晶状体硬化抑制剂的制作方法

本发明涉及含有吡诺克辛类或其盐和/或硫普罗宁类或其盐的晶状体硬化抑制剂、以及用于治疗和/或预防与晶状体硬化相关的疾病的剂。

背景技术：

晶状体位于眼球内的前方，并且是折射来自外部的光线并在视网膜上形成图像的器官。其发挥照相机中的凸透镜的功能，并且通过在观察近处时变厚、且在观察远处时变薄来调整眼睛的焦点。

人体中，晶状体与被称为睫状体的肌肉相连，并被睫状小带支撑。通过睫状肌的收缩和舒张、以及睫状小带的舒张和收缩，从而控制晶状体的厚度。

随着年龄增长，晶状体的弹力性下降并且发生晶状体的浑浊，导致眼科疾病。例如，晶状体丧失弹力并硬化时，无法良好地调节晶状体的厚度，并产生老花眼。此外，发生晶状体的浑浊时，光在该部分发生散射，从而物体开始看起来昏暗或者模糊(白内障)。

作为针对老年性白内障的治疗药，已知吡诺克辛(产品名：katalin)、谷胱甘肽(产品名：tathion)、硫普罗宁(产品名：thiola)、和唾液腺激素(产品名：parotin)等。这些药物通过抗氧化作用和/或蛋白质不溶化抑制作用来抑制晶状体蛋白质的变性和晶状体的浑浊，从而推迟白内障的进展。然而，针对作为老年性白内障的前阶段的老花眼，尚未市售有效的治疗药和预防药。

其主要原因之一在于，因年龄增长而导致晶状体的弹力性下降的确切发生机理尚属未知，并且因此尚未制作出晶状体硬化(老花眼)的模型动物。

本发明人以前报道了在暴露于主流烟的大鼠中发生与氧化性dna损伤相伴的角膜损伤、和泪腺功能障碍(非专利文献1)。最近，已通过在某些特定的条件下使实验动物经受吸烟处理，从而成功地在实验动物中引发晶状体硬化，并进一步示出，使用该模型能够评价药物对晶状体的弹力性造成的效果(专利文献1)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：jp-a-2015-140327

非专利文献

非专利文献1：freeradic.biol.med.,2011,卷51,页2210-2216。

技术实现要素：

发明要解决的课题

随着老龄化，可预想今后对于针对由年龄增长而引发的多种障碍的治疗药和预防药的需求会日益提高。然而，尚不存在针对由晶状体硬化而引起的老花眼等的有效治疗药和预防药，并要求其开发。因此，本发明的一个目的在于寻求具有晶状体硬化抑制作用的物质，并提供针对与晶状体硬化相关的疾病、例如老花眼等的新型的有效治疗剂和/或预防剂。

用于解决课题的手段

本发明人为了解决上述课题而进行深入研究，并发现吡诺克辛或硫普罗宁具有晶状体硬化抑制作用，从而完成了本发明。

即，本发明如下所述。

[1]晶状体硬化抑制剂，其含有式(i)所示的化合物或其盐、和/或式(ii)所示的化合物或其盐：

[化学式1]

式中，r¹-r⁴相同或不同，且分别为氢原子、卤素原子、羟基、巯基、低级烷基、低级酰基、低级烷氧基、羧基、氨基甲酰基或羰基氨基酸基；

[化学式2]

式中，r为氢原子、或任选被氨基、羟基、巯基或者羧基取代的低级烷基，并且a为低级亚烷基。

[2]根据[1]所述的抑制剂，其含有式(i)所示的化合物或其盐。

[3]根据[2]所述的抑制剂，其中，式(i)所示的化合物为1-羟基-5-氧代-5h-吡啶并[3,2-α]吩噁嗪-3-甲酸。

[4]根据[1]所述的抑制剂，其含有式(ii)所示的化合物或其盐。

[5]根据[4]所述的抑制剂，其中，式(ii)所示的化合物为n-(2-巯基丙酰基)甘氨酸。

[6]根据[1]-[5]中任一项所述的抑制剂，其为用于治疗和/或预防与晶状体硬化相关的疾病的剂。

[7]根据[6]所述的抑制剂，其中，与晶状体硬化相关的疾病为老花眼。

[8]根据[1]-[7]中任一项所述的抑制剂，其为滴眼剂或眼膏剂。

发明的效果

根据本发明，使得对尚不存在有效治疗和/或预防药的与晶状体的硬化相关的疾病、例如老花眼等进行治疗和/或预防变为可能。

附图说明

图1示出暴露于主流烟对大鼠的体重(左图，单位(g))和泪液量(右图，单位(mm/分钟))造成的影响。图中，nt(右图中为各柱的左棒状图)是非吸烟处理组，吸烟(右图中为各柱的右棒状图)是吸烟处理组。*：p<0.05。

图2示出暴露于主流烟对大鼠的角膜状态造成的影响、以及吡诺克辛、硫普罗宁的药效。图中，nt是非吸烟处理组，吸烟是吸烟处理组，s+硫普罗宁是吸烟处理+0.1%硫普罗宁滴眼组，s+白内停表示吸烟处理+0.005%吡诺克辛滴眼组。

图3示出大鼠中因暴露于主流烟而导致的晶状体硬化通过吡诺克辛或硫普罗宁给药而受到抑制。图中，nt是非吸烟处理组，吸烟是吸烟处理组，s+0.1%硫普罗宁是吸烟处理+0.1%硫普罗宁滴眼组，s+白内停是吸烟处理+0.005%吡诺克辛滴眼组。**；p<0.01。

具体实施方式

以下，说明本发明。在没有特别提及的情况下，本说明书中使用的术语具有该领域中通常使用的含义。

本发明提供含有吡诺克辛类或其盐和/或硫普罗宁类或其盐的晶状体硬化抑制剂。

“吡诺克辛类”是指吡诺克辛(1-羟基-5-氧代-5h-吡啶并[3,2-α]吩噁嗪-3-甲酸)和其类似物，具体而言，是指下述式(i)所示的化合物。

[化学式3]

式中，r¹-r⁴相同或不同，且分别为氢原子、卤素原子、羟基、巯基、低级烷基、低级酰基、低级烷氧基、羧基、氨基甲酰基或羰基氨基酸基。

本说明书中，以下有时将式(i)所示的化合物称为化合物(i)。

“卤素原子”的实例包括氟原子、氯原子、溴原子、碘原子。

“低级烷基”是指直链状或支链状的具有1-3个碳原子的烷基，并且可以举出甲基、乙基、丙基、异丙基。

“低级酰基”是指直链状或支链状的具有1-3个碳原子的酰基，并且可以举出甲酰基、乙酰基、丙酰基。

“低级烷氧基”是指直链状或支链状的具有1-3个碳原子的烷氧基，并且可以举出甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基。

“羰基氨基酸基”是指其中羰基与氨基酸的氨基形成酰胺键的基团，并且可以举出例如羰基甘氨酸、羰基丙氨酸、羰基苏氨酸、羰基谷氨酸等。

式(i)中，r¹-r⁴优选均为氢原子。其中r¹-r⁴均为氢原子的式(i)的化合物是以吡诺克辛(1-羟基-5-氧代-5h-吡啶并[3,2-α]吩噁嗪-3-甲酸)的名字而公知的化合物，其具有抗氧化作用和蛋白质不溶化抑制作用，并且防止晶状体的浑浊。因此，其常规而言已被用作早期老年性白内障的治疗药[商品名:karyuni滴眼液0.005%(santenpharmaceuticalco.,ltd.)、商品名：catalin-kforophthalmic(senjuphamarceuticalco.,ltd.)、商品名：catalinophthalmicsolution(senjupharmaceuticalco.,ltd.)等]。然而，迄今完全未知吡诺克辛具有晶状体硬化抑制作用。

“硫普罗宁类”是指硫普罗宁(n-(2-巯基丙酰基)甘氨酸)和其类似物，具体而言是指下述式(ii)所示的化合物。

[化学式4]

式中，r为氢原子、或任选被氨基、羟基、巯基或者羧基取代的低级烷基，并且a为低级亚烷基。

本说明书中，有时将式(ii)所示的化合物称为化合物(ii)。

“任选被氨基、羟基、巯基或者羧基取代的低级烷基”是指任选被氨基、羟基、巯基或者羧基取代的直链状或支链状的具有1-4个碳原子的烷基，其实例包括甲基、巯基甲基、4-氨基丁基、羧甲基、1-羟基乙基等，并且优选为巯基甲基。

“低级亚烷基”是指直链状或支链状的具有1-3个碳原子的亚烷基，并且可以举出亚甲基、乙叉基、亚乙基、丙叉基、异丙叉基、亚丙基、三亚甲基等。优选为乙叉基。

式(ii)中，r优选为氢原子，并且a优选为乙叉基。其中r为氢原子且a为乙叉基的式(ii)的化合物是以硫普罗宁(n-(2-巯基丙酰基)甘氨酸)的名字而公知的化合物，并且其具有肝脏酶体系的活性促进作用、晶状体蛋白质的凝集抑制作用等。因此，其常规而言已被用作针对慢性肝病的肝功能改善药、针对早期老年性皮质白内障等的治疗药[商品名：thiolatab.100(mylanepd)]。然而，迄今完全未知硫普罗宁具有晶状体硬化抑制作用。

化合物(i)或(ii)可以呈与无机碱、有机碱、无机酸、有机酸等的盐的形式。上述与无机碱的盐的实例包括碱金属盐、例如钠盐、钾盐等；碱土金属盐、例如钙盐、镁盐等；以及铝盐、铵盐等。上述与有机碱的盐的实例包括与三甲基胺、三乙基胺、吡啶、甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己基胺、和n,n'-二苯甲基乙二胺的盐。上述与无机酸的盐的实例包括与盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、和磷酸的盐。上述与有机酸的盐的实例包括与甲酸、乙酸、三氟乙酸、富马酸、草酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸、丁二酸、苹果酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸的盐。这些盐当中，优选药理学上可接受的盐。化合物(i)为吡诺克辛、且化合物(ii)为硫普罗宁时，它们的优选的盐为例如碱金属盐。

化合物(ii)具有异构体、例如光学异构体、立体异构体、位置异构体、旋转异构体等时，任意异构体、以及异构体的混合物也被包括在化合物(ii)中。例如，化合物(ii)具有光学异构体时，从外消旋体中拆分出的光学异构体也被包括在化合物(ii)中。这些异构体可以通过本身公知的合成方法或分离方法(浓缩、溶剂萃取、柱色谱、重结晶等)以独立产物的形式得到。

化合物(i)或(ii)可以为晶体或非晶形式。化合物(i)或(ii)为晶体时，单晶和晶型混合物两者都被包括在化合物(i)或(ii)中。晶体可以按照本身公知的结晶方法通过结晶来制造。

化合物(i)或(ii)可以为溶剂合物(例如水合物等)、或者非溶剂合物，这两者均被包括在化合物(i)或(ii)中。

化合物(i)或(ii)可以被同位素(例如³h、¹⁴c、³⁵s等)等标记。

化合物(i)例如可以按照jp-b-55-10570中记载的方法制造。化合物(ii)例如可以按照jp-b-56-5388中记载的方法制造。化合物(i)为吡诺克辛时，还可以使用市售的含吡诺克辛的医药组合物，并且化合物(ii)为硫普罗宁时，还可以使用市售的含硫普罗宁的医药组合物。

由于化合物(i)或(ii)可以抑制晶状体硬化，因此对于治疗和/或预防与晶状体硬化相关的疾病而言是有效的。本说明书中，“晶状体硬化抑制作用”不仅包括抑制晶状体硬化进展并维持晶状体的硬度，还包括使晶状体硬化恢复并赋予弹性。本说明书中，“与晶状体硬化相关的疾病”是指其中晶状体的硬化贡献于其发病或进展、或者伴随其发病或进展而发生晶状体的硬化的任意疾病。该疾病的实例包括老花眼、远视眼、白内障等，优选为老花眼、白内障(但是，化合物(i)为吡诺克辛的情况中、以及化合物(ii)为硫普罗宁时，排除作为针对白内障的治疗剂的用途)。晶状体通过改变其厚度而调节眼睛的焦点。因此，作为与晶状体硬化相关的疾病的病症，可以举出由于晶状体硬化而丧失弹性从而导致眼睛的焦点调节变得困难。

化合物(i)或(ii)具有低毒性，可以以其原样、或者以按照本身公知的方法通过与医药上可接受的添加剂混合而得到的医药组合物的形式对人和其他哺乳动物(例如大鼠、兔、羊、猪、牛、猫、犬、猴等)以经口的或肠胃外的方式安全地进行给药。特别地，吡诺克辛和硫普罗宁已经作为医药品而上市销售，针对安全性已累积有调查结果。

本发明的晶状体硬化抑制剂或者用于治疗和/或预防与晶状体硬化相关的疾病的剂(以下有时总称为“本发明的剂”)中含有的化合物(i)或其盐、或化合物(ii)或其盐(以下有时概括称为“本发明化合物”)的量只要对于抑制晶状体硬化而言为充分、且不显示出细胞毒性，则没有特别限制，并且通常可以从0.001-100重量%的范围内适当选择。本发明化合物的含量可以根据使用目的、剂型、病症的程度等而适当增减。本发明的一个实施方式中，还可以组合使用2种或更多种的化合物(i)或其盐、2种或更多种的化合物(ii)或其盐、或者1种或更多种的化合物(i)或其盐和1种或更多种的化合物(ii)或其盐。在该情况中，可以使全部有效成分包含在同一制剂中，或者使各有效成分分别包含在2个或更多个的制剂中。组合使用2种或更多种的有效成分时，有效成分的总含量可以以落入上述范围内的方式设定。

本发明的剂的剂型没有特别限制，并且可以适当选择适合于经口给药或者肠胃外给药的各种剂型。作为用于肠胃外给药的制剂，可以使用例如滴眼剂、软膏剂、洗剂、霜剂、注射剂、栓剂等，优选为适合于对眼部局部给药的剂型，可以举出例如滴眼剂(水性滴眼剂、非水性滴眼剂、混悬性滴眼剂、乳浊性滴眼剂等)、软膏剂、洗剂、霜剂等。本发明的剂为滴眼剂时，可以使用适当的基剂材料。作为用于滴眼剂的基剂材料，可以举出磷酸盐缓冲液、hank's缓冲液、生理盐水、灌流液、人造泪液等。

本发明的剂除了含有作为有效成分的本发明化合物之外，还可以含有医药上可接受的添加剂，例如针对用于眼部局部给药的制剂，可以适当选择并添加例如缓冲剂、等渗剂、增溶剂、防腐剂、粘性基剂、螯合剂、清涼剂、ph调节剂、抗氧化剂等。

缓冲剂的实例包括磷酸盐缓冲剂、硼酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、酒石酸盐缓冲剂、乙酸盐缓冲剂、氨基酸等。

等渗剂的实例包括山梨糖醇、葡萄糖、甘露醇等糖类；丙三醇、丙二醇等多元醇类；氯化钠等盐类；硼酸等。

增溶剂的实例包括聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯(例如polysorbate80)、聚氧乙烯氢化蓖麻油、四丁酚醇、普兰尼克等非离子性表面活性剂；丙三醇、聚乙二醇等多元醇等。

防腐剂的实例包括苯扎氯铵、苄索氯铵、氯化鲸蜡基吡啶鎓等季铵盐类；对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯等对羟基苯甲酸酯类；苯甲醇、山梨酸和其盐(钠盐、钾盐等)、硫柳汞(商品名)、氯丁醇、脱氢乙酸钠等。

粘性基剂的实例包括聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙二醇、聚(乙烯醇)等水溶性高分子；羟乙基纤维素、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠等纤维素类等。

螯合剂的实例包括乙二胺四乙酸钠、柠檬酸等。

清涼剂的实例包括l-薄荷醇、冰片、樟脑、桉树油等。

ph调节剂的实例包括氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠、硼酸或其盐(硼砂)、盐酸、柠檬酸或其盐(柠檬酸钠、柠檬酸二氢钠等)、磷酸或其盐(磷酸氢二钠、磷酸二氢钾等)、乙酸或其盐(乙酸钠、乙酸铵等)、酒石酸或其盐(酒石酸钠等)等。

抗氧化剂的实例包括亚硫酸氢钠、干燥亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、混合生育酚浓缩物等。

一般而言，化合物(i)常为水不溶性或难溶性，以盐的形态或者在碱的存在下使其可溶于水并以水溶液的形式使用。但是，当其呈水溶液或者其他有机溶剂溶液的形式时，其通常不稳定并且容易分解，并且特别是对热和/或光的稳定性差。因此，期望将化合物配制为固体制剂、例如片剂、颗粒剂等，并在使用时溶解于溶剂中。溶剂的ph通常被调节为约3.0-约7.0、优选约5.0-约7.0。替代地，其还可以通过微粒化而被配制为混悬液剂而不溶解于水。另一方面，含有化合物(ii)作为有效成分时，通常可以将本发明的剂的ph调节为约5.0-约8.5、优选约6.0-约8.0。优选使这些液体制剂经受使用膜过滤器等的灭菌处理、例如通过过滤灭菌等。

将本发明的剂配制为眼膏剂的形式时，其还可以包含软膏基剂。尽管该软膏基剂没有特别限定，但一般而言可以使用作为疏水性基剂的油脂类、蜡、烃化合物等。具体而言，可以举出黄色凡士林、白色凡士林、石蜡、液体石蜡、plastibase、硅酮等矿物性基剂；蜂蜡、动物和植物性油脂等动物和植物性基剂等。

另一方面，本发明的剂为用于经口给药的制剂时，例如可以被配制成片剂(包括糖衣片、膜包衣片)、丸剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂(包括软胶囊剂)、糖浆剂、乳剂、混悬剂等。这些制剂可以通过本身公知的制备法、例如第14修订日本药局方、制剂总则所记载的方法来制造。除了可以针对用于眼部局部给药的制剂使用的上述医药上可接受的添加剂之外，其还可以含有在制剂领域中通常使用的赋形剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、水溶性高分子、碱性无机盐等。

赋形剂的实例包括乳糖、蔗糖、d-甘露醇、淀粉、玉米淀粉、晶状纤维素、轻质无水硅酸、氧化钛等。

润滑剂的实例包括硬脂酸镁、脂肪酸的蔗糖酯、聚乙二醇、滑石、硬脂酸等。

粘合剂的实例包括羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、晶状纤维素、淀粉、聚乙烯基吡咯烷酮、阿拉伯胶粉末、明胶、普鲁兰多糖、低取代度的羟丙基纤维素等。

崩解剂的实例包括(1)交联聚维酮、(2)被称为超级崩解剂的崩解剂、例如交联羧甲基纤维素钠(fmc-asahikaseicorporation)、羧甲基纤维素钙(gotokuchemicalco.,ltd.)等、(3)羧甲基淀粉钠(例如由matsutanichemicalindustryco.,ltd.制造)、(4)低取代度的羟丙基纤维素(例如由shin-etsuchemicalco.,ltd.制造)、(5)玉米淀粉等。该“交联聚维酮”可以为包括被称为聚乙烯基聚吡咯烷酮(pvpp)、1-乙烯基-2-吡咯烷酮均聚物的那些的、具有1-乙烯基-2-吡咯烷酮均聚物的化学名的任意交联聚合物质。其具体实例包括kollidoncl(由basf制造)、polyplasdonexl(由isp制造)、polyplasdonexl-10(由isp制造)、polyplasdoneinf-10(由isp制造)等。

水溶性高分子的实例包括可溶于乙醇的水溶性高分子[例如，羟丙基纤维素(以下有时记作hpc)等纤维素衍生物；聚乙烯基吡咯烷酮等]、不可溶于乙醇的水溶性高分子[例如，羟丙基甲基纤维素(以下有时记作hpmc)、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠等纤维素衍生物；聚丙烯酸钠、聚(乙烯醇)、藻酸钠、瓜尔胶等]等。

作为碱性无机盐，可以举出例如钠、钾、镁和/或钙的碱性无机盐。优选为镁和/或钙的碱性无机盐。进一步优选为镁的碱性无机盐。该钠的碱性无机盐的实例包括碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢二钠等。该钾的碱性无机盐的实例包括碳酸钾、碳酸氢钾等。该镁的碱性无机盐的实例包括重质碳酸镁、碳酸镁、氧化镁、氢氧化镁、偏硅酸铝镁、硅酸镁、铝酸镁、合成水滑石[mg6al2(oh)16·co3·4h2o]和水氧化氧化铝·镁，优选为重质碳酸镁、碳酸镁、氧化镁、氢氧化镁等。该钙的碱性无机盐的实例包括沉淀碳酸钙、氢氧化钙等。

需要时，还可以将上述医药组合物包囊在脂质体中从而促进细胞内递送。优选的脂质体包括正电荷脂质体、正电荷胆固醇、可透过膜的肽结合脂质体等(mamorunakanishi等人，protein,nucleicacidandenzyme、44:1590-1596(1999)；shironiki、kagakutoseibutsu、43:649-653(2005)、clinicalcancerresearch59:4325-4333(1999)等)。

本发明的剂只要不会因与本发明化合物配合而产生不优选的相互作用，则还可以含有其他活性成分、例如抗过敏或抗组胺组分、解充血药、局部麻醉药组分、维生素组分、有效氨基酸以外的氨基酸组分(例如缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、组氨酸、瓜氨酸、鸟氨酸、胱氨酸、牛磺酸、甘氨酸)等。作为这样的其他活性成分，可以适当使用本身公知的各种药剂。此外，其他活性成分可以与本发明的剂分别配制，并对同一对象同时或以隔有时间差的方式以同一途径或不同的途径给药。

本发明的剂的给药量根据给药对象(动物种类)和其年龄、体重、症状、剂型、给药途径等而不同。例如将以含有吡诺克辛或其盐作为有效成分且呈滴眼剂的形式的针对老花眼的治疗剂用于人时，可以将具有0.001-0.01重量%的吡诺克辛浓度的液剂以每日1次至2-6次、优选3-5次的方式通过每次给药1-2滴来进行给药。其他肠胃外给药和经口给药的情况中，也可以以按照其的量进行给药。取决于症状的程度，可以适当增减施用量和次数。例如将含有硫普罗宁或其盐作为有效成分的针对老花眼的治疗剂对人进行经口给药时，可以将以硫普罗宁量计50-1000mg、优选100-500mg以每日1次至2-3次的方式来给药。对于肠胃外给药，也可以以按照其的量进行给药。取决于症状的程度，可以适当增减施用量和次数。对于以滴眼剂的形式使用，还可以在佩戴接触镜片、例如非透氧性硬性接触镜片、透氧性硬性接触镜片、软性接触镜片等的过程中使用。

如上所述，分别配制2种或更多种的有效成分时，各制剂可以对同一对象同时或以隔有时间差的方式以同一途径或不同的途径给药。

尽管以下通过参照实施例来对本发明更具体地进行说明，但不能称本发明受到它们的限制。

实施例

实施例1：通过暴露于主流烟而进行的吸烟处理

将雄性6-8周龄的sprague-dawley(sd)大鼠以每组4只的方式分为4组，并将它们分别用作非吸烟处理组(nt)、吸烟处理组(吸烟)、吸烟处理+0.1%硫普罗宁滴眼组(s+0.1%硫普罗宁)、吸烟处理+0.005%吡诺克辛滴眼组(s+白内停)。

制备硫普罗宁(thiolatab.100，由mylanepd制造)从而提供0.1w/v%的有效成分量，由此制作滴眼剂。对于0.005%吡诺克辛滴眼组，使用catalinforophthalmic0.005%(由senjupharmaceuticalco.,ltd.制造)。对每只眼以每次滴眼5μl来进行滴眼。以在下述吸烟处理前进行1次、处理后进行3次的方式，进行12天滴眼。

吸烟处理参照higuchi等人的方法(freeradic.biol.med.,2011,卷51,页2210-2216)以下述方式进行。将大鼠放入吸烟室中，并使用注射器向室内添加300ml的主流烟。将雄性6-8周龄sd大鼠(最多至12只)放入为实验而制作的吸烟室(60cm×40cm×35cm)内，并用空气泵向室内使送入新鲜空气。将烟草(sevenstar(注册商标))安装在50ml注射器上，并且抽吸主流烟并吹入室内。重复6次该抽吸操作，将总计300ml的主流烟加入至室内，并且在通过泵输送新鲜空气的同时放置30分钟。重复5次类似的操作(总计6次)，由此使大鼠每天总计3小时暴露于主流烟。其后，使大鼠返回至饲养室。测定实施了12天吸烟处理的大鼠和非吸烟组的体重，并采集角膜、泪腺、晶状体。由于吸烟处理，导致体重存在下降的倾向，并且泪液量也下降(图1)。然后，进行所收集的角膜的荧光染色，并确认角膜的状态(图2)。吸烟处理组中，与非吸烟组相比，荧光染色评分显著增大，观察到角膜状态的恶化。经受了吸烟处理的大鼠当中，对比滴眼组(s+硫普罗宁、s+白内停)与非滴眼组(吸烟)的荧光评分。其结果是，未发现因滴眼而导致角膜状态的恶化，并且0.005%吡诺克辛滴眼组(s+白内停)显示出朝向改善的倾向。

实施例2：吸烟处理后的晶状体硬度测定

对实施例1中由眼球摘出的晶状体，通过下述方法测定晶状体硬度。晶状体硬度组合使用电子天平和高度计来测定。将预先测定了短轴长的晶状体置于电子天平上，并将重量设为0。从晶状体上方操作高度计的把手，并使其前端部分与晶状体接触。进一步操作把手，并使前端下降短轴长的约5-10%，从而对晶状体施加压力。通过电子天平测定此时的重量的变化，并且将重量除以高度计上所示的移动距离并记作硬度。值越大则表示越硬。对于晶状体硬度的统计处理，根据dunnett法对各组相对于吸烟处理组的显著性差异进行检验。

图3中示出非吸烟处理组(nt)、吸烟处理组(吸烟)、吸烟处理+0.1%硫普罗宁滴眼组(s+0.1%硫普罗宁)、吸烟处理+0.005%吡诺克辛滴眼组(s+白内停)的晶状体硬度的测定结果。由于暴露于主流烟，导致晶状体硬度增大(吸烟)，并且该硬度的增大通过吡诺克辛的给药(s+白内停)、或硫普罗宁(s+0.1%硫普罗宁)的给药而得到明显抑制。

工业实用性

由于本发明化合物发挥出优异的晶状体硬化抑制效果，因此其能够提供对尚不存在有效治疗和/或预防药的与晶状体的硬化相关的疾病、例如老花眼等进行有效治疗和/或预防的手段。

本申请基于2014年10月31日在日本提交的专利申请第2014-223294号，其全部内容被并入本说明书中。