)(μg/ml)56.5醋酸(mg/ml)0.03醋酸钠(mg/ml)1.6蔗糖(mg/ml)11.2NaCl(mg/ml)0.56pH值6.0装量(ml/支)12、含rhPTH(1-34)药用组合物冻干制剂的制备采用与实施例1相同的冻干步骤制备得到冻干制剂F。由于药物组合物F采用过少的稳定剂，使得其在制备冻干制剂F时粉末发生崩塌，使得冻干制剂F不成形，不符合临床用药质量控制的要求。实施例2复溶性检测将冻干制剂A-E置于37℃下保存，并采用《中国药典》(2010)版附录26处的方法，用1.1ml注射用水分别溶解所述冻干制剂，检测其在加速储存实验过程中完全溶解的时间(复溶时间)的变化情况，并观察溶解后溶液的外观及可见异物，所得结果如下表：可知，冻干制剂A和B在37℃加速实验中复溶时间、溶液外观及可见异物方面均符合临床用药质量要求，且均无明显波动。在重复实验中发现，冻干制剂C和D也能达到与冻干制剂A和B同样的临床用药质量要求。对于冻干制剂E，由于未使用本发明要求保护的稳定剂，使得制剂尽管在0天体现为无色澄清且无异物，但在加速试验1周后发现细小蛋白絮状物，并随加速试验的进行逐渐聚合为蛋白颗粒，不符合《中国药典》(2010年版)的相关规定。实施例3稳定性检测将冻干制剂A和B置于37℃下保存，分别采用cAMP测定法、RP-HPLC法分别检测冻干制剂A和B在加速储存实验过程中生物学活性、rhPTH(1-34)纯度及肽含量的变化，所得结果如下表：实验结果表明，冻干制剂A和B在0天时rhPTH(1-34)纯度为98％以上，生物学活性也保持了较高水平，可知冻干工艺对rhPTH各项特性影响较小。在随后的储存过程中，生物活性、rhPTH(1-34)纯度和含量波动较小，且均保持了相对较高的稳定性，符合临床用药质量要求。将冻干制剂C和D在同样条件下进行稳定性实验，冻干制剂C和D能达到与冻干制剂A和B基本一致的稳定性实验结果。综上可知，并本发明制备的rhPTH(1-34)冻干制剂具有良好的稳定性、生物学活性及复溶性，所得冻干制剂符合临床用药质量要求。上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。当前第1页1 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