技术领域
本发明涉及植物中活性成分的提取，具体涉及地枫皮抗炎活性提取物及
其制备方法和应用。
背景技术：
一氧化氮(nitricoxide，NO)作为一种自由基，既具有第二信使和神经递质
的功能，又可以作为效应分子介导炎症、免疫等多种疾病的病理和生理过程。
当免疫细胞遭受微生物内毒素、炎症介质等刺激时，会生成大量的诱导型一
氧化氮合成酶(iNOS)，iNOS通过催化其底物L-精氨酸，生成大量NO进行免
疫应答，过量的NO可造成组织损伤。在急性和慢性炎症中，NO都是重要的
致炎因子。大量研究结果表明风湿病患者的关节液和血清中NO水平明显高
于正常人。NO不仅作为一种炎症介质直接参与了风湿病的发生，又能促进其
它炎症因子释放，进而促进关节软骨破坏，加重病情恶化。减少NO的产生
可为关节炎症提供保护。
壮药地枫皮为八角属地枫皮IlliciumdifengpiK.I.BetK.I.M的干燥树皮，
为中国药典收录品种，具有祛风除湿、行气止痛的功效。但至今为止，未见
有地枫皮抗炎活性提取物及其制备方法的相关报道。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是提供一种地枫皮抗炎活性提取物及其制备方
法和应用。
本发明提供的地枫皮抗炎活性提取物的制备方法，包括以下步骤：
1)获得地枫皮粗提物；
2)对地枫皮粗提物按下述方法a-c中的任一种进行纯化以制得地枫皮抗
炎活性提取物；
方法a：将地枫皮粗提物上硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂，
梯度洗脱，收集V石油醚：V乙酸乙酯＝5-15：1的洗脱液，浓缩，干燥，得到地枫
皮抗炎活性提取物；
方法b：将地枫皮粗提物上C18色谱柱层析，以甲醇-水或乙醇-水为洗脱
剂，梯度洗脱，收集体积分数为80-90％醇洗脱液，浓缩，干燥，得到地枫皮
抗炎活性提取物；
方法c：将地枫皮粗提物上大孔树脂柱层析，以甲醇-水或乙醇-水为洗脱
剂，梯度洗脱，收集体积分数为90-100％醇洗脱液，浓缩，干燥，得到地枫
皮抗炎活性提取物。
上述制备方法的步骤1)中，地枫皮粗提物可以直接从市场上购买，也可
以按现有常规方法对地枫皮进行提取以获得。优选地，本申请采用有机溶剂
对地枫皮进行提取以获得地枫皮粗提物，其中，所述的有机溶剂为氯仿、乙
酸乙酯、体积分数为60-100％甲醇或体积分数为60-100％乙醇；提取的方式
及次数、提取时有机溶剂的用量及提取时间均与现有技术相同，如提取方式
可以是浸提、加热提取、回流提取、超声提取等，优选采用超声提取(工作频
率优选为30～100KHz)，超声提取的时间通常为0.5～2h，提取溶剂的用量通
常按1Kg地枫皮加2-5L有机溶剂为基准来提取。
上述制备方法的步骤2)的方法a中，为了减少进入硅胶柱的粗提物中的
杂质，减轻硅胶柱的负担，同时提高所得地枫皮抗炎活性提取物中活性成分
的含量，优选是将地枫皮粗提物用水溶解，用乙酸乙酯萃取，收集有机相(乙
酸乙酯相)，将收集的有机相再上硅胶柱层析。该方法中，优选是收集V石油醚：
V乙酸乙酯＝10：1的洗脱液。
上述制备方法的步骤2)的方法b中，为了减少进入C18色谱柱的粗提物
中的杂质，减轻C18色谱柱的负担，同时提高所得地枫皮抗炎活性提取物中
活性成分的含量，优选是将地枫皮粗提物用水溶解，用乙酸乙酯萃取，收集
有机相(乙酸乙酯相)，将收集的有机相再上C18色谱柱层析。为了进一步减
轻C18色谱柱的负担并提高产品中活性成分的含量，优选在将收集的有机相
先用MCI色谱柱脱色后再上C18色谱柱层析。
上述制备方法的步骤2)的方法c中，所述大孔树脂的型号为D101或
HPD100。
本发明还提供由上述方法制备得到的地枫皮抗炎活性提取物。
本发明进一步提供由上述方法制得的地枫皮抗炎活性提取物在制备治疗
炎症的药物中的应用，具体包括地枫皮抗炎活性提取物在制备治疗由对二甲
苯引起的炎症的药物中的应用。
与现有技术相比，本发明将地枫皮粗提物经大孔树脂柱、硅胶柱或C18
柱层析后以获得含有多种活性成分的地枫皮抗炎活性提取物(其中厚朴酚的
含量≥25％，异红花八角醇含量≥5％，HPLC法)，提取物中的各活性成分协
同作用，对炎症具有很好的抑制作用(其抑制作用明显优于厚朴酚)。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的详述,以更好地理解本发明的
内容,但本发明并不限于以下实施例。
实施例1
1)取干燥的地枫皮粗粉1.5Kg，加入体积分数为80％乙醇5L加热回流
提取1h，过滤，药渣重复提取2次，合并提取液，减压浓缩至膏状，得到地
枫皮粗提取物182g；
2)取地枫皮粗提取物150g，经C18柱(YMC*GELODS-A-HG)层析分离
纯化，以乙醇-水为洗脱剂，梯度洗脱，收集体积分数为80％乙醇-水溶液的
洗脱液，减压浓缩，干燥，得地枫皮的抗炎活性提取物8.2g，其中厚朴酚的
含量为36.8％，异红花八角醇的含量为6.1％。
实施例2
1)取干燥的地枫皮粗粉1.5Kg，加入3L氯仿浸提18h，过滤，药渣重复
提取2次，合并提取液，减压浓缩至膏状，得到地枫皮粗提物28g；
2)取地枫皮粗提物20g，上硅胶柱层析分离纯化，以石油醚-乙酸乙酯为
洗脱剂，梯度洗脱，收集V石油醚：V乙酸乙酯＝10:1洗脱液，减压浓缩，干燥，得
到地枫皮的抗炎活性提取物3.8g，其中厚朴酚的含量为65.6％，异红花八角
醇的含量为20.2％。
实施例3
1)采用与实施例1相同的原料并按实施例1相同的方法获得地枫皮粗提
物；
2)取上述地枫皮粗提物150g用水分散，以乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯
部位并将其上大孔树脂D101纯化，以乙醇-水系统梯度洗脱，收集体积分数
为85％乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，得到地枫皮的抗炎活性提取物10.6g，
其中厚朴酚的含量为26.2％，异红花八角醇的含量为5.2％。
实施例4
1)取干燥的地枫皮粗粉1.5Kg，加入6L甲醇超声提取1h，过滤，药渣
重复提取1次，合并提取液，减压浓缩至膏状，得到地枫皮粗提物93.5g；
2)取地枫皮粗提物80g，用水分散，以乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯部位
并将其上MCI柱后再上C18色谱柱层析分离纯化，以甲醇-水为洗脱剂，梯
度洗脱，收集体积分数为80-90％甲醇-水溶液的洗脱液，减压浓缩，干燥，
得地枫皮的抗炎活性提取物6.3g，其中厚朴酚的含量为40.2％，异红花八角
醇的含量为6.6％。
实施例5
1)取干燥的地枫皮粗粉1.5Kg，加入7.5L乙酸乙酯超声提取2h，过滤，
药渣重复提取2次，合并提取液，减压浓缩至膏状，得到地枫皮粗提物60.3g；
2)取上述地枫皮粗提50g上硅胶柱层析分离纯化，以石油醚-乙酸乙酯为
洗脱剂，梯度洗脱，收集V石油醚：V乙酸乙酯＝10-15:1洗脱液，减压浓缩，干燥，
得到地枫皮的抗炎活性提取物4.5g，其中厚朴酚的含量为53.5％，异红花八
角醇的含量为17.2％。
实施例6
1)采用与实施例4相同的原料并按实施列4相同的方法获得地枫皮粗提
物；
2)取上述地枫皮粗提物80g上HPD100大孔树脂柱分离纯化，以甲醇-水
系统梯度洗脱，收集体积分数为90％甲醇洗脱液，减压浓缩，干燥，得到地
枫皮的抗炎活性提取物10.1g，其中厚朴酚的含量为25.5％，异红花八角醇的
含量为5.1％。
试验例：地枫皮抗炎活性提取物的药效学实验结果
1、地枫皮抗炎活性取物及厚朴酚对LPS诱导的RAW364.7巨噬细胞炎
症因子生成的影响
采用Griess法检测RAW264.7巨噬细胞培养基上清液中NO含量。考察
地枫皮抗炎活性提取物及单体化合物对LPS诱导的RAW364.7细胞产生NO
的抑制率。结果表明地枫皮活性提取物(按实施例1所述方法制得)及其主
要单体化合物厚朴酚和异红花八角醇均能有效地抑制NO生成，见表1。
表1地枫皮抗炎活性提取物及其单体化合物对LPS诱导的RAW364.7细胞产生NO抑
制作用
2、地枫皮抗炎活性提取物及厚朴酚对二甲苯引起小鼠急性炎性肿胀抑制
作用研究
KM雄性小鼠70只，按体质量随机分成7组，设模型组(空白对照组)、
阳性对照组(西药：阿司匹林；中成药：帕夫林白芍总苷胶囊)、地枫皮抗炎
活性提取物高(H)、中(M)、低(L)剂量组、厚朴酚组。灌胃给药，1次
/d，连续3d，末次给药1h后，均采用移液枪在7组小鼠的右耳前、后面分别
均匀涂抹二甲苯15μL，左耳不涂作为对照。涂抹后1h，颈椎脱臼处死小鼠，
沿耳廓基线剪下左右耳，用7mm打孔器分别在双耳同一部位打下耳片，称重，
比较各组间耳肿胀度，并计算肿胀抑制率，结果见表2。
肿胀抑制率＝(空白对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/空白对照组平
均肿胀度×100％。
结果显示：地枫皮抗炎活性提取物的高、中、低剂量组均对二甲苯引起
小鼠急性炎性肿胀有明显抑制作用。高、中剂量组与空白对照组比较，差异
性显著，提示其对炎性疾病具有治疗作用；此外，地枫皮活性提取物中主要
成分厚朴酚也对二甲苯引起小鼠急性炎性肿胀发挥抑制作用。
表2地枫皮抗炎活性提取物及厚朴酚对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响
与模型组比较，*P<0.05。