本发明涉及赪酮甾醇新的药物用途。
背景技术：
癌症患者药物化疗仍是目前治疗癌症的重要手段，然而肿瘤细胞对化疗药物的多药耐药是肿瘤治疗的主要障碍，多药耐药性产生主要机制是具有药物外排功能的P-糖蛋白过量表达，因此通过应用P-糖蛋白抑制剂逆转多药耐药，提高抗癌药物的生物利用度是近年来抗肿瘤药物研究的热点。
目前报道的三代P-糖蛋白抑制剂均因毒性和其他问题而限制了其临床使用，近年来科研人员致力于从天然草本类成分中寻找新的P-糖蛋白抑制剂，特别是大量应用于日常饮食中的草药成分，其安全性得到了肯定。(参见Varma,M.,Ashokraj,Y.,Dey,C.S.,and Panchagnula,R.P-glycoprotein inhibitors and their screening:a perspective from bioavailability enhancement.Pharmacol[J].Res.,48:347-359,2003.和Huang,J.,Si,L.,Jiang,L.,Fan,Z.,Qiu,J.,and Li,G.Effect of pluronic F68block copolymer on P-glycoprotein transport and CYP3A4metabolism[J].Int J Pharm,356:351-353,2008.)。
赪酮甾醇是一种植物甾醇，植物甾醇是植物体内的天然活性成分，毒性研究表明其没有明显毒副作用，且近年来欧盟欧盟食品科学委员会(SCF)、美国食品药物管理局(FDA)和中国卫生部均将植物甾醇列为食品或功能性食品添加剂。(参见张志旭,昌超,刘东波.天然植物甾醇的来源、功效及提取研究进展[J].食品与机械,2014,30(5):288-298)。
技术实现要素：
本发明的目的是公开赪酮甾醇作为P-糖蛋白抑制剂的应用。
体外试验发现，赪酮甾醇可显著增加P糖蛋白高表达HEK293细胞中P糖蛋白底物罗丹明B的摄取，且效果与经典P糖蛋白抑制剂维拉帕米效果相当，但显著降低正常HEK293细胞中P糖蛋白底物秋水仙碱的摄取，而维拉帕米对正常细胞中秋水仙碱的摄取有显著增加作用，可见与维拉帕米比较，赪酮甾醇具有选择性抑制高表达P-糖蛋白细胞的P-糖蛋白的功能；而对正常细胞中P-糖蛋白的功能有促进(增强其解毒功能)的优势。
毒性研究显示，赪酮甾醇的毒性很小，不影响HEK293细胞的增殖，因此，赪酮甾醇可用于制备抑制P糖蛋白活性的药物；
所述的赪酮甾醇，其化学结构式如下：
本发明还涉及一种药物组合物，包括治疗有效量的赪酮甾醇和医药学上可接受的载体，所述载体如淀粉、乳糖，羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素或乙基纤维素等药用辅料。
本发明所说的药物组合物可以单独，在抗癌剂的给药之前或之后，或与抗癌剂结合给药。
所述的药物组合物为注射液、口服液或者是片剂、胶囊、滴丸等剂型；
所述的赪酮甾醇可通过口服或注射途径施加于需要治疗的患者，使用剂量一般为0.1-50mg/体重天，具体可根据患者的年龄病情由医师决定。
其理化性能为：白色针状结晶，与硫酸或其它强酸可产生颜色反应；不溶于水、碱和酸，可溶于乙醚、苯、氯仿、乙酸乙酯、二硫化碳和石油醚等有机溶剂中；既具亲水性又具亲油性使得它具有调节和控制反相膜流动性的能力，具有良好的抗氧化、抗腐败作用。
本发明的有益效果是：
与传统P糖蛋白抑制剂相比,赪桐甾醇毒性很小，不影响HEK293细胞的增殖，与维拉帕米比较，赪酮甾醇具有选择性抑制高表达P-糖蛋白细胞的P-糖蛋白的功能；而对正常细胞中P-糖蛋白的功能无明显影响。
具体实施方式
实施例1
赪酮甾醇的制备
1.药材的提取
醋柴胡10kg，置于提取锅中，加体积浓度为80％乙醇的50克，浸泡0.5h后，煎煮2h，滤过，滤渣加体积浓度为80％乙醇，继续煎煮2h，滤过，如此重复，共煎煮三次，合并三次所得滤液。滤液用旋转蒸发器减压浓缩成浸膏，置冰箱备用。
2.乙酸乙酯部位的提取
将醋柴胡浓浸膏，置5000ml锥形瓶中，加入2500克乙酸乙酯，用力振摇，静置沉淀，取上层溶液，在旋转蒸发仪上浓缩，回收乙酸乙酯。重复上述程序至沉淀不再溶解。得到乙酸乙酯部位的浓浸膏。
3.硅胶色谱柱分离
硅胶粒径：160-200目；
硅胶质量/浸膏质量＝1.8:1；
石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集石油醚-乙酸乙酯(10：1)洗脱部位，静置，析出结晶(主要含赪酮甾醇)。
4.重结晶
析出的结晶，用乙酸乙酯溶解，并在常温下让溶剂挥发，让其析出结晶。用石油醚洗涤晶体，抽气过滤得到较纯的白色针状晶体即为赪酮甾醇。
实施例2
赪酮甾醇对正常HEK293细胞摄取秋水仙碱活性影响研究
秋水仙碱为Pgp和MRP1共有底物，为排除MRP1的干扰；研究醋柴胡对HEK293细胞摄取秋水仙碱的影响时，加入MRP1抑制剂MK571与赪酮甾醇共孵育。HEK293细胞接种于六孔板中，于对数生长期时加入赪酮甾醇(50μg·mL-1)与MK571(50μmol·L-1)共同培养；细胞经药物处理48h后，移除药液，PBS清洗1次；后加入秋水仙碱(50μmol·L-1)与细胞共孵育60min。随后收集细胞，PBS清洗3次，加入超纯水重悬细胞，-80℃冻融裂解；15000g离心15min，移取上清，保存于-80℃冰箱备用。以上所有操作除特定条件外，均在冰浴中进行。每一实验重复3次。
培养基的组分和含量如下：
DMEM高糖培养基 89％
胎牛血清{FBS} 10％
青-链霉素双抗 1％
精密吸取样品175μl，再加入三倍量的甲醇涡旋混匀，经15000rpm离心15min后，吸取上清液于一新EP管中，挥干，再用175μl流动相复溶，15000rpm离心15min，取上清液进样于高效液相色谱仪进行定量分析。Diamonsil C18柱(250×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇-水(55:45)，流速 为1mL/min，柱温为25℃，检测波长为353nm，进样量为25μl。
结果见表1
表1赪酮甾醇对HEK293细胞摄取秋水仙碱的影响(n＝3)
注：*表示与对照组比较，差异有统计学意义，P＜0.05；**表示与对照组比较，差异有统计学意义，P＜0.01。结果显示赪桐甾醇促进正常细胞P糖蛋白的外排作用,有利于正常细胞的保护.
实施例3
赪酮甾醇对Pgp高表达HEK293(HEK293-Pgp)细胞摄取秋水仙碱活性影响研究
实验分为空白组(正常细胞)、对照组(Pgp高表达细胞)、赪酮甾醇组和维拉帕米组。hPgp-HEK293细胞接种于六孔板中，于对数生长期时加入赪酮甾醇处理24h后，移除药液，PBS清洗1次，随后加入罗丹明B(200nmol·L-1)，与细胞避光孵育30min；收集细胞于样品管中，PBS清洗并重悬细胞；于流式细胞仪检测hPgp-HEK293细胞上RB的相对荧光强度(检测细胞数固定为10000个细胞)。实验重复3次。
结果见表2
表1赪酮甾醇对HEK293-Pgp细胞摄取秋水仙碱的影响(n＝3)
注：*表示与对照组比较，差异有统计学意义，P＜0.05；**表示与对照组比较，差异有统计学意义，P＜0.01,结果提示赪桐甾醇对于可显著增 加P糖蛋白过表达细胞中抗肿瘤药物的摄取,其强度甚至稍高于传统P糖蛋白抑制剂维拉帕米.
实施例4
片剂：
赪酮甾醇 200克
淀粉 300克
硬脂酸镁 5克
将上述的组分混合，采用本领域公知的方法制备成为片剂。
实施例5
赪桐甾醇 300克
乳糖 200克
羧甲基纤维素钠 5克
将上述组分混合,采用本领域公知的方法制备为胶囊剂
实施例6
赪桐甾醇 5克
注射用水 500克
吐温-80 2g
将上述组分混合,采用本领域公知的方法制备为注射剂
实施例7
赪桐甾醇 100克
聚乙二醇6000 400克
将上述组分混合，采用本领域公知的方法制备成滴丸剂
实施例8
赪桐甾醇 40克
蒸馏水 500克
吐温80 20克
将上述组分混合，采用本领域公知的方法制备成口服液。